决明子＼枸杞果＼绿茶对非酒精性脂肪肝小鼠血脂代谢的影响对比

决明子＼枸杞果＼绿茶对非酒精性脂肪肝小鼠血脂代谢的影响对比作者单位：300270 天津医科大学临床医学院
通讯作者：苏贺靖
目的对比决明子、枸杞果、绿茶对非酒精性脂肪肝模型小鼠血脂代谢以及脂肪肝发展的影响情况。

方法采用高脂饮食法（high fat diet，HFD）建立非酒精性脂肪肝小鼠模型，用决明子、枸杞果、绿茶浓缩液分别对甲、乙、丙三组予以灌胃治疗，同时对丁组模型对照组和戊组空白对照组予等量的生理盐水灌胃。

经过4周喂养后，每2周在各组分别取5只小鼠进行解剖，取肝脏做石蜡切片进行组织病理学观察。

同时采集静脉血，采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）以及高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）（n＝5），并取肝脏，制肝匀浆，测定LTG、LTC。

结果模型治疗组与两对照组相比，HDL-C有所升高，差异有统计学意义（P＜0.05），TC、TG、ALT、AST、LDL－C、LTG、LTC 明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。

结论决明子、枸杞果、绿茶对于非酒精性脂肪肝模型对肝脏脂肪沉积以及肝内炎症发展均有一定程度的抑制作用，其抑制强度分别为决明子>枸杞果>绿茶。

标签：决明子；枸杞果；绿茶；脂肪肝；血脂代谢；肝指数
Cassia seed, wolfberry fruit and green tea for non-alcoholic fatty liver lipid metabolism in mice compared YAO Peng,ZHANG Yu,QI An-long,HUANG Ke-nan,LIU Tao,WANG Wei,SHEN Jia-jia，REN Ting-yuan,SU He-jing,ZHANG Jie,ZHU Min.Tianjin Medical University,School of Clinical Medicine，Tianjin 300270，China
【Abstract】Objective To contrast cassia seed, wolfberry fruit and green tea of non-alcoholic fatty liver lipid metabolism of model mice and affect the development of situation.Methods To establish the mouse model of non-alcoholic fatty liver with the high fat diet （high fat diet, HFD）, which was given concentrates of cassia seed, wolfberry fruit and green tea to A, B, C three groups respectively with stomach treatment, meanwhile to the E control group and D model control group fed the same amount of saline. After 4 weeks’ feeding, dissected 5 mice respectively from each group every 2 weeks,made the paraffin section of mouse liver for histopathological observation.Collected the venous blood serum and the liver homogenate then detected total cholesterol （TC）,triglyceride （TG）, alanine aminotransferase（ALT）, aspartate aminotransferase （AST）, low-density lipoprotein cholesterol （LDLC）and high density lipoprotein cholesterol （HDL-C）（n5）in blood serum and determine the LTG, LTC of liver homogenate by automatic biochemical analyzer.Results Compared with two control groups，HDL-C is higher in model treatment group, so the variation is remarkably （P＜0.05）,TC、TG、ALT、AST、LDL－C、LTG、LTC level is obviously
decreased,the the variation is remarkably （P＜0.01）.Conclusion It suggested that the three materials can significantly improved the fuction of liver and reduce the tissue damage and inhibite the fatty liver degeneration, which the intension of inhibition is cassia> medlar> green tea.
【Key words】Cassia seed；Wolfberry；Green tea；Adiposis hepatica；Lipidemia；Hepatic index
脂肪肝是由多种原因引起的肝脏脂肪性病变，当肝细胞内脂质蓄积超过5%，或组织学上每单位面积1/3以上肝细胞脂变时，称为脂肪肝。

近年来，由于生活习惯、饮食结构等多种因素的影响，我国脂肪肝发病率有逐渐增加的趋势，虽然脂肪肝常被认为是良性病变，但大量资料表明，部分脂肪肝患者可发展为肝纤维化，甚至肝硬化，可以认为脂肪肝是肝纤维化及肝硬化的前期病变。

高脂血症作为引发脂肪肝第一大因素，其也是引发心脑血管疾病危险因子。

近年来决明子、枸杞果、绿茶作为降脂保健品，越来越受到人们的关注，对它们的研究也越来越深入［1］。

国内外对它们的药理研究及临床应用方面取得不少新进展，它们都具有降低血清胆固醇、甘油三酯的作用，其药理价值也受到人们的关注。

决明子除含有糖类、蛋白质、脂肪外，还含类固醇化合物、大黄酚、大黄素、决明素、钝叶决明素等，还有人体必需的微量元素铁、锌、锰、铜、镍、钴、钼等［2］。

其中大黄素葡萄糖甙、大黄素蒽酮、大黄素甲醚，具有降低血清胆固醇、甘油三酯和强心作用，并且能升高高密度脂蛋白、降低低密度脂蛋白。

枸杞果含有甜菜硷、多糖、粗脂肪、粗蛋白、胡萝卜素、维生素A、维生素C、维生素B1、维生素B2及钙、磷、铁、锌、锰、亚油酸等营养成分，具有防止动脉粥样硬化、抑制脂肪肝、促进肝细胞再生的功效［3］。

