黄芪总黄酮抗紫外线损伤作用的实验研究
黄芪活性成分对膜损伤的防护作用
ｓ ａ ｅ ｇ ｎ ｆ ｃ ｎ ｖ ｒｏ ｓ ｆ ｅ ａ ｉａ ｓ ｔ ｅ ｂ ｓ ｆ ｃ ． ｓ ｇｖ ｎ ｂ ｏ ａ ｌ ｖ ｎ ｄ ｆａ ｔａ ａ ｕ （ Ａ ）ａ ｄ ｃ ｖ ｎ ｉ ｇ ｅ ｆ ｔｏ ａ ｉｕ ｒ ｅ ｒ ｄ ｃ ｌ ｛ ｈ ｅ ｔｅ ｆ ｔ￣ａ ｉ ｅ ｙ ｔ ｔ ｌｔａ ｏ ｉ ｓ ｏ ｓ ｒ ｇ ｌ ｓ ＴＦ ｅ ｅ － ｎ ｔ ｔ ｌ ａ ｏ ｉ ｓ ｏ ｓ ｒ ｇ ｌ ｓ ＴＳ ） Ｃｏ ｃ ｕ ｉ ｎ Ｔｈ ｃ ｉｅ ｐ ｉ ｃｐ ｅ ｆｏ ｒ ｄ ｘ ａ ｔａ ａｉｃ ｎ ｗｅ ｌｐ ｅ ｅ ｔ ｔ ｅ ｏ ａ ｐ ｎ ｎ ｆ ａ ｔａ ａ ｕ （ Ａ ｓ ｎ ｌ ｓｏ ｅ ａ ｔ ｒｎ ｉ ｌ ｒ ｍ ａ ｉ ｓ ｒ ｇ ［ ａ ｌ ｒ ｖ ｎ ｈ ｖ
黄 芪 ［ ｔ ｇ ｌｓ Ａｓｒ ａｕ ｍｏ ｇ ｏｉ ｓ Ｂ ｅ ；Ａ． ａ ｎ ｈｌｕ ｇ． ｃ
入 ２ ５ ｍｎ ［Ｌ Ｃ Ｃ２溶 液 ， 拌 ５ｍｉ， 下 静 置 ３ ． ａ ／ ａ １ ｏ 搅 ｎ ４Ｃ Ｏ
ｍｅ ｒｎ ｃｕ Ｆｓｈ ）Ｂ ｅ 系豆 科黄 芪属 植物 ， ｍｂ ａ ａｅ ｓ（ ｉ ． ｇ ３ ｃ 药 用其 干燥根 ， 中医传 统的主要 益气 药 。现代药 为
Ｄａ ｏ ｇ Ｍ ｅ ｉａ ｌ ｇ Ｓｈ ｎ ３ ０ ８． ａ ｔｎ ｄ ｃ ｌ Ｃｏ ｌ ｅ， ａ ｘｉ０ ７ ０ Ｃｈ ｎ ｅ Ｌ
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黄芪颗粒中总黄酮的含量测定(精)
第40卷第8期2012年4月广州化工Guangzhou Chemical Industry Vol．40No．8April．2012黄芪颗粒中总黄酮的含量测定何1，42，3艳，陈华国，赵2，3超，周2，3欣，王*2，32，3垄，申海艳（1贵阳中医学院，贵州贵阳550002；2贵州师范大学贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室，贵州贵阳550001；3贵州师范大学天然药物质量控制研究中心，贵州贵阳550001；4贵州汉方制药有限公司，贵州贵阳550002）摘要：建立了黄芪颗粒中总黄酮的含量测定方法：以芦丁为参照，利用紫外分光光度法在371nm 波长测定黄芪颗粒中总黄RSD%酮的含量。
芦丁在5．90 59．0μg /mL线性关系良好，线性方程为A=0．0103C +0．2707，γ=0．9963，平均回收率为98．65%，=0．85%。
结果表明：紫外分光光度法测定黄芪颗粒中总黄酮的含量方法简便，快捷，准确，可用来做黄芪颗粒的质量评估的方法。
关键词：黄芪颗粒；总黄酮；紫外分光光度法中图分类号：O65文献标识码：A文章编号：1001－9677（2012）08－0133－03Quantitative Determination of Total Flavonoids in HuangqiGranule by UV Spectrophotometry *433333HE Yan 1，，CHEN Hua －guo 2，，ZHAO Chao 2，，ZHOU Xin 2，，WANG Long 2，，SHEN Hai －yan 2，（1Guiyang College of Traditional Chinese Medicine ，Guizhou Guiyang 550002；2Key Laboratoryfor Information System of Mountainous Areas and Protection of Ecological Environment ，Guizhou Normal University ，Guiyang ，Guizhou Guiyang 550001；3Research Center for Quality Control of Natural Medicine ，Guizhou Normal University ，Guizhou Guiyang 550001；4Guizhou Hanfang Pharmaceuticals Company ，Guizhou Guiyang 550001，China ）Abstract ：A new method for determination the total flavonoids in Huangqi Granule was established．The total fla-vonoids in Huangqi Granule were determined by UV spectrophotometry using rutin as the reference at the wavelength of 371nm．The linear equation was A =0．0103C +0．2707，γ=0．9963，and linear range of calibration curve was 5．9 59μg /mL．The average reeovery rate was 98．65%with the relativestandard deviation 0．86%．The method of UV spec-trophotometry determination the total flavonoids in Huangqi Granule was simple ，fast and accurate ，which can be used to evaluate the quality of Huangqi Granule．Key words ：Huangqi Granule ；total flavone ；UV spectrophotometry黄芪颗粒是以黄芪的全成分提取物为主要成分所制成的内科中成药，具有补气固表，利尿，托毒排脓，生肌等功效。
黄芪药理作用研究综述
黄芪药理作用研究综述摘要：黄芪是我国的一种传统的中药材，具有很多药理作用，而且在临床医学中的应用也逐渐广泛，治疗效果明显，值得推广使用。
本文简单分析了黄芪的药理作用及其在临床医学中的应用情况，仅供参考。
关键词：黄芪；药理作用黄芪来自于草本植物膜荚黄芪和蒙古黄芪的根部。
将根部与根须除去洗净，再将其晒干、切片后就可以制成黄芪。
黄芪中含有的化学成分有黄酮、多糖和氨基酸等。
黄芪是我国一种传统的中药材，历史悠久，而且它味甘、性质微温，能够有效的消肿、利水、补气，还能够增强人们的免疫力，具有多种功效。
1、对机体的免疫系统产生的作用⑴有利于增强机体体液的免疫功能，促进机体具有抗体生成的作用，血清中含有的抗体水平会直接影响到机体的免疫力；⑵有利于增强细胞的免疫功能，在细胞免疫时，其中分化出来的效应细胞会消灭靶细胞，或者利用生成的一定数量的细胞因子来发挥效应；⑶有利于增强机体的非特异性免疫功能。
人体血液中含有的白细胞的数量会在黄芪的药理作用下明显的增多，从而会提升机体内血清溶血素的水平。
有利于促进机体中巨噬细胞和某些中性粒细胞的吞噬和杀菌功能的提高；⑷有利于增强机体的免疫调节功能。
