广州市慢性乙型肝炎患者表面抗原水平分析

广州市慢性乙型肝炎患者表面抗原水平分析
曾磊;丁爱娇;江凌晓;曾静;林裕龙;袁小澎
【摘要】目的：对广州市慢性乙型肝炎患者不同感染阶段表面抗原（HBsAg）水
平进行定量检测，并结合乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）等检测结果探讨HBsAg定量在慢性乙型肝炎患者诊断和治疗监测的临床意义。

方法按照美国肝病
学会慢性乙型肝炎分期规则标准将其分为免疫耐受期（IT）、e抗原阳性的慢性肝炎期（EPH）、非活动性携带期（IC）、e抗原阴性的慢性乙型肝炎期（ENH）。

将珠江医院就诊的慢性乙型肝炎患者96例按要求分期，对其血清样本进行HBsAg、HBV-DNA和ALT检测，并对结果进行统计分析。

结果广州市慢性乙型肝炎感染过程不同阶段HBsAg均值分别为：IT（4.12 log10 U/L）、EPH（4.02 log10 U/L）、IC （2.85 log10 U/L）、ENH（3.29 log10 U/L），差异显著。

IT、IC、EPH、ENH期患者HBsAg水平与HBV-DNA拷贝数的相关系数分别是
0.6828、0.5759、0.3280、0.1083，相关性逐步减弱。

HBeAg（+）患者HBsAg定量水平明显高于HBeAg（-）患者。

各期HBsAg的量与ALT水平均无
相关性。

结论不同感染阶段的慢性乙型肝炎患者HBsAg定量水平存在差异，HBsAg水平与HBV-DNA的不完全一致性表明HBsAg定量可以作为新的检测指
标在诊断和治疗监测中发挥作用，更多的检测手段将有助于临床慢性乙型肝炎患者的个体化分类和治疗。

%Objective To assess the value of quantitative analysis of hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels in the diagnosis and therapeutic evaluations in patients with chronic hepatitis B (CHB). Methods According to the staging criteria defined by the American Association of Liver Diseases, 96 patients with CHB admitted in Zhujiang Hospital were classified in immune-tolerant (IT), HBeAg-positive hepatitis (EPH), inactive
carrier (IC) and HBeAg-negative hepatitis (ENH) phases. Serum HBsAg, HBV-DNA and ALT levels were quantified and their correlations were evaluated in each phase of infection. Results The mean HBsAg titers (measured in log10U/L) differed significantly between the phases of CHB (4.12 in IT, 4.02 in EPH, 2.85 in EPH, and 3.29 in ENH). The correlation coefficient of HBsAg with HBV-DNA was 0.6828 in IT, 0.5759 in EPH, 0.3280 in IC, and 0.1083 in ENH. Serum HBsAg titers were significantly higher in HBeAg-positive patients than in HBeAg-negative patients. No correlation was found between HBsAg level and ALT in each phase of CHB. Conclusion The median baseline serum HBsAg levels vary between different phases of CHB in Guangzhou, suggesting the value of HBsAg in accurate classification of hepatitis B patients and evaluation of the therapeutic effect and outcomes of the patients.
【期刊名称】《南方医科大学学报》
【年(卷),期】2014(000)007
【总页数】4页(P974-977)
【关键词】慢性乙型肝炎;表面抗原定量;乙型肝炎病毒DNA
【作者】曾磊;丁爱娇;江凌晓;曾静;林裕龙;袁小澎
【作者单位】南方医科大学珠江医院检验医学部，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院检验医学部，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院检验医学部，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院检验医学部，广东广州 510282;南方医
科大学珠江医院检验医学部，广东广州 510282;南方医科大学珠江医院检验医学部，广东广州 510282
【正文语种】中文
Abstract:ObjectiveTo assess the value of quantitative analysis of hepatitis B surface antigen(HBsAg)levels in the diagnosis and therapeu tic evaluations in patients with chronic hepatitis B(CHB).MethodsAccording to the staging criteria defined by the American Association of Liver Diseases,96 patients with CHB admitted in Zhu jiang Hospital were classified in immunetolerant(IT),HBeAg-positive hepatitis(EPH),inactive carrier(IC)and HBeAg-negative hepatitis(ENH)phases.Serum HBsAg,HBV-DNA and ALT levels were quantified and their correlations were evaluated in each phase of infection.ResultsThe mean HBsAg titers(measu red in log10U/L)differed significantly between the phases of CHB(4.12 in IT,4.02 in EPH,2.85 in EPH,and 3.29 in ENH).The correlation coefficient of HBsAg with HBV-DNA was 0.6828 in IT,0.5759 in EPH,0.3280 in IC,and 0.1083 in ENH.Serum HBsAg titers were significantly higher in HBeAg-positive patients than in HBeAg-negative patients.No correlation was found between HBsAg level and ALT in each phase of CHB.ConclusionThe median baseline serum HBsAg levels vary between different phases of CHB in
Guangzhou,suggesting the value of HBsAg in accurate classification of hepatitis B patients and evaluation of the therapeutic effect and outcomes of the patients.
Key words:chronic hepatitis B;hepatitis B virus;hepatitis B surface
antigen;HBV DNA
世界范围内约有3.5亿～4.0亿慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者，其中约40%的HBV的携带者发展成肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌［1-2］。

