LDH检测
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书
乳酸脱氢酶（LDH ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0680规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体30 mL×1瓶4℃保存试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体25 mL×1瓶4℃保存试剂四液体60 mL×1瓶4℃保存标准品液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用时加入1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；2、标准品：2 μmol/mL 丙酮酸钠溶液。
产品说明：LDH （EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD +/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD +氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
基线ldh水平
基线ldh水平基线LDH水平是指人体内的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）的基准值或正常范围。
LDH是一种酶，存在于人体的多个组织和器官中，包括肝脏、心脏、肌肉和红细胞等。
正常情况下，基线LDH水平可以反映各种组织和器官的正常代谢状态。
LDH是一种催化乳酸转化的酶，参与能量代谢过程中的乳酸产生和消耗。
它存在于细胞内和细胞外，当细胞损伤或破坏时，LDH会释放到血液中。
因此，基线LDH水平的测量可以作为一种常规检查项目，用于评估细胞损伤或疾病的程度。
正常情况下，基线LDH水平的范围在血液中大约为100-190单位/升。
不同实验室可能会有略微不同的测量方法和参考范围。
超出正常范围的LDH水平可能表明存在某种疾病或疾病的恶化。
因此，医生通常会将LDH水平与其他临床症状和实验室检查结果结合起来，以确定可能的诊断。
LDH水平的升高可能与多种疾病和情况有关。
其中一些常见的疾病包括心肌梗塞、肝炎、肝硬化、肺炎、肿瘤、贫血等。
此外，某些药物和药物治疗也可能导致LDH水平的升高。
LDH水平的降低相对较少见，通常与遗传性疾病或特定类型的贫血有关。
然而，LDH水平的降低并不常见，并且通常不是一个独立的诊断指标，需要结合其他临床表现和实验室检查结果来进行综合分析。
需要注意的是，基线LDH水平只是一种参考指标，不能作为唯一的诊断依据。
临床医生通常会根据患者的具体情况，结合其他临床症状、体征和实验室检查结果，综合分析来确定疾病的诊断和治疗方案。
基线LDH水平是评估细胞损伤或疾病的一个重要指标。
通过测量LDH水平，可以帮助医生诊断和监测某些疾病的发展和治疗效果。
然而，需要注意的是，LDH水平的升高或降低并不是一个特异性的指标，需要结合其他临床信息进行综合分析和判断。
细胞乳酸脱氢酶检测意义
细胞乳酸脱氢酶检测意义细胞乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）是一种重要的生物标志物，广泛应用于生物医学领域。
LDH存在于人体内的多种细胞中，包括红血细胞、肝细胞、心肌细胞、肌肉细胞、肺细胞、肾细胞等。
当细胞损伤或死亡时，LDH会释放到血液中。
因此，测量血清中的LDH水平可以帮助医生了解患者是否存在细胞损伤或死亡。
基本原理LDH是一种四聚体酶，可以从细胞内转移乳酸和NADH，将乳酸氧化为丙酮酸，同时还原NADH为NAD+。
LDH的氧化还原反应是维持细胞能量平衡的重要过程之一。
LDH检测方法1. 传统测定法传统的LDH检测方法采用分光光度法，根据LDH催化转化的NADH来分析产生的差异吸光度。
这种方法可以测定LDH总活性，但不能区分各亚型LDH之间的活性。
2. 利用亚型间的差异不同的组织和器官中LDH亚型组成有所不同。
基于不同LDH亚型在不同组织中的分布的差异，可以采用多亚型定量法，比如酵素双抗体方法。
此类方法在血液学、肿瘤学等领域得到应用。
LDH在临床医学中的应用由于LDH广泛存在于人体内，因此它被广泛应用于临床医学中，特别是在肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病等领域。
下面将介绍LDH在不同领域中的应用意义。
