第十五章 甾体激素类药物的分析ppt课件
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13
2.酮基的呈色反应: C3–酮基和C20–酮基
甾酮类 激素药 物
羰基试剂
腙（黄色）
＃常用的羰基试剂：
2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
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3、甲酮基的呈色反应
具有甲酮 基或活泼 亚硝基铁氰化钠 亚甲基的 （间二硝基酚、芳香醛） 呈色 甾体激素 类药物
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15
专属的鉴别 反应
★硫酸-乙醇 晾干后，先喷显色剂，再在１２０℃烘５分钟
★ 20％硫酸 晾干后，先喷显色剂，再在１０５℃烘１０分钟
★ 10％磷钼酸-醋酸 晾干，喷显色剂，在1OO℃加热10一l5min,
(6)判定法：按规定的斑点数目和颜色判断
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33
2、高效液相色谱法
中国药典 (2005年版)所列的色谱条件如下:
3、特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似
4、方法（具有一定分离能力） TLC法（主成分自身稀释对照法） HPLC法（不加校正因子的主成分自身稀释对照法）
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31
１、薄层色谱法：中国药典
(1)薄层板 ：硅胶G板，硅胶ＧＦ254或硅胶ＨＦ254。 (2)供试液和对照液的制备 ：分别用溶剂(如氯仿-甲
22
曲安息龙 丙酸倍氯米松
溶剂
甲醇
乙醇
浓度
20μg/ml 20μg/ml
结果判断 在238nm处有 在239nm处有最 最大吸收 大吸收，A为
0.57～0.60，在 239nm与263nm 处的吸收度比值为 2.25～2.45
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23
五、红外分光光度法
甾体激素类药物结构复杂，红外吸收光谱是 鉴别该类药物有效而可靠的方法
★ C10、C13:具有角甲 基
★ C11:具有羟基或酮基
整理版课★件 具有紫外吸收
4
肾上腺皮质激素
羟基形成醋酸酯，肌注时可延长作用时间
H HO
9
F O
C1、C2和C4、C5之间双键
O
O O CH3
OH 16 CH3 抗炎作用增强
H H
醋酸地塞米松
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5
二、雄性激素及蛋白同化激素 雄性激素：睾酮的衍生物，如甲睾酮、丙酸睾 酮、十一酸睾酮等 蛋白同化激素有苯丙酸诺龙
第十五章 甾体激素类 药物的分析
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1
第一节 基本结构和分类
基本结构：
基本结构：环戊烷骈多氢菲
A环:多数为脂环， 有△4-3-酮，少数为苯环
C3:可能有酮基或烃基; C10、C13:多数均有角甲基
少数C10上无角甲基 Cll:可能有酮基或羟基; C17:可能有羟基 、酮基 、甲酮基 、α-醇酮基 、甲
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示例：黄体酮的含量测定 色谱条件：固定相 ODS，流动相 甲醇-水 （65:35），检测波长254nm， 内标物 己烯雌酚
系统适用性试验：n>1000，R符合规定。
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A、对照品
B、供试品
测定样品：黄体酮原料、注射液。 定量方法：内标法
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二、紫外分光光度法（30% ）
黄体酮
亚硝基铁
氰化钠
其他甾体
蓝紫色 淡橙色
或不显色
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16
4、有机卤素的呈色反应 呈色
有机氟 有机氯
茜素氟蓝 硝酸亚铈
有机破坏 Fˉ
Clˉ
硝酸—硝酸银
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AgCl↓ 17
5、酚羟基的呈色反应
雌激素 重氮苯磺酸 红色偶
类药物
氮染料
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6、 乙炔基的沉淀反应
含炔基的 甾体激素
中国药典 载的甾体激素原料，其中大多采用 该法鉴别。
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炔雌醇
OH C CH
HO
结构特征：酚羟基、C17 –OH
C17
–乙炔基 整理版课件
25
νCH
3300cm-1
1615cm-1
3610cm-1
ν酚羟基 OH
3505cm-1
ν 醇羟基 OH整理版课件
CC
1590cm-1
1505cm-1
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6
雄性激素： 丙酸睾酮
Cl0上无 角甲基
结构特点：
★雄性激素母核有19个 C原子
蛋白同化激素母核有 18个C原子
★A环:具有△4-3-酮基
★C17:无侧链，多数是 一 个 β— 羟 基 ， 有 些 是由它形成的酯
★具有紫外吸收
蛋白同化激素：
苯丙酸诺龙
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7
三、孕激素
黄体激素或孕酮。典型药物为黄体酮。
(1)色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶。
(2)流动相：
各种不同比例的甲醇-水混合溶剂。
(3)检测器：紫外吸收检测器 (241nm、254 nm、28 nm、218 nm、230 nm、288 nm等，视品种而定)。
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34
(4)供试液和对照液的制备：高浓度者为溶液①， 低浓度者为溶液②。
(5)判定法：溶液①显示的杂质峰数不得超过1 个或数个;各杂质峰面积或其总和不得大于溶 液②主峰面积的一定分数。
苯环的骨
架振动
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六、 TLC法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别
➢ 方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。
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炔诺酮 TLC图
注意点： ★供试品要 作前处理； ★显色后要 立即检视
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七、高效液相色谱法
在一定的色谱条件下，比较甾体激素样品与其 对照品峰的保留时间进行鉴别。
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规格：0.75 mg/片 吸收系数＝357
mg
