中华眼镜蛇毒组分H对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关凋亡基因表达的影响

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中华眼镜蛇毒神经生长因子对PCI2细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响

中华眼镜蛇毒神经生长因子对PCI2细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响李卉;余晓东;和七一;邓敏;陈夏;林奕心【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2009(25)1【摘要】目的探讨中华眼镜蛇毒(Naja NaBAtra)神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响.方法 PC12细胞分为正常对照组和给药组,采用Western blot方法检测各组PCI2细胞κ阿片受体蛋白质的表达.结果①nNGF的25、50、100 μg·L-13个剂量中,50和100μg·L-1nNGF下调PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达,50μg·L-1剂量组下调最明显(P<0.01),100 μg·L-1剂量组下调(P<0.05).②50μg·L-1nNGF分别处理PC12细胞1、3、5、7、10 d后,其κ阿片受体蛋白质表达呈降低趋势,其中d 5、7下调(P<0.05),d 10下调明显(P<0.01).③10μmol·L-1吗啡可上调PC12细胞κ阿片受体蛋白表达,而10μmol·L-1纳络酮对其无影响,二者分别都能逆转nNGF的下调效应,但是二者共存时不能逆转nNGF的下调效应.结论 nNGF诱导PC12细胞分化中,可引起PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的下调效应,该效应能被吗啡或纳络酮逆转,但二者共存不能被逆转效应.【总页数】4页(P88-91)【作者】李卉;余晓东;和七一;邓敏;陈夏;林奕心【作者单位】重庆师范大学生命科学学院,重庆市动物生物学重点实验室,重庆市生物活性物质工程研究中心,重庆,400047;重庆师范大学生命科学学院,重庆市动物生物学重点实验室,重庆市生物活性物质工程研究中心,重庆,400047;重庆师范大学生命科学学院,重庆市动物生物学重点实验室,重庆市生物活性物质工程研究中心,重庆,400047;重庆师范大学生命科学学院,重庆市动物生物学重点实验室,重庆市生物活性物质工程研究中心,重庆,400047;重庆师范大学生命科学学院,重庆市动物生物学重点实验室,重庆市生物活性物质工程研究中心,重庆,400047;重庆师范大学生命科学学院,重庆市动物生物学重点实验室,重庆市生物活性物质工程研究中心,重庆,400047【正文语种】中文【中图分类】R282.74;R329.24【相关文献】1.蛇毒神经生长因子对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及肝纤维化相关蛋白质表达的影响 [J], 胡仁统;张学荣;徐瑾;罗小玲;林兴;廖明2.中华眼镜蛇(Naja Naja Atra)毒神经生长因子对PC12细胞κ阿片受体mRNA 表达的影响 [J], 李卉;余晓东;和七一;邓敏;陈夏;林奕心3.广西眼镜蛇毒神经生长因子对颅脑创伤大鼠细胞免疫功能的影响 [J], 张学荣;罗小玲;宋慧;韦敏;舒雨雁4.中华眼镜蛇毒神经生长因子对鸡胚背根神经节及PC12细胞作用的观察 [J], 董跃伟;徐天瑞5.中华眼镜蛇毒神经生长因子分离纯化及其对坐骨神经损伤的影响 [J], 杨斌;陈敏坚;等因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

理对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用

［猿］

砸陨原孕燥泽贼组允燥蚤灶贼组
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表员摇缘组大鼠缺血再灌注血清杂韵阅、酝阅粤和杂韵阅（哉辕皂蕴）摇悦运原酝月的比较
酝阅粤及悦运原酝月响摇与杂澡葬皂组比陨辕砸组杂韵阅减少，酝月减少，差异有显著性（孕约园郾园缘）；砸陨原孕燥泽贼组和
注组操作。腹腔手术找到肾脏，分离肾动脉和肾神经，
造赠贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶枣葬糟贼燥则泽蚤灶贼澡藻灶藻则增燥怎泽泽赠泽贼藻皂［允］援晕藻怎则燥灶，圆园园圆，
［员园］允韵蕴再灾，砸陨悦匀耘月耘孕，郧哉陨郧晕粤砸阅月，藻贼葬造援砸藻皂蚤枣藻灶贼葬灶蚤造原蚤灶鄄凿怎糟藻凿责燥泽贼燥责藻则葬贼蚤增藻澡赠责藻则葬造早藻泽蚤葬葬灶凿蚤贼泽责则藻增藻灶贼蚤燥灶憎蚤贼澡泽皂葬造造原［允］援粤灶藻泽贼澡藻泽蚤燥造燥早赠，圆园园缘，员园猿（员）：员源苑原员缘缘援凿燥泽藻噪藻贼葬皂蚤灶藻
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白表达水平明显降低，月糟造原圆辕月葬曾明显增加（孕约园郾园缘；与砸陨原孕燥泽贼组相比允燥蚤灶贼组上述指标变化差异有显著性（孕护作用。

广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响

广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响梁永红;苏延旭;马兴才;张洪也;蒋兴明;陆世银;苏志恒;郑华;宋慧【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2016(000)002【摘要】目的：观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响，并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。

方法分别用natrin 5，25和125 mg·L-1预处理原代SD乳大鼠心肌细胞24 h后，再以H2O20.3 mmol·L-1诱导损伤，以Fluo-3为Ca2+荧光探针，应用激光共聚焦显微镜动态检测细胞内游离钙离子浓度变化；另外用natrin 5，25和125 mg·L-1及维拉帕米（Ver）5 nmol·L-1预处理24 h后，再以H2O20.3 mmol·L-1诱导损伤15 min，FQ-PCR法检测心肌细胞钙离子通道Cav1.2，Calm，RyR2和钾离子通道Kir6.2的mRNA表达情况。

结果激光共聚焦显微镜检测结果发现，与正常对照组比较，H2O2作用3~15 min 心肌细胞内钙荧光平均峰值增强49.37%（P<0.01）；而给予natrin 5，25，125 mg·L-1预处理24 h组该平均峰值分别增强27.52%，12.71%和5.15%，显著低于H2O2组（P<0.01）。

PCR结果表明，H2O2损伤组其心肌细胞Cav1.2，Calm，RyR2及Kir6.2的mRNA表达分别为正常对照组的1.78倍，1.26倍，4.34倍和0.79倍（P<0.01）；而给予natrin及维拉帕米干预组，细胞Cav1.2，Calm和RyR2的mRNA表达较H2O2损伤组均显著降低（P<0.01），而Kir6.2的mRNA表达较H2O2损伤组显著升高（P<0.05）。

银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响佚名【摘要】目的探讨银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法将100只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及银杏内酯B低剂量组(15 mg/kg)、中剂量组(30 mg/kg)、高剂量组(60 mg/kg),每组20只.通过夹闭左冠状动脉前降支制作心肌缺血再灌注大鼠模型.监测各组大鼠心电图波动变化;红四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死体积;苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理变化;末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡状况;免疫蛋白印记法测定凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、激活型Caspase-3)表达.结果与模型组比较,银杏内酯B各剂量组心电图明显改善,其中银杏内酯B高剂量组基本恢复正常;银杏内酯B中剂量组、高剂量组心肌梗死体积显著降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织病变明显改善,心肌细胞凋亡指数(AI)显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01),Bax和激活型Caspase-3蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01).结论银杏内酯B通过调节凋亡相关蛋白表达从而抑制再灌注性损伤后心肌细胞凋亡.【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2019(017)012【总页数】4页(P1804-1807)【关键词】心肌缺血再灌注;银杏内酯B;大鼠;Bcl-2;Bax;激活型Caspase-3【正文语种】中文【中图分类】R542.2;R256.2银杏内酯是银杏叶的主要活性成分，其中以银杏内酯B活性最高，秦兵等[1-3]研究发现银杏内酯B通过抑制细胞凋亡进而对脑组织、肝脏缺血再灌注损伤起到一定抑制作用。