黄芪中含有的多糖成分，能能够调节其中淋巴细胞亚群的比例，而且还有利于促进细胞表层粘附分子的表达，辅助淋巴细胞实现再循环。
2、对泌尿系统产生的作用黄芪能够维持肾小球血管内部的皮细胞结构，保证它的完整，同时还有利于改善它的功能；黄芪还能够除去过量的氧自由基，避免肾组织受到一定的损害；除此之外，黄芪还能够利尿。
3、黄芪的抗衰老作用科学调查显示，黄芪能够通过抗氧化的作用来限制生成自由基，而且还可以消除机体内过量的自由基，放缓和减少脂质过氧化，以此可以延长细胞的寿命。
4、对血糖的作用黄芪中含有的多糖能够增强糖原合成的酶活性，以此来达到抵抗糖尿病的目的。
同时，多糖成分会有效的改善机体脂质代谢紊乱的现象，促使血清中HDL的含量增加。
5、对血液系统产生的作用黄芪能够有效地抑制住磷酸二酯酶的活性，促使机体中血小板的含量升高，同时还有利于抑制血小板的结合。
比色法辅助下紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量
试品溶液。
２．２ 对照品溶液的制备
准确称取芦丁标准品 ５ｍｇ，烘干后置于容量瓶（５０ｍＬ）中， 加 ５０％乙醇水浴加热溶解并定容，即得芦丁标准溶液（０．１ｍｇ／ ｍＬ），放入冰柜备用。
第 １４期
陈凌霆等：比色法辅助下紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量
·７５·ห้องสมุดไป่ตู้
比色法辅助下紫外分光光度法测定黄芪总黄酮含量
陈凌霆１，２，赵娅敏，２，齐燕姣１，２，罗兴平１，２，康淑荷１，２，张丽丽１，２，俞布仁３，杨文亮１，２
（１．西北民族大学化工学院，甘肃 兰州 ７３００００；２．西北民族大学甘肃省高校环境友好复合 材料及生物质利用省级重点实验室，甘肃 兰州 ７３００００；３．西北民族大学电气工程学院，甘肃 兰州 ７３００００）
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＴｏｔａｌＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａＢａｉｃａｌｅｎｓｉｓｂｙ ＵｌｔｒａｖｉｏｌｅｔＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙＡｓｓｉｓｔｅｄｂｙＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ
ＣｈｅｎＬｉｎｇｔｉｎｇ１，２，ＺｈａｏＹａｍｉｎ１，２，ＱｉＹａｎｊｉａｏ１，２，ＬｕｏＸｉｎｇｐｉｎｇ１，２， ＫａｎｇＳｈｕｈｅ１，２，ＺｈａｎｇＬｉｌｉ１，２，ＹｕＢｕｒｅｎ３，ＹａｎｇＷｅｎｌｉａｎｇ１，２
摘要：目的：建立一种简单、快速、有效的方法测定黄芪中总黄酮含量。方法：在 ＮａＮＯ３ －Ａｌ（ＮＯ３）３ －ＮａＯＨ比色法辅助下，用紫外分光 光度法测定黄芪中总黄酮的含量。结果：显色法最佳条件为 ５％ＮａＮＯ３－８％Ａｌ（ＮＯ３）３－５％ＮａＯＨ，最大吸收波长为 ５１２ｎｍ，吸光度 Ａ与 芦丁在 ０．０１５～０．６ｍｇ／ｍＬ范围内呈良好的线性关系（Ｒ２＝０．９９９５），线性方程为 Ａ＝０．０７４１ｃ＋０．０００５，总黄酮的回收率为 ９７．６％，相对 偏差（ＲＳＤ）为 ２．４７％。结论：该法简单准确，易操作，回收率高，可作为黄芪总黄酮含量测定的一种方法。 关键词：黄芪；总黄酮；比色法；紫外分光光度法 中图分类号：Ｏ６５７．３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０１８）１４－００７５－０３
黄芪黄酮的研究进展
黄芪黄酮的研究进展李娟;张龙;雷春龙;吴永胜【摘要】药理学研究发现,黄芪黄酮具有较强的抗氧化性,可有效清除ROS、缓解氧化损伤等.综述了黄芪中黄酮类化合物的主要成分、提取工艺、功能等的研究进展情况.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2019(040)003【总页数】3页(P65-67)【关键词】黄芪黄酮;提取工艺;功能【作者】李娟;张龙;雷春龙;吴永胜【作者单位】成都市农林科学院畜牧研究所,四川成都 611130;西华师范大学生态研究院,四川南充 637009;成都市农林科学院畜牧研究所,四川成都 611130;成都市农林科学院畜牧研究所,四川成都 611130【正文语种】中文【中图分类】R285黄芪作为一味传统中药材，国内外学者对其化学成分进行大量研究发现，黄芪中含有黄酮类、皂苷类、多糖类、氨基酸、生物碱、有机酸类、微量元素以及叶酸、亚油酸、胆碱、甜菜碱、香豆酸等复杂的化学成分，其中，黄酮类、皂苷类和多糖类物质是主要的天然活性物质，具有较高的药用价值。
药理学研究发现，黄芪黄酮具有较强的抗氧化性，可有效清除ROS、缓解氧化损伤。
1 黄芪黄酮的成分及影响因素1.1 成分区海燕［1］利用高效液相色谱法成功分离出毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮和芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷4种黄芪黄酮类物质活性成分。
侯美如等［2］研究认为，优化的黄芪固态发酵培养基适宜解淀粉芽胞杆菌生长，易于黄芪黄酮释放，且所筛选的培养基原材料也符合固态发酵产业化生产条件。
1.2 影响因素任伟超等［3］比较了不同产地、生长年限、生长环境黄芪中黄酮含量的差异，结果发现，不同产地的黄芪中毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量存在明显区别。
李光跃［4］研究发现，不同产地蒙古黄芪毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪皂苷Ⅰ含量具有差异性。
李光跃［4］研究还发现，内蒙古地区黄芪黄酮含量与年降水量和年均温呈负相关，与年日照时数、纬度呈正相关。
黄芪的化学成分及药理作用研究进展
由于黄芪在医学临床中表现出多种药理 作用， 具有非常广泛 的临床使 用价值 ， 因此这种传统的中药药材受到了世界医学的广泛关注 。不但 我国 的医药 学学者对 黄芪的化学成 分、 药理作用进 行了大量 的研 究， 国外 部分 医药学 专家也在相关领域进行 了研究。 研究证明 ，芪可 以显著提高骨质疏松患者的骨密度， 显著提高 抗外力作用， 研究认为和黄芪拟雌激 素样 作用有 密切关 系。 ３ ． ９抗氧 化。经过 临床 实践发现 ， 利 用黄 芪进行抗氧化 、 抗衰老试 验能 够取得很好的效果。 这是 因为黄芪所含有 的多糖能够极大的提升血超氧化 物Ｓ ＯＤ、 ＣＡ Ｔ、 谷胱甘肽 以及 ＧＳ Ｈ－ Ｐ Ｘ等酶 的活性 从而使血浆 、 脑匀 浆与 肝匀浆里的 Ｌ Ｐ Ｏ含量大大减少 ， 从而达到了 良好的抗氧化效果。 ３ ． １ ０ 抗辐射 。有学者发现黄 芪能够促进淋 巴细胞的转化 ， 能够清 除人 因为遭受辐射而 产生的 自由基， 从而提 高了人对辐射 的抵 抗能力 ， 这 一发 现表面黄芪能够起到抗辐射的效果， 这对于当前普遍受到各种 辐射影响的 人们来讲 ， 无 疑 是 一 个“ 福音” 。 ３ ． １ １抗肿瘤。 黄 芪能够抑制低 淋巴转 移（ Ｈｅ ｐ Ａ ） ／ ］ ， 鼠肿瘤生长， 增加免疫 器官重量 ， 促进 体内 Ｉ Ｌ 一 ２的产生， 提 高小 鼠单核吞噬细胞功能， 说明黄 芪作 为 生物 诱导剂 能够增 强荷瘤小 鼠的免疫 功能， 从而起到抗肿瘤作用 。通过 体外抑瘤实验证 明： 黄芪总提取物 （ Ｔ Ａ Ｅ ） ２ ０ ￣ １ ６ ０ ｍ ｇ ？ Ｌ 一 １ 对人肝癌 Ｂ ｅ 一 ７ ４ ０ ４ ） 细胞和人 宫颈肿瘤（ Ｈｅ Ｌ ａ ） 细胞有 明显的抑制作用， 提示Ｔ Ａ Ｅ不仅在整体水 平有抑瘤作用， 而且对癌细胞有直接 的抑制作用 。