A501000 E11c%m100
计算每片以标示量为100％的含量X， 求出平均值和标准差S，差值A A 100 X
A+1.80S≤15.0 合格 A+S>15.0 不合格 A+1.80S>15.0整且理版A课件+S≤15.0 复试 49
即按各药品项下规定的杂质峰的数目和面积的 要求进行判定。
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例如，黄体酮中"其他甾体"的检查方法如下:
取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制 成8mg/lm1的溶液①与0.02mg/lml的溶液②。
用含量测定项下的方法和溶液，取5u1注入液 相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度 达记录仪的满标度。
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原理：
PO H HPO M oO
钼蓝 还原H PMoO nHO
钼蓝 方法：
供 对
试 照 钼 液 液 酸 铵 还 原 n m A A 对 样
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地塞米松磷酸钠 检查 游离磷酸
精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水 15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨 基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀， 在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在 740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理 的吸收度比较，不得更大。
再分别取溶液①和②各10 u1进样。
记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。
溶液①显示的杂质峰数不得超过1个，其面积不 得大于溶液②主峰面积的3/4。
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≤图A中峰1面积的四分之三
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二、硒的检查
毒
来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢
原理：
Se , 二 氨 基 ,萘 苯并苯硒
pH ..
环己烷
方法
Anm
氧 瓶 S 燃 e 烧 盐 酸 S 羟 e 胺
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三、甲醇和丙酮 药典规定采用气相色谱法测定时不得出现甲醇 峰。该法测定甲醇时检测限为3.1ng。
甲醇 ≤ 0.3％
丙酮 ≤5.0% 内标法 + 校正因子
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四、游离磷酸
目的：地塞米松磷酸钠在生产和贮存过程 中可能引入磷酸盐，需对游离磷酸盐进行 检查。
基 、乙炔基 等;
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2
分类
甾体激素 肾上腺皮质激素 雄性激素及 蛋白同化激素
性激素
孕激素
雌激素
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3
一、肾上腺皮质激素 (简称皮质激素) 如氢化可的松、曲安西龙、醋酸地塞米松等。
氢化可的松
结构特点：
★具有21个C原子
★ A环:具有△4-3-酮基
★ C17:具有α-醇酮基并多 数有α-羟基
硝酸银
银盐沉淀
AgNO3
RCC H
RCCAg↓
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三、制备衍生物测定其熔点
与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲 利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应 的母体，然后测定其熔点进行鉴别。
本法虽繁琐费时，但专属性强，目前仍 为一些国家药典采用。
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1. 缩氨基脲的生成
盐酸氨基脲
苯丙酸诺龙
★对照品溶液的制备：精密称取醋酸地塞米松对 照品25mg，置1OOml量瓶中，加无水乙醇适 量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5m1， 用无水乙醇稀释至5Oml，摇匀，甚可得。
★供试品溶液的制备：取本品适量 (约相当于醋 酸地塞米松2·5mg)，精密称定，置烧杯内，加 无水乙醇约25m1，置水浴中加热，搅拌，使 醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却;滤过，滤 液置1OOml量瓶中，同法提取3次，滤液并入 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
分子中存在△4-3—酮基、苯环和其他共轭系 统，因而在紫外光区有特征吸收。
△４-3-酮
240nm（±） 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素
苯环 280nm（±）
雌激素 整理版课件
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例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查 （1）配制供试液，取10片分别进行测 （2）测定：240nm （3）计算
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★测定方法：精密量取对照品溶液及供试品溶液各 lOmI，分别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，残 渣 中 加 氯 仿 lOmI ， 振 摇 ， 使 残 渣 溶 解 ， 各 精 密 加 0.1%异烟肼甲醇溶液lOml(取异烟肼0·5g，加盐酸 0·63m1，加甲醇使溶解成5OOml，即得)，摇匀， 置55℃暗处保温45min，取出、放冷至室温，用氯 仿稀释至25ml，摇匀，在415nm分别测定吸收度， 计算，即得。
HH
O
CH 3
醋酸甲地孕酮
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9
四、雌激素（卵泡激素） 收载有：雌二醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇等
炔雌醇
结构特点： ★母核具有18个C原子;
★A环:为苯环，
雌二醇
H CH 3 OH H
HH HO
★C3：具有酚羟基且有些形 成了酯或醚;
★Cl0:无角甲基
★C17:具有β-羟基，有些烃
基形成了酯，还有些具有乙
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（对照液 0.0035%KH2PO4）
HPO KHPO
.. %
L
%
.