实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV病毒载量是临床HBV治疗监测和评估疗效的主要指标［3］。

但是随着人们对乙型肝炎治疗研究的深入，个体化治疗越来越为重要，HBV-DNA 结果在部分乙型肝炎患者的治疗监测中显示出其应用局限性，临床需要新的指标为乙型肝炎的治疗提供帮助。

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测是乙型肝炎最为古
老的检测指标，近年随着HBsAg新的定量方法在临床的应用，HBsAg检测的重
新受到人们的重视，HBsAg水平被认为是预测临床预后水平新的候选指标［4-6］。

不同地区的人种和生活习惯影响机体免疫状态，广州市作为乙型肝炎的高发区，乙型肝炎自然感染进程中不同阶段患者HBsAg的的基线水平如何？与其他地区的相关性如何都尚未清楚。

基于此，本研究对广州市不同感染阶段的慢性乙型肝炎患者HBsAg水平进行检测并对其与HBV-DNA、ALT的相关性进行分析，以期了解广州市慢性乙型肝炎患者HBsAg的基线水平，探讨HBsAg作为新的检测指
标的可能性，为下一步通过乙型肝炎HBsAg水平监测分析乙型肝炎患者进程，指导和检测慢性乙型肝炎治疗和诊断提供帮助。

1.1 材料
1.1.1 标本来源、分类收集2011年2月～2012年5月间在珠江医院就诊检测发
现HBsAg阳性并除外其他慢性肝病（丙肝、丁肝、酒精肝、自身免疫性肝病、胆汁性肝硬化）且未经正规乙型肝炎治疗的患者96例，其中男性67例，女性29例。

留取静脉血，离心分离出血清，-20℃保存待检。

根据最新出版的美国肝病学会定义CHB分期规则，将收集的患者分为4个感染期，免疫耐受期（IT）、e抗原阳性的慢性肝炎期（EPH）、非活动性携带期（IC）、
e抗原阴性的慢性肝炎期（ENH）［7］（表1）。

本次研究严格按照上述分期规
则对收集到的样本分类。

但是由于存在个体差异，并不是每个患者都可以准确分期［8］。

1.1.2 仪器及试剂HBsAg定量检测仪器为美国雅培公司的i2000SR全自动免疫发光检测系统，诊断试剂由雅培公司提供，稀释血清为日常检测标本中感染八项全阴标本；HBV-DNA测定仪为罗氏公司light cycler 480荧光定量PCR仪，试剂盒购自深圳凯杰生物股份有限公司；ALT检测仪器为BECKMAN DXC800，试剂盒购自广州标佳有限公司。

1.2 方法
1.2.1 HBsAg定量检测检测前用仪器配套标准品，质控品对系统进行校准质控。

标本用日常检测血清中感染八项结果为全阴的标本进行100倍稀释，稀释后上机检测。

若检测结果仍超过线性范围（0.05～250 IU/m l）则进行500倍稀释后再检测。

HBsAg定量水平的报告单位为IU/m l。

1.2.2 HBV-DNA病毒载量的检测荧光定量PCR检测使用罗氏公司light cycler 480荧光定量PCR仪。

HBV核酸提取和检测分析严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.3 ALT检测采用BECKMAN DXC 800全自动生化分析仪检测。

实验室参考范围：ALT<40 IU/L。

1.3 统计学分析
采用GraphPad Prism5软件进行统计学分析，将检测各期的HBV-DNA拷贝数及HBsAg含量进行对数转换。

组间比较用Kruskall-Wallis方差分析。

Pearson 相关系数（r）用来描述两个变量之间的相关性。

P<0.05认为有统计学差异。

2.1 研究人群
共纳入96例患者，年龄为38.24±12.12岁，男性病例数占70%。

根据乙型肝炎的分期规则进行分组，IT期17例，EPH期20例，IC期31例，ENH期28例。

男女间HBsAg水平没有明显差异（P>0.05）。

HBsAg为3.44± 0.82
log10IU/m l，血清HBV-DNA为4.56±1.71 log10IU/m l，血清ALT为
45.54±48.26 IU/L。

