孕妇外周血胎儿游离DNA检测在无创性产前诊断中的价值分析

孕妇外周血胎儿游离DNA检测在无创性产前诊断中的价值分析
发布时间：2022-07-28T07:05:10.302Z 来源：《医师在线》2022年4月7期作者：任敏
[导读]
任敏
（安徽医科大学第二附属医院；安徽合肥230000）
【摘要】目的：分析胎儿染色体非整倍体诊断中孕妇外周血胎儿游离DNA无创性产前检测的意义。

方法：选取2020年8月-2021年8月期间在我院产前诊断与生殖中心选择羊水穿刺行胎儿染色体核型分析及外周血胎儿游离DNA无创性产前检测的孕妇共300例，观察胎儿染色体非整倍体疾病的发生率及无创性产前检测的准确率。

结果：胎儿染色体异常共检出10例，染色体异常发生率3.33%。

胎儿游离DNA无创性产前检测性染色体高危2例、18-三体高危3例、21-三体高危4例；羊水染色体核型分析结果检出性染色体异常3例、18-三体3例、21-三体4例，总体符合率91.67%。

以羊水染色体核型分析结果为准，外周血胎儿游离DNA无创性产前检测诊断胎儿非整倍体的特异度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值、准确度分别为82.60%、88.03%、93.66%、73.50%、95.01%，ROC曲线下面积为0.884（95%CI：0.027-0.942）。

结论：孕妇外周血胎儿游离DNA无创性检测为一种可靠的产前检测方法，可有效检出胎儿染色体非整倍体。

【关键词】游离DNA；产前诊断；非整倍体；核型分析
胎儿染色体非整倍体是围产期胎儿死亡、新生儿出生缺陷的主要原因，也是妊娠早中期最常见的染色体异常。

产前进行有效的筛查是降低出生缺陷行之有效的手段，产前进行胎儿染色体非整倍体检测包括传统的血清学筛查、无创性胎儿游离DNA检测及介入性穿刺行胎儿染色体核型分析。

相比无创性胎儿游离DNA检测而言，羊水染色体核型分析诊断胎儿染色体非整体准确率较高，但术后可出现流产、宫内感染、羊水渗漏等风险，且传统血清学筛查假阳性率较高[1]。

无创性胎儿游离DNA检测大大提高了准确率，即从孕妇外周血提取来自胎儿的游离DNA片段进行新一代高通量测序[2]。

本文针对无创性胎儿游离DNA检测进行深入的探讨，以分析其对胎儿染色体非整倍体的诊断效能。

1资料与方法
1.1资料
选取2020年8月-2021年8月期间在我院产前诊断与生殖中心选择羊水穿刺行胎儿染色体核型分析及外周血胎儿游离DNA无创性产前检测的孕妇共300例，年龄36-41岁，均值（37.86±3.22）岁，孕周18-25周，均值（20.36±2.17）周。

纳入标准：B超胎儿结构异常；羊水过多或过少；染色体异常家族史；染色体异常胎儿生育史；孕早期接触致畸物质；不良妊娠史；血清学筛查高风险。

1.2方法
（1）无创性胎儿游离DNA检测方法
采集5 ml孕妇外周血混匀置于EDTA 抗凝管中，4℃条件下提取DNA，紫外分光光度法鉴定完整性及RNA纯度，高通量基因检测计数进行DNA测序和分析。

（2）羊水染色体核型分析方法
抽取20 ml羊水，离心10min（1500r/min），取沉淀物加入羊水培养瓶，置于37℃、5% CO2培养箱7-10d，适当更换培养液，加入秋水仙素，经37℃低渗、固定、制片、G显带、染色处理，得到分裂相的羊水细胞标本20 个，行计数及核型分析。

1.4统计学处理
SPSS22.0进行数据分析，ROC分析无创性胎儿游离DNA检测诊断胎儿非整倍体的效能。

真阳性数：a，假阳性数：b，假阴性数：c，真阴性数：d，a／(a+c)=敏感性，d／(b+d)=特异性，a／(a+b)=阳性预测值，d／(c+d)=阴性预测值。

2结果
2.1胎儿游离 DNA无创性产前检测与羊水染色体核型分析结果对比
胎儿染色体异常共检出10例，染色体异常发生率3.33%。

胎儿游离 DNA无创性产前检测性染色体高危2例、18-三体高危3例、21-三体高危4例；羊水染色体核型分析结果检出性染色体异常3例、18-三体3例、21-三体4例，总体符合率91.67%。

