不同产地党参HPLC指纹图谱研究及比较

不同产地党参HPLC指纹图谱研究及比较
刘晓芳;赵慧辉;刘养清;程若敏;刘小玉;王秀文;焦建华
【摘要】目的:研究不同产地党参的指纹图谱.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱:Grace Smart RP C18柱(250 nm×4.6 nm,5μm),以乙腈-0.1%醋酸为流动相进行二元梯度洗脱,流速0.6mL/min,检测波长268 nm,柱温30℃.结果:党参样品HPLC指纹图谱可明确显示不同党参样品的差异性和相似性,精密度、稳定性和重复性实验的RSD均小于3%,用党参炔苷作为参照物可确认党参样品中的活性成分.结论:本方法操作简便,结果稳定可靠,且利用指纹图谱的整体性,可以对不同产地党参药材进行真伪鉴别,并对质量进行定性、定量评价.
【期刊名称】《山西中医学院学报》
【年(卷),期】2010(011)001
【总页数】3页(P28-29,60)
【关键词】党参;党参炔苷;指纹图谱;高效液相色谱
【作者】刘晓芳;赵慧辉;刘养清;程若敏;刘小玉;王秀文;焦建华
【作者单位】山西中医学院,山西,太原,030024;北京中医药大学,北京,100029;山西中医学院,山西,太原,030024;山西中医学院,山西,太原,030024;山西中医学院,山西,太原,030024;山西中医学院,山西,太原,030024;山西中医学院,山西,太原,030024【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
党参为我国传统的名贵中药材之一，味甘、性平，归脾、肺经，具有补中益气、健脾益肺之功，主治脾肺虚弱、气短心悸、食少便溏、虚喘咳嗽、内热消渴等证。

《中华人民共和国药典》［1］2005年版收载的党参为桔梗科植物党参、素花党
参或川党参的干燥根，主产于山西、甘肃、陕西、四川等省，不同产地党参在化学成分含量上有所差异。

目前有文献报道采用HPLC测定党参药材中党参炔苷的含
量［2-3］，而有关不同产地党参指纹图谱的研究尚未见报道［4-5］。

本文旨在
建立简单、快速而准确地鉴别不同产地党参真伪、优劣及定量的方法。

1 实验材料
1.1 实验仪器
电子分析天平（上海精密仪器有限公司生产），DIONEX高效液相色谱仪，PDA 检测器，超声清洗机。

1.2 药品与试剂
党参药材来源：No.1为潞党参（山西平顺），No.2为五花蕊（山西陵川），No.3为紫团参（山西壶关树掌镇），No.4为党参（山西晋城白云农贸市场购），No.5为紫团参（野生，山西壶关树掌镇），No.6为台党参（山西五台山），No.7为条党参（甘肃陇西），No.8为野党参（山西兴县固贤乡），No.9为党参（甘肃定西市通渭县水坑村），No.10为党参（甘肃省天水市甘谷县大石乡王湾村），No.11为党参（甘肃省天水市甘谷县大石乡榆川村），No.12为党参（甘肃省定西市通渭县鸡川镇），No.13为党参（四川省龙泉山），No.14为川党（四川成都）；党参炔苷对照品购自上海友思生物技术有限公司。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Grace Smart RP C18柱（250 nm×4.6 nm，SHM）；流动相：乙腈-
0.1%醋酸；检测波长：268 nm。

流动相梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序时间（min）乙腈（%） 0.1%醋酸（%）流量
（mL/min）0694 0.615 15 85 0.620 15 85 0.625 18 82 0.645 32 68 0.660 6 94 0.6
2.2 对照品溶液的制备
取党参炔苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液，稀释为一定浓度，备用。

2.3 样品溶液的制备
党参样品0.3 g，加无水乙醇5 mL，超声提取25 min，滤过，再加无水乙醇5 mL超声提取15 min，滤过，再加无水乙醇4 mL超声提取10 min，滤过，合并3次滤液，浓缩，用无水乙醇洗涤并定容到5 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.4 精密度试验
取8号样品药材，按“2.3”样品制备方法制备供试品1份，进样量10 μL，连续进样6次，测得指纹图谱中党参炔苷峰的保留面积分别为1.90，1.86，1.85，
1.88，1.93，1.83，RSD 为 1.9%。