.%
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第四节 含量测定
一、高效液相色谱法（48%） 以反相分配色谱用于甾体激素的含量测 定最为广泛。
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶; 流动相：甲醇和水组成的混合液，
紫外检测器：具有△4-3-酮基和苯环， 在240nm或280nm附近有吸收
中国药典收载有:黄体酮、醋酸甲地孕酮 原料及制剂等。
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黄体酮
结构特点：
★ 母 核 具 有 21个 C 原 子;
★A 环 : 具 有 △ 4-3- 酮 基
O CH 3
CH 3 H
CH 3 O CH 3
O
★ C17: 具 有 甲 酮 基 ， 有 些 具 有 α- 羟 基 ， 与醋酸、己酸等形 成酯
炔基。
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第二节 鉴别试验 一、物理常数的测定：熔点、比旋度、吸收系数等 二、化学鉴别法 （一）与强酸的呈色反应
许多甾体激素（母核）能与硫酸、磷酸、高氯酸、 盐酸等呈色，其中以与硫酸的呈色反应应用较广。
甾体激素 类药物
H2SO4 H3PO4 呈色
HClO4 HCl
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与硫酸显色反应
缩氨基脲衍生物
△
m.p.约182℃（分解）
2. 酯的水解
丙酸睾酮
碱性条件 睾酮 m.p.为150℃~ 156℃
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21
四、紫外分光光度法 分子中有α，β—不饱和酮、苯环和其他的
共轭结构，在紫外光区有特征吸收
C C C O
△４-3-酮 240nm
C C C C C C
苯环
280nm
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三、比色法
异 烟 肼异
HCl
烟
腙
（
（缩合）
420 nm
肾上腺皮质激素、
雄性激素和蛋白同
化激素、孕激素
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对照品法
供 对
试 照 液 液挥 CH 去 C l乙醇异 烟 肼
A ℃
暗45′
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2、测定方法
例：醋酸地塞米松软膏的含量测定为例：
显色
醋酸可的松 黄或微 带橙
荧光 加水稀释
褪色并澄 清
炔雌醇
橙红
黄绿 絮状↓玫红
炔雌醚 泼尼松
橙红 橙
黄绿 ↓红色 黄→蓝绿
泼尼松龙 深红
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絮状↓灰 12
（二）官能团的反应 1、C17-α-醇酮基
具还原性
氧化剂
肾上腺 皮质激 素药物
四氮唑盐 OHˉ
呈色
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此外还有斐林试 液、多伦试液
一般都规定在含量测定项下的高效液相色谱图 中，供试品峰的保留时间应与对照品峰的保留 时间一致。
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29
第三节特殊杂质检查 一、其他甾体
1、定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他 甾体” 其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的 药理作用而又互不相同.