黄芪总黄酮对辐射损伤小鼠的防护作用研究
ＹＡＮＧ ｎ － ｅ。 ｔ Ｙｉｇ ｘｕ ｅ
（ ｅａｔｅｔｆ ｓ ｌ ｙ ｎ ｍ ｒｏ ｇ ，ｏｅｅ Ｂ ｓ ｄｃｎ ，ｈｎｑｎ Ｍｅｉ ｌ ｎｖｒｔ） Ｄ ｐｒ ｎｏＨｉｏ ｇ ｄ ｂｙｌ ｙ Ｃｌｇ ａｉＭｅｉｉ Ｃ ｏｇｉｇ ｄｃ ｉ ｓｙ ｍ ｔｏ ａ Ｅ ｏ ｌ ｏ ｆ ｃ ｅ ａＵ ｅ ｉ
黄芪总黄酮对辐射损伤小 鼠的防护作用研究
杨 映雪 ｔ陈建 业 ：费中海 谭榜 宪 唐 恩 洁 ｓ唐华 英 ｚ王 亚平 ， ， ， ， ， ，
（． １重庆医科 大学基础 医学院组胚学教研室， 重庆 医院检验科 ， 南充 ４ ０ １ ； ．Ｉ 医学院应用技术研 究所 ， ０ ０ ６ ２ 川北 南充
用提供实验依据。 方法 ： 采用大剂量 ｃ 射线一次性全身照射雌性昆明小鼠， ｏ 制成放射损伤动物模型。 鼠在照射前 ３ 及照射 小 ｄ 后， 以不同剂量 的 Ｔ Ａ连续灌 胃 １ ， Ｆ ４ｄ 观察受致死剂量 ６ ｏ 射线照射小 鼠的 ３ 存活率及生存时间长短 。 ０ Ｃ ０ｄ 同时 ， 在低剂量照
【 ｂｔ ｃ］ ｂｅｔ ｅＴ ｐｏ ｅ ａｉ ｒｔ ｔｅ ｆ ｃｏＴ Ａｏ ｅ０ｏ —ａ ｒｄａ ｄ ｃ ｎ ｒｖ ｅａ ｘｅｉｅｔ ａｉｆｒ Ａ ｓａｔＯｊ ｃｉ ：ｏ ｘｌ ｅｈ ｄ ｐｏ ｃｉ ｅｔ ｆ Ｆ ｎ ｈ Ｃ ｒｙ ｒ ｉｅ ｅ ｄｐｏｉ ｅｐｒ ｎａｂｓ ｒ ｖ ｅ ｒｔ ｒ ｏ ｅ ｖｅ ｔ ６ ｉａ ｔ ｍｉ ａ ｄ ｎ ｍ ｌ ｓｏ
复所需时间（＜． ）同时 ， Ａ还能促进小鼠脾重指数的恢 复 ， ＰＯ ５ ； ０ Ｔ Ｆ 减轻辐射对小 鼠脾脏的损伤程度 ， 促进造血灶增生 ， 加快造血 功能恢复 。结论：Ｆ ＴＡ具有较强的抗辐射作用 ， 能显著提高受致死剂量 ｍ ｏ 射线照射小 鼠的存活率 ， ｃ 降低辐射对小 鼠外周血
黄芪颗粒中总黄酮的含量测定
５ ｇ ｍＬ ９ ／ ．Ｔ ｅ ａ ｅ ａ ｅ ｒ ｅ ｖ ｒ ａｅ ｗａ ８ ６ ％ ｗ ｔ ｈ ｅａｉ ｅ ｓａ ｄ ｒ ｅ ｉｔ ｎ０． ６ ．Ｔ ｅ ｍｅｈ ｄ ｏ ｐ ｃ ｈ ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅ ｙ ｒ ｔ ｓ９ ． ５ ｉ ｔ ｅ ｒ ｌｔ ｔｎ ａ ｄ ｄ ｖ ａｉ ８ ％ ｈ ｖ ｏ ｈ ｔｏ ｆ ＵＶ ｓ ｅ ．
中总黄酮的含量测定的报道 ， 故本 实验 以芦 丁为参照 ， 采用紫外 分光光度法 ， 对黄芪颗粒 中总黄酮 的含量进行测 定 ， 旨为黄芪 颗 １１６ ２ １１９ １ ， １０ ０ ，１０ ０ ） 芦丁参照（自制 ， 通过 波谱解析技术 Ｉ １ Ｒ、Ｈ—
Ｎ ＭＲ、３ １Ｃ—Ｎ ＭＲ、 ＭＳ分析 ， 鉴定其 结构 ， 通过 Ｄ Ｄ检测 器检测 Ａ
２ 方 法 与 结果
２ １ 标准 曲线 的制备 ．
精 密称 取在 １５ｏ ０ Ｃ干燥 至恒 重的芦 丁参 照 品 １ ．Ｏ ｍ １ ８ ｇ于 １ ０ｍＬ的容量瓶 中， ６ ％ 乙醇超声溶 解 ， 移入 １０ｍ 加 ０ 转 ０ Ｌ的容 量瓶中 ， ６ ％ 乙醇洗涤 ３次 ， 将洗涤 液并 人 １０ ｍ 用 ０ 并 ０ Ｌ的容量 瓶中， 再加 ６ ％ 乙醇稀 释至刻 度摇 匀， ｏ 即得 参照 品溶 液 （ ． １０ ０ １８ ａ ｍ ） ｒ ／ Ｅ 精密吸取该试液 ０ ０ ０ ５ １０ ２ ０ ３ ０ ４ ０ ５ ０ｍ ， ｇ ． ， ． ， ． ，． ， ． ， ． ， ． Ｌ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ａ ｅ ｍｅｈ ｄ ｆ ｒ ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｉｎ ｔ ｏ ａ ａ ｏ ｉ ｓ ｉ ａ ｇ ａ ｕ ｅ ｗａ ｓａ ｌｓ ｅ ． Ｔｈ ｏａ ａ ｎ ｗ ｔ ｏ ｅｅ ｎ ｔ ｈｅ ｔ ｔ ｆ ｖ ｎｏｄ ｎ Ｈｕ ｎ ｑｉＧｒ ｎ ｌ ｓ ｅ ｔｂ ｉｈ ｄ ｏ ｍ ｏ ｌ ｌ ｅ ｔｔ ｌｆ — ｌ ｖ ｎ ｉ ｓ ｉ ａ ｇ ｉＧｒ ｎ ｌ ｒ ｔｒ ｉ ｅ ｙ ＵＶ ｐｅ ｔｏ ｈｏｏ ｔｙ ｕｓｎｇ ｒ ｔ ｓ ｔ ｅｅ ｅ ｅ ａ ｈｅ ｗａ ｅｅ ｇｈ ｏ ｏ ｏｄ ｎ Ｈｕ ｎ ｑ ａ ｕ ｅ ｗｅ ｅ ｄｅｅ ｎ ｄ ｂ ｍ ｓ ｃｒ ｐ ｔ ｍｅｒ ｉ ｕ ｉ ａ ｈｅ ｒ ｆｒ ｎｃ ｔｔ ｖ ｌ ｎ ｔ ｆ ｎ ３ ｎ ７１ ｍ．Ｔｈ ｉ ｅ ｒｅ ａｉｎ ｗａ ＝０． ０３ ＋０． ７ ７，＾ ０． ９ ３，ａ ｄ ｌ ａ ａ ｇ ｆｃ ｌ ｒ ｔｏ ｕ ｖ ｓ５． ～ ｅ ｌｎ ａ ｑｕ ｔｏ ｓ Ａ ０１ Ｃ ２０ ｖ ９６ ｎ ｉ ｒｒ ｎ ｅ ｏ ａ ｉ ａｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ｗａ ９ ｎｅ ｂ
紫外分光光度法测定蒙古黄芪中总黄酮的含量
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｍｅｍ－ｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ・）Ｂｇｅ・ｖａｒ・ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ（Ｂｇｅ・）Ｈｓｉａｏ或膜荚黄芪Ａ・ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ・）Ｂｇｅ・的干燥根［１］，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效［２］，其化学成分主要有黄酮类、皂苷类和多糖等［３］，迄今从黄芪中分离得到的黄酮类化合物有黄酮、异黄酮、异黄烷和紫檀烷四大类［４］。
目前报道的测定黄芪中总黄酮含量的方法主要是可见光分光光度法［５］，本研究采用紫外光分光光度法测定黄芪中总黄酮含量［６］，拟建立一种准确而简便的测定黄芪中总黄酮含量的方法。