3讨论
据统计，我国出生缺陷的总发生率约为5.6%，以全国年出生数1600万例计算，每年新增出生缺陷约90万例，其中出生时临床明显可见的出生缺陷约25万例，成为新生儿死亡的第二大病因，约占19.1%[3]。

其中遗传因素所导致的占比10%，而新生儿染色体异常中非整倍体异常占比95%。

目前染色体疾病尚无有效的治疗方法，孕期产前筛查和诊断是降低染色体异常胎儿出生的主要手段。

目前我国广泛采用的孕早中期血清学筛查的检出率不足75%，假阳性率5%-8%，漏诊率高达30%-40%。

而介入性产前诊断技术虽为胎儿染色体非整倍体诊断的“金标准”，但容易增加流产、宫内感染、羊水渗漏和损伤胎儿等风险，且存在细胞培养周期长、成本高，临床上不被广大孕妇所接受[4]。

因而，寻找一种新的无创、快速、准确的产前检测胎儿非整体的方法成为重点研究方向。

香港中文大学卢煜明教授等在1997年首次发现孕妇血浆中存在少量的胎儿游离DNA(cffDNA)，这一发现为无创产前检测技术提供了理论可能[5]。

cffDNA在孕妇怀孕的第7周即可在外周血中被检测到，最初三个月内cffDNA含量每周增加21%，约六个月时进入平台期，分娩后2小时内迅速消失。

这一特点使其可以在早期检测、具有特异性，且不受以往妊娠的干扰[6]。

随着测序成本的降低，高通量测序技术迅速发展，至2010年无创产前检测技术已逐步成为产前筛查的新模式，并在世界范围内的临床推广。

近年来，国内也进行了大数据的无创检测胎儿DNA的研究，并取得了理想的检测准确率[7]。

本研究显示孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测技术共检出染色体异常胎儿9例，总体符合率91.67%。

从诊断效能分析可见，孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测技术诊断胎儿非整倍体的效能较高。

本研究显示孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测技术对性染色异常的检测效能较低，可能与孕妇性染色体异常嵌合体或局限性胎盘嵌合体有关。

同时有研究发现该检测技术也存在一定的局限性，因而，非整倍体胎儿的临床诊断仍需结合多项检测结果来进行判定，不可依赖单一的检测手段[8]。

综上，无创性胎儿游离DNA检测为一种可靠、快速的产前检测方法，可有效检出胎儿染色体非整倍体疾病，为临床诊断提供了多种选择的可能。

【参考文献】
[1]徐燕, 袁幼红, 王琳琳,等. 无创产前基因检测筛查胎儿性染色体异常的临床意义探究[J]. 中外医学研究, 2019, 17(3):3-3.
[2]欧阳宁.无创产前DNA检测可有效筛查唐氏综合症降低出生缺陷[J].基因组学与应用生物学,2019,38(04):1926-1931.
[3]中华人民共和国卫生部.《中国出生缺陷防治报告(2012)》问答[J]. 中国实用乡村医生杂志, 2012,19(20):3-5.
[4]Taylor-Phillips S, et al. Accuracy of non-invasive prenatal testing using cell-free DNA for detection of Down, Edwards and Patau syndromes: a systematic review and meta-analysis[J]. BMJ Open, 2016. 6(1): e010002. [5]Lu, Wan, Ting Huang,?Xin-Rong Wang, et al. Next-generation sequencing: a follow-up of 36,913 singleton pregnancies with noninvasive prenatal testing in central China. J Assist Reprod Genet[J].2020. 37(12): p. 3143-3150.
[6]Xu Y, Wei Y, Ming J, et al. Cost-Effectiveness Analysis of Non-invasive Prenatal Testing for Down Syndrome in China[J]. Int J Technol Assess Health Care. 2019. 35(3): p. 237-242.
[7]赵咏梅,张传英,席海林.孕中期高危孕妇外周血中胎儿游离DNA与高危产前诊断指征相关性分析[J].中国实验诊断学,2021,25(02):229-232.
[8]花睿. 孕妇外周血胎儿游离DNA无创产前检查在诊断胎儿染色体异常中的应用价值[J]. 当代医药论丛, 2021, 19(16):2-3。