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2、来源 原料、中间体、异构体、降解产物
醇或甲醇或氯仿或丙酮)配成一定浓度的溶液。
(3)展开剂系统：各种不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲 醇-水混合溶剂用得较多，
(4)显色剂： 碱性四氮唑蓝试液，
硫酸-乙醇 (2:8或1:1或3:7),
20％硫酸，
10％磷钼酸-乙醇液。
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(5)检出法：
★碱性四氮唑蓝试液
晾干，１０５℃烘１０分钟放冷，喷以碱性四氮 挫蓝试液，立即检
2.酮基的呈色反应: C3–酮基和C20–酮基
甾酮类 激素药 物
羰基试剂
腙（黄色）
＃常用的羰基试剂：
2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
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3、甲酮基的呈色反应
具有甲酮 基或活泼 亚硝基铁氰化钠 亚甲基的 （间二硝基酚、芳香醛） 呈色 甾体激素 类药物
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专属的鉴别 反应
★硫酸-乙醇 晾干后，先喷显色剂，再在１２０℃烘５分钟
★ 20％硫酸 晾干后，先喷显色剂，再在１０５℃烘１０分钟
★ 10％磷钼酸-醋酸 晾干，喷显色剂，在1OO℃加热10一l5min,
(6)判定法：按规定的斑点数目和颜色判断
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2、高效液相色谱法
中国药典 (2005年版)所列的色谱条件如下:
3、特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似
4、方法（具有一定分离能力） TLC法（主成分自身稀释对照法） HPLC法（不加校正因子的主成分自身稀释对照法）
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１、薄层色谱法：中国药典
(1)薄层板 ：硅胶G板，硅胶ＧＦ254或硅胶ＨＦ254。 (2)供试液和对照液的制备 ：分别用溶剂(如氯仿-甲
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曲安息龙 丙酸倍氯米松
溶剂
甲醇
乙醇
浓度
20μg/ml 20μg/ml
结果判断 在238nm处有 在239nm处有最 最大吸收 大吸收，A为
0.57～0.60，在 239nm与263nm 处的吸收度比值为 2.25～2.45
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五、红外分光光度法
甾体激素类药物结构复杂，红外吸收光谱是 鉴别该类药物有效而可靠的方法
★ C10、C13:具有角甲 基
★ C11:具有羟基或酮基
整理版课★件 具有紫外吸收
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肾上腺皮质激素
羟基形成醋酸酯，肌注时可延长作用时间
H HO
9
F O
C1、C2和C4、C5之间双键
O
O O CH3
OH 16 CH3 抗炎作用增强
H H
醋酸地塞米松
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二、雄性激素及蛋白同化激素 雄性激素：睾酮的衍生物，如甲睾酮、丙酸睾 酮、十一酸睾酮等 蛋白同化激素有苯丙酸诺龙
第十五章 甾体激素类 药物的分析
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第一节 基本结构和分类
基本结构：
基本结构：环戊烷骈多氢菲
A环:多数为脂环， 有△4-3-酮，少数为苯环
C3:可能有酮基或烃基; C10、C13:多数均有角甲基
少数C10上无角甲基 Cll:可能有酮基或羟基; C17:可能有羟基 、酮基 、甲酮基 、α-醇酮基 、甲
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示例：黄体酮的含量测定 色谱条件：固定相 ODS，流动相 甲醇-水 （65:35），检测波长254nm， 内标物 己烯雌酚
系统适用性试验：n>1000，R符合规定。
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A、对照品
B、供试品
测定样品：黄体酮原料、注射液。 定量方法：内标法
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二、紫外分光光度法（30% ）
黄体酮
亚硝基铁
氰化钠
其他甾体
蓝紫色 淡橙色
或不显色
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4、有机卤素的呈色反应 呈色
有机氟 有机氯
茜素氟蓝 硝酸亚铈
有机破坏 Fˉ
Clˉ
硝酸—硝酸银
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AgCl↓ 17
5、酚羟基的呈色反应
雌激素 重氮苯磺酸 红色偶
类药物
氮染料
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6、 乙炔基的沉淀反应
含炔基的 甾体激素
中国药典 载的甾体激素原料，其中大多采用 该法鉴别。
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炔雌醇
OH C CH
HO
结构特征：酚羟基、C17 –OH
C17
–乙炔基 整理版课件
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νCH
3300cm-1
1615cm-1
3610cm-1
ν酚羟基 OH
3505cm-1
ν 醇羟基 OH整理版课件
CC
1590cm-1
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雄性激素： 丙酸睾酮
Cl0上无 角甲基
结构特点：
★雄性激素母核有19个 C原子
蛋白同化激素母核有 18个C原子
★A环:具有△4-3-酮基
★C17:无侧链，多数是 一 个 β— 羟 基 ， 有 些 是由它形成的酯
★具有紫外吸收
蛋白同化激素：
苯丙酸诺龙
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三、孕激素
黄体激素或孕酮。典型药物为黄体酮。
(1)色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶。
(2)流动相：
各种不同比例的甲醇-水混合溶剂。
(3)检测器：紫外吸收检测器 (241nm、254 nm、28 nm、218 nm、230 nm、288 nm等，视品种而定)。
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(4)供试液和对照液的制备：高浓度者为溶液①， 低浓度者为溶液②。
(5)判定法：溶液①显示的杂质峰数不得超过1 个或数个;各杂质峰面积或其总和不得大于溶 液②主峰面积的一定分数。
苯环的骨
架振动
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六、 TLC法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别
➢ 方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。
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炔诺酮 TLC图