１仪器与试药１．１仪器：Ｃａｒｙ－５０可见紫外分光光度计（美国ｖａｒ－ｉａｎ公司）；ｃｐ３２４５型万分之一天平（德国赛多利斯公司）；ＫＱ－５２００Ｂ型超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）；ＬＧ１０－２・４Ａ离心机（北京医用离心机厂）。
１．２试药：芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：１０００８０－２００３０６），黄芪药材采集于山西浑源县，经山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍老师鉴定为蒙古黄芪（粉碎至６０目粉末）；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇均为分析纯。
２方法与结果２．１对照品溶液的制备准确称取于１２０℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品１０ｍｇ，置于２５ｍｌ容量瓶中，加甲醇１５ｍｌ，超声使之溶解，冷却至室温，并稀释至刻度，摇匀，得浓度为０．４０ｍｇ／ｍｌ的芦丁对照品溶液，冷藏，备用。
２．２供试品溶液的制备准确称取黄芪药材（山西省浑源县３年生）２．０ｇ，置于１００ｍｌ磨口锥形瓶中，加８０％乙醇３０ｍｌ，浸泡２ｈ，超声提取４０ｍｉｎ，过滤，残渣再重复提取１次，２次滤液合并，挥干，置于２ｍｌ容量瓶中，甲醇定容。
２．３定性鉴别反应２．３．１氨水反应：取供试品溶液点于滤纸上，将滤纸在氨水上方熏１５ｍｉｎ，立即置于紫外光下观察（２５４ｎｍ），呈黄绿色荧光斑点。
紫外分光光度法测定蒙古黄芪中总黄酮的含量
黄 芪 为豆 科 植 物 蒙 古 黄 芪 Ａ ｔ ｇｌｓｍ ｎ— ｓ ａａ ｅ ｒ ｕ
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定 为 蒙古 黄 芪 （ 碎 至 ６ 粉 Ｏ目粉末 ）亚 硝酸 钠 、 氧 ； 氢 化钠 、 酸铝 、 硝 乙醇 均 为分析 纯 。
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维普资讯
中国药物 与Ｉ ２ ０ 临床 ０ ７年 １ ２月第 ７卷第 １ 期 Ｃ ｉｅｅＲ ｍ ｄｅ ＆ ＣｉｉｓＤ ｃｍ ｅ ０ ７Ｖ ｌ７Ｎ ．２ ２ ｈｎｓ ｅ ｅ ｉｓ ｌ ｃ ， ｅｅ ｂ ｒ ０ ，ｏ ，ｏ１ ｎ ２
・８９ ・ ９
紫外分 光光度 法测定 蒙古黄芪 中总黄酮 的含量
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黄芪有效成分的药理作用与质量控制研究进展
黄芪有效成分的药理作用与质量控制研究进展摘要：黄芪是医药行业常会用到的药材之一，本片文章主要研究黄芪有效成分的药理作用。
黄芪是大宗药材，有效成分主要包括多糖类、皂苷类和黄酮类。
多糖类成分是黄芪中含量最多的活性成分，具有提高免疫力、抗衰老、改善记忆力等药理作用；皂苷类成分具有抗炎、免疫调节、抗氧化等作用；黄酮类成分具有显著的抗氧化、抗衰老等作用。
黄芪有效成分的质量控制方法以高效液相色谱法最为常用，根据不同有效成分的特性可选用不同的检测器；另外，红外光谱法、色谱-质谱联用技术等也是其质量控制的有效方法。
综述黄芪有效成分的药理作用及其质量控制研究进展，明确黄芪有效成分的药理作用并为黄芪各有效成分的质量控制提供参考和依据。
关键词：黄芪；有效成分；药理作用；质量控制引言黄芪首载于《神农本草经》。
《中国药典》收载其来源为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmem-branaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicus(Bge．)Hsiao或膜荚黄芪A．membranaceus(Fisch．)Bge．的干燥根，味甘，微温，归脾、肺经，具有补气升阳，固表止汗，利水消肿等作用。
黄芪中含有多种化学成分，包括多糖、皂苷类、黄酮类及氨基酸、微量元素、甾醇类物质等。
黄芪甲苷(又称黄芪皂苷Ⅳ)为羊毛酯醇形的四环三萜皂苷，是黄芪的主要活性成分之一，具有调节血糖、抗纤维化、抗氧化应激、抗肿瘤等药理作用。
现对黄芪甲苷的提取、分离、纯化方法以及调节血糖、抗肿瘤、抗细胞凋亡等药理作用进行归纳，以期为黄芪甲苷的深入研究提供支持。
1资源分布黄芪属的种类十分繁杂，常见的有蒙古黄芪、膜荚黄芪、乌拉尔黄芪、秦岭黄芪、云南黄耆、斜颈黄芪等。
其中蒙古黄芪和膜荚黄芪收录在《中华人民共和国药典》２０２０年版一部，主流品种为蒙古黄芪。
蒙古黄芪多为人工栽培，多分布于山西、内蒙古、甘肃、宁夏等半干旱地区，其道地药材产地有内蒙古固阳县、山西浑源县和甘肃陇西县，多生长在向阳草坡或者山坡上。
黄芪总苷在抗皮肤光老化和光损伤中的应用[发明专利]
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专利名称：黄芪总苷在抗皮肤光老化和光损伤中的应用专利类型：发明专利
发明人：李民,刘培庆,温炜杰,陈健文
申请号：CN201810826316.4
申请日：20180725
公开号：CN108969415A
公开日：
20181211
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及黄芪总苷在抗皮肤光老化和光损伤中的应用，所述黄芪总苷能改善UVB长期反复照射下造成的光老化，通过细胞水平的实验发现，黄芪总苷在抗氧化，抗光损伤和光老化，保护线粒体以及抑制UVB引起的凋亡等均有良好的效果，同时，黄芪总苷亦能逆转光老化过程中皮肤细胞的胶原的流失过程，促进胶原蛋白的积累。
另一方面可上调光老化细胞中自噬活力，维持正常的细胞稳态过程，从而更好地抵抗光老化过程。
本发明证明了黄芪总苷在抗皮肤光老化过程中有良好的效果，可应用于制药、保健品、化妆品等领域。
申请人：中山大学
地址：510275 广东省广州市海珠区新港西路135号
国籍：CN
代理机构：广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：宫爱鹏
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黄芪中总黄酮的含量测定
哈尔滨商业大学毕业设计（论文）黄芪中总黄酮的含量测定学生姓名胡莉华指导教师杨波专业药学学院药学院2012年06月1日Graduation Project (Thesis)Harbin University of Commerce Determination of total flavon content inradix astragaliStudent Hu Li HuaSupervisor Yang BoSpecialty PharmaceuticsSchool College of Pharmacy2012-6-1毕业设计（论文）任务书毕业设计（论文）审阅评语毕业设计（论文）审阅评语毕业设计（论文）答辩评语摘要目的：通过采用紫外分光光度法测定药材黄芪种总黄酮含量。