本研究探讨银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响，现报道如下。

眼镜蛇毒因子在大鼠脑缺血-再灌注损伤中的作用研究

（．ＴｈｉｄＰｅｐｅＨｏｓｉａ，Ｈａｇｈｏｈｅｉｎ１０９；２ＤｅａｔｅｆＮｅｒｌｇＴｈｅＳｃｎ１ｅＴｈｒｏｌｐｔｌｎｚｕＺｊｇ３００ａ．ｐｒｍｎｔｏｕｏｏｙ，ｅｏｄ
ＡｆｉａｅｏｐｔｌＣｈｎｑｎｉｅｓｔｆＭｅｉａｃｅｃｓＣｈｎｉｇ４０１ｆｉｔｄＨｓｉａ，ｏｇｉｇＵｎｖｒｉｙｏｄｃｌＳｉｎｅ，ｏｇｑｎ０００，Ｃｈｎ）ｌｉａ
维普资讯
中国神经免疫学和神经病学杂志２００８年７月第１５卷第４期
ＣｉＮｅｒｉｈｎＪｕｏｍｍｕｏｎｌ＆Ｎｅｒｌ０８ｕｏ０，Ｖｏ．５Ｎｏ４２１１，
・２１・９
ＴｅＲｌｏｏｌｎｅｌｔｎｏｅＲｔｅｅｒｌｓｈｍｉ－ｅｅｆｓｎＩｊｒｈｏｅｆｍｐｅＣｍｅｔｐｅｉｎｔａｒｂａｃｅａｒｐｒｕｉｎｙＤｏｈＣＩｏｕ
ＷＵＣｈｕ－ｉｎｌ，ＬＩＣｈａｇｑｉ，ＬＩｎ — ｎｇＡＮＧ — ｈｎＬｉｚｅ
ｓｈｈｅｅｒｓｉｎｔｎｉｙｏｏｍｐｌｍｅｑａｄＣ３ｐｒｔｉｂｒｉａｅｏｅｎｔｈａｕｃａｓｔｘｐｅｓｏｎｉｅｓｔｆｃｅｎｔＣｌｎｄｏｅｎ，ａｎｗｔｒｃｎｔｎｔａｄｈｅｃｎｇｅｏｈｅｆｔｎｅｏｌｇｉｍｐｉｍｅｓｏｒ．ＲｅｕｔＣＶＦｏｕｄｓｇｎｉｉａｌｉｈｉｔｈｅｘｅｓｉｏｐｌｍｅｑｎｄｕｒｏｃｉａｒｎｔｃｅｓｌｓｃｌｉｆｃｎｔｙｎｂｉｔｅｐｒｓｏｎｏｆｃｍｅｎｔＣｌａ