注意点： ★供试品要 作前处理； ★显色后要 立即检视
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七、高效液相色谱法
在一定的色谱条件下，比较甾体激素样品与其 对照品峰的保留时间进行鉴别。
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规格：0.75 mg/片 吸收系数＝357
mg
A501000 E11c%m100
计算每片以标示量为100％的含量X， 求出平均值和标准差S，差值A A 100 X
A+1.80S≤15.0 合格 A+S>15.0 不合格 A+1.80S>15.0整且理版A课件+S≤15.0 复试 49
即按各药品项下规定的杂质峰的数目和面积的 要求进行判定。
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例如，黄体酮中"其他甾体"的检查方法如下:
取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制 成8mg/lm1的溶液①与0.02mg/lml的溶液②。
用含量测定项下的方法和溶液，取5u1注入液 相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度 达记录仪的满标度。
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原理：
PO H HPO M oO
钼蓝 还原H PMoO nHO
钼蓝 方法：
供 对
试 照 钼 液 液 酸 铵 还 原 n m A A 对 样
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地塞米松磷酸钠 检查 游离磷酸
精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水 15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨 基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀， 在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在 740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理 的吸收度比较，不得更大。
再分别取溶液①和②各10 u1进样。
记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。
溶液①显示的杂质峰数不得超过1个，其面积不 得大于溶液②主峰面积的3/4。
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≤图A中峰1面积的四分之三
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二、硒的检查
毒
来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢
原理：
Se , 二 氨 基 ,萘 苯并苯硒
pH ..
环己烷
方法
Anm
氧 瓶 S 燃 e 烧 盐 酸 S 羟 e 胺
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三、甲醇和丙酮 药典规定采用气相色谱法测定时不得出现甲醇 峰。该法测定甲醇时检测限为3.1ng。
甲醇 ≤ 0.3％
丙酮 ≤5.0% 内标法 + 校正因子
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四、游离磷酸
目的：地塞米松磷酸钠在生产和贮存过程 中可能引入磷酸盐，需对游离磷酸盐进行 检查。
基 、乙炔基 等;
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分类
甾体激素 肾上腺皮质激素 雄性激素及 蛋白同化激素
性激素
孕激素
雌激素
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一、肾上腺皮质激素 (简称皮质激素) 如氢化可的松、曲安西龙、醋酸地塞米松等。
氢化可的松
结构特点：
★具有21个C原子
★ A环:具有△4-3-酮基
★ C17:具有α-醇酮基并多 数有α-羟基
硝酸银
银盐沉淀
AgNO3
RCC H
RCCAg↓
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三、制备衍生物测定其熔点
与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲 利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应 的母体，然后测定其熔点进行鉴别。
本法虽繁琐费时，但专属性强，目前仍 为一些国家药典采用。
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1. 缩氨基脲的生成
盐酸氨基脲
苯丙酸诺龙
★对照品溶液的制备：精密称取醋酸地塞米松对 照品25mg，置1OOml量瓶中，加无水乙醇适 量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5m1， 用无水乙醇稀释至5Oml，摇匀，甚可得。
★供试品溶液的制备：取本品适量 (约相当于醋 酸地塞米松2·5mg)，精密称定，置烧杯内，加 无水乙醇约25m1，置水浴中加热，搅拌，使 醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却;滤过，滤 液置1OOml量瓶中，同法提取3次，滤液并入 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
分子中存在△4-3—酮基、苯环和其他共轭系 统，因而在紫外光区有特征吸收。
△４-3-酮
240nm（±） 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素
苯环 280nm（±）
雌激素 整理版课件
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例：醋酸地塞米松片的含量均匀度检查 （1）配制供试液，取10片分别进行测 （2）测定：240nm （3）计算
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★测定方法：精密量取对照品溶液及供试品溶液各 lOmI，分别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，残 渣 中 加 氯 仿 lOmI ， 振 摇 ， 使 残 渣 溶 解 ， 各 精 密 加 0.1%异烟肼甲醇溶液lOml(取异烟肼0·5g，加盐酸 0·63m1，加甲醇使溶解成5OOml，即得)，摇匀， 置55℃暗处保温45min，取出、放冷至室温，用氯 仿稀释至25ml，摇匀，在415nm分别测定吸收度， 计算，即得。
HH
O
CH 3
醋酸甲地孕酮
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四、雌激素（卵泡激素） 收载有：雌二醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇等
炔雌醇
结构特点： ★母核具有18个C原子;
★A环:为苯环，
雌二醇
H CH 3 OH H
HH HO
★C3：具有酚羟基且有些形 成了酯或醚;
★Cl0:无角甲基
★C17:具有β-羟基，有些烃
基形成了酯，还有些具有乙
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（对照液 0.0035%KH2PO4）
HPO KHPO
.. %
L
%
.