1. 癌症诊断和治疗LDH在肿瘤的识别和治疗中扮演着重要的角色。
LDH在许多常见的肿瘤中都有升高的趋势，包括淋巴瘤、骨髓瘤和非小细胞肺癌等。
因此，测量患者血清中LDH的水平可以作为肿瘤筛查的一种手段，也可以用于判断肿瘤患者的预后。
此外，LDH水平升高可作为肿瘤治疗的指标之一。
2. 心血管疾病LDH的另一个重要的临床应用领域是心血管疾病。
心肌细胞损伤后，血液中LDH水平升高。
因此，测量血清中的LDH水平可以作为评估患者心肌缺血和心肌梗死程度的指标之一。
3. 神经系统疾病LDH也被用于评估神经系统疾病，如脑膜炎和脑卒中等。
在这些情况下，LDH的水平通常升高，并且可以用作患者疾病严重程度的指标之一。
LDH法的原理及应用
LDH法的原理及应用1. 原理LDH（Lactate dehydrogenase）法是一种用于测定体液中乳酸含量的常用方法。
乳酸是生物体在无氧代谢过程中产生的一种代谢产物，其浓度的升高常常与某些病理状态相关，因此测定乳酸浓度可以帮助医生评估病人的代谢情况和疾病严重程度。
LDH法的原理基于乳酸在存在乳酸脱氢酶（LDH）的催化下与还原型辅酶Ⅱ（NADH）发生氧化还原反应，生成丙酮酸和NAD+。
该反应可通过测定NAD+的减少量或NADH的增加量来间接测定乳酸的浓度。
具体步骤如下：1.取一定体积的待测液样加入反应溶液中，其中包括乳酸脱氢酶、NADH和缓冲剂。
2.反应开始后，乳酸脱氢酶催化乳酸与NADH反应，生成丙酮酸和NAD^+。
3.NADH的减少量可以通过光密度的变化来测定。
乳酸浓度与NADH减少量成正比。
4.通过比对标准曲线，可以确定待测液样中乳酸的浓度。
2. 应用LDH法广泛应用于临床医学、药物研究和生物学等领域。
下面列举了该方法在不同领域的应用：2.1 临床医学LDH法在临床医学中用于测定血液、尿液和其他体液中乳酸的浓度。
这对于评估病人的代谢情况、疾病状态和疾病严重程度非常重要。
LDH法在以下疾病的诊断和监测中有广泛应用：•心肌梗塞：乳酸浓度的升高与心肌梗塞相关。
•肝脏疾病：乳酸浓度的增加可能与肝功能受损有关。
•肾脏疾病：乳酸浓度的变化可以反映肾脏功能的改变。
2.2 药物研究LDH法可用于药物研究中对药物对细胞代谢的影响进行评估。
通过测定细胞中乳酸的浓度变化，可以了解药物对细胞氧化代谢的影响。
该方法可以帮助研究人员了解药物的治疗效果和毒副作用，进而指导药物的研发和应用。
2.3 生物学研究LDH法在生物学研究中也有一定的应用。
乳酸浓度的变化可以反映细胞的能量代谢状态。
通过测定乳酸浓度的变化，可以了解细胞在不同生理和病理条件下的代谢状态。
在细胞培养和细胞凋亡研究中，LDH法可用于评估细胞的损伤程度和细胞死亡情况。
ck、ldh指标
ck、ldh指标全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血清CK（Creatine Kinase）和LDH（Lactate Dehydrogenase）是两种常见的生化指标，常用于评估肌肉和肝脏等组织损伤程度。
它们也可以在心肌梗死、中风、感染和其他疾病中发挥重要作用。
本文将重点介绍这两种指标的作用、测定方法、临床意义及相关疾病的诊断价值。
一、CK指标1. CK是一种细胞内酶，主要存在于肌肉组织、心脏和脑组织中。
当这些组织受损时，细胞膜破裂会释放大量的CK到血液中，导致其浓度升高。
CK水平的检测可以间接反映肌肉和心肌损伤的程度。
2. CK的测定方法主要包括酶法和免疫法两种。
酶法通过检测CK催化底物的催化反应来测定其活性，而免疫法则是通过特定抗体结合CK并产生颜色反应来检测其浓度。
3. 在临床上，CK常被用于评估骨骼肌和心肌损伤的程度。
在急性心肌梗死中，CK的水平会在几小时内显著增加，达到峰值后逐渐降低。
CK可以作为心肌梗死的诊断和疗效监测指标。
4. 一些其他疾病如横纹肌溶解症、中毒和运动损伤等也会导致CK 水平升高。
CK的测定在临床上具有一定的诊断和监测价值。
二、LDH指标1. LDH也是一种细胞内酶，存在于肝脏、心肌、红细胞等组织中。
当细胞受损后，LDH会释放到血液中，导致其浓度升高。
LDH的测定可以反映组织损伤的程度。
2. LDH的测定方法主要包括酶法和免疫法两种，与CK类似。
酶法测定LDH的活性，而免疫法测定LDH的浓度。
3. 在临床上，LDH常被用于评估肝功能和心肌损伤的程度。
在心肌梗死中，LDH的水平也会升高，与CK一起用于心肌梗死的诊断和疗效监测。
4. LDH水平也常用于肝功能评估。
肝脏受损时，LDH会释放到血液中，因此LDH水平的测定可以反映肝脏损伤的程度。
三、总结CK和LDH是两种重要的生化指标，可用于评估肌肉和肝脏等组织的损伤程度。
