药物鉴别试验总结

药物鉴别试验总结
一、葡萄糖注射液
性质：葡萄糖属于单糖，分子中具有醛基，伯醇基，仲醇基和邻二醇基结构，通常醛基最易被氧化，伯醇次之。

1、用斐林试剂（0.1 g/ml的氢氧化钠和0.05 g/ml的硫酸铜试剂）反应生成砖红色沉淀加热的条件下
原理：具有醛基，醛基遇斐林试剂有砖红色沉淀生成。

步骤1：向试管内注入2mL待测组织样液。

2：向试管内注入1mL斐林试剂（甲乙液混合均匀后再注入）。

3：将试管放入盛有50~60摄氏度温水的大烧杯中加热约2min
4：观察试管中出现的颜色变化。

结果：可以观察到有砖红色沉淀生成。

2、班氏试剂：在试管中加入葡萄糖注射液0.1mL，加入班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放入盛有开水的烧杯中，加热煮沸1min~2min，若试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀，说注射液中含有葡萄糖
3、可用溴水来鉴别葡萄糖，葡萄糖能被溴水氧化成葡萄糖酸，使溴水褪色。

原理：葡萄糖的醛基具有还原性，溴水能将其氧化，使溴水褪色。

步骤：取葡萄糖5ml于试管中，然后加入1ml饱和溴水，观察颜色。

结果：三小时后，溴水褪色。

4.分光光度法：利用分光光度计测量容易的吸光度，与标准溶液吸光度比较。

5.红外光谱：测量样品溶液的红外光谱，与标准溶液的红外光谱图比较。

6.银镜反应：葡萄糖分子中的醛基，有还原性，能与银氨溶液反应：CH2OH-（CHOH）4-CHO+2Ag （NH3)2OH==CH2OH-（CHOH）4-COOH+2Ag↓+H2O+4NH3，被氧化成葡萄糖酸。

实验操作：取本品的适量（约相当于葡萄糖1g）,加水10ml,振摇，滤过，滤液加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试液管壁上生成银镜。

7、比旋度测定法：偏振光透过1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液，在钠光源的D
线（589.3nm），温度20℃下测定比旋度，比旋度在52.5~53.0，范围内。

原理：葡萄糖分子结构中有5个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。

比旋度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度，可以鉴别药物。

优选：斐林反应和比旋度测定法。

该方法操作简便，现象易观察，所用试剂较少，环境污染小。

二、阿司匹林肠溶片
性质：为白色结晶或结晶性粉末；无溴或微带醋酸臭，味微酸。

结构中有酯基，能够水解。

原理:受热分解产生水杨酸和乙酸，水杨酸的酚羟基与三氯化铁，呈紫堇色。

1、为白色结晶或结晶性粉末；无溴或微带醋酸臭，味微酸。

2、三氯化铁法：本品水溶液加热放冷后，与三氯化铁溶液反应，呈紫堇色。

3、水解反应阿司匹林与碳酸钠溶液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气。

4.红外光谱法：
A、纯KBr薄片扫描本底
取少量KBr固体，在玛瑙研钵中充分磨细，并将其在红外灯下烘烤10min左右。

取出约100mg装于干净的压膜内（均匀铺撒并使中心凸起），在压片机上于29.4MPa压力下压1min，制成透明薄片。

将此片装于样品架上，插入红外光谱仪的试样安放处，从4000~600cm-1进行波数扫描。

B、扫描固体样品
取1~2mg乙酰水杨酸产品（已经经过干燥处理），在玛瑙研钵中充分研磨后，再加入400mg 干燥的KBr粉末，继续研磨到完全混合均匀，并将其在红外灯下烘烤10min左右。

取出100mg 按照步骤1同样方法操作，得到吸收光谱。

并和标准光谱图比较。

5.薄层色谱：取本品细粉适量（约相当于阿司匹林50mg）加乙醇 5ml振摇溶解静置取上清液即得。

参比物溶液的制备：取谷维素片2片，研细加乙醇3ml溶解静置取上清液即得。

薄层色谱鉴别：取参比物溶液和供试品溶液各2微升，点样于硅胶板GF254（快检专用薄层板）将正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15:5:1）混合液8-10ml倒入层析缸中，将点样完毕的薄层板放入，待展开前沿至距原点8cm处将板取出。