绿茶的主要成份是茶多酚、咖啡碱、脂多糖、茶氨酸、维生素C等。

尤其茶多酚中的儿茶素能降低血浆中总胆固醇、游离胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇，以及三酸甘油酯，同时可以增加高密度脂蛋白胆固醇，抑制动脉粥样硬化发生。

但是，目前探讨决明子、枸杞果、绿茶影响血脂代谢发展的疗效对比的研究并不多［4］。

为此笔者通过决明子、枸杞果、绿茶浓缩液灌喂用高脂、高胆固醇饮食建立非酒精性脂肪肝模型小鼠，观察血脂代谢的变化情况，为更深入的科研工作提供一些基础数据。

1 材料和方法
1.1 实验动物KM小鼠，清洁级，小鼠平均体重为21.3 g，波动范围在1.4 g 上下。

1.2 实验试剂胆固醇（上海源聚生物科技有限公司生产，批号：080502）；胆酸（中国医药集团上海化学试剂公司，批号：20070120）；猪油、蛋黄粉、普通饲料、决明子、枸杞果、绿茶（市购）；生理盐水。

1.3 实验仪器美国贝克曼CX5 PRO全自动生化分析仪，尼康YS100和尼康E200显微镜、加拿大PixeLINK显微摄像系统,上海良平仪器仪表公司JA3003电子天平,沈阳龙首电子仪器公司LS-2055AT的全自动石蜡切片机。

1.4 动物分组及处理30日龄以上雌鼠250只，随机取其中125只，并把125只KM小鼠随机分为5组，空白对照组予以普通饲料，其余4组采用高脂饮食建立的非酒精性脂肪肝模型。

给予高脂饲料饲（10%猪油，10%蛋黄粉，4%胆固醇，1%胆酸，75%普通饲料），饲喂4周后每组解剖5只［5，6］，病理证实小鼠非酒精性脂肪肝模型已形成，予以灌喂治疗。

甲、乙、丙三组为治疗组，丁组为模型对照组，戊组为空白对照组，甲组经灌喂予决明子浓缩液，乙组经灌喂给予枸杞果浓缩液，丙组经灌喂予绿茶浓缩液，丁、戊组同时予等量的生理盐水灌喂对照，每天早晚9点各灌喂一次；每次每只小鼠灌喂量为10 mg/kg，各组按原饲料进行饲养［7,8］。

实验开始后每2周各组动物均取5只解剖，取肝作组织病理学观察，了解其病理变化情况，同时采集静脉血，分离血清，采用全自动生化分析仪，测定TC、TG、ALT、AST、HDL－C和LDL－C浓度，并取肝脏，制肝匀浆，测定LTG、LTC。

表1 KM小鼠分组及不同饮食喂养情况
1.5 观测指标及检测
1.5.1 一般项目观察动物的体重、饮食、毛发、活动情况、肝/体重比等。

1.5.2 血脂检测于动物处死前，采取各组动物血液分离血清，采用生化分析仪测定。

1.5.3 病理学观察取肝左叶用10%中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋切片，HE染色［9］，作肝组织病理学观察，光学显微镜下拍照记录，了解炎症改善情况和组织脂肪变性的程度。

1.6 统计学方法采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，等级资料用t检验，计数资料用χ2检验。

P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 小鼠的一般情况实验期间空白对照组（戊）精力充沛，灵活好动，饮食正常，皮毛整洁，体重缓慢增加；模型对照组（丁）饮食量大，嗜睡，毛色偏黄，个体较大，体重增长较正常组较快；模型治疗组（甲、乙、丙）较模型对照组饮食量较小，活动增加，毛色偏黄，个体较小，体重增长较慢。

模型治疗乙组和丙组较甲组，活动减少、皮毛凌乱，有不同程度的精神萎靡。

2.2 体重和肝指数模型治疗组较模型对照组，小鼠体重变化较小，肝指数有明显降低，其中甲组降低明显（P＜0.01），见表2。

表2 各组小鼠体重、肝指数变化情况
2.3 血液指标5组小鼠采集静脉血，分离血清观察查血脂情况的改变见表3。

2.4 肝脏病理学变化
2.4.1 肉眼观察实验开始时空白对照组（戊组）小鼠肝脏形态颜色均正常，其余4组模型组小鼠肝脏体积增大，包膜紧张，色泽灰黄，切面油腻。

治疗开始2周后模型治疗组，甲组小鼠包膜紧张，边缘较钝，质地略软，色变灰，表面呈花斑状，触之似泥块并有油腻感，部分小鼠肝脏有黄白色的局灶性脂肪沉积，乙、丙两组较之甲组色黄，质地较硬。