它们在心肌梗死、中风、感染和其他疾病的诊断和监测中具有重要价值。
ldh法和mtt法
ldh法和mtt法一、介绍在细胞实验研究中，细胞增殖和生长的检测是必不可少的。
而常用的细胞增殖和生长检测方法有许多种，其中较为常见的是LDH法和MTT法。
这两种方法都是通过细胞的代谢和细胞的状态来反映细胞的增殖和生长情况的。
二、LDH法LDH法全称为乳酸脱氢酶检测法，是利用乳酸脱氢酶的氧化还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法基于细胞膜通透性的变化，当细胞膜发生损伤或破裂时，细胞内的乳酸脱氢酶会释放到培养基中。
而乳酸脱氢酶检测法就是通过检测培养基中乳酸脱氢酶含量的变化来判断细胞是否发生了损伤或破裂，以此来推测细胞的增殖和生长情况。
三、MTT法MTT法全称为四氮唑盐（3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基-二氮杂烷）法，是利用MTT盐的还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法的原理是将MTT盐加入细胞培养液中，MTT盐通过细胞中的酶反应还原成具有紫色的甲醛样代谢产物。
而这个代谢产物则会在细胞中不断积累，从而使细胞颜色越来越深。
最后，通过检测细胞的颜色深浅来推测细胞的增殖和生长情况。
四、LDH法和MTT法的比较1.优点与缺点LDH法的优点是可以反映细胞的状态和增殖情况，适用于不同种类的细胞；缺点是需要时间较长，对细胞损伤有一定影响。
而MTT法的优点是简单易行，可作为高通量筛选的快速方法；缺点则是对细胞形态和生长状态的要求较高，对于一些较小或幼稚的细胞不适用。
2.应用范围LDH法和MTT法都常用于评估各种细胞因素（如生长因子、激素、细胞毒性物质等）对细胞生长的影响；同时也受到在细胞增殖实验和细胞毒性实验中的广泛应用。
此外，LDH法和MTT法也可应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
3.实验难度和操作技巧LDH法和MTT法均需要一定的实验基础和耐心，但LDH法一般操作难度稍高些。
五、总结细胞增殖和生长检测方法是细胞实验研究中非常重要的组成部分。
LDH法和MTT法是两种常用的检测方法，不仅能反映细胞的增殖和生长情况，也广泛应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明乳酸脱氢酶（LDH）法操作说明操作简介：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种常用的生物化学分析方法。
本文将详细介绍使用乳酸脱氢酶法进行实验操作的步骤。
材料准备：1. 乳酸脱氢酶试剂盒2. 样品溶液3. 乳酸标准品4. 实验用试管和显微管操作步骤：1. 样品制备- 将待测样品装入实验用试管中。
每个样品应分别装入不同的试管，以避免交叉污染。
- 若样品过浓稀，需要进行适当的稀释，确保样品浓度在测试范围内。
2. 标准曲线制备- 准备不同浓度的乳酸标准品溶液，浓度范围可根据实验要求而定。
- 将不同浓度的标准品溶液分别装入实验用试管中。
3. 试剂添加- 分别向样品管和标准品管中加入相同体积的乳酸脱氢酶试剂，充分混匀。
4. 反应温育- 将所有试管置于恒温水浴中，温度设定为适合乳酸脱氢酶反应的温度（一般为37°C）。
- 在设定的反应温度下，将试管保持在水浴中反应一段时间（时间根据实验要求而定）。
5. 反应终止- 在反应时间结束后，以适当的方法终止反应。
常见的终止方式是添加酸性试剂或采用其他合适的方法。
6. 测定乳酸脱氢酶活性- 使用光度计、分光光度计或其他合适的仪器，测定样品和标准品反应后产生的光吸收值。
吸收值与乳酸脱氢酶活性成正比。
- 通过标准曲线，将样品的吸收值转化为对应的乳酸脱氢酶活性。
注意事项：1. 本实验操作需要严格按照实验室安全操作规范进行，避免任何可能导致个人受伤或污染的行为。
2. 实验过程中的试剂、标样和废液等应按照实验室规定的方法处理，不得随意丢弃。
3. 在操作过程中，保持实验器材和试剂的洁净，尽量避免外界因素对实验结果的影响。
4. 操作时需注意避免交叉污染，尤其是样品的装管和试剂的配比过程。
5. 样品和标准品的选择要合适，浓度范围应覆盖实验要求。
6. 温育过程中，确保试管能均匀受热，并避免发生温度不稳定的情况。
总结：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种可靠的生物化学分析方法，适用于乳酸脱氢酶活性的测定。
ldh指标
ldh指标
LDH指标，也称为乳酸脱氢酶指标，是以乳酸脱氢酶为指标的一项生物化学检测指标，通常用于评估体内细胞代谢情况和疾病状态。