方法：采用超声提取法从药材黄芪中对总黄酮进行提取，采用紫外分光光度法以芦丁为对品对总黄酮成分进行含量测定。
结果：采用紫外分光光度法，以芦丁为标准品采用标准曲线法测定黄芪中总黄酮类成分的总量为0.1605%。
芦丁在8～48 μg/ml 具有良好的线性关系, 回归方程为A=0.03950C - 0.01820( r=0.9999)。
结论：该方法简便可靠, 重现性好, 可用来作为药材黄芪中总黄酮含量的测定方法。
关键词：黄芪；总黄酮；紫外分光光度法AbstractObjective: ultraviolet spectrophotometry was used to determine the content of total flavone medicinal Astragalus species.Methods: the ultrasound extraction from Chinese milkvetch on total flavonoids extracted, by Ultraviolet Spectrophotometry with rutin as control sample on Determination of the content of total flavone composition.Results: The ultraviolet spectrophotometry with rutin as standard sample, using standard curve method for determination of total flavonoids in Radix Astragali total 0.1605%. Rutin in 8 ~48 g / ml has good linear relationship, the regression equation was A =0.03950C+ 0.01820( r = 0.9999).Conclusion: this method is simple, reliable, reproducible, and can be used as medicine Astragalus and content determination of total flavone.Key words: Astragalus; total flavone; UV spectrophotometry.目录摘要 (I)Abstract (II)1 绪论 (4)1.1 本论文研究的目的及意义 (4)1.2 黄芪的国内外研究现状 (4)1.2.1中医药对黄芪的认识 (4)1.2.2现代药理研究对黄芪的认识 (6)1.3黄芪概述 (8)1.3.1化学成分 (8)1.3.2 药理作用 (9)1.3.3 临床应用 (11)1.4 中药鉴定方法 (13)1.4.1 性状鉴定 (13)1.4.2 显微鉴定 (13)2 仪器与药品 (14)2.1 实验药材 (14)2.2药品与试剂 (14)2.3仪器 (14)3 实验部分 (15)3.1黄芪的鉴别 (15)3.1.1 性状鉴别 (15)3.1.2理化鉴别 (15)3.2 乙醇超声提取总黄酮 (16)3.3 紫外分光光度法测定黄芪中总黄酮的含量 (16)3.3.1 实验原理 (16)3.3.2 实验操作及结果 (16)3.3.3 方法学考察 (18)4 结论 (20)讨论 (21)参考文献 (22)致谢 (25)1 绪论1.1本论文研究的目的及意义黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membr anaceus( Fisch. ) Bg e. var. monghol i cus ( Bge. )Hsiao 或膜荚黄芪A str agalus membranaceus( Fisch. ) Bg e. 的干燥根, 具有补气固表、利尿托毒、敛疮生肌等功效。
黄芪黄酮微波辅助提取工艺的研究
黄芪黄酮微波辅助提取工艺的研究一、研究背景黄芪是一种常见的中药材，具有补气、养血、抗疲劳等功效，广泛应用于中医药领域。
其中，黄芪黄酮是一种重要的有效成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，研究黄芪黄酮的提取工艺对于深入挖掘其药用价值具有重要意义。
传统的提取方法存在着效率低、操作繁琐、环境污染等问题，因此，研究一种高效、环保的提取方法势在必行。
微波辅助提取技术具有操作简便、提取效率高、污染小等优点，近年来已被广泛应用于中药提取领域。
因此，本研究旨在探究黄芪黄酮微波辅助提取工艺，为其在中药领域的应用提供技术支持。
二、研究方法1.实验材料本实验采用的黄芪样品为产自陕西省的优质黄芪，黄芪黄酮标准品由国家药典委员会提供。
其他试剂均为分析纯。
2.实验设备微波提取仪、电子天平、恒温振荡器、紫外分光光度计等。
3.实验步骤（1）样品制备将黄芪样品研磨成粉末，筛选出粒径为60目的样品，备用。
（2）微波提取将5g黄芪样品放入微波提取仪中，加入50ml 70%乙醇溶液，以200W的微波功率进行提取。
提取时间、温度和液固比分别为20min、60℃和10:1。
（3）提取液制备将提取液过滤，用蒸馏水稀释至100ml，即为黄芪黄酮提取液。
（4）紫外分光光度法测定黄芪黄酮含量取黄芪黄酮提取液1ml，加入1ml 95%乙醇，用紫外分光光度计测定在344nm处的吸光度值，根据标准曲线计算黄芪黄酮含量。
三、实验结果本实验中，采用微波辅助提取技术提取黄芪黄酮，得到了较好的提取效果。
在提取时间为20min、温度为60℃、液固比为10:1的条件下，黄芪黄酮的提取率最高，达到了2.36%。
四、实验分析微波辅助提取技术是一种高效、环保的提取方法，其提取效率高、操作简便、污染小等优点得到了广泛认可。
本实验中，采用微波辅助提取技术提取黄芪黄酮，得到了较好的提取效果，说明该方法适用于黄芪黄酮的提取。
此外，本实验中采用的提取条件为20min、60℃、液固比为10:1，这些参数的选择对于提取效果具有重要影响。
黄芪多糖对中波紫外线辐射皮肤角质形成细胞损伤的影响
黄芪多糖对中波紫外线辐射皮肤角质形成细胞损伤的影响目的观察黄芪多糖对中波紫外线（UVB）辐射损伤皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）的影响，初步探讨其作用机制。
方法采用UVB辐射HaCaT细胞进行造模。
分为空白对照组、模型组、阳性对照组及黄芪多糖低、中、高剂量组，各药物组给予相应药物干预。
MTT法测定细胞活力；生化比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CA T）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；ELISA检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量。
结果与空白对照组比较，模型组SOD、CAT、GSH-Px含量降低，MDA、TNF-α、IL-6含量升高（P＜0.05）；与模型组比较，各药物组SOD、GSH-Px、CAT含量升高，MDA、TNF-α、IL-6含量降低（P＜0.01）。