结果表明，该方法精密度良好。

2.5 稳定性试验
取8号样品药材，按“2.3”样品制备方法制备供试品 6 份，进样量10 μL，分别在 0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、8 h测定其指纹图谱，测得指纹图谱中党参炔苷峰的保留面积分别为 1.81，1.92，1.89，1.89，1.84，1.82，RSD为2.3%。

结果表明，供试品溶液在8 h内稳定。

2.6 重复性试验
取8号样品药材，按“2.3”样品制备方法制备供试品5份，进样量10 μL，测得指纹图谱中党参炔苷峰的保留面积分别为 1.88，1.91，1.89，1.77，1.87，RSD为2.9%。

结果表明，该测定方法的重复性良好。

2.7 14种党参样品HPLC图的共有峰
按2.3的方法提取14种党参样品，采用2.1中表1的流动相梯度洗脱程序进行梯度洗脱，进样量10 μL，检测波长268 nm。

党参炔苷标准品和样品的HPLC图，结果见图1～图4。

14种党参的HPLC图进行比较，其共有峰统计结果见表2。

图1 党参炔苷标准品HPLC图
图2 No.2 HPLC图
图3 No.12 HPLC图
图4 No.13 HPLC图
表2 党参共有峰的统计（min）来源 6.0 6.8 8.0 18.8 21.4 28.4 37.0 42.0 No.1 + + + +No.2 + + + + +No.3 + + + + +No.4 + + + + + +No.5 + + + + + + +No.6 + + + + + + + +No.7 + + + + + +No.8 + + + +No.9 + + + + + + + +No.10 + + + + + +No.11 + + + + + + +No.12 + + + +No.13 + + + + + + +No.14 + + + + + + + +数目统计 10 8 7 5 14 13 13 14
由表2可知，42 min党参炔苷的峰为14个党参样品所共有，但含量差异较大，No.4、No.7、No.14的党参炔苷峰面积较小，No.12的党参炔苷峰面积较大。

21.4 min、28.4 min、37.0 min为党参的共有峰，但强度各不相同，因此可作为党参的特征峰。

此外还有一些非共有峰有鉴别意义。

3 讨论
对 210 nm、254 nm、268 nm、272 nm 扫描的各波长下的色谱图进行分析比较，结果在268 nm波长下各峰分离良好，峰数目较多，且党参炔苷在此波长下有最大吸收，故以此波长作为检测波长。

对样品采用甲醇、50%甲醇、无水乙醇、75%乙醇、无水乙醇与氯仿1∶1的混合溶剂，无水乙醇与乙酸已酯1∶1的混合溶剂等进行提取、比较，实验结果表明，无水乙醇的效果最好，提取量高，干扰少，重复性好。

实验过程中对不同的梯度洗脱程序进行了比较，结果表明使用文中所选择的梯度洗脱程序样品的分离度和峰的数目都较为合适。

实验过程中对采用不同浓度的酸以及水做流动相进行了比较，用水做流动相检测不到党参炔苷的峰，而用0.3%醋酸和0.1%醋酸两种不同酸度的酸效果相差不明显，文中选择0.1%醋酸做流动相。

实验过程中对采用1.0 mL/min，0.8 mL/min，0.6 mL/min的不同流量进行比较，流量为1.0 mL/min和0.8 mL/min时，党参炔苷的峰分别在33.38 min和37.66 min处；而流量在0.6 mL/min时，党参炔苷的峰在42.0 min处，实验表明0.6 mL/min的流量较为合适。

不同产地的党参由于地理环境、气候、土壤等生长条件不同以及采收后加工炮制方法不同，党参药材中各成分的有无以及含量有明显的差异。

通过党参指纹图谱的对比，可明显显示其差别，有利于党参质量的进一步评价和临床鉴别用药。

参考文献
［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：199.
［2］赵晓华，刘养清，裴晓丽.党参中党参炔苷的HPLC分析［J］.山西中医学院学报，2006，7（5）：49-50.
［3］宋丹，程雪梅，李隆云，等.HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量［J］.中国中药杂志 2008，33（17）：2133-2135.
［4］宋丹，程雪梅，李隆云，等.川党参的高效液相色谱指纹图谱研究［J］.中国
药学杂志，2008，43（15）：1136-1139.
［5］封士兰，胡芳弟，刘欣，等.HPLC研究甘肃产白条党参指纹图谱［J］.中成药，2005，27（7）：745-748.。