.%
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第四节 含量测定
一、高效液相色谱法（48%） 以反相分配色谱用于甾体激素的含量测 定最为广泛。
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶; 流动相：甲醇和水组成的混合液，
紫外检测器：具有△4-3-酮基和苯环， 在240nm或280nm附近有吸收
中国药典收载有:黄体酮、醋酸甲地孕酮 原料及制剂等。
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黄体酮
结构特点：
★ 母 核 具 有 21个 C 原 子;
★A 环 : 具 有 △ 4-3- 酮 基
O CH 3
CH 3 H
CH 3 O CH 3
O
★ C17: 具 有 甲 酮 基 ， 有 些 具 有 α- 羟 基 ， 与醋酸、己酸等形 成酯
炔基。
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第二节 鉴别试验 一、物理常数的测定：熔点、比旋度、吸收系数等 二、化学鉴别法 （一）与强酸的呈色反应
许多甾体激素（母核）能与硫酸、磷酸、高氯酸、 盐酸等呈色，其中以与硫酸的呈色反应应用较广。
甾体激素 类药物
H2SO4 H3PO4 呈色
HClO4 HCl
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与硫酸显色反应
缩氨基脲衍生物
△
m.p.约182℃（分解）
2. 酯的水解
丙酸睾酮
碱性条件 睾酮 m.p.为150℃~ 156℃
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四、紫外分光光度法 分子中有α，β—不饱和酮、苯环和其他的
共轭结构，在紫外光区有特征吸收
C C C O
△４-3-酮 240nm
C C C C C C
苯环
280nm
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三、比色法
异 烟 肼异
HCl
烟
腙
（
（缩合）
420 nm
肾上腺皮质激素、
雄性激素和蛋白同
化激素、孕激素
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对照品法
供 对
试 照 液 液挥 CH 去 C l乙醇异 烟 肼
A ℃
暗45′
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2、测定方法
例：醋酸地塞米松软膏的含量测定为例：
显色
醋酸可的松 黄或微 带橙
荧光 加水稀释
褪色并澄 清
炔雌醇
橙红
黄绿 絮状↓玫红
炔雌醚 泼尼松
橙红 橙
黄绿 ↓红色 黄→蓝绿
泼尼松龙 深红
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絮状↓灰 12
（二）官能团的反应 1、C17-α-醇酮基
具还原性
氧化剂
肾上腺 皮质激 素药物
四氮唑盐 OHˉ
呈色
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此外还有斐林试 液、多伦试液
一般都规定在含量测定项下的高效液相色谱图 中，供试品峰的保留时间应与对照品峰的保留 时间一致。
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第三节特殊杂质检查 一、其他甾体
1、定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他 甾体” 其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的 药理作用而又互不相同.
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2、来源 原料、中间体、异构体、降解产物
醇或甲醇或氯仿或丙酮)配成一定浓度的溶液。
(3)展开剂系统：各种不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲 醇-水混合溶剂用得较多，
(4)显色剂： 碱性四氮唑蓝试液，
硫酸-乙醇 (2:8或1:1或3:7),
20％硫酸，
10％磷钼酸-乙醇液。
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(5)检出法：
★碱性四氮唑蓝试液
晾干，１０５℃烘１０分钟放冷，喷以碱性四氮 挫蓝试液，立即检