结论黄芪多糖可在一定程度上减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损伤。
Abstract：Objective To investigate the effects of Astragalus polysaccharide （APS）on damage of keratinocytes in ultraviolet B （UVB）radiation skin in HaCaT cells；To preliminarily explore its mechanism of action. Methods HaCaT cells were treated by UVB irradiated for modeling. Blank control group，model group，UVB irradiation group and low-，medium- and high-dose APS interventional groups were set up. Each medication group was given relevant medicine. MTT assay was used to determine the cell activity；GSH-Px，CAT，SOD activity and MDA content were detected by biochemical colorimetric method；contents of TNF-α and IL-6 were detected by ELISA. Results Compared with the control group，the contents of SOD，CAT and GSH-Px in the model group decreased significantly，while the contents of MDA，TNF-α and IL-6 increased significantly （P＜0.05）；compared with the mode group，the contents of SOD，CAT and GSH-Px in the medication groups increased significantly，while the contents of MDA，TNF-α and IL-6 were reduced significantly （P＜0.01）. Conclusion APS can reduce the oxidative stress injury of UVB to HaCaT cells to some extent.Key words：Astragalus polysaccharides；ultraviolet B；HaCaT cells；protective effect黄芪为豆科草本植物内蒙黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var. mongholicus（Beg.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，有补气固表、托毒排脓、敛疮生肌等功效。
黄芪甲苷抑制长波紫外线引起人成纤维细胞氧化损伤的研究
黄芪甲苷抑制长波紫外线引起人成纤维细胞氧化损伤的研究王玫玲;吴秀红;周静芬;王蓉;王宝涛;杨子良【期刊名称】《中国中西医结合皮肤性病学杂志》【年(卷),期】2009(8)5【摘要】目的观察黄芪甲苷对长波紫外线(UVA)辐射引起的人成纤维细胞增殖活性变化及氧化损伤的影响.方法采用5、10J/cm2 的UVA照射培养的成纤维细胞,加入黄芪甲苷干预处理,以四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT法)检测细胞活性,比色法检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量变化.结果不同剂量UVA照射后24 h,成纤维细胞出现增殖活性下降,活性下降程度与辐射强度成正比;黄芪甲苷干预处理可使细胞活性有一定程度恢复.UVA照射组的SOD明显下降、MDA上升,黄芪甲苷处理的细胞上清液中SOD活性明显增加,而MDA下降(P＜0.05).结论黄芪甲苷可在一定程度上抑制UVA引起的成纤维细胞活性下降,其机制可能与其抑制氧化损伤和增强细胞抗氧化能力有关.【总页数】3页(P268-270)【作者】王玫玲;吴秀红;周静芬;王蓉;王宝涛;杨子良【作者单位】苏州大学第一附属医院,苏州,215006;苏州大学第一附属医院,苏州,215006;苏州大学第一附属医院,苏州,215006;苏州大学第一附属医院,苏州,215006;苏州大学第一附属医院,苏州,215006;苏州大学第一附属医院,苏州,215006【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.APP17肽对长波紫外线辐射人皮肤成纤维细胞氧化损伤的保护机制 [J], 陈慧;连石;朱威2.人参皂苷Rg1抗长波紫外线对人皮肤成纤维细胞损伤模型的作用研究 [J], 周桃花;周红艳;陈芳;尹颖;杨玉3.人真皮成纤维细胞受长波紫外线辐照引起基因表达动态变化 [J], 殷庆飞;陈田4.黄芪甲苷对人成纤维细胞光老化的抑制作用(英文) [J], 刘昕;闵玮5.橙皮苷抑制长波紫外线诱导的人角质形成细胞氧化损伤和凋亡 [J], 李敏;朱文元;骆丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
紫外分光光度法测定黄芪总黄酮的含量
紫外分光光度法测定黄芪总黄酮的含量
李春红;田吉;何兵;肖顺汉
【期刊名称】《重庆医科大学学报》
【年(卷),期】2011(36)8
【摘要】目的:建立黄芪总黄酮的含量测定方法。
方法:采用紫外分光光度法测定黄芪总黄酮。
结果:总黄酮在0.025～0.5 mg范围内具有良好的线性关系(R=0.999 9),回收率为98.27%,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为0.27%。
结论:该方法操作简便、快速、有效、灵敏、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为黄芪总黄酮含量的测定方法。
【总页数】3页(P954-956)
【关键词】黄芪;总黄酮;紫外分光光度法
【作者】李春红;田吉;何兵;肖顺汉
【作者单位】泸州医学院药物及功能性食品研究中心;泸州医学院药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
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黄芪中总黄酮的含量测定方法