中华眼镜蛇心脏毒素对心肌细胞内钙循环影响的研究进展

∗基金项目:广州市属高校科研项目(１２０１６２０１４４);广州医科大学附属第一医院临床应用与转化研究项目(２０１５１３Ｇg y f y y );广州市医药卫生科技项目(２０１４１A ０１１０７７);２０１７~２０１８年度广州医科大学第一临床学院大学生科技创新项目作者简介:黎鸿豪,男,在读本科医学生,研究方向:临床医学.∗∗通讯作者:E Ｇm a i l :q i n gd a ９９＠１６３．c o m 中华眼镜蛇心脏毒素对心肌细胞内钙循环影响的研究进展∗黎鸿豪１,周宇豪１,钟㊀强１,潘恩豪１,苏健辉１,杨颜聪２,林俊敏２,梁子敬２,梁㊀庆２∗∗(１．广州医科大学,广东广州㊀５１０２８８;２．广州医科大学附属第一医院急诊科,广东广州㊀５１０１２０)[关键词]㊀中华眼镜蛇;心脏毒素;钙循环;心力衰竭[中图分类号]㊀R ９９６．３㊀[文献标识码]㊀A㊀[文章编号]㊀１００１－５６３９(２０１８)０３－０５２５－０３d o i :１０．３９６９/j．i s s n ．１００１－５６３９．２０１８．０３．０５９㊀㊀中华眼镜蛇(N a j a n a j a a t r a )俗称饭铲头或吹风蛇,是我国十大毒蛇之一.其毒素成分复杂,临床表现多样㊁复杂,主要为皮肤软组织局部肿胀㊁坏死,严重者可致心脏受损,多器官功能障碍综合征,最终导致死亡.㊀㊀目前,研究认为抗蛇毒血清为毒蛇咬伤治疗的唯一有效解毒剂,但使用抗蛇毒血清并非毒蛇咬伤治疗的全部,因其只能中和循环中未与靶器官结合的蛇毒素,而对已与靶器官结合并激活或未激活下游毒理反应的毒素则无中和效应[１].如何有效的防治中华眼镜蛇咬伤导致局部皮肤软组织肿胀坏死及其引起的心力衰竭(h e a r t f a i l u r e ,H F )仍是世界性的医疗难题.已知组织细胞坏死及H F 的机制均与细胞钙超载有关[２].心脏毒素(c a r d i o t o x i n ,C T X )是中华眼镜蛇蛇毒干毒中含量较多的组分,对心肌细胞内钙循环有多方面的影响,因此,C T X 对心肌细胞内钙循环调控的基础研究有利于发现可能的靶点干预药物.现本文就C T X 与心肌C a２＋的关系及眼镜蛇咬伤致心肌钙超载可能干预靶点和相应药物作一综述如下.１㊀中华眼镜蛇伤流行病学现状㊀㊀近年来,随着户外旅游的兴起,以及城市大型住宅区及公园等社区绿化率的升高,市民被蛇咬伤的病例相继增多,高发于偏远山区及农村地区.黄周等对其所在地近１０年来收治的蛇伤病例资料进行分析发现,病例主要来源于广西区内的绝大部分毒蛇咬伤患者中,以中华眼镜蛇咬伤占首位(５９．８５％)[３].游俊廷等对２３５例蛇伤患者的临床资料进行回顾性分析,结果显示眼镜蛇咬伤位居第二(６．６％)[４],由上述文献可知,中华眼镜蛇咬伤的案例数目极大.龚旭初等研究总结江苏省南通市及其周边地区的３５９９例蛇伤病例特点,结果显示,我国蛇伤患者中农民所占比例最大,达３１０５例(８５．２７％),工人为２３７例(６．５９％),仅次于农民,这与其劳作环境而接触毒蛇的几率高相关.据资料统计,蛇伤事件多发生在田间劳作(８１．３８％)和野外路边作业或野外活动时(１１．６１％)[５].蛇咬伤部位多为四肢,发病季节集中在夏秋两季.２㊀中华眼镜蛇蛇毒心脏毒素的研究概况㊀㊀中华眼镜蛇毒为混合毒,其成分主要是蛋白质和多肽类等,包括神经毒素(N e u r o t o x i n s ,N T X )㊁C T X ㊁眼镜蛇毒因子(C o b r a v e n o m f a c t o r ,C V F )以及磷脂酶A ２(P h o s p h o l i p a s e A ２,P L A ２)等,约占干毒的８５％.其中以C T X 含量较多,约占干毒的４０％~５０％[６].C T X 是一种作用于细胞膜的多肽酶,具有两种亚型:S 型和P 型,其毒性作用包括对多种组织细胞膜的去极化及使细胞溶解,被认为是主要的致命因素[７].C T X 对机体的影响主要是导致循环功能障碍,其中S 型C T X 显示出更高的肌细胞去极化活性,P 型则具有更强的细胞溶解活性.中毒早期常有短暂兴奋过程,如心率增快㊁血压上升㊁频发期前收缩等;随着血循环中蛇毒浓度的升高,可由短暂兴奋后转入抑制,心搏障碍㊁心室纤颤,甚至心肌坏死,最终导致心力衰竭,严重中毒时出现休克[８].３㊀心肌钙循环调节机制㊀㊀作为一种重要的第二信使,C a ２＋对心脏的兴奋Ｇ收缩偶联以及心脏相关基因的表达调节起着重要作用.在正常心理㊁生理状态下,心肌细胞浆内C a２＋维持在较低的浓度水平(约１ˑ１０－７m o l /L )远低于细胞外C a ２＋浓度.而心肌细胞钙平衡主要依靠细胞膜钙通道和肌浆网中受体的调节,正常心肌钙循环主要包括钙释放㊁钙回摄和钙储存三个过程.钙释放是指正常生理状况下心肌细胞去极化时,少量C a２＋通过L Ｇ型钙通道(L Ｇt y p e c a l c i u mc h a n n e l ,L T C C )进入到细胞内,导致细胞质中C a ２＋升高,胞质中的C a ２＋与肌浆网(J u n c t i o n Ｇa l s a r c o p l a s m i c r e t i c u l u m ,J S R )上的兰尼碱受体２(R ya n o d i n e r e c e p t o r ２,R y R ２)结合使肌浆网释放大量C a ２＋,而致胞浆内C a ２＋瞬间升高,这个过程又称为钙诱导钙释放(c a l c i u mi n Ｇd u c e d c a l c i u mr e l e a s e ,C I C R ).心肌收缩后,J S R 将胞浆中的C a ２＋回摄入J S R 中储存,为下一次的收缩作准备.同时心肌细胞膜表面的(N a ＋/C a ２＋e x c h a n g e r ,N C X )将少量的C a ２＋运出细胞外,使心肌细胞内C a ２＋迅速降低,C a ２＋与肌钙蛋白C 解离而导致心肌细胞舒张[９].故可知心肌细胞内钙循环的异常在心衰的发展中起着关键作用,而C T X 通过破坏心肌钙循环调节机制导致心肌细胞钙超载[２],最终导致循环系统障碍.４㊀中华眼镜蛇毒心脏毒素与心肌C a２＋的关系㊀㊀在生理条件下,细胞内钙的调节有一套自身平衡机制.５２５这主要依赖于细胞膜或某些细胞器膜上的C a２＋ＧA T P酶(C a２＋泵)㊁以及承担C a２＋的被动运输的电位依赖性电压门控通道(V o l t a g e g e l e dc h a n n e l s)和化学门控配体闸门通道(l i g a n d g e l e d c h a n n e l s)㊁线粒体和内质网对细胞内钙库的调控.C T X具有损伤细胞膜的作用,导致细胞内外离子紊乱是其主要结果之一,在心肌细胞中尤以C a２＋紊乱具有重要意义.心肌细胞质膜完整性的破坏可能与C T X的膜溶解性有关,主要通过三个方面的作用,分别是形成新的跨膜离子通道㊁特定结合细胞膜引起蛋白质聚集㊁促使细胞膜上磷脂底物暴露并加速其降解[１０].在膜溶解的前期加剧了对离子的通透性,这可能是心肌内C a２＋失衡的一个重要原因之一.C T X在与膜结合而引起去极化,此时部分电压依赖性钙通道将被激活,而且C T X能在低钠溶液中引起肌收缩,说明C T X能直接促进细胞膜对C a２＋的通透性[１１].㊀㊀目前,有研究表明C T X引起的心肌细胞内C a２＋的快速且持续增加可导致心肌细胞强直收缩.杨育红等对正常分离的大鼠心肌细胞进行C T X(０．０１~１μm o l/L)处理后,心肌细胞C a２＋快速升高且随后持续高水平,同时可观察到杆形心肌细胞呈时间依赖性消失变为圆形[１２];通过电刺激经C T X处理的心肌细胞,使其去极化通过L型C a２＋通道导致C I C R的发生引起收缩;而H u a n g SJ等在实验中使用硝苯地平能降低大约５０％的C T X在含C a２＋介质中诱导心肌强直效应[１３].这也表明C T X导致的心肌(C a２＋)变化不仅是通过活化L型C a２＋通道实现,还存在着其他影响钙循环的途径.心肌细胞的强直收缩以及细胞形态的异常改变均与细胞内的C a２＋过载密切相关,而心肌细胞的持续强直收缩势必影响心脏的泵功能,导致心脏收缩功能异常乃至心律失常,甚至心力衰竭.将大鼠肌注蛇毒３０m i n后,观察其心电图可见Q R SＧT波异常改变,心率及呼吸频率均有轻度加快,Ⅱ导联S T段抬升幅度超过同期正常对照０．１m V以上[１４]引发心律失常.综上显示,恶性心律失常可作为C T X引起心肌细胞强直收缩的总体表现.㊀㊀心肌细胞内C a２＋持续升高可引起心肌细胞死亡,导致心肌异常收缩和受损.正常生理状况下心肌细胞内肌浆网,即肌纤维内特化的滑面内质网储存大量C a２＋用于心肌兴奋Ｇ收缩耦联,而内质网内所含的钙网蛋白(C a l r e t i c u l i n,C R T)具有维持钙稳态功能;当心肌细胞内C a２＋水平过高时则可引起细胞损伤,诱发内质网应激相关的细胞凋亡途径[２].除引发心肌细胞程序性死亡外,C T X诱发的心肌细胞内C a２＋持续升高还可能导致细胞坏死.在C h a iＧH u iW a n g等对胎儿大鼠的心肌进行C T X处理后,发现心肌细胞质膜完整性被破坏,且心肌中作为凋亡信号通路终末标志的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Ｇ３(C a s p a s eＧ３)缺失[１５].心肌细胞质膜破坏以及C a s p a s eＧ３缺失,提示细胞可能并未执行凋亡信号通路诱导细胞程序性死亡,而是通过其他途径损伤心肌细胞导致细胞坏死.但C h a iＧH u iW a n g实验中所应用的是C T X A３成分,并不能单独表明C T X导致心肌细胞内C a２＋水平过高单纯与心肌细胞坏死有关.５㊀中华眼镜蛇伤心肌钙超载可能干预靶点及相应药物㊀㊀中华眼镜蛇毒导致心肌细胞钙超载,虽然C T X与心肌细胞膜结合的位点暂未明确,但最近有研究发现其在心脏细胞上有含磺基受体的证据[１６].因细胞膜的组成成分为蛋白质和碳水化合物,在细胞膜的外表面有成簇的带负电荷的氨基酸残基,并且多肽链的阴离子区通常位于脂质双层的外层,易与带正电荷的蛇毒膜毒素特异性结合,形成稳定复合物[１７].