乳酸脱氢酶是一种催化乳酸转化为丙酮酸的酶，存在于体内多种组织细胞中，如肝脏、心脏、肌肉、肺、肾脏等。
一旦细胞受到损害或疾病侵袭，乳酸脱氢酶会释放到体液中，导致其水平升高，成为血液生化参数监测的重要指标之一。
LDH指标的正常范围一般在100-200 U/L之间，其中不同年龄和性别的人群也有一定差异。
当LDH指标超出正常范围，可能意味着体内存在多种疾病病因，如心肌梗死、肝病、肌肉损伤、肺炎、贫血、白血病等。
因此，LDH指标通常作为辅助诊断指标，需结合其他检测指标和临床表现综合判断。
LDH指标也常用于疾病治疗的评估和监测。
例如，在白血病等恶性肿瘤治疗过程中，LDH指标常常成为评估化疗效果的重要指标之一。
如果LDH指标下降，则可能表示疾病得到了控制和缓解；反之，LDH指标上升，则可能预示着疾病进展和治疗效果不佳。
总之，LDH指标虽然仅是一项生物化学检测指标，但却在临床诊疗中扮演着重要的角色。
仔细监测LDH指标的变化，能够帮助医生更准确地判断病情和治疗效果，并及时进行调整和干预，提高治疗成功率。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
LDH法细胞毒性检测：原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率LDH（乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合物，可通过酶标仪进行检测。
颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。
应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。
这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。
乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进行比较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。
该实验方法操作简便、快速，可应用于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。
同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞）细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶操作流程：设立效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组）：50μl效应细胞+50μl培养基实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50μl效应细胞+50μl靶细胞设立靶细胞自发释放组：50μl靶细胞+50μl培养基设立靶细胞最大释放组：50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液（10×）设立体积校正对照组：100μl培养基+10μl裂解液（10×）设立背景对照组：100μl培养基250g离心4分钟37℃孵育4小时离心前45分钟添加裂解液（10×）至靶细胞最大释放组250g离心4分钟取上清50μl转移至另一孔板（可选）于独立的孔中加50μl LDH阳性对照（1：5000）于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物室温避光孵育30分钟添加50μl终止溶液490nm测吸收值1.靶细胞接种数目的优化1.1.设立检测板1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl，使用与细胞毒分析相同的培养基及孔板终体积。
ldh试剂检测公式
ldh试剂检测公式ldh试剂检测公式是一种常用的生化检测方法，用于检测血清或组织中的乳酸脱氢酶（LDH）活性。
LDH是一种重要的酶类，存在于细胞的胞浆中，其活性水平可以反映细胞损伤程度，对于临床诊断和疾病监测具有重要意义。
LDH试剂检测公式是通过测定LDH催化的底物转化为产物的速率来间接测定LDH活性的方法，下面我们将介绍LDH试剂检测公式的具体步骤和计算方法。
一、LDH试剂检测公式的原理LDH试剂检测公式是基于LDH催化底物氧化还原反应的原理。
LDH催化的底物是乳酸，它在催化下被氧化为产物丙酮酸。
LDH试剂检测公式中，首先将待测样品和辅酶NAD+加入反应体系中，LDH催化乳酸氧化的同时，NAD+被还原为NADH。