黄芩中总黄酮的含量测定To determine the content of total flavonoids inRadix Scutellariae班级 08级2班专业药学姓名崔立靖同组人陆晓娅关雪李娟张栋材摘要目的：黄芩中总黄酮含量的测定。
方法：采用紫外分光光度法测定黄芩中总黄酮的含量。
结果：黄芩中总黄酮含量是0.034mg/ml。
Abstract Objective:To determine the content of total flavonoids in Radix Scutellariae.Methods :Ultraviolet spectrophotometry was used to To determine the content of total flavonoids content.Results :Total flavonoids content of Radix Scutellariae reached 0.034mg/ml。
关键词黄芩；总黄酮；紫外分光光度法Key World Radix Scutellariae；Total flavonoids ; uv-spectrophotometry目录摘要 (1)Abstract (1)关键词 (1)Key World (1)目录 (2)1 绪论 (3)2 黄芩中总黄酮含量测 (6)2.1仪器与试剂 (6)2.1.1实验仪器 (6)2.1.2实验药品 (6)2.2试验方法 (6)2.2.1总黄酮成分提取 (6)2.2.2定量实验总黄酮的含量测定 (6)2.2.2.1线性关系考察 (6)2.2.2.2提取物含量的测定 (7)2.3方法学检验 (7)2.3.1精密度实验 (7)2.3.2稳定性考察 (7)2.4黄芩根及粉末的显微图像 (7)2.4.1黄芩根的显微图像 (7)2.4.2黄芩粉末的纤维图像 (7)3 参考文献 (8)1 绪论【英文名】Radix Scutellariae【别名】山茶根、黄芩茶、土金茶根【来源】本品为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。
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【论著】黄芪总黄酮抗紫外线损伤作用的实验研究3 Expe ri m enta l S tud ies on TFA Anti2dam a ge Effec ts Fo llow ing U ltra vio le t Irra d ia tion汪德清 房征宇△ 沈文梅 田亚平 王成彬 王 泠 刘红鹰W ang D eqing,F ang Z heny u△,T ian Y ap ing,S hen W enm ei,W ang Cheng bin,W ang,L in,L iu H ongy ing(解放军总医院生化科,北京100853,△解放军总医院老年医学研究所)(D ep a rt m en t of B ioche m istry,Genera l H osp ita l of PL A,B eij ing100853) 摘要 目的:探讨紫外线的细胞损伤作用和总黄酮的防护功效。
方法:采用细胞溶血和细胞膜脂质过氧化反应体系研究了黄芪总黄酮的抗紫外线损伤作用。
结果:黄芪总黄酮对紫外线所致红细胞溶血有很好的防护作用,在浓度为30m g L时,其防护率可达50%;当浓度为10m g L时,对紫外线所致细胞膜脂质过氧化反应即有明显的抑制作用(P<0.05),浓度达100m g L时,与对照组比较有极显著的统计学差异(P<0.001)。
结论:提示黄芪总黄酮可能是一种较好的天然抗紫外线损伤物质。
关键词: 紫外线 黄芪总黄酮 溶血 脂质过氧化Abstract T he anti2dam age effects of to tal favono ids of astragalus(T FA)have been studied fo llow ing ul2 travi o let irradiati on initiated eryth rocyte hemo lysis and li p id peroxidati on of purified eryth rocyte m em brane.T he results suggested that at a do se of T FA30m g L,the rate of p ro tecti on is50%in the system of the ery2 th rocyte hemo lysis caused by UV.In ano ther system,the date show ed that at a do se of10m g L,T FA had significant inh ibiting effect on UV2induced cell m em brane li p id peroxidati on(P<0.05).W hen the do se in2 creased to100m g L,the M DA concentrati on significantly decreased(P<0.001).It indicated that T FA is bet2 ter nature m aterial of anti2dam age effects fo llow ing UV irradiati on.Key words∶ UV TFA Hem o lys is LPO 紫外线是最常见的物理损伤因子之一,其照射可造成生物体多种形式损伤,人们利用该作用机制进行消毒杀菌〔1〕。
近年来,开始注意到紫外线照射对人体的损害,尤其是自由基医学的研究发展,对紫外线的作用机制有了更深入的了解,认为紫外线照射可多途径诱发膜脂质过氧化链式反应,造成生物膜损伤〔2〕。
本实验观察了紫外线照射对细胞膜和完整细胞的损伤以及黄芪总黄酮(to tal flavono ids of astragalu s, T FA)对其损伤作用的防护功效。
3本课题获全军“九・五”医药卫生基金资助(题号96Q101)1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂 硫代巴比妥酸(TBA)为上海试剂二厂产品,四乙氧基丙烷(T EP)为F luka公司生产,黄嘌呤(Xan)与黄嘌呤氧化酶(Xo)为Sigm a公司产品,其它试剂均为国产分析纯。
1.1.2 药物T FA制备〔3,4〕 取黄芪10kg,以95%乙醇减压回流提取3次,合并,浓缩至浸膏,取浸膏加蒸馏水溶解,用醋酸乙脂淬取数次,合并淬取液,浓缩,过柱,得总黄酮,提取物由北京放射医学研究所鉴定。
用前以磷酸盐缓冲液(PB S)稀释至所需浓度。
・2・J L abour M ed V o l.15 N o.4 《劳动医学》1998年第15卷第4期1.2 方法:1.2.1 红细胞(RBC)悬液制备 取正常人混合抗凝静脉血,用生理盐水洗3次,配成悬液。