因此,仍难以研制特定的靶向治疗药物,但用已知可抑制钙超载的药物可能对中华眼镜蛇咬伤导致局部皮肤软组织肿胀坏死及其引起的H F有效.㊀㊀在S JH u a n g等[１３,１８]实验中证明,硝苯地平和尼群地平具有一定的减轻C T X对心肌强直收缩作用,可能与其对L 型C a２＋通道的阻滞作用有关,对C T X所引起的外钙内流起到抑制作用.同样其他钙通道阻滞剂可能也存在相似的作用而起到一定的降低心肌细胞内钙水平,反向表明C a２＋和C T X竞争相同的结合部位.内源性钙通道的激活是C T X 引起肌收缩的机制,钙通道由许多膜结合的亚单位组成,其在受到严格生理控制的聚集过程后形成通道,而C T X能促进蛋白质聚集速率或使聚集更稳定,进而导致C a２＋内流增加.采用荧光技术测得C T X与磷脂酞丝氨酸的结合常数大于１０６MＧ１,每个毒素可与７~１０个脂质结合.C T X与负磷脂静电结合后,疏水的第一拌L e u１ＧT h r１３插入脂质层[１１],据此提出了膜毒素与磷脂结合的模型,认为膜毒素如同阳离子除垢剂,正电荷的阳离子头端与磷脂双层极性层的阴离子部位结合,疏水性基团部分插入细胞中而使细胞膜破坏[１７].而在许云禄等[１８]的实验中特别提到了C T X对膜磷脂的作用,通过激活P L C,产生二酰基甘油从而激活蛋白激酶C,同时通过１,４,５Ｇ三磷酸肌醇及游离脂肪酸等促使肌浆网内钙的释放,使胞浆内C a２＋增加而引发肌肉强直收缩.通过抑制P L C介导的内钙释放途径或能抑制C T X引起的心肌钙超载.㊀㊀此外,C T X还可与P L A２发生协同效应,促进磷脂水解,加速膜的溶解过程,增大膜的通透性,使大量的C a２＋内流.C h a n g研究[１９]发现,心脏毒素与磷脂酶A２的协同作用表现在能加速心脏毒素的阻塞作用,而不增强其阻塞作用效能.对于能够抑制P L A２的活性药物如糖皮质激素㊁吲哚类等,可能对细胞膜具有一定的保护性作用,进而起到一定的避免引起心肌钙超载的作用.有研究认为,胞外高C a２＋对C T X 的抑制作用是通过与C T X竞争结合位点导致的[１０],但也有假说认为是高C a２＋导致了心肌细胞膜的非特异性膜稳定性提高[１７].上述两种说法都说明高C a２＋能够起到拮抗C T X 的作用,能在一定程度上对抗其引发的心肌钙超载.６㊀总结和展望㊀㊀基于早期应用抗蛇毒血清是毒蛇咬伤治疗的关键,但临床的实际情况是许多患者身处广大农村或偏僻山区,不能迅速获得抗蛇毒血清治疗,而且抗蛇毒血清昂贵且长期供应短缺是全球性的问题.此外,抗蛇毒血清的使用并非毒蛇咬伤治疗的全部,因此探寻临床易于在急性中毒期获取价廉㊁并６２５对蛇毒结合靶器官后下游损伤机制的靶点有干预作用的某种药物,用于临床治疗蛇伤的具有重大意义.对C T X蛇毒作用机制的研究及筛选潜在的钙循环调控靶点药物,将会为眼镜蛇咬伤的治疗提供全新思路.[参考文献][１]㊀黄伟青,梁子敬,苏雪娥．毒蛇咬伤的早期预测与程序化救治的疗效观察[J]．蛇志,２００４,１６(３):７Ｇ８．[２]㊀高利平．钙超载与细胞损伤[J]．四川医学,２００４,２５(９):１０３９Ｇ１０４１[３]㊀黄㊀周,王㊀威,李其斌等．我院近十年毒蛇咬伤中毒的变化趋势分析[J]．蛇志,２０１６,２８(２):１３６Ｇ１３８．[４]㊀游俊廷,黎惠章,蓝光明,等．东莞市毒蛇咬伤流行病学调查[J]．岭南急诊医学杂志,２０１６,２１(１):６７Ｇ６８．[５]㊀龚旭初,吴金娜,丁志群,等．３５９９例毒蛇咬伤流行病学研究[J]．蛇志,２０１４,２６(１):３９Ｇ４４．[６]㊀王㊀威,李其斌．中华眼镜蛇咬伤的治疗[J]．蛇志,２００８,２０(４):２７８Ｇ２８０．[７]㊀D u f t o n M J,R C H i d e r．S t r u c t u r ea n d p h a r m a c o l o g y o f e l a p i dc y t o t o x i n s[J]．P h a r m a c o lT h e r,１９８８,３６(１):１Ｇ４０．[８]㊀应雪红,王永安,王汉斌．毒蛇咬伤的诊断和治疗进展[J]．中国医刊,２００７,４２(７):２４Ｇ２８．[９]㊀朱蔚琳．心肌细胞钙循环调节机制的研究进展[J]．医学综述,２０１３,１９(１４):２５３０Ｇ２５３２([１０]㊀蒋世强,潘能庆,鄢㊀航．C T X研究进展[J]．综述专论,２０１７,４７(３):２６Ｇ２８．[１１]㊀沈㊀兵．蛇毒组分对离子通道作用的研究[C]．安徽医科大学生理教研室,２０１３．１０．[１２]㊀杨育红,单㊀丹,杜洪文,等．眼镜蛇毒心脏毒素对大鼠心肌细胞收缩及细胞内钙离子的作用[J]．中国现代应用药学,２００５,２２(６):４４８Ｇ４５１．[１３]㊀H u a n g SJ,C Y K w a n．I n h i b i t i o nb y m u l t i v a l e n tc a t i o n so fc o n t r a c t i o n i nd u ce db y C h i n e s ec o b r av e n o m c a r d i o t o x i ni ng u i n e a p i gp a p i l l a r y m u s c l e[J]．L i f eS c i,１９９６,５９(４):５５Ｇ６０．[１４]㊀曾令铝,陈㊀熹,杨㊀威,等．中华眼镜蛇伤大鼠模型多项电生理指标的动态观察[J]．蛇志,２００７,１９(２):８９Ｇ９３．[１５]㊀W a n g C H,M o n e t t eR,L e eSC,e ta l．C o b r ac a r d i o t o x i nＧi nＧd u ce d c e l l d e a t h i nf e t a l r a t c a r d i o m y o c y t e sa n dc o r t i c a l n e uＧr o n s:d i f f e r e n t p a t h w a y b u ts i m i l a rc e l ls u r f a c et a r g e t[J]．T o x i c o n,２００５,４６(４):４３０Ｇ４４０．[１６]㊀W i j e y e w i c k r e m aLC,B e r n d tM C,A n d r e w sR K．S n a k ev e nＧo m p r o b e so f p l a t e l e ta d h e s i o n r e c e p t o r s a n dt h e i rl i g a n d s．T o x i c o nO f f i c i a lJ o u r n a lo ft h eI n t e r n a t i o n a l[J]．S o c i e t y o nT o x i n o l o g y,２００５,４５(８):１０５１．[１７]㊀颜汝平．蛇毒膜毒素抗肿瘤机制的研究进展[J]．云南医药,２００７,４:４０４Ｇ４０８．[１８]㊀许云禄,王晴川,刘广芬．中华眼镜蛇毒心脏毒素Ｇ１３对猪离体冠脉的作用[J]．福建医科大学学报,１９９７,３１(１):１６Ｇ２０．[１９]㊀C C C h a n g,ST C h u a n g,C Y L e e,e ta l．R o l eo f c a r d i o t o x i na n d p h o s p h o l i p a s eAi nt h eb l oc k ad eo fne r v ec o n d u c t i o n a n dd e p o l a r i z a t i o no f s k e l e t a lm u s c l e i n d u c e db y c o b r a v e n o m[J]．B r i t i s hJ o u r n a l o f P h a r m a c o l o g y,１９７２,４４(４):７５２Ｇ７６４．探究小剂量右美托咪啶应用于高龄患者的麻醉效果龙㊀湖,侯立力(南华大学附属南华医院麻醉科,湖南衡阳㊀５３０４０９)[关键词]㊀全身麻醉;盐酸右美托咪啶;高龄患者;药物镇静[中图分类号]㊀R６１４㊀[文献标识码]㊀A㊀[文章编号]㊀１００１－５６３９(２０１８)０３－０５２７－０４d o i:１０．３９６９/j．i s s n．１００１－５６３９．２０１８．０３．０６０㊀㊀随着我国人口老龄化,对医疗水平的要求日益增长,高龄患者手术治疗的比例逐年升高,并且其中很大部分患者会采取全身麻醉进行手术治疗.全身麻醉的初始阶段是麻醉诱导,由于传统的麻醉诱导会引发患者交感神经抑制,从而影响患者心肺功能和血流循环.而且高龄患者通常心肺功能较差,心血管循环代偿功能减弱,对麻醉药物的承受能力下降,会产生应激反应,从而增加了高龄患者全身麻醉风险.因此,选择麻醉药物种类及麻醉方法对高龄患者来说至关重要.为保证麻醉药物对心功能影响较小,确保临床手术治疗安全有效,需要对高龄患者进行全面体检,获取患者各主要脏器功能的生理变化特点,全面掌握心血管疾病的严重程度和循环代偿功能,同时与麻醉师评估危险因素,充分做好麻醉术前准备工作;采取适当的麻醉诱导药物㊁方式和监控,提前做好术中心肺氧供需,术后疼痛应激,低氧血症及心血管疾病后遗症预防工作.特别是心脏病高龄患者,由于术前多存在多种病发症和重要脏器老化衰退,对麻醉诱导和手术安全构成极大威胁.㊀㊀右美托咪啶又名盐酸右美托咪啶,由于其药物麻醉特性被广泛应用于临床中.其具有抑制交感神经兴奋㊁增加迷走神经兴奋㊁促使患者肠胃蠕动减缓,同时还可预防患者临床治疗中的应激反应,对患者大脑及各脏器起到保护作用,促进血流动力学稳定等,而且对高龄患者的呼吸系统影响较小,因此,盐酸右美托咪啶不但被应用于心脏手术中,也常用于非心脏手术中.本文就盐酸右美托咪啶在高龄患者全身麻醉手术中的应用浅述如下.１㊀盐酸右美托咪啶临床药物学特性㊀㊀盐酸右美托咪啶在临床上是有效的α２Ｇ肾上腺素受体激动素,具有较好的亲和力.盐酸右美托咪啶已被广泛应用于使用呼吸机镇静的患者以及重症监护的插管患者.颜景佳等[１]研究表明,盐酸右美托咪啶不但能够抑制交感神经兴７２５。