待展开剂挥尽置于254nm紫外光灯下观察。

6.高效液相色谱法：在含量测定项下记录的色谱中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

优选：三氯化铁法和水解法，应用化学法鉴别，简便，现象易观察。

三、维生素E软胶囊
1、氧化还原法：原理：VE侧链上的叔碳原子易自动氧化，生成相应的羟基化合物，本品的乙醇溶液与硝酸供热，则生成生育酚，溶液显橙红色。

步骤：取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热约15min，溶液显橙红色。

2、维生素E具有较强的还原性，与三氯化铁作用，被氧化成对-生育酚，后者与2,2'-联吡啶作用生成血红色的络合物。

3、薄层色谱法
仪器与试剂：分析天平、薄层板为硅胶G板、维生素E标准品
步骤：对照品溶液：精密称取维生素E标准品0．15 g，加氯仿10 ml溶解，即得。

供试品溶液：精密称取本品1．0 g，加水25ml搅拌，用氯仿40ml分两次萃取，缓慢振摇以避免乳化，分取氯仿层，合并两次萃取的氯仿液，水浴蒸干至1ml，即得。

空白对照液：按处方比例依法制备不含维生素E的空白对照
样品，按供试品溶液制备方法同法制备，即得。

薄层层析：用微量进样器吸取上述对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各30ul，分别点样
于同一硅胶G薄层板上，置预先用上述展开剂饱和的层析缸中，用上行法展开至15cm时取出薄层板，挥干，喷以20％的磷钼酸乙醇溶液，于105℃烘烤5 min(必要时可延长)至斑点清晰。

结果供试品溶液色谱中在与对照品溶液色谱相应位置上显深蓝色的斑点，空白对照无干扰。

4、紫外光谱法：维生素E结构中具有苯环，本品的0.01%无水乙醇液，在284nm的波长处
有最大吸收；在254nm的波长处有最小吸收，可供鉴别。

5、红外光谱法鉴别:其红外光吸收图谱应与对照的光谱图一致；
6、采用气相色谱法鉴别维生素E，按含量测定项下的方法试验，供试品溶液主峰的保留时
间应与对照品溶液主峰的保留时间相似。

7、高效液相色谱法：维生素E样品与对照品的主峰相对保留时间一致。

优选：氧化还原法和紫外光谱法，化学法和光谱法相互补充，使鉴别依据更加充分。

四、硫酸阿托品片
1、vitali反应托烷生物碱特征反应：取本品的细粉适量(约相当于硫酸阿托品lmg)，置分液漏斗中，加氨试液约5ml，混匀，用乙醚10ml振摇提取后，分取乙醚层，置白瓷皿中，挥尽乙醚后，残渣与发烟硝酸共热，冷后加醇制氢氧化钾，显深紫色。

原理：托烷类生物碱的酯键易水解生成莨菪酸。

莨菪酸与发烟硝酸共热得黄色的莨菪酸三硝基衍生物，冷后，加醇制氢氧化钾溶液或固体氢氧化钾作用转变成醌型产物，呈深紫色。

2、硫酸—重铬酸钾的反应：硫酸阿托品水解后生成的莨菪酸,可以与反应的试剂再加热的条件下，将水解的莨菪酸氧化成苯甲醛，从而逸出苦杏仁的臭味。

3、红外光谱：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。

原理：从红外吸收光谱中可以获得硫酸阿托品吸收光谱的形状，吸收峰波数的位置、吸收相对强度等信息，这些信息均可以用于鉴别。

若供试品德光谱图与对照光谱图一致，通常可判定两化合物为同一物质。

4、硫酸盐鉴别反应
(1)加氯化钡生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中不溶解
(2)加醋酸铅生成白色沉淀，沉淀在醋酸铵或氢氧化钠试液中溶解
(3)加盐酸不生成白色沉淀，与硫代硫酸盐区别
原理：①取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成BaSO4的白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。

②取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成PbSO4的白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。

