酶联免疫吸附试验操作中的注意事项

4562023
酶联免疫吸附试验操作中的注意事项
邹子云光泽县动物疫病预防控制中心福建光泽354100
摘要结合兽医实验室的日常操作,对酶联免疫吸附(ELI SA)试验中存在的细节问题和注意事项进行阐述,包括试验前样品、试剂盒准备及试验中的各个操作步骤等。

为兽医实验室人员提供参考和帮助,避免人为因素对试验结果的准确性造成影响。

关键词ELI SA试验步骤细节因素注意事项
文献标识码:B文章编号:1003-4331(2023)06-0055-02
ELI SA是兽医实验室中最普遍使用的试验种类之一,具有良好的准确性和灵敏性,操作步骤简单,不易产生试验环境污染。

因此,被广泛用于猪瘟、口蹄疫、小反刍兽疫和猪繁殖与呼吸综合征抗体实验室检测项目中。

根据日常操作和试验步骤中细节问题的处理,总结分析ELI SA试验中常见的细节问题,以减少试验过程中由主观因素造成的误差,从而提高试验的准确性。

1试验前准备注意事项
1.1样品样品在采集、制备、保存过程中,要注意以下几点。

首先,采集的每份样品应保证之后试验、复检、留样的使用数量;其次,采集完的样品竖直向上摆放,避免剧烈震荡,如果出现严重溶血现象,后期难以清洗干净,容易出现假阳性;最后,样品保存时不能反复冻融,2~8℃保存3d,-20℃可长期保存。

此外,使用前须将样品轻柔地上下颠倒混匀,保证离心管中各个位置抗体浓度一致,不可剧烈晃动混匀。

1.2试剂盒试剂盒在使用前需平衡至室温(20~ 25℃),若放置于实验室中自然回温,耗时较长且各组件回温程度不均匀。

建议将试剂盒各组件放在恒温箱中回温,包括配制洗涤液使用的纯净水。

恒温箱温度设定在25℃,内部放置温度计,确保箱内温度能准确达到25℃,每一步使用时将所要用到的试剂组件取出。

不同批次的试剂不可混合使用。

试剂盒严格按照要求保存,放在冰箱中应避免靠在冰箱内壁上,以免造成结冰。

未使用完的反应板要保存在放有干燥剂的密封袋内。

2试验操作过程注意事项
2.1加样在加入第一个样品与最后一个样品之间存在时间差,因此,每个样品与孔板接触和反应的时间就存在细微差异。

为保证每个孔的反应时间大致一样,在加样过程中要把握移液枪的熟练使用,每次加样都要匀速准确。

此外,在加入不同试剂时,都要选择相同的方向和顺序,如果一开始加入样品是从左往右,那么之后每一步都应该从左往右,中途不能更换,这样可以有效减小和抵消反应时间差带来的不利影响。