大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、心肌细胞凋亡和缺血再灌注性心律失常的相关性

大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、心肌细胞凋亡和缺血再灌注性心律失常的相关性目的探讨大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、心肌细胞凋亡和缺血再灌注性心律失常的相关性。

方法制作大鼠心肌缺血再灌注模型，对比缺血期与再灌注期的心律失常发生机率、STT段改变状况、平均持续时间，分析心机丙二醛含量以及超氧化物歧化酶的活力，了解心肌细胞的凋亡情况。

结果缺血期房室传导阻滞发生率为7.8%，室性早搏发生率为15.3%，室速发生率为10.6%。

再灌注之后，房室传导阻滞发生率为30.5%，室性早搏发生率为68.1%，室速发生率为32.7%，再灌注指标明显比缺血期增高。

缺血期的室速的平均发作时间上升，上升至（496±104）s，再灌注之后，室颤持续时间平均为（199±23）s。

与缺血组相比较，在灌注之后心机丙二醛含量增高，并且呈现逐渐递增的趋势，心肌超氧化物歧化酶活力降低，再灌注2小时后呈现下降趋势，再灌注心肌细胞凋亡增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

去接学再灌注心肌损伤过程中，心律失常发生机率和超氧化物歧化酶活力变化呈现负相关关系，心肌细胞凋亡变化和心机丙二醛变化呈现正相关关系。

结论心肌缺血再灌注后的心律失常与氧自由基和心肌细胞凋亡有关。

标签：大鼠；心肌缺血再灌注损伤；氧自由基；心肌细胞凋亡；心律失常缺血再灌注心律失常是因为急性缺血心肌血流恢复后出现的心律失常，临床研究发现，其发生率高达50%以上，主要表现为室性心律失常，但还是包括有频发的室性心律、短暂室颤或短暂室速、房室传导阻滞、窦性心动过缓等。

近几年，心血管疾病发病率升高，加快了心血管疾病的介入治疗。

本次实验主要是通过大鼠缺血再灌注模型，了解对比缺血期和再灌注期的房室传导阻滞、室性早搏、室速以及室颤的发生情况。

1 材料与方法1.1 实验材料实验仪器：由美国BD公司生产的IBOR流式细胞仪，武汉博士德生物工程公司生产的DAB显色试剂盒，南京建成生物工程研究所提供超氧化物歧化酶试剂盒、丙二醛试剂盒，美国Roche公司提供的原位细胞凋亡试剂盒。

中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响

作用。方法应用三磷酸腺苷一生物荧光肿瘤化疗药物敏感实验法（ＴＴＡ）定细胞的生长抑制百分率，置相差ＡＰ— Ｃ测倒显微镜、Ｅ染色观察细胞形态学改变，Ｈ流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率。结果ＡＰ—ＴＡ实验显示眼镜蛇毒对ＴＣ体外培养的ＮＣＡＣ细胞生长有明显的抑制作用，浓度和作用时间呈正比；态学观察发现用药后的ＮＣ与形ＡＣ细胞质空泡、核固缩、核染色质聚集等形态学变化现象；流式细胞仪检测发现眼镜蛇毒阻滞ＮＣＡＣ细胞生长于细胞周期的Ｇ／，。Ｇ期检测到实验组细胞凋亡率显著高于对照组。结论中华眼镜蛇毒能抑制ＮＣＡＣ细胞增殖，导ＮＣ诱ＡＣ细胞凋亡。
维普资讯
时珍国医国药２００８年第１９卷第６期
ＬＨＺＥＥＩＩＥＡＤＭＴＲＡＭＤＣＥＥＲＨ２０Ｏ．９ＮＩＩＨＮＭＤＣＮＮＡＥＩＥＩＡＲＳＡＣ０８ＶＬ１Ｏ６Ｓ
中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响
ＥｆｅｔｆＣｈｎｅｅＣｏｒｎｍｎＰｒｌｆｒｔｏｎｄＣｅｌＣｙｌｆＮｏｖｌＨｕａｌｔｌｆｃｓ０ｉｓｂａＶｅｏｏｏｉｅａｉｎａｌｃｅｏｏｅｍｎＰａａａＳｌｖｒａｄＣｅｌｎｆＡｄｎｉｓｉｒｉｍａａｉａｙＧｌｎｌｓＬｉｅｏｅｏｄＣｙｔｃＣａｃｎｏ