③取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）。

5、纸色谱法
试剂与药品：硫酸阿托品标准品由中国药品生物制品检定所提供。

实验用碘化铋钾等试剂为分析纯。

实验方法：磷酸盐缓冲液的配制：取无水磷酸氢二钠0.76g，无水磷酸二氢钾0.18g，加水溶解至100ml。

层析纸的制备：将新华滤纸在磷酸盐缓冲液中提湿后，凉干。

展开剂：正丁酵的水饱和液。

标准液与供试液的配制：取硫酸阿托品(约相当于阿托品30mg)置125m1分液漏斗中，加蒸馏水8ml，氨水2ml，摇匀。

加氯仿10ml，充分振摇，并快速提取。

分取氯仿层，水层再用10ml氯仿提取1次，合并两次氯仿提取液，置水浴上蒸发至1ml，作为标准液与供试液。

纸层析：用微量注射器分别取5ul标准液与供试液，等间隔地点于同一层析滤纸上，点样原点直径一致，均为2mm。

层析滤纸先在层析缸内饱和10min，然后用展开剂径向展开10cm。

取出滤纸，在105℃电热烘箱内干燥20min。

放冷，喷以稀碘化铋钾试液。

取标准品同时重复进行上述操作。

结果表明，供试品所显斑点的颜色及位置与标准品相同，而空白液显示斑点的相应位置处无斑点产生。

6、薄层色谱法（TLC）精密称取硫酸阿托品，甲醇制成1ml含硫酸阿托品0．5mg，取硫酸阿托品片适量加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

分别精密量取单一对照品溶液、供试品
溶液各15l ,分别点于同一硅胶G薄层板上，室温晾干，放入层析缸中，以醋酸乙酯一甲醇
一浓氨试液(17：2：1)n 为展开剂，展距均为15era，取出，晾干，喷以5％亚硫酸钠70％的乙醇液，再喷以改良碘化铋钾试液。

供试品色谱中，至少检出3个橙红色斑点，其在与对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的斑点。

7、紫外光谱法：取适量的本品溶液，加入0.001mol/l的盐酸溶液稀释制成1ml中含1mg 的溶液，测定其紫外吸收光谱，在252nm,257nm和254nm波长处有最大吸收。

8、高效液相色谱法：硫酸阿托品样品与对照品的主峰相对保留时间一致。

优选：vitali反应和硫酸盐鉴别反应，操作简单，现象易观察。

五、维生素C颗粒
1.化学鉴别法：
（1）还原性
因为维生素C中具有稀二醇结构，因此其具有较强的还原性，可以被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时会产生黑色金属银沉淀。

以 2，6-二氯靛酚为燃料，其的氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色，因此其与维生素C作用后生成还原性的无色的酚亚蓝。

与一些具有颜色的氧化性物质相互反应，从而可以使具有颜色的氧化性物质，从而也使根据颜色的有无来鉴别。

（2）与糖类的反应：:根据维生素C可以在三氯醋酸或者盐酸存在的条件下水解，脱羧，生成戊糖，然后在失水转化成糠醛，根据糠醛可以和吡咯反应的特征，将此混合溶液加热到50℃而产生蓝色
2.色谱法
（1）TLC法：吸取维生C溶液一定量两份，将其做一定处理后将一份作为供试品，另一份作为对照品，然后同时吸取2ul，分别在同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯—乙醇—水为展开剂，展开，晾干，立即紫外灯光下（254nm）检视。

供试品溶液羧显示主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同
（2）高效液相色谱法：取维生素C对照品适量，加甲醇一水一冰醋酸(2O：80：0．5)(对乙
酰氨基酚含量测定项下流动相)，使溶解并稀释至每lml含维生素C约40g的溶液，作为对照品溶液。

取供试品1O片，除去包衣，研细，混匀，充分研磨，称取适量(约相当于维生素C2mg)，置50ml容量瓶中，超声处理lmin使其充分溶解，加流动相至刻度，滤过，取滤液即得供试品溶液。

3.光谱法
（1）紫外光谱法：维生素C在0.01mol/l盐酸溶液中，在243nm波长处有唯一的最大波长，可以根据其在此处的特殊性质进行鉴别。

（2）红外分光度法：
取维生素C片1O片，研细，置锥形瓶中，加无水乙醇8O ml振摇使溶解，滤过，滤液水浴蒸干，残渣置硅胶干燥器内，用溴化钾压片，测定红外吸收光谱。