NADH的生成量与乳酸氧化的速率成正比，而NADH的光密度与其浓度成正比。
因此，通过测定NADH的光密度变化，可以间接测定LDH活性。
二、LDH试剂检测公式的步骤1. 样品制备：将待测血清或组织样品离心去除悬浮物，取上清液作为待测样品。
2. 试剂配置：将乳酸、NAD+、琥珀酸、LDH酶等试剂按照一定比例配置成反应液。
3. 反应体系组装：将待测样品和试剂加入反应管中，混匀后放入分光光度计。
4. 反应条件设定：设置适当的温度和波长，记录初始吸光度。
5. 反应过程监测：启动分光光度计记录反应体系吸光度随时间的变化。
6. 数据处理：根据吸光度变化曲线计算LDH活性。
三、LDH试剂检测公式的计算方法1. 计算初始吸光度（A0）和最终吸光度（A1）。
2. 计算反应时间（t）。
3. 根据NADH的摩尔吸光系数ε和反应体系的光程b计算NADH的摩尔浓度C（C = ΔA / εb）。
4. 根据反应体系中NAD+的初始摩尔浓度C0和NADH生成量与NAD+消耗量之间的关系，计算LDH活性。
在实际操作中，为了提高LDH试剂检测公式的准确性和稳定性，需要严格控制各项操作条件，并采用标准曲线法进行定量分析。
此外，还需注意避免样品污染和环境干扰对实验结果的影响。
乳酸脱氢酶LDH检测作业指导书
乳酸脱氢酶LDH检测作业指导书1 检验目的规范乳酸脱氢酶（LDH）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法DGKC改良法L→P。
3 检测原理乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸，同时NAD+被还原为NADH。
NADH在340nm处有吸收峰，因此反应会引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中乳酸脱氢酶活性呈正比的关系。
乳酸脱氢酶L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH +H+4 样本血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：2～8℃稳定7天；15～25℃稳定1天。
5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围135～225U/L。
9 警告/危急值：未规定。
10 性能指标10.1 线形上限：△A/min为0.40，1600U/L。
10.2 精密度：批内、批间CV分别为5.9%、6.8%。
10.3 准确度:不准确度≤15%。
10.4 试剂贮存:密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月；工作液密闭避光贮存2～8℃可稳定21天，室温可稳定7天。
11 干扰因素及变异的潜在来源11.1.由于红细胞、血小板中含有大量的LD，故严禁使用溶血标本。
11.2.在采用血浆作为标本时必须用3000ｒ/min离心15min以除去血小板。
乳酸脱氢酶（LDH）检测——简单便捷的比色法方案
乳酸脱氢酶（LDH）检测——简单便捷的比色法方案乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。
动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。
乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。
红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
一、乳酸脱氢酶分类1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。
2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。
3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。
第1类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactatemonooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真丨菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。
血清乳酸脱氢酶(LDH)—生化检测项目
血清乳酸脱氢酶（LDH）
一、检测原理