大鼠心肌缺血／再灌注损伤基因表达谱特征的初步观察

具体见操作手册。紫外分光及电泳检测显示获得高质量的总
ＲＮＡ。
胞外基质、细胞骨架蛋白、转录因子、ＤＡ损伤修复基因、Ｎ凋亡相关蛋白及核糖体蛋白等相关编码基因。结论：ｃＮ用ＤＡ表达谱芯片分析心肌缺血／再灌注后基因表达，能快速筛选出再灌注损伤相关基因，为临床上更有效地预防缺血／再灌注损伤提供根据。［关键词］大鼠；基因表达；缺血／再灌注［中图分类号］Ｒ４．５２２［文献标识码］Ａ
１２２实验过程．．
双链ｃＮＤＡ的合成：常规合成第１按条链
ｃＮ并在第１ＤＡ，链合成的管中加上第２链反应试剂，匀，混稍离心，１￣置２ｈ６Ｃ放；加２Ｌ１ｕ４ＤＡｐｌｒｓ，［０］ＴＮｏｍｅｅｙａ
１℃放置５Biblioteka ｎ６ｉ；加１Ｌ０５ｍｌＬＥＴ０．ｏＤＡ，一０／２ ℃保存。纯
化双链ｃＮｈｓｏｋＧｌＰＧ）酚／ＤＡＰａｅＬｃｅｓ（Ｌ－氯仿抽提纯化ｃＮＤＡ，
并用Ｒａｅｆｅｎ．ｅ水重新溶解沉淀的ｃＮ。生物素标记ｃＮｓｒＤＡＲＡ
脱、色、扫描芯片：染杂交１６ｈ后，从芯片中取出杂交液装入新的离心管，一０Ｃ长时间保存，ＷａｈＢｅＡ充满芯片。８￣ｓｕｒｆ
床上心肌缺血／再灌注损伤的分子生物学机制提供１２３芯片检测芯片结果采用Ａｙｔｘ扫描仪进行扫．．ｆｍｅｉｒ根据。描，ｃｏｒｙＳｉ５１Ｍｉａｒｕｔ．软件读取、处理数据，分析再灌注即ｒａｅ

中华眼镜蛇细胞毒素基因克隆、表达及对肿瘤细胞作用机理的研究的开题报告

中华眼镜蛇细胞毒素基因克隆、表达及对肿瘤细胞作用机理的研究的开题报告一、研究背景和意义中华眼镜蛇（Naja atra）是一种常见的毒蛇，其毒液含有多种有生物活性的成分，其中细胞毒素是导致中毒症状最主要的因素之一。

细胞毒素是一类具有强烈细胞毒性的蛋白质，可以通过多种机制抑制或破坏细胞的正常功能，进而诱导细胞凋亡或坏死。

在近年来的研究中发现，中华眼镜蛇细胞毒素不仅可以对损伤的组织和炎症细胞产生显著的炎症反应，还可以直接作用于癌细胞，诱导其凋亡、抑制增殖和侵袭。

因此，对中华眼镜蛇细胞毒素的研究有助于深入理解其对肿瘤细胞的生物学作用机制，为开发高效、低毒副作用的抗肿瘤药物提供新思路和新途径。

二、研究内容和目的本研究的主要内容为中华眼镜蛇细胞毒素基因的克隆、表达及对肿瘤细胞作用机理的研究。

具体研究目的如下：1.利用PCR技术从中华眼镜蛇的基因组DNA中扩增细胞毒素基因；2.将目的基因克隆至表达载体中，构建重组表达质粒；3.通过启动子的选择和条件的优化，在大肠杆菌中高效表达重组蛋白；4.纯化重组细胞毒素蛋白，并进行生物学活性的鉴定；5.利用体外实验方法，研究中华眼镜蛇细胞毒素对人类癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响机制。

三、研究方法和技术路线1.实验材料：中华眼镜蛇的基因组DNA、大肠杆菌BL21 (DE3)、目的基因载体pET-28a、细胞毒素单克隆抗体、人类肿瘤细胞株等实验材料。

2.实验步骤：（1）基因克隆：利用中华眼镜蛇基因组DNA为模板，采用PCR技术扩增细胞毒素基因，并通过限制性酶切和连接酶反应将其克隆到表达载体中。

（2）重组蛋白表达和纯化：将构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中，并进行感光诱导蛋白表达和纯化蛋白的过程。

（3）鉴定和生物学测试：利用SDS-PAGE、Western blot、ELISA等方法验证纯化的重组蛋白，并利用细胞毒素单克隆抗体进行细胞凋亡、增殖和侵袭等实验。

四、预期结果和研究意义1.成功克隆中华眼镜蛇细胞毒素基因并构建重组表达质粒；2.成功表达和纯化重组蛋白，并发现其具有明显的生物学活性；3.研究发现中华眼镜蛇细胞毒素对人类癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响机制，为进一步开发抗肿瘤药物提供新的理论和实验支持。

中华眼镜蛇蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响

ｎｓｅｃｍｒｈｍｏｅｓｉｔａｓｙ（Ｔ —ＣｅｃｎｅｔｏｅｓｎｉｖｙｓａＡＰＴＡ）ｗｓｕｅｘｍｉｅｇｗｈｏＡＣｃｌｅｔｄｗｔＣｉｅｅｃ— ｕｃｔｉａｓｄｔｅａｎｔｒｔＮＣｅｓｒａｉｈｎｓｏｏｅｈｏｆｌｔｅｈ
（ｘｅｍｎｅｔＥｐｒｅｔｎｒｆＭｅｉｌｃｎｅｕｎｘＭｅｉｌＵｉｎｔ，ａｎｎ３０１ＰＲＣｉ）ｉＣｅｏｄｃｉｃ，ＧａｇｉｄｃｎｖｉＮｎｉｇ５０２，．．ｈｎａＳｅａｅｙａ
Ａｓａｔ［ｂｅｔｅｏｔｄｅｆｃｏｈｅｅｃｂａｖｎｍｏｒｌｅａｏｎｐｐｏｉｉｏｖｌｕａａ— ｂｔｃ：Ｏｊｉ］ＴｕｙｔｅｔｆｉｓｏｒｏｎｐｏｆｒｉａｄａｏｔｓｎｏｅｈｍｎｐｌｒｃｖｓｈｅＣｎｅｉｔｎｓｎａａｖｒｌｄｃｉｎｆｄｎｉｃｓｃｃｒｉｍａＮＣ．［ｔｄ］Ｔｅａｅｏｉｅｔｐｏｐｔ（Ｔ）ｂｌｍ — ｔｓｉｙｇａｅｌｌｅｏｅｏｙｔａｎ（ＡＣ）ＭｅｏｓｈｄｎｓｉｈｓａＡＰ一ｉｕｉｌａｌａｎｓｉａｄｉｃｏｈｎｒｅｏ
ｃｎｏｏｐ．Ｃｎｌｓｎｏｒｅｏａｎ —ｃｎｅｃｉｔｉｖｔ．ｏｔｌｕｓ［ｏｃｉ］Ｃｂａｖｎｍｈａｔａｃｒｔｉｉｏｒｇｒｕｏｓｉａｖｙｎｒ
ｔｓｄｐｎｅｔｍａｎｒｆｗｅｍｅｒｎｙｉｓｏｄｔａｐｐｏｉｎｒｅｔＡＣＣｃｉｎｔｅＧ／ｈｓｅｅｉ — ｅｅｄｎｎｅ；ｌ￣ｏｔａａｓｈｗｅｈｔａｏｔｓｓａｄａｒｓＮｍｅｏｙｌｓｆｏｅｌｉｈＯＧ１ｐａｅｗｒｓ