与维生素C红外光谱对照。

优选：还原法和紫外光谱法，化学法和光谱法相结合，使鉴别更加准确。

六、阿苯达唑胶囊
1.化学鉴别法
（1）阿苯达唑为苯并咪唑化合物，在2位取代胺基后，实际上可以看成是胍基取代化合物，苯环上有丙巯基取代，巯基能够使醋酸铅试纸变黑来鉴别.取本品约0.1g，置试管底部，管口放一湿润的醋酸铅试纸，加热灼烧试管底部，产生的气体能使醋酸铅试纸显黑色
（2）本品中含有氮原子，具有与生物碱类似的作用，取本品约0.1g，溶于微温的稀硫酸中，滴加碘化铋钾试液，即生成红棕色沉淀
2.光谱法
（1）紫外-可见分光光度法：在295nm的波长处有最大吸收，在277nm的波长处有最小吸收（2）红外光谱法：红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。

如发现在1380cm-1处的吸收峰与对照的图谱不一致时，可取本品适量溶于无水乙醇中，置水浴上蒸干，减压干燥后测定。

优选：化学鉴别法（1）和紫外光谱法，化学法和光谱法相互补充，该化学鉴别法所用试剂少，对环境污染小。

七、对乙酰氨基酚片
结构式
（一）理化性质：为白色结晶或结晶性粉末，无臭，味微苦，易溶于乙醇和热水，溶于丙酮，略溶于水。

（二）试验方法：
1、重氮化反应
原理：本品与稀盐酸和亚硝酸钠反应后生成的对氨基酚的与碱性β-萘酚发生重氮反应。

操作：取本品细粉适量（约相当于对乙酰氨基酚0.2g），用乙醇8ml分次研磨，使对乙酰氨基酚溶解，滤过，合并滤液，蒸干，得残渣。

取残渣约0.1g,加稀盐酸5ml，置水浴中加热40分钟，放冷，取0,5ml，滴加下硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后加碱性β-萘酚试液2ml，振摇，观察颜色。

结果：显红色。

2、与三氯化铁反应
原理：本品含有酚羟基结构，所以可以用三氯化铁来鉴别。

操作：取上述剩余残渣制成水溶液，加三氯化铁试液适量，观察。

结果：显蓝紫色。

3、水解后与硫酸和乙醇反应
原理：对乙酰氨基酚水解后具有乙酰胺结构。

操作：取上述方法1中滤液5ml，加入适量硫酸和乙醇溶液，振摇。

结果：试管口可闻到乙酸乙酯香味。

4、红外光谱法
（1）取对乙酰氨基酚片2 片,研细,置100 mL 锥形瓶中,加热水(70～80 ℃) 30 mL 振摇使溶解, 趁热滤过, 滤液放冷到5 ℃使结晶析出, 用3 号垂熔玻璃漏斗滤过, 结晶于105 ℃干燥30 分钟, 即得.
（2）取对对乙酰氨基酚对照品及重结晶样品，用溴化钾压片，测定红外吸收光谱。

5、薄层色谱法
精密吸取对乙酰氨基酚对照品溶液，混合对照品溶液与样品溶液各50ul 和对氨基酚对照品溶液 1 0 ul。

分别点于硅胶G板上晾干，放人层析缸中，以二氯甲烷 -甲醇-球醋酸(9:1:0.3)为展开剂室温下展开，展距约8 cm，取出晾干。

然后置饱和碘蒸气下熏蒸即显示黄色或棕色斑点。

混合对照品溶液显示的 2个斑点分别与对乙酰氨基酚对照品和对氨基酚对照品溶液所显示的斑点位置一致，0.5ug量的对氨基酚的斑点也可辨别。

对乙酰氨基酚比移值Rf=0.62，对氨基酚比移值=0.32。

样品溶液点样后的主斑点与对乙酰氨基酚对照品一致。

未显示对氨基酚的斑点，与我们测定经考棱样品的涪出度与含量的结果是一致的由此可见。

6、紫外光谱法
7、高效液相色谱法
优选：方法2和方法4较好，特异性强，现象明显易观察，操作简单，综合了仪器分析和化学方法。

八、苯妥英钠片
结构式：
理化性质：本品具有环状酰胺结构，在碱性条件下加热可开环，可与吡啶硫酸铜反应。

含有钠离子，可发生焰色反应。

实验方法：1，本品溶液与碱加热，分解产生二苯基脲基乙酸，最后生成二苯基氨基乙酸，并释放出氨气。

2.取本品细粉约相当于苯妥英钠1g，加水20ml，浸渍使苯妥英钠溶解，滤过，向滤液中加入二氯化汞试液数滴，可生成白色沉淀，在氨试液中不溶。

3.吡啶-硫酸铜试液鉴别，显蓝色的是苯妥英钠
4.紫外光谱法
实验仪器与试剂：UV-2450紫外分光光度仪，GR-202电子分析天平，可调压电炉，酒精灯。

实验步骤：制备好的供试品溶液的续略液0.2ml,(相当于苯妥英钠10mg)加高锰酸钾10mg，氢氧化钠0.25g与水10ml，小火加热至沸并保持微沸2min,放冷。