2.2 不同感染阶段CHB患者的基本特征
HBeAg（+）患者年龄明显小于HBeAg（-）患者。

每组男性患者明显多于女性
患者，与慢性乙型肝炎整体感染实际情况一致（表1）。

2.3 不同感染阶段患者的血清HBsAg水平
不同感染阶段患者血清HBsAg水平均有显著差异（P<0.0001），各期HBsAg定量的均值见表1。

IT期与EPH期HBsAg定量水平中值明显高于IC期及ENH期。

HBeAg（+）患者HBsAg定量水平明显高于HBeAg（-）患者（图1）。

2.4 各阶段CHB患者HBsAg定量水平与ALT的相关性分析
各阶段CHB患者HBsAg定量水平与相应的ALT并无明显相关性，r值分别为：0.0008、0.0015、0.0733、0.08798（图2）。

2.5 各阶段CHB患者HBsAg定量水平与HBV-DNA的相关性分析
各阶段CHB患者中HBsAg定量与HBV-DNA的拷贝数r值分别为：IT
（0.6828），EPH（0.5759），IC（0.3280），ENH（0.1083）。

相关性逐步减弱，显示出HBsAg作为独立监测指标存在的可能性（图3）。

血清HBV-DNA水平是目前临床上用于HBV治疗监测的主要标志。

但当患者治疗过程中出现DNA拷贝数低于检测下限时就无法对治疗过程进行有效的监测。

部分IC期患者中DNA水平虽然都低于检测下限，但是患者在疾病的转归中也存在着不同，以单纯DNA指标指导治疗存在不足。

新的研究认为肝脏细胞内cccDNA的
水平变化更能反应治疗效果，但是cccDNA检测相对困难，血清DNA不能反映
肝脏细胞内cccDNA的水平，这些都提示研究者需要寻找到更好或与之相关的检
测指标。

我们的研究显示HBsAg定量水平较高标本的HBV-DNA拷贝数也较高。

但是具体
到不同感染阶段，HBsAg与HBV-DNA相关性则各不相同，在IT期，HBsAg合成与DNA的合成相对一致。

但是随着机体免疫清除系统启动之后，随着疾病的整个进展过程，这种相关性就变得越来越弱。

尤其在ENH期，血清中HBsAg水平
与HBV-DNA更是明显不符。

HBeAg（-）患者HBsAg水平远低于HBeAg（+）患者，与Werle-Lapostolle B等人报道HBeAg（-）患者肝细胞内存在较低的cccDNA水平相似［9-11］。

有研究证实，跟HBV-DNA的合成相比，cccDNA
指导的HBsAg抗原的合成是一个相对独立的过程，血清中HBsAg水平和肝内cccDNA水平具有更好的相关性［9-17］，这显示出采用HBsAg水平检测替代肝脏cccDNA水平检测的可能性。

另外，在干扰素治疗HBeAg（-）患者过程中，
第12周和24周HBsAg定量水平的下降已被证明是治疗24周后病毒载量下降的有效预测指标［18-20］。

以上证实HBsAg定量结果能够作为独立或者联合
HBV-DNA为患者治疗监测提供更为准确的监测方法。

广州市人群IT、EPH期乙型肝炎患者血清HBsAg定量水平明显高于IC、ENH期，各期间的差异也均有统计学意义，通过HBsAg定量水平可以初步判断分析患者所处的感染时期，此结论与Nguyen关于亚洲人群（HBV基因型以B、C为主）的
研究结果相似［13］。

HBsAg定量检测标准化程度高、容易操作且相对便宜，更容易得到广泛应用。

本研究只是针对乙型肝炎感染进程中广州市人群患者进行了横断面研究，通过了解广州市乙型肝炎患者不同感染时期HBsAg水平，从而推测HBV感染后HBsAg的自然变化过程。

本研究结果有助于进一步了解广州市HBV
生活史及宿主免疫反应对HBV的影响，有助于深入了解广州市乙型肝炎患者的发病机制及慢性感染过程，为慢性乙型肝炎治疗检测及治疗监测增添新的指标；为研究大样本的纵向检测治疗过程中HBsAg的变化奠定基础。