模型对照组（丁组）小鼠脂肪肝无改善，空白对照组（戊组）小鼠肝脏形态正常。

治疗开始4周后模型治疗组，甲组小鼠肝脏切面油腻，外形稍饱满圆钝，质地略软，色灰，乙、丙两组较之甲组改变较小。

模型对照组（丁组）小鼠脂肪肝无改善，戊组（空白对照组）小鼠肝脏形态正常。

治疗开始6周后模型治疗组甲组小鼠肝脏外形饱满圆钝，质地较脆，色灰白，乙、丙两组小鼠肝脏切面油腻，质地略软，色灰黄。

模型对照组（丁组）小鼠脂肪肝加重，空白对照组（戊组）小鼠肝脏形态正常。

治疗结束时模型治疗组，甲组小鼠肝脏外形饱满圆钝，质地较脆，色灰红（图A），乙组小鼠肝脏外形饱满，质地较软，色灰白（图B），丙组小鼠肝脏切面油腻，质地略软，色灰白（图C）。

模型对照组（丁组）小鼠脂肪肝加重，脏体积明显增大，包膜紧张，边缘较钝，色黄，切面油腻（图D）。

空白对照组（戊组）小鼠肝脏形态正常（图E）。

2.4.2 光镜观察在10×40倍光镜下，HE染色。

正常对照组（戊组）肝小叶结构正常，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列。

无肝细胞肿胀及脂肪变（见图1）；治疗开始2周后模型对照组（丁组）小鼠肝组织HE染色显示：小鼠肝脏呈中度脂肪变（见图2），且肝脏脂肪变性程度明显高于模型治疗组（甲、乙、丙组）小鼠。

模型治疗组（甲、乙、丙组）的三组小鼠中，甲组小鼠较乙组和丙组小鼠小叶内脂变程度轻（见图3）；治疗开始6周后模型对照组（丁组）小鼠肝组织HE染色显示小鼠呈中重度的大泡性脂肪变，脂滴分布密度增大并可见脂滴融合（见图4）。

模型治疗组（甲、乙、丙组）的三组小鼠中，甲组小鼠较乙组和丙组小鼠小叶内炎症程较轻，肝内脂肪滴明显减少，乙、丙两组小鼠肝内炎症情况也有不同程度的降低；实验结束时模型对照组（丁组）小鼠肝组织HE染色可见大部分肝细胞浆含大脂滴，部分脂滴形成大空泡，将细胞核挤压至一边，且以中央静脉周围为甚；肝小叶结构破坏，肝细胞排列不规整，并伴大量肝细胞肿胀，脂滴融合形成脂囊（见图5），模型治疗组（甲、乙、丙组）的三组小鼠轻微的肝细胞脂肪变性，其中，甲组小鼠较乙组和丙组小鼠小叶内炎症程较轻，肝内脂滴明显减少，乙、丙两组小鼠肝内汇管区及小叶内炎症细胞浸润和散在的点状坏死，其炎症情况也有不同程度的降低（见图6）。

3 讨论
本实验选用作为养生佳品的决明子、枸杞果和绿茶的浓缩液来治疗由高脂饮食法建立的非酒精性脂肪肝小鼠模型，经过一段实验周期后，测定其血液指标并制作病理切片，来研究三种浓缩液对血脂代谢的影响情况。

通过对比表明，决明子、枸杞果、绿茶均在不同程度上具有抑制肝脏脂肪沉积和抗肝组织损伤以及脂肪变性的作用［10］，其影响程度为决明子>枸杞果>绿茶。

虽然实验在模型小鼠上取得了较明显的效果，但小鼠与人在脂类代谢机制上有很多不同之处，因此在临床应用上还有待进一步探讨。

加之实验条件有限，实验数据的收集和整理也有
很多不完善之处，希望与大家共同探讨研究。

参考文献
［1］Wang JT, Liu YL. Non-alcoholic fatty liver disease:the problems weare facing. Hepatobil Pancreat Dis Int，2003，2:334-337.
［2］Deng YQ, Fan XF. Liver fibrosis indexes in nonalcoholic fatty liverdisease. Zhejiang Daxue Xuebao Yixueban，2003，32:241-243.
［3］周新.应重视血脂指标的联合监测与综合分析.中华检验医学杂志,2005,28（1）:8.
［4］Zafrani ES. Non-alcoholic fatty liver disease: an emergingpathological spectrum. Virchows Arch，2004，444:3-12.
［5］王宗伟.脂肪肝研究进展.临床肝胆病杂志，1998，14（1）:8-11.
［6］魏金茹.50例脂肪肝相关因素分析.中国中医药信息，1998，（3）：41.
［7］王德山，肖玉芳，董朝晖，等.枸杞抗实验性高血脂、肝脂量效关系及毒性研究.辽宁中医杂志，1997，24（12）:567-568.
［8］钟洁，吴万垠.肝胆宁抗乙硫氨酸致小鼠脂肪肝的实验研究.新消化病研究，1995，3（3）.
［9］佘大德.脂肪肝的诊断与治疗.新中医，1999，31（2）：55-56.
［10］唐树林.脂肝乐治疗脂肪肝100例.辽宁中医，1997，24（4）：170.。