各取5ml加正庚烷20ml，
振摇提取，照紫外可见分光光度法在248+-2nm的波长处测定吸光度（A*nm）
5，焰色反应。

取本品的细粉适量（约相当于苯妥英钠1g）,加水20ml，浸渍使苯妥英钠溶解，滤过，加二氯化汞试液数滴，即生成白色沉淀，在氨试液中不溶。

另取部分滤液，取铂丝,用盐酸湿润后,蘸取滤液,在无色火焰中燃烧,火焰即显鲜黄色。

6，红外光谱法取本品适量（约相当于苯妥英钠150mg），加水20ml，使其溶解，加3mol/L 盐酸溶液5ml，加三氯甲烷20ml提取，分取三氯甲烷层，用水20ml洗涤三氯甲烷层，取三氯甲烷液，置水浴蒸干，残渣置105℃干燥1小时，残渣的红外光吸收图谱应与对照品图谱一致。

7，高效液相色谱法。

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致
8，薄层色谱法。

测得其所得图谱应与对照品色谱图一致。

优选：选择方法4和方法5较好，特征性强，现象明显，对环境污染小，操作简单，综合了仪器分析和化学方法。

九、异烟肼片
结构式：
理化性质：异烟肼具有的烟肼基和吡啶环，烟肼基具有还原性，吡啶环具有碱性实验方法：1.还原反应，酰肼基具有还原性，还原硝酸银中的Ag成单质银，肼基氧化成氮气。

2.沉淀反应：分子中吡啶环有碱性，可以和重金属盐类（氯化汞、硫酸铜、碘化鉍钾）以及苦味酸形成沉淀
3.缩合反应：异烟肼含酰肼基，可以和含羰基的试剂如香草醛发生缩合反应，生成异烟腙衍生物，为黄色结晶物。

4，红外光谱法：取本品细粉适量（约相当于异烟肼50mg），加乙醇10ml，研磨溶解，滤过，滤液蒸干，残渣经减压干燥，依法测定。

本品的红外光吸收图谱应与对照品的一致。

5，紫外光谱法：取本品，照溶出度测定法，以水1000ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经30分钟时，取溶液5ml滤过，精密量取续滤液适量，用水定量稀释制成每1ml中含10∽20ug的溶液，照紫外分光光度法，在263nm处有最大吸收，吸收系数为307。

6，高效液相色谱法。

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致.
7，薄层色谱法。

测得其所得图谱应与对照品色谱图一致。

8、戊烯二醛反应(Köning反应)：溴化氰与芳伯胺作用于吡啶环，水解生成戊烯二醛，再与芳伯胺缩合生成的戊烯二醛衍生物。

反应式：
用于异烟肼鉴别时，先用KMnO4或溴水氧化异烟酸,再与溴化氰作用。

9、分解产物的反应： 异烟肼与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可发生脱羧降解，并有吡啶臭味逸出。

异烟肼−−−−−−−→−加热无水碳酸钠或氢氧化钙/吡啶臭味
10、二硝基氯苯反应（Vongerichten 反应）： (无水条件)
吡啶及其衍生物 + 2,4-二硝基氯苯 混合共热或热至熔融加醇制KOH 溶液溶解残渣
溶液紫红色。

反应式：
优选：还原反应和紫外光谱法，化学鉴别法和光谱鉴别法相互补充，化学法简便，灵敏度高，光谱法专属性好。

十、维生素B 6片
结构式·HCL
（一）理化性质：维生素B6包括吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺，其基本化学结构为3一甲基一3一羟基一5一甲基吡啶。