LDH催化L-乳酸氧化成丙酮酸，同时NAD还原成NADH+，引起340nm吸光度的升高，与样品中LDH的活性成正比。
二、参考区间
血清：109—245U/L
三、临床意义
1、乳酸脱氢酶，属于糖酵解酶的一种，可以在人体的血液、骨骼以及心脏大量存在。
2、乳酸脱氢酶的临床意义较大，可以作为诊断心肌疾病、慢性肝炎以及肝癌等病症的诊断依据。
3、乳酸脱氢酶有5种同工酶的形式，即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5，在人体的心肌、肾脏以及红细胞中LDH1、LDH2含量比较高，这两项升高常见于心肌炎、心肌梗死、恶性贫血、急性肾皮质坏死。
肝脏和横纹肌以LDH
4、LDH5为主，当升高的时候常见于肝硬化、肝炎以及骨骼肌的损伤等，
LDH3在胰腺、脾脏、甲状腺、肾上腺当中较多，当异常升高时常见于胰腺癌等疾病。
4、血清LDH活性检测可判断白血病的疗效和转归。
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定
血清乳酸脱氢酶（LDH）速率法测定1. 实验原理VITROS LDH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测LDH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+。
将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：LDH丙酮酸+ NADH + H+———————→乳酸+ NAD2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros LDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6. 试验材料：6.1 测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。
ldh细胞毒性检测原理
ldh细胞毒性检测原理
LDH细胞毒性检测是一种常用的细胞毒性评价方法，其原理基于乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）在细胞损伤时释放到培养上清液中。
LDH是一种催化乳酸转化为丙酮酸的酶，在正常情况下主要存在于细胞内。
当细胞发生损伤或坏死时，LDH被释放到外界环境中。
因此，通过测定培养上清液中的LDH水平，可以间接反映细胞损伤程度。
LDH细胞毒性检测的具体步骤如下：
1. 给予细胞不同浓度的试剂处理，例如药物、化合物等。
2. 处理一段时间后，将培养上清液收集并离心，得到上清液。
3. 使用LDH试剂盒，按照说明书的步骤将上清液与试剂进行反应。
4. 将反应混合物置于检测设备中，通过测定OD值或荧光信号的强度，可以得到LDH的活性或浓度。
5. 将测定结果与对照组进行比较，可以评估细胞毒性的程度。
LDH细胞毒性检测的优点在于操作简便，结果可靠，常用于评估药物、化合物对细胞的毒性影响。
然而，需要注意的是LDH的释放并不一定代表细胞的坏死，因为在一些情况下，LDH也可能通过非坏死途径释放，如胞吞作用、葡萄糖缺乏等。
因此，综合分析LDH释放的动力学变化和其他细胞毒性指标，可以更全面地评估细胞的毒性情况。
ldh释放检测原理
ldh释放检测原理LDH（乳酸脱氢酶）是一种在人体内广泛存在的酶，它参与多种生物化学反应。
通过LDH的检测，我们可以了解到人体健康状况以及某些疾病的发生程度。
LDH的检测原理主要基于其作用机制和测定方法。
LDH在体内的一些组织和器官，如心肌、肝脏和肾脏等，会释放一定量的LDH进入血液中。
当这些组织受到损伤时，LDH的释放量就会增加，因此LDH的浓度可以间接反映出组织损伤的程度。
LDH的检测方法主要有两种，一种是光度法，另一种是电化学法。
光度法是将待测样本与特定试剂反应后生成可溶性产物，通过测定产物的吸光度来确定LDH的浓度。
电化学法则是通过测定反应溶液中电流的变化来判断LDH的浓度。
这两种方法各有优劣，根据实际需要可以选择合适的方法进行检测。
LDH的检测具有广泛的临床应用价值。
首先，LDH可以用于心肌梗死早期的诊断。
心肌梗死会导致心肌组织受损，释放大量的LDH进入血液中。
通过检测LDH的浓度，医生可以判断心肌梗死的严重程度并及时采取治疗措施。
此外，LDH的检测还可以用于肝功能评估。
肝脏是身体重要的代谢器官，当肝脏受损时，LDH的释放量也会增加。
通过监测LDH的变化，可以确定肝脏功能是否正常，以及肝炎等肝脏疾病的发生程度。
LDH的检测不仅适用于心肌和肝脏等器官，还可以用于其他组织和器官的功能评估。