1.2.2 紫外线照射所致RBC溶血及T FA的防护效能 取RBC悬液0.1m l放入培养板(24孔)内,分别加入不同量T FA,以生理盐水补充体积至1.0m l混匀后置紫外灯下,距离10c m 照射15m in,然后加生理盐水2.0m l,离心2000×g,10m in,取上清测415nm光吸收,以RBC 在蒸馏水中溶血为100%,计算其溶血度(%)。
1.2.3 结果计算 T FA防护效能以防护率表示,其计算公式为:防护率=(对照管溶血度-测定管溶血度)×对照管溶血度-1×100%。
1.2.4 红细胞(RBC)膜的制备 参见文献〔5〕略加修改。
取新鲜健康人全血,按1∶20加入2.5mm o l・L-1CaC l2溶液,搅拌5m in,4℃下静置30m in,离心1500g,15m in,去上清,沉淀用低渗磷酸盐溶液洗涤,至沉淀呈乳白色时,再用0.1m o l・L-1,pH7.4的PB S洗一次,在日立7150全自动生化分析仪上测定膜蛋白浓度,置4℃冰箱备用。
1.2.5 UV照射对细胞膜的损伤及其防护 条件参照M engel等〔6〕方法稍加修改。
取膜悬液2.0m g・L-10.4m l,药物0.1m l(对照加PB S),最后用PB S补充总反应体积至1.0m l, 37℃预温15m in,置30W UV杀菌灯下,灯管距液面10c m,振荡照射1h(阴性对照用黑纸遮挡),加入20%冰醋酸配制的0.67%TBA2.0 m l,混匀后煮沸15m in,冷却,1500g离心15m in,取上清在日本岛津UV-120-02紫外分光光度计,532nm处测定光密度值,以T EP 为标准,计算每m g膜蛋白中脂质过氧化的终产物丙二醛(M DA)的生成量。
2 结果2.1 紫外线对RBC溶血的影响按前述反应体系,紫外线照射RBC悬液不同时间,其溶血程度与照射时间呈明显相关(见表1)。
说明RBC溶血度与紫外线的照射时间直接相关。
表1.不同照射时间的紫外线与RBC溶血的影响照射时间(m in)51015202530溶血度(%)5.723.857.176.185.790.4 r=0.9662.2 T FA对紫外线所致RBC损伤的影响将不同量的T FA加入紫外线损伤体系中,发现其溶血程度随加入T FA量的增加而降低(见表2)。
表2.T FA对紫外线所致RBC损伤的防护作用(n=5,x±s)浓度(m g L)防护率(%)浓度(m g L)防护率(%)对照06062.5±4.4321.3±3.89071.1±5.21530.3±4.018082.7±4.13051.6±4.830096.6±5.22.3 T FA对紫外线的照射诱导膜脂质过氧化反应的抑制效能(见表3)在本实验中,结果表明,T FA对该体系的脂质过氧化有不同程度的抑制作用,作用强度随T FA的浓度增高而增强。
表3.T FA对紫外线所致膜脂质过氧化反应的抑制作用(n=5,x±s)浓度(m g L)M DA(nmo l m g.p r)对照68.8±5.51051.3±4.2310028.8±4.83320022.9±3.933 与对照组比较, 3 p<0.05, 33 p<0.0013 讨论紫外线照射RBC悬液,可诱发RBC膜脂质过氧化反应,致使膜的结构和通透性受损〔7,8〕,此损伤必将伴随RBC内血红蛋白的外漏,因此RBC溶血程度反映着紫外线所致膜损伤的程度。
紫外线的照射可以多途径诱发膜的氧化损伤,氧自由基则是造成这种损伤的主要原因之一。
活性氧作用于生物膜,攻击膜上磷脂中的多不饱和脂肪酸(PU FA),引发膜脂质过氧化链式反应,形成过氧化物〔9〕,在酸性条件下加热与TBA形成红色化合物,当加入具有清除自・12・《劳动医学》1998年第15卷第4期 J L abour M ed V o l.15 N o.4由基作用或阻断其链式反应的药物时,即可降低其脂质过氧化物的生成量。
有实验表明T FA是一种良好的抗氧化剂〔10,11〕,可清除多种自由基,本实验结果显示T FA能有效地阻断紫外线所致的RBC溶血和生物膜脂质过氧化反应,这两种反应过程均与自由基水平有密切关系,因此,我们认为T FA 对紫外线损伤的防护功效主要源于对自由基的清除作用,而这种作用对过量紫外线照射所致疾病的防治具有重要价值,是一个很值得深入研究的课题。
4 参考文献 1.W augh S M,L ow PS.H em ich rom e binding to band3:nu2cleati on of H einz bodies on the eryth rocyte m em brane.B i ochem istry,1985,24(1)∶34 2.L iu SC,Zhai S,L aw ter J,et al.H em in-m ediated dissoci2ati on of eryth rocyte m em brane skeletal p ro teins.J B i o Chem,1985,260(22)∶122～134 3.贺正全,王宝琴.蒙古黄芪化学成分的分离鉴定,药学学报,1991,25(9)∶694 4.王志学,马启凤,何群等.黄芪化学成分的研究.中草药,1983,14(3)∶13 5.刘吉生,张敏丽.血清总抗氧化活性的测定.老年学杂志,1991,11∶171 6.M engel CE,Kann H E J,M eri w ether W D.Studies ofparoxys m al nocturnal hemoglobinuria eryth rocytes:In2 creased lysis and li p id peroxide.J C lin Invest,1967,46∶1715 7.L ux S,Shohet SB.T he eryth rocyte m em brane:B i ochem2istry.Ho sp P ract,1984,19∶77 8.M archesi V.T he cyto skeletal system of red blood cells.Ho sp P ract,1985,20∶113 9.Ch iu D,L ubin B,Shohet SB.Peroxidati on reacti ons on redcell bi o logy.In P ryo r W A eds.F ree radicals in bi o logy, V o l.V,N ew Yo rk∶A cadem ic P ress,1982∶15 10.汪德清,沈文梅,田亚平等.黄芪有效成分对氧自由基清除作用的ESR研究.生物化学与生物物理进展,1996,23(30)∶260 11.汪德清,沈文梅,田亚平等.黄芪总黄酮对自由基损伤防护作用的研究.生物化学与生物物理进展,1996,23(4)∶346(1998-04-24收稿 1998-07-28修回)【病例报告】急性氯苯中毒合并化学灼伤1例报告陈玉姬 张凤林 (吉林化工集团职业病防治研究所,吉林 132021)宁 磊 (吉林化工集团总医院一院中西医结合科) 患者 男,59岁,于入院前12h在检修氯苯管道时,管道破裂泄露,不慎吸入氯苯蒸汽,氯苯液体溅到面部、颈部、肩部、前胸、双足,立即用清水冲洗,病人出现头晕、头痛、乏力、咳嗽、咽痛。