它们易溶于水及乙醇，对热的稳定性与介质的pH有关，在酸性溶液中稳定，而在碱性溶液中容易被分解破坏。

三种形式的维生素B。

对光均较敏感，尤其是在碱性环境中。

（二）试验方法：
1、与氯亚氨基-2,6-二氯醌试液反应
原理：维生素B6结构中含有活泼-H，能与氯亚氨基-2,6-二氯醌反应显蓝色。

操作：取本品细粉适量（约相当于维生素B610mg），加20%醋酸钠溶液5ml,振摇使维生素B6溶解，滤过，滤液加水使成100ml溶解，各取1ml，分别置甲、乙两支试管中，各加20%醋酸钠溶液2ml，甲管中加水1ml，乙管中加4%硼酸溶液1ml，混匀，各迅速加氯亚氨基-2,6-二氯醌试液1ml，观察两管中液体颜色。

结果：甲管中显蓝色，几分钟后即消失，并转变为红色，乙管中不显蓝色。

2、沉淀反应
原理：维生素B6结构中含有Cl原子。

操作：取本品细粉适量，加水振摇，滤过，先加氨试液使成碱性将析出的沉淀滤去，取滤液再加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液，观察。

结果：生成白色凝乳状沉淀，分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。

3、Cl-的检查
原理：维生素B6结构中含有Cl原子。

操作：取本品细粉少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，观察现象。

结果：生成氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

4、分解反应
原理：本品加热分解产生吡啶，吡啶显碱性并有吡啶特臭。

操作：取本品的细粉适量(约相当于维生素B6 50mg)置小坩锅中徐徐升温，产生气体，观察蓝色石蕊试纸颜色。

结果：升华时的气体能使湿润的蓝色石蕊试纸立即变红，并产生吡啶的特臭。

5、与高锰酸钾试液反应
原理：维生素B6具有还原性。

操作：取本品的细粉适量(约相当于维生素B610mg)加水至10ml溶解摇匀，加氢氧化钠试液5滴使呈碱性，加高锰酸钾试液1滴，振摇，观察颜色。

结果：紫色消失，溶液转变成绿色。

6、与三氯化铁反应
原理：维生素B6结构中含有烯醇型-0H，能与三氯化铁试液反应显紫堇色。

操作：取本品的细粉适量(约相当于维生素B6 10mg)加水至10ml溶解摇匀，滴加几滴三氯化铁试液，观察液体颜色。

结果：显紫堇色。

优选：方法2和方法5较好，特异性强，操作简单，反应现象明显易于观察。

十一、维生素B
片的鉴别
2
结构式
（一）理化性质：维生素B2为黄或橙黄色结晶粉末，味微苦。

有旋光性，在碱性溶液中呈左旋性。

极微溶于水，几乎不溶于乙醇和氯仿，不溶于丙酮和乙醚，在水中有黄绿色荧光，最大吸收波长565nm。

在酸性溶液中稳定，碱性溶液中易分解。

对光线敏感，发生光化不可逆反应。

（二）试验方法：
1、荧光反应
原理：维生素B2分子中存在п-п电子跃迁。

操作：取本品细粉适量(约相当于维生素B2 1mg),加水100ml,振摇，浸渍数分钟，滤过，滤液在投射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光，分成二份：一份中加无机酸或碱溶液，另一份中加连二亚硫酸钠结晶少许，摇匀，观察。

结果：第一份中荧光消失，第二份中黄色消退，荧光亦消失。

2、荧光分光光度法
原理：维生素B2在365nm处的紫外灯下可见强烈的黄绿色荧光。

操作：取本品10g，加水30ml，搅匀，分成两份，分别移入甲乙两个试验管中，甲管中加水2ml，乙管中加盐酸2ml，摇匀，置365nm紫外灯下检视，观察。

结果：甲管中溶液显黄绿色荧光，乙管中溶液不显荧光。

3、紫外-可见分光光度法
维生素B2在267nm、375nm、444nm的波长处有最大吸收，375nm处的吸收度与267nm处的比值在0.31~0.33，444nm处的吸收度与267nm处的比值在0.36~0.39。

4、测定比旋度
避光操作。

取本品，精密称定，加无碳酸盐的氢氧化钠溶液（0.05mo/L）溶解并定量稀释制成每1ml中约含5mg 的溶液，在30分钟内，依法测定（附录ⅥE），并严格控制温度，比旋度为-115°至-135°。

5、高效液相色谱法：维生素B2供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

6、红外光谱法：本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集447图）一致。

优选：方法2和方法3较好，特异性强，操作简单，现象明显，综合了仪器分析和化学方法。