含量和有关物质方法学验证方案

含量和有关物质⽅法学验证⽅案⼀般项⽬⽅法学验证⽅案
表⼀原料药检测项⽬及⽅法学验证⽅案
名称检测项⽬⽅法学验证
起始原料性状、溶解度、鉴别、⽐旋度（⼿
性中⼼）、⼲燥失重、炽灼残渣、
残留溶剂、重⾦属、有关物质、
含量
残留溶剂、有关物质、含量中间体性状、有关物质、纯度有关物质、纯度API性状、溶解度、引湿性、熔点、
⽐旋度（⼿性中⼼）、鉴别、⼲
燥失重或⽔分、硫酸盐、氯化物、
重⾦属、炽灼残渣、残留溶剂、
粒度、晶型、有关物质、含量残留溶剂、粒度、有关物质、含量
表⼆⽚剂检测项⽬及⽅法学验证⽅案
名称检测项⽬⽅法学验证
⽚剂性状、鉴别、⽔分、重量差异、
有关物质、溶出度、含量均匀度、
含量、微⽣物限度有关物质、溶出度、含量均匀度、含量、微⽣物限度表三有关物质⽅法学验证内容
名称有关物质⾊谱条件
摸索
有关物质⽅法学验证HPLC
起始原料检测波长的初选、分
离度、检测波长的确
定分离度、仪器精密度、
LOD、溶液稳定性、空
⽩⼲扰
不加校正因⼦的主成
分⾃⾝对照法
中间体检测波长的初选、分
离度、检测波长的确
定分离度、仪器精密度、
LOD、溶液稳定性、空
⽩⼲扰
⾯积归⼀化法
API检测波长的初选、分
离度、检测波长的确
定分离度、强制降解试验、
仪器精密度、LOD、溶
液稳定性、空⽩⼲扰、
耐⽤性
不加校正因⼦的主成
分⾃⾝对照法
分离度、强制降解试验、
系统适⽤性、仪器精密
度、LOD、LOQ、线性、
溶液稳定性、空⽩⼲扰、
耐⽤性
加校正因⼦的主成分
⾃⾝对照法
分离度、强制降解试验、
系统适⽤性、仪器精密
度、⽅法精密度、中间
精密度、溶液稳定性、
空⽩⼲扰、LOD、LOQ、
线性、回收率
外标法
表四有关物质⾊谱条件摸索
名称试验内容备注
检测波长的初选分别取各杂质及供试品加甲醇（或⼄腈）溶解
并稀释制成各约含XXug/ml（⼀般10ug/ml）
的溶液，进⾏UV扫描（200nm～400nm）溶剂：能溶解供试品或各杂质的单⼀溶剂（可向合成咨询溶剂及供试品或各杂质的溶解情况）
浓度：吸光度读数以在0.3～0.7之间为宜
⾊谱条件摸索（流动相、⾊谱柱的摸索）先查⽂献或各国药典API的保留时间⼀般在5～15min，主峰峰型
好，理论板数5000以上。

API的配制浓度：根据扫描结果
分离度分别取各杂质及供试品配成⼀定浓度，分别进
样。

分离度溶液：配制成含API的浓度及各杂质浓
度为1%（API的有关物质测定浓度）（进6针）
杂质与主峰的分离度应⼤于1.5 检测波长的确定在流动相条件下进⾏UV扫描
表五有关物质⽅法学验证具体内容
试验内容溶液配制⽅法溶液配制份数进样针数评定标准备注
系统适⽤性分别取供试品、各杂质适量，
加流动相超声溶解，并稀释
配制成约含供试品XXmg/ml
和含杂质各1%（相当于供试
品浓度XXmg/ml）的混合溶
液作为系统适⽤性溶液。

供试液 1 份进6针杂质峰峰⾯积RSD≤ 2.0%；
保留时间RSD ≤1.0%；
杂质峰的拖尾因⼦≤2.0；
分离度及理论塔板数应符合质
量标准的规定
杂质为订⼊标准中的
杂质
⽅法专属性 1 精密量取流动相供试液 1 份每份各 1 针空⽩溶剂应⽆⼲扰；精密度在规定的测试条件下，同⼀均质供试品，经多次取样进⾏⼀系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）
仪器精密度供试液及⾃⾝对照液⾃⾝对照液1份进6针峰⾯积RSD≤2.0%
供试液仪器精密度供试液 1 份进6针峰⾯积RSD≤2.0%；
保留时间RSD≤1.0%
检测限供试品或杂质适量，⽤流动
相溶解并逐级稀释
供试品溶液1份检测限2针；S/N≥3或2。

研究的所有杂质
定量限供试品或杂质适量，⽤流动
相溶解并逐级稀释供试品溶液1份定量限6针；S/N≥10。

主成分及杂质峰保留
时间的相对标准差应不⼤于
2.0%，峰⾯积的相对标准差应不
⼤于5.0%。

外标法测定的杂质
溶液稳定性供试液供试液 1 份0、1、2、4、6 、8、24
⼩时各进1针主成分的含量变化的绝对值≤2.0%；
杂质含量的绝对值在±0.1％以内，
并不得出现新的⼤于报告限度
的杂质
峰⾯积及峰⾯积的归⼀化含量
耐⽤性供试液
系统适⽤性溶液调流动相pH变化±0.2 1 份供试液和1份系统适⽤性溶液，各条件下进
2 针
主峰的拖尾因⼦不得⼤于2.0；
主峰与杂质峰必须达到基线分
离；主峰与杂质峰分离度符合质
量标准；
各条件下的峰⾯积RSD符合规
定；
杂质含量的绝对值在±0.1％以
内
调流动相配⽐变化±5%
柱温±5℃（如有柱温）
不同（批号）⾊谱柱
流速相对值变化±20％
缓冲液中盐的浓度±10％
⽅法精密度供试液
杂质对照品溶液供试液6份
杂质对照品溶液1份
供试品进1针
杂质对照品溶液进3针
报告限以上的杂质个数⼀致，外
标法计算杂质的含量，RSD不
得⼤于15%。

中间精密度供试液
杂质对照品溶液供试液6份（另⼀个⼈员、不
同仪器、不同时间）
杂质对照品溶液1份
供试品进1针
杂质对照品溶液进6针
报告限以上的杂质个数⼀致，外
标法计算杂质的含量，12个数
据RSD不得⼤于20%。

线性不同浓度的各杂质对照品溶
液⾄少5个浓度（LOQ～限度的
150%）
各进2针相关系数（R）不得⼩于0.9990，
Y轴截距应在100%响应值的
25%以内，响应因⼦的相对标准
差应不⼤于10%。

回收率供试液
杂质对照品溶液供试液9份（三个浓度：50%、
限度、120%各3份）
杂质对照品溶液1份
供试液各进2针
杂质对照品进6针
各浓度下的平均回收率应在
80%-120%（低浓度为定量限，
放宽⾄70%-130%），RSD(%)不
⼤于10.0%
强制降解试验供试液控制溶液、空⽩溶液、酸破坏、碱破坏、光破坏、氧化破坏、
各进1针空⽩不⼲扰降解产物的检出，
热破坏、酸碱空⽩溶液、氧化空⽩溶液。