缺血后处理对大鼠缺血—再灌注肺损伤血红素加氧酶—1表达的影响

缺血后处理对大鼠缺血—再灌注肺损伤血红素加氧酶—1表达的影响目的觀察缺血后处理（IPO）对大鼠肺缺血—再灌注损伤（IRI）期间血红素加氧酶—1 （HO—1）表达的影响，探讨其保护机制。

方法48只成年SD大鼠，随机（随机数字法）分成6组（n=8），假手术组（S组）；缺血—再灌注组（I/R组）：夹闭左肺门缺血45 min，再灌注105 min；缺血后处理组（IPO组）：缺血后再灌注30 s，停灌30 s，反复3次，再恢复灌注102 min；氯化高铁血红素（Hemin）+缺血—再灌注组（HM+I/R组）：术前连续2 d腹腔注射Hemin 40 μmol/（kg·d），余同I/R组；锌原卟啉Ⅸ+缺血后处理组（ZnPPⅨ+IPO组）：术前24 h 腹腔注射ZnPPⅨ20 mg/（kg·d），余同IPO组；氯化高铁血红素+假手术组（HM+S 组）。

测定各组肺组织HO—1蛋白表达水平、动脉血氧分压（PaO2）、肺组织湿/干质量比（W/D）和血清丙二醛（MDA）含量，观察肺组织病理变化。

组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用配对t检验。

结果I/R组肺组织HO—1蛋白表达（0.177±0.015）与S组和HM+S组相比差异具有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05），但与IPO组（0.194±0.017）及HM+I/R组（0.209±0.013）相比差异具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。

各实验组PaO2均显著低于S组（90±11）mm Hg，IPO组和HM+I/R组PaO2与I/R组相比较，差异具有统计学意义（P ＜0.01）；I/R组较S组肺组织W/D、血清MDA含量升高，肺组织病理损伤严重，而IPO组和HM+I/R组上述改变差异具有统计学意义（P＜0.05）。

结论早期短时程缺血后处理能明显减轻在体大鼠肺IRI，其作用机制与其上调HO—1蛋白表达及抑制脂质过氧化的损伤作用有关。

中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响

中华眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖周期及细胞凋亡的影响作者：刘成军，韦世秀，李牡艳，吴华，李佳荃【摘要】目的探讨中华眼镜蛇毒（Chinese cobra venom）对体外培养的人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株诱导凋亡的作用。

方法应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感实验法（ATP-TCA）测定细胞的生长抑制百分率，倒置相差显微镜、HE染色观察细胞形态学改变，流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率。

结果ATP-TCA实验显示眼镜蛇毒对体外培养的NACC细胞生长有明显的抑制作用，与浓度和作用时间呈正比；形态学观察发现用药后的NACC细胞质空泡、核固缩、核染色质聚集等形态学变化现象；流式细胞仪检测发现眼镜蛇毒阻滞NACC细胞生长于细胞周期的G0／G1期，检测到实验组细胞凋亡率显著高于对照组。

结论中华眼镜蛇毒能抑制NACC细胞增殖，诱导NACC细胞凋亡。

【关键词】中华眼镜蛇毒 NACC细胞株细胞周期细胞凋亡Abstract：Objective To study on the effect of Chinese cobra venom-induced apoptosis in Noovel Human palatal salivary gland cells line. MethodsThe adenosine triphospate(ATP)-bioluminescence tumor chemosensitivity assay(ATP-TCA) was used to examine the growth of NACC cells treated with Chinese cobra venom in different concentration.Cell apoptosis was observed by flow cytometry and cell morphology. ResultsThe experiment showed that cobra venom could obviously inhibit the growth of NACC cell in a concentration and time-dependent manner.The changes in morphology of NACC Cell were observed by HE staining. The flow cytometry analysis showed that apoptosis and inhibition of NACC cells in the G0/G1 phase were induced after treated with Chinese cobra venom. The apoptotic rates of NACC cells treated with Chinese cobra venom groups were significantly higher than that in control group. ConclusionCobra venom can inhibit proliferation and induce apoptosis of NACC cells.Key words：Chinese cobra venom; NACC cell; Cell cycle; Cell apoptosis涎腺腺样囊性癌是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，研究有效药物控制其复发和转移成为目前研究的热点。

Rho激酶对离体大鼠缺血再灌注损伤心脏功能的影响的开题报告

Rho激酶对离体大鼠缺血再灌注损伤心脏功能的影响的开
题报告
题目：Rho激酶对离体大鼠缺血再灌注损伤心脏功能的影响
研究背景：
缺血再灌注是心肌梗死、冠心病、心肌病等心血管疾病的常见病理生理过程，在急性心肌梗死、冠状动脉介入治疗、心脏移植等多种情况下都具有临床意义。