【相关文献】
［1］Liaw YF.Impact of therapy on the long-term outcome of chronic hepatitis B［J］.Clin Liver Dis,2013,17（3）:413-23.
［2］Liaw YF,Kao JH,Piratvisuth T,et n-Pacific consensus statement on the management of chronic hepatitis B:a 2012 update［J］.Hepatol Int,2012,6（3）:531-61. ［3］何敏,杨朝霞,刘微,等.HBV DNA定量检测方法的评价［J］.国外医学:临床生物化学与检验学
分册,2005,26（2）:123-4.
［4］Kim YJ,Cho HC,Choi MS,et al.The change of the quantitativeHBsAg level during the natural course of chronic hepatitis B［J］. Liver Int,2011,31（6）:817-23.
［5］Brunetto MR.A new role for an old marker,HBsAg［J］.J Hepatol, 2010,52（4）:475-7. ［6］Ganji A,Esmaeilzadeh A,Ghafarzadegan K,et al.Correlation between HBsAg quantitative assay results and HBV DNA levels in chronic HBV［J］.Hepat Mon,2011,11（5）:342-5.
［7］Lok AS,M cmahon BJ.Chronic hepatitis B:update 2009［J］. Hepatology,2009,50（3）:661-2.
［8］Hadziyannis SJ,Vassilopoulos D.Hepatitis B e antigen-negative chronic hepatitis B ［J］.Hepatology,2001,34（4,Part 1）:617-24.
［9］Werle-Lapostolle B,Bow den S,Locarnini S,et al.Persistence of cccDNA during the natural history of chronic hepatitis B and decline during adefovir dipivoxil therapy
［J］.Gastroenterology, 2004,126（7）:1750-8.
［10］Wursthorn K,Lutgehetmann M,Dandri M,et al.Peginterferon alpha-2b plus adefovir induce strong cccDNA decline and HBsAg reduction in patients with chronic hepatitis B ［J］.Hepatology,2006, 44（3）:675-84.
［11］Wiegand J,Wedemeyer H,Finger A,et al.A decline in hepatitis B virus surface antigen （HBsAg）predicts clearance,but does not correlate with quantitative HBeAg or HBV DNA levels［J］.Antivir Ther,2008,13（4）:547–554.
［12］Jaroszew icz J,Calle Serrano B,Wursthorn K,et al.Hepatitis B surface antigen（HBsAg）levels in the natural history of hepatitis B virus（HBV）-infection:a European perspective ［J］.J Hepatol,2010, 52（4）:514-22.
［13］Nguyen T,Thompson AJ,Bowden S,et al.Hepatitis B surface antigen levels during
the natural history of chronic hepatitis B:a perspective on Asia［J］.J Hepatol,2010,52（4）:508-13.
［14］Chen CH,Lee CM,Wang JH,et al.Correlation of quantitative assay of hepatitis B surface antigen and HBV DNA levels in asymptomatic hepatitis B virus carriers［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol,2004,16（11）:1213-8.
［15］Tangkijvanich P,Komolm it P,Mahachai V,et parison between quantitative hepatitis B surface antigen,hepatitis B eantigen and hepatitis B virus DNA levels for predicting virological response to pegylated interferon-alpha-2b therapy in hepatitis B
eantigen-positive chronic hepatitis B［J］.Hepatol Res,2010,40（4）: 269-77.
［16］Liaw YF.Clinical utility of hepatitis B surface antigen quantitation in patients with chronic hepatitis B:a review［J］.Hepatology,2011, 53（6）:2121-9.
［17］Guner R,Karahocagil M,Buyukberber M,et al.Correlation between intrahepatic hepatitis B virus cccDNA levels and other activity markers in patients with HBeAg-negative chronic hepatitis B infection［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol,2011,23
（12）:1185-91.
［18］Brunetto MR,Bonino F,Marcellin P,et al.Kinetics of HBsAg decline in patients with HBeAg-negative chronic hepatitis B treated with peginterferon alfa-2a according to genotype and its association with sustained HBsAg clearance 4 years post-treatment［J］. Hepatology,2008,48（Suppl 4）:740A,abstract 965.
［19］Rijckborst V,Borg M J,Akarca US,et al.Early reduction of serum HBsAg levels in HBeAg-negative chronic hepatitis B patients achieving sustained virological response after Peginterferon alfa-2a +/-ribavirin treatment［J］.Hepatology 2008,48（Suppl 4）:749A, abstract 986.
［20］Rijckborst V,Hansen BE,Cakaloglu Y,et al.Early on-treatment prediction of response to peginterferon alfa-2a for HBeAg-negative chronic hepatitis B using HBsAg and HBV DNA levels［J］. Hepatology,2010,52（2）:454-61.。