例如，肾脏受损时会释放大量的LDH，所以LDH的测定也可以用于肾功能的评估。
值得注意的是，LDH的浓度受多种因素的影响，包括年龄、性别、体重等。
因此，在进行LDH检测时，需要根据实际情况进行数据的解读和分析。
综上所述，LDH的检测原理通过测定相关试剂与LDH生成的产物或电流的变化，可以间接反映出人体组织受损的程度。
LDH的检测在临床诊断中具有重要的意义，可用于心肌梗死、肝功能和肾功能等的评估。
然而，在进行LDH的检测时，还需要综合考虑其他因素的影响，以得到准确的结果。
组织ldh检测方法
组织ldh检测方法
乳酸脱氢酶同工酶（LDH）检测方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等，但迄今最好的和用得最多的是电泳法。
具体操作如下：
1. 将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
2. 吸去培养液，用PBS液洗涤一次。
换新鲜培养液（推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液），将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔（背景空白对照孔），未经药物处理的对照细胞孔（样品对照孔），未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞孔（药物处理样品孔），并做好标记。
按照实验需要给予适当药物处理（如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，
不同处理时间，对照孔中需加入适当的药物溶剂对照），继续按常规培养。
到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培
养液体积的10%。
加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
3. 到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。
分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
4. 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
混匀，室温（约25℃）避光孵育30min（可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动）。
然后在490nm处测定吸光度。
使用600nm或大于600nm的任一波长作为参考波长进行双波长测定。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
乳酸脱氢酶测定方法
乳酸脱氢酶测定方法
乳酸脱氢酶测定方法可以用于检测血液中的乳酸脱氢酶（LDH）水平。
LDH是一种酶，它参与细胞内乳酸代谢的过程。
由于LDH存在于多种细胞中，因此它的水平是对细胞损伤和死亡的指标，可以用来诊断许
多疾病和状况，包括心肌梗死、肝病、血液疾病、癌症等。
常规的LDH测定方法包括等温电泳、酵素联合免疫吸附测定法（ELISA）、分光光度法、流式细胞术等。
其中，分光光度法是最常用的方法之一。
分光光度法基于LDH催化的反应，根据NADH（辅酶NADH）的光学吸收特性来检测乳酸代谢反应的产物。
具体步骤如下：
首先，将待测样品和反应试剂混合，放置在恒温器中达到恒定温度。
反应试剂包括含有乳酸的底物缓冲液、NADH、钠盐和乳酸脱氢酶。
接着，立即开始检测反应物转化的动力学过程，以记录NADH吸收波长的变化情况。
在该过程中，LDH催化乳酸的氧化还原反应，NADH
被还原生成NAD+，同时将NADH浓度减少，使得其吸收能力下降，从而吸光值减小。
最终，根据反应曲线上的数据，计算出LDH水平。
分光光度法的优点是测定精度高且适用于大量样品的处理，但因其需
要专业的设备和技术，因此对于医疗保健机构和实验室而言，装置和操作成本可能较高。
此外，一些因素也可能干扰LDH测定，例如红细胞和其他细胞成分的存在。
总体而言，乳酸脱氢酶测定方法在诊断和监测许多疾病方面发挥着关键作用。
当临床医生怀疑患者可能存在细胞受损或死亡的情况时，建议根据患者的具体情况，综合使用多种实验室检测方法以确保诊断准确性。
乳酸脱氢酶测定原理
乳酸脱氢酶测定原理一、引言乳酸脱氢酶（LDH）是一种重要的酶类物质，广泛存在于人体内的各种组织和细胞中。
LDH的测定在临床医学中具有重要的意义，可以用于诊断和监测多种疾病，如心肌梗死、肝炎、肝癌、肺炎等。