缺血再
灌注损伤引起的心肌细胞死亡是导致心肌缺血再灌注损伤的主因。

而Rho激酶是一种
重要的信号转导蛋白，可以影响心肌细胞的生长、再生和凋亡过程。

因此，研究Rho
激酶在缺血再灌注损伤心脏功能方面的作用，对于心血管疾病的治疗和防治具有重要
意义。

研究目的：
本研究旨在探究Rho激酶是否可以影响离体大鼠心脏缺血再灌注损伤过程中心肌细胞的凋亡、心肌肥厚等生理变化，以及Rho激酶对于心脏功能恢复的影响。

研究方法：
将实验大鼠分为三组：sham组、缺血再灌注组和组织特异性Rho激酶过表达组。

采用Langendorff离体心脏灌流技术，对大鼠心脏进行缺血再灌注处理，记录心肌肥
厚度、心肌细胞凋亡、心脏功能等指标，并对RhoA激酶的表达进行检测。

研究意义：
本研究可以深入探究Rho激酶对心血管疾病的治疗和防治作用，有助于提高对心血管疾病的认识和预防。

同时，研究结果还可以促进探究Rho激酶在其他疾病中的作
用机制，为临床应用提供理论参考和实验依据。

大鼠急性心肌缺血再灌注

Bcl - 2/ Bax 蛋白的表达。 113 统计学处理各组定量观察结果以 ( x ±s) 表示 ,组间比较用方差分析 ,2 组间比较用 q 检验。
图 1 缺血 30 min 组 ×17 000
图 2 缺血 30 min 再灌注 1 h 组 ×17 000
2 结果 211 透射电镜观察结果 Ⅰ组正常心肌细胞核中染色质疏松 ,密度均一 ,肌纤维完整 ,肌节各带清晰 ,肌节之间线粒体被膜完整 ,嵴密集。 Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ组电镜下可见某些心肌细胞凋亡的超微结构特征。以细胞核的改变较为明显 :核膜皱缩 ,染色质凝聚、趋边 ,在核膜下集聚呈斑块状。核仁消失 , 偶见胞核固缩 ,未见凋亡小体。线粒体轻度肿胀 , 或部分嵴融合。肌膜完整及肌原纤维未见明显变化。以上所见 Ⅳ组较多 , Ⅲ组次之 , Ⅱ组偶见。
3 讨论
图 3 缺血 30 min 再灌注 2 h 组 ×17 000
212 TUNEL 检测结果 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组可见心肌细胞核呈深棕色反应的阳性凋亡细胞 ,核固缩 ,染色质聚边 , 胞浆不显色。各组凋亡指数比较 AI Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ比 AI Ⅰ显著性增高 ( P < 0101) , AI Ⅲ、 AI Ⅱ、AI Ⅰ之间也存在着显著性差异 ,其中 AI Ⅳ最高。4 组凋亡指数的统计见表 1 。
我们试图通过观察缺血再灌注心肌细胞超微结构的改变和应用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺血末端标记法和dna电泳检测dna片段的存在来证实大鼠心肌急性缺血再灌注过程中存在着不同程度的细胞凋亡并初步探讨细胞凋亡与bcl2bax蛋白表达的关系为阐明心肌缺血再灌注损伤的机制和临床心肌保护措施提供一些形态学资料
武警医学 (Medical Journal of the Chinese People’s Armed Police Forces) Vol . 12 No. 3 2001 - 03 出版

中华眼镜蛇毒对大鼠凝血功能的影响

中华眼镜蛇毒对大鼠凝血功能的影响许林;魏颖;徐书静;张启云;郭静;周舒婷;孙黔云【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2022(30)3【摘要】目的研究中华眼镜蛇毒对大鼠凝血功能的影响。

方法体外实验采用中华眼镜蛇毒及其分离峰与大鼠全血孵育,测定血栓弹力图;体内采用尾静脉或肌肉注射眼镜蛇毒,取不同时间点全血测定血栓弹力图;取体内外实验分离的血浆测定LDH 活力、血红蛋白、vWF、P-selectin含量并采用酶切发色底物法测定凝血相关酶活性。

结果体内外实验结果表明,眼镜蛇毒及其部分分离峰可明显引起大鼠凝血功能的异常,表现为凝血因子减少、纤维蛋白原水平低下、血小板功能减弱;同时大鼠血浆血红蛋白含量及LDH活力显著升高。

体外实验中眼镜蛇毒及其部分分离峰可显著下调酶切凝血酶及纤溶酶底物活性。

体内实验中肌肉注射后血浆中P-selectin 含量0.5 h时显著升高,酶切凝血因子Ⅹa底物活性6 h内显著上调;尾静脉注射后血浆酶切凝血酶底物活性2 h内显著上调,6 h内vWF含量明显升高。

结论中华眼镜蛇毒能明显引起大鼠凝血功能的异常,其作用主要与激活凝血系统导致凝血因子消耗、纤维蛋白原减少以及血小板消耗等有关。

【总页数】10页(P316-325)【作者】许林;魏颖;徐书静;张启云;郭静;周舒婷;孙黔云【作者单位】贵州医科大学药学院;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室;山西大学中医药现代研究中心【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响2.广西眼镜蛇毒神经生长因子对颅脑创伤大鼠细胞免疫功能的影响3.中华眼镜蛇毒组分H对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关凋亡基因表达的影响4.腹蛇毒和眼镜蛇毒对大鼠免疫功能的影响5.中华眼镜蛇毒治疗对豚鼠移植于大鼠心脏存活时间的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

眼镜蛇毒心脏毒素对心肌电及机械活动的影响（一）

眼镜蛇毒心脏毒素对心肌电及机械活动的影响（一）
洪息君;黄仁彬
【期刊名称】《广西医学院学报》
【年(卷),期】1989(006)002
【摘要】中华眼镜蛇毒心脏毒素(Cardiotoxin,简称CTX)对离体的豚鼠心肌电及机械活动有明显而持久的影响。

1mg/L CTX可提高离体的大鼠心房和离体的豚鼠心脏肌张力,减少收缩振幅,ECG的S-T段下降或抬高,T波由正常倒置型全部转为直立,电压增加。

离体的大鼠心房ERP、豚鼠心脏P-R及Q-T间期、心率、冠脉流量(CF)不变。

反复用生理溶液冲洗标本,不能使CTX抑制了的标本恢复正常。

而
5mM Ca^(+2)拮抗CTX对心肌电及机械活动的影响。

【总页数】5页(P28-32)
【作者】洪息君;黄仁彬
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R996.3
【相关文献】
1.中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响 [J], 龚海云
2.舟山眼镜蛇毒心脏毒素-13的纯化、活性及尼群地平对其作用的影响 [J], 许云禄;刘广芬;王晴川
3.徐长卿对舟山眼镜蛇毒心脏毒素和神经毒素毒性的影响 [J], 林丽珊;许云禄;刘广芬;王长溪;王晴川
4.眼镜蛇毒心脏毒素的毒性作用及Ca^(+2)对其毒性作用的影响(二) [J], 黄仁彬;洪息君;杨帆;汤圣希
5.大花罗布麻对心脏电和机械活动的影响 [J], 韩大英;林坡;曲柏林;陈孝良
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眼镜蛇毒对大鼠脊髓乙酰胆碱酯酶表达的影响

眼镜蛇毒对大鼠脊髓乙酰胆碱酯酶表达的影响
赵祥;李怀斌;熊克仁
【期刊名称】《蛇志》
【年(卷),期】2005(17)4
【摘要】目的探讨眼镜蛇毒对大鼠腰髓乙酰胆碱酯酶(AchE)表达的影响. 方法将蛇毒注射到大鼠左小腿下部,采用亚铁氰化铜法示AchE,观察大鼠腰髓前角AchE阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化. 结果蛇毒组大鼠AchE阳性神经元比对照组表达增强. 结论眼镜蛇毒对腰髓的AchE阳性神经元表达有上调作用.
【总页数】4页(P233-236)
【作者】赵祥;李怀斌;熊克仁
【作者单位】皖南医学院解剖学教研室,安徽芜湖,241001;皖南医学院解剖学教研室,安徽芜湖,241001;皖南医学院解剖学教研室,安徽芜湖,241001
【正文语种】中文
【中图分类】R996.3
【相关文献】
1.眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达的影响 [J], 龚鑫;李怀斌;熊克仁
2.眼镜蛇毒对大鼠脊髓和脊神经节一氧化氮合酶表达的影响 [J], 熊波;李怀斌
3.眼镜蛇毒对大鼠脊髓Nestin和BDNF表达的影响 [J], 王继胜;丁见;吴锋;熊克仁
4.甲基强的松龙对脊髓半横断大鼠腓肠肌乙酰胆碱酯酶表达的影响 [J], 高杰;巴方;李洪鹏
5.补体C3mRNA在大鼠脑出血模型中的表达及眼镜蛇毒因子对其表达的影响 [J], 郑晓梅;刘亮;李小刚;高毅滨;袁云华
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