2.2孵育目前使用的试剂盒通常有25℃室温孵育和37℃恒温箱孵育两种方式。

室温孵育时,温度控制在20~25℃,反应板应避免放置在阳光直射、冷热风出口、潮湿桌面等温度不均匀的地方。

恒温箱孵育时,反应板由25℃升至37℃需要时间,因此,可以推迟几分钟开始计时。

孵育开始前要用封膜盖紧反应板,避免液体蒸发。

撕开封膜时要紧紧按住反应板中部,否则反应板容易被黏性封膜带起后砸落在桌面上,造成液体飞溅。

多个反应板不能叠加摆放,以免受热不均。

2.3洗版洗涤液要按照试剂盒说明书的要求按比例稀释。

稀释之前应该注意浓缩液中是否有结晶沉淀,如果有,就需要让浓缩液继续回温直至没有结晶沉淀才能进行下一步稀释。

通常使用多道移液器添加洗涤液,在吸取洗涤液时,应稍微留意每个吸头的液面是否一样,而在打入洗涤液时,要避免太过用力,推力过大会导致洗涤液飞溅。

吸水纸应当选择干净、无尘、吸水效果好的材料。

目前,试验使用的ELI SA反应板通常都是可拆卸的,而在弃去废液时,容易造成反应板脱落、掉入废液池中,导致试验失败。

因此,建议在试验开始前,可用白色胶带固定反应板四周,一是方便标记横竖序号,二是可以固定反应板,避免松动、脱落。

2.4显色显色反应是试验的最后一个反应步骤,酶催化反应产生有色物质,阴性不变,而阳性会随着反应时间延长而颜色加深。

因此,影响因素除了之前的温度和时间外,还有光照。

在加入反应底物后,可将反应板装在深色纸袋中,按说明书要求的温度放入恒温箱或置于室温环境。

加入终止液,温和震荡,让液体充分混合、终止反应,注意不要洒出,并尽快读数。

在使用前要查看反应底物和终止液是否无色透明,如果出现变色则不能使用。

2.5读数读数开始前,用干净的纸巾轻轻擦拭反应板底部,去除底部吸附的杂质和液体,避免影响反
55
4562023
应板的透光度。

按照说明书要求调整好波长,酶标仪在使用前半小时打开预热,以提高读数的准确性。

2.6其他本地区除夏季外,其他季节早晚温差较大,尤其是秋季集中监测,通常在11月底至12月初进行试验。

早晨时试验环境温度较低,回温时间应当加长。

值得注意的是,当环境温度达到试验要求时,试验工作台台面依然温度过低,用红外测温仪测量发现二者间温差达6~7℃。

因此,可以在台面与反应板之间放置一块泡沫板,从而减少温度差异产生的不利影响。

3总结
ELI SA试验简单易懂,但是每个步骤都有可能影响试验结果的准确性,从开始的样品、试剂准备到最后的显色、读数都有可能产生误差。

因此,精密的仪器、良好的检测试剂以及准确无误的操作都是试验是否准确的组成部分。

作为试验人员,所能把握的便是操作严格按照说明书要求进行,尤其是对细节的把控,是试验结果真实、准确的保障。

龙岩市永定区肉牛产业发展现状、存在问题及对策赖小兰福建省永定动物防疫监督检查站福建永定364100
摘要近年来,龙岩市永定区肉牛养殖及相关产业得到快速发展,已成为当地农民增收致富的重要产业。

本文就永定区肉牛产业现状、发展有利条件、存在的主要困难和问题进行调查分析,并对今后发展方向提出相应对策。

关键词肉牛养殖现状存在问题对策
文献标识码:B文章编号:1003-4331(2023)06-0056-03
肉牛是草食动物,主要饲喂牧草适当补充精料,
属节粮型和政府扶持的养殖品种。

牛肉具有高蛋白、
低脂肪、低胆固醇等特点,深受崇尚健康生态食品的
人们喜爱。

龙岩市永定区地处福建西南部,位于北纬
24°23′~25°05′、东经116°25′~117°05′,全区林地面
积17.52万hm2,草地1433.51hm2,牧草资源丰富,气候环境条件适宜,且永定区及周边地区牛肉丸、泡
牛皮等食品加工、牛系列餐饮市场需求旺盛,牛肉供
不应求,价格不断上升。

为此,近年来永定区利用自
身优势,积极转变畜牧业发展方式,大力发展肉牛养
殖,扩大肉牛养殖规模,推动肉牛屠宰和加工业链条
壮大延伸,使肉牛产业规模有了长足发展,对提高养
殖效益、增加农民收入、丰富城乡“菜篮子”发挥了重
要作用,为乡村振兴建设助力添彩。

随着肉牛产业的
不断扩张,生产增长放缓、养殖技术落后、养殖模式
单一、环保压力增大、肉牛种源等问题日益突出,严
重影响了本地肉牛产业的进一步升级。

本文对永定
区近年来肉牛养殖和消费的整体情况进行了调研,
就永定区肉牛企业养殖、乡镇养殖规模及屠宰加工
现状、存在问题进行分析,并就肉牛产业发展提出对
策,供同行和养殖户参考。

1永定区肉牛产业发展现状
1.1全区畜牧业基本情况据2022年统计部门统
计,永定区畜牧业产值32.28亿元,肉蛋乳总产量
9.52万t(肉类总产量89526t、乳类产量147t、禽蛋产量5546t)。

其中生猪存栏46.8万头,出栏82.1万头;家禽存栏269.8万羽,出栏1242万羽;兔存栏16万只,出栏38.8万只;牛存栏8127头,出栏6500头;羊存栏10547只,出栏15101只。

牛肉产量1113t,羊肉产量230t,兔肉产量590t。

从上述数据分析,永定区主要以饲养生猪为主,肉牛数量较少,全区每年消费肉牛16000余头(节假日宰杀量较大),需从外地调运牛近万头,牛肉自给率约40%,60%靠外调。

1.2各乡镇肉牛饲养、屠宰及消费情况据永定区统计局统计,2022年永定区肉牛存栏8127头,出栏6500头,各乡镇肉牛饲养、屠宰及消费情况见表1。

1.3肉牛规模养殖情况具一定规模的养殖场有福建益旺华农业有限公司、永定区天天牛场、培丰镇东中村村赖炳文养殖户、洪源村简锋禄养殖户、湖雷老刘农业养牛场等5家,牛存栏分别为400头、200头、100头、100头、150头,其余均为散养户。

永定区肉牛养殖场规模小、生产水平低,主要靠外调来满足本地市场的需求,因此,市场前景广阔。

2永定区肉牛屠宰和加工现状
2.1肉牛屠宰情况全区日均屠宰肉牛40头左右,年宰牛1.6万头左右,其中用于加工牛肉丸3200多头,鲜销和餐饮12800头,年销售额约2.4亿元。

56。