本文将介绍LDH测定的原理及其应用。
二、LDH的结构和功能LDH是一种四聚体酶，由两种亚基组成，即M亚基和H亚基。
M亚基主要存在于心肌、肝脏、肾脏等组织中，而H亚基则主要存在于肌肉、肺、红细胞等组织中。
LDH的主要功能是催化乳酸的氧化还原反应，将乳酸转化为丙酮酸，同时释放出一定量的能量。
三、LDH测定的原理LDH测定的原理是利用LDH催化乳酸的氧化还原反应，测定反应产生的NADH的吸光度变化。
具体步骤如下：1. 取样本，加入适量的缓冲液和底物（乳酸）。
2. 加入LDH，使其催化乳酸的氧化还原反应。
3. 反应产生的NADH会使溶液的吸光度增加，利用分光光度计测定吸光度的变化。
4. 根据标准曲线计算出样本中LDH的浓度。
四、LDH测定的应用LDH测定在临床医学中有广泛的应用，主要包括以下几个方面：1. 诊断心肌梗死：心肌梗死时，心肌细胞会受到损伤，释放出大量的LDH。
因此，测定血清中LDH的浓度可以用于诊断心肌梗死。
2. 监测肝炎和肝癌：肝炎和肝癌时，肝细胞会受到损伤，释放出大量的LDH。
因此，测定血清中LDH的浓度可以用于监测肝炎和肝癌的病情。
3. 诊断肺炎：肺炎时，肺组织会受到损伤，释放出大量的LDH。
因此，测定血清中LDH的浓度可以用于诊断肺炎。
4. 监测其他疾病：LDH测定还可以用于监测其他疾病，如肌肉疾病、贫血等。
五、结论LDH测定是一种简单、快速、准确的检测方法，具有广泛的应用价值。
在临床医学中，LDH测定可以用于诊断和监测多种疾病，为疾病的早期诊断和治疗提供了重要的参考依据。
医院检验科血清乳酸脱氢酶(LDH)速率法测定 血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定方法
血清乳酸脱氢酶（1.DH）速率法测定1.实验原理VITROS1.DH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测1.DH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+0将一滴IOul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：1.DH丙酮酸+NADH÷H+ --------------------------- 乳酸+NAD2.标本：2.1病人准备：无特殊。
2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros1.DH干片对完整血小板内的1.DH不敏感，因此对比方法的1.DH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3.标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5.标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6.试验材料：6.1测试AST所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit3；VitrOS特制质控液；Vitros7(⅛BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18~28℃。
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乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay
碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT
(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：
可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
C0016-3需注意避免反复冻融。
C0016-4需避光保存。
试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。
注意事项：
冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。
建议样品准备好后尽量当天完成测定。
如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。
如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。