Roi基因在三种植物中转化与表达的比较研究

片断
。
4 (’
,
“,
,
是 一 个存 在 于 会 引起 愈伤组
根瘤农杆 菌 中的天 然植 物 激 素 基 因
织 的 发生 以 及 长 芽
,
。
它 在一 些植物 品 种 中的转 化与 表 达
“, 〔
,
。
,
但 只 有极 个别 可 以 再生 为完 整 植 株 很少 报 导
,
利 用 这 一天 然激 素 基 因 在
.
o
t a n g
u
博
.
士 馈赠 )
R
o
.
此 载体质 粒 的 致瘤 基 因 已大 部分被 切 除 仅 留存 下 T
o s
,
一
D N A右边 的 R i o
,
基因
i基 因与 N
;
基 因 ( No
p a l in
e
Sy
n
th
e
t
a s e
Ge
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) 处 于 相 邻位 置
常 在 一 起实现 共 转
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)
T
E N
R
i 植 物 中 转 化 基 因 在 三 种o
与 表 达 的 比 较 研 究
吴
*
敏
摘
李宝健
要
通过改 良的 叶圆盘转化法
,
o 基因 ( 细 胞分裂素合成 酶基 因 ) 转 化入 一 将 T i 质粒上 的 R i
.
种单 子 叶植物花叶芋 和 二种双 子 叶 植物 花椰菜 和 甘蓝 的基 因 组中 在 转化 后 组 织 当 中 以 及再生 植株 的 苗中 基 因 的 产物胭 脂碱 的 存在 稳定 的 整 合 和 表 达
,
究外 源 植物 激 素 基 因 转 化并 整 合 入 植物 基 因 组 后 对植 物细 胞生 长发 育 的影响作 用 ; 同 时 的可 能性
.
分 化 和 再生 途径
,
进 一 步 探 讨 将 T i 质 粒 扩大应 用 于 天 南 星 目 等 单 子 叶植物 的 转 化研 究
本文 1 9 8 9 年
化
此外
,
此 质粒 还 嵌 进了来
。
自大 肠杆菌 p
l
,
B R 3 2 的安 比 西 林 抗性基 因 A
作 为这一
质 粒 的 遗 传标志
,
菌 种在 含利 福平 ( R i f ) 3 0 召 g / m
基
。
安比西 林 ( A m
,
p
)
5 0召g
/ml 的
.
Zo m l L B
液 体培 养
于2 8 ℃ 条件下
a c e a
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Pi t a t a
) 研
和 花椰 菜 ( B
f
c a
l
e , a c e a
乙
。
,
,
, ,￡
s
) 以 及 一 种单 子 叶植 物
Co a l ’ l : d
m
bi c l o o
;
) 中
,
着 重 研 究在 转 化 了 的不 同植 物 中 R i o 基 因 的 表达效 应
、
—
天南 星 科 的 花
,
以 Zo o r p m
速度进 行旋转 式振 荡
培养 过 夜
1 3
2 0
.
培养基
。
3
z
植 物培 养基
,
M S培 养 基
,
〔.
,
。 ( M
r a s
h
a
g
e
和 Sko
r
o
g
,
2 962
e 一
)
C
,
固 体 培 养 基加
u
.
8 呱琼 脂
3
。
o 不 加任 何植物 激素 也称 M S O 培养 基 ( H
m
。
其它植物 中 的 转 化与 表 达效 应 的 研 究
运 用 天 然 与 改建 的 iT 质粒 系 统
` 〔 7
已 将不 少外源 基 因 引 入 了植物 细 胞 当中
。
然而
,
这
一载体 系 统 的应 用 却 受 到农 杆菌 宿 主 范 围 的 限 制
到 目 前 为止
,
仅仅 有 几 种 单 子 叶植物
能够实现 有 效 的 转 化 的过 程
中山 大学学报 ( 自然科 学 第
4
1 论 丛)〔
〕
8
第 卷 期( 1 年
8
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5
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CA E S E NI T R I TU A T H M E US S Y AN I S〔 E 〕 1
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8 4T 1 T 沁 (
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Me d iu
m
)
2
细 菌培 养基
L B培 养 基
` 。〕 。 〔
转化方 法
采 用 组 织 培 养 的 花叶芋无 菌 苗 和 以 甘蓝 花椰 菜 的 灭 菌 种 子 萌发 长 成 的
,
、
7
一1 0 天苗
龄 的幼苗 的 子 叶 以 及 下 胚 轴 断
,
,
在无菌 条件 下操作 将组 织片断 取出 (
星目
,
~
〕;
而 在 其中
,
仅 仅 石 刁 柏 的 转 化 细 胞 成功地 实 现 了植 株再生
,
已 ’ 〔
.
据l C
e e n
等报道
(`
3
,
在 单 子 叶植物 中
o
对 农杆 菌 敏感 的植 物大 都 属于 百 合 目 与天 南
“〕 。 o o
` 而 过 去通 过 农杆菌 转 化成功 的单 子 叶植 物大 都 属 于 百 合 目的 植 物 〔 ~
,
,
I 将 之切 成 c
,
6
月
6
日 收到
国家教委植物基 因工 程 重 点研究 资助项 目
中 山 大 学 学报
1 〕 白然科学 ) 论 丛 〔
第
卷(
1
1
1 1
。
材料 与 方 法
1
1 1
.
植 物材 料
花叶 芋
2
。
.
a
a
d fΒιβλιοθήκη 。m c a石o
,
)
l 2i 实验 室 无 菌 苗
v a :
.
.
.
-
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o
o l( a
:
C
,
,
花椰 菜 ( B
, 。
,
s 甚 至 再生植株 的 无性 繁殖 后 代中均可 测 得 N o
这表 明
,
T i 质 粒 上 的 外 源 基 因 已 经在 以 上 三种转基 因 植物中得到
.
新 的 性状 可 以 随 着 细 胞 分裂 而 传代
,
关键 词
Ri o
基因
T i质 粒
,
叶 圆 盘转化法 l
细 胞 分 裂 素 合 成 酶 基 因 位 于 农 杆菌 T i 质粒 的 H in d
本 文 目 的 是 试 图 将 T i 质粒 上 的 R 成酶 基 因 叶芋 (
,
i基 因 ( R
t
In h i bi t o (B:
a s s
r
G
e n e
,
也 叫细胞 分裂 素合
o a ;
。
或称 基 因 )
: a s s
4
o
,
转 化 入 两 种 双 子 叶植物 甘蓝
o a ,
.
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1。 ;
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o
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)种子
品 种为
雪 山椰 菜 花
,
日 本
出产
1
.
1
。
.
3
甘 蓝 (B 了a
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ta
)品 种
品种 为
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雅 致甘 蓝
”
日 本 出
产
.
1 2
实 验 用 菌 种 及 载 休质粒
用 含 p G V 3 8 5 1 载体 的农杆菌 ( A 扭 m e f a 百 e 。 ) 为 转化 用 的 菌 株 ( 由 比 利 时 M