氯化锂对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响_安莹
氯化锂对人颌骨来源的骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化能力的影响
氯化锂对人颌骨来源的骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化能力的影响高丽娜;安莹;杨昊;陈发明;金岩【期刊名称】《实用口腔医学杂志》【年(卷),期】2013(29)2【摘要】Objective: To investigate the effects of lithium chloride ( LiCl) on the proliferation and osteogenic differentiation of human orofacial-derived bone marrow mesenchymal cells ( OF-BMMSCs) in vitro. Methods: Human OF-BMMSCs were isolated and cultured by limited dilution method. The cloned OF-BMMSCs were stimulated with LiCl at different concentrations(0, 5, 10, 20, 40 mmol/L) respectively. After 3 days stimulation, proliferation of OF-BMMSCs was examined by MTT assay. The osteogenic differentiationof OF-BMMSCs was evaluated by Alizarin red staining, ALP staining and real-time quantitative PCR for the mRNA expression of ALP, Runx-2 and OCN after treatment by LiCl and followed by osteogenic induction. Results: LiCl at 5 mmol/L promoted the proliferation of OF-BMMSCs(P <0. 05) , but showed no significant effect on the mRNA expression of ALP, Runx-2 and OCN of OF-BMMSCs(P > 0.05). However, LiCl at 20 and 40 mmol/L inhibited the cells proliferation (P >0.05) , while, promoted the mRNA expression of the genes(P<0.05). Conclusion: LiCl may promote the osteogenic differentiation of OF-BMMSCs.%目的:探讨氯化锂(LiCl)对颌骨来源的骨髓间充质干细胞(OF-BMMSCs)增殖及骨性分化的影响.方法:采用有限稀释法克隆化培养人颌骨来源的骨髓间充质干细胞;正常培养基中加入不同浓度LiCl(5、10、20、40 mmol/L),同时设立对照组(0 mmol/L);运用MTT法分析不同浓度LiC1对人OF-BMMSCs增殖活性的影响;采用组织化学染色法、RT-PCR法测定不同浓度LiC1处理人OF-BMMSCs后的ALP活性及相关骨向分化基因(ALP,Runx-2,OCN)的表达.结果:5 mmol/L LiCl促进OF-BMMSCs增殖,对ALP、Runx-2、OCN表达的影响作用不明显(P>0.05),20和40 mmol/L LiC1抑制细胞增殖(P<0.05),促进ALP、Runx-2、OCN基因表达(P<0.05).结论:LiCl能够促进人OF-BMMSCs的骨向分化.【总页数】6页(P203-208)【作者】高丽娜;安莹;杨昊;陈发明;金岩【作者单位】710032西安,第四军医大学口腔医学院组织工程研究中心【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1【相关文献】1.糖基化终末产物对人牙周膜干细胞和骨髓间充质干细胞骨向分化能力影响的比较研究 [J], 杨琨;崔晓霞;邓超;伍燕;刘琪;金岩2.犬颌骨与髂骨两种骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化能力比较 [J], 王国轩;朱国雄;朱斌;梁世桢;赵喜聪;安玉林;金岩3.二仙汤对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及骨向分化的影响 [J], 吴琪;刘波;陈志;徐彭4.张应力对骨髓间充质干细胞骨向分化来源成骨细胞ICAM-1基因表达的影响 [J], 江凌勇;赵志河;王军;樊瑜波5.壮骨止痛胶囊调控自噬相关蛋白对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞增殖与骨向分化的影响 [J], 陈沙;李荣慧;吴结枝;曹宝丹;田国力;刘平安;张国民因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
氯化锂对肝癌细胞BEL-7402增殖、周期的影响及其作用机制
氯化锂对肝癌细胞BEL-7402增殖、周期的影响及其作用机制徐杰伟;蒋桂星;曹利平【摘要】目的:探讨氯化锂对人肝癌细胞BEL-7402增殖、周期的影响及其作用机制。
方法应用MTT法及DNA PREP细胞周期法检测BEL-7402经氯化锂作用后的增殖及周期改变情况,Western blot检测糖原合成激酶-3(GSK-3)、失活pGSK-3及其下游分子CyclinD1的表达情况。
结果氯化锂可显著抑制BEL-7402的增殖,并呈时间、剂量依赖性(P<0.05);氯化锂可使BEL-7402的G0/G1期比例明显降低、G2/M期比例显著升高(P<0.05);氯化锂作用后GSK-3、失活pGSK-3及CyclinD1蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05)。
结论氯化锂可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能是通过抑制GSK-3活性并上调CyclinD1表达使肝癌细胞阻滞于G2/M期。
%Objective To investigate the effect of lithium chloride (LiCl) on cellproliferation,cellcycle of human hepatoma cells and its mechanism. Methods Cultured human hepatoma BEL- 7402 cells were treated with different concentrations of LiCl. cellproliferation was measured by MTT assay and cellcycle was examined by DNA PREP cell cycle assay. The expressions of GSK- 3, inactivated GSK- 3 and CyclinD1 were determined by Western blot. Results LiCl inhibited BEL- 7402 cellproliferation in a concentration- and time- dependent manner. After LiCl treatment the percentage of G0/G1 phase was significantly reduced, the G2/M phase was significantly increased, and the expression levels of GSK- 3, inactivated GSK- 3 and CyclinD1 were up- regulat-ed. Conclusion LiCl can inhibit the proliferation of BEL- 7402 cells, in which inactivation ofGSK- 3 and up- regulation of CyclinD1 may be involved leading to cellcycle arrest in G2/M phase.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2013(000)019【总页数】4页(P1736-1738,1772)【关键词】肝癌;糖原合成激酶- 3;氯化锂;CyclinD1【作者】徐杰伟;蒋桂星;曹利平【作者单位】310009 杭州,浙江大学医学院附属第二医院肝胆外科;310009 杭州,浙江大学医学院附属第二医院肝胆外科;310009 杭州,浙江大学医学院附属第二医院肝胆外科【正文语种】中文糖原合成激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是普遍存在于真核细胞生物中的一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,可参与多种细胞生理过程,包括细胞增殖、分化及存活[1]。
木犀草素对人牙周膜细胞增殖及成骨分化能力的影响
木犀草素对人牙周膜细胞增殖及成骨分化能力的影响张淼;刘绣华;赵红宇【摘要】Objective:To evaluate the biological effects of Luteolinl on the proliferation and differentiation in human periodontal ligament cells (PDLC) . Methods:MTT, ALP kit and Q-PCR was used to detect the expression of osteogenesis related gene. Results:Luteolinl (100, 10, 1, 0.1, 0.01μmol/L) could increase the proliferation of PDLC, and there were significant differences compared with control group (P<0.05) . The ALP Kit results showed that Luteolinl could increase the ALP actiuty of PDLC(P<0.05) . The Q-PCR results showed that Luteolin could increase the expression of ALP and RUNX2 (P<0.05) . Conclution:At proper concentration,Luteolinl can increase the proliferation and differentiation of PDLC.%目的:探讨不同浓度木犀草素对人牙周膜细胞(PDLC)增殖及成骨分化能力的影响。
方法:体外培养PDLC并进行组织来源鉴定,取第3代细胞进行实验。
氯化锂调控人肺腺癌A549细胞增殖及侵袭转移的体外研究
氯化锂调控人肺腺癌A549细胞增殖及侵袭转移的体外研究林高阳;徐克【摘要】目的:探讨氯化锂对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭转移能力的影响及其调控机制.方法:应用MTT法、平板克隆形成实验评价细胞生长活力和增殖的生物学特征变化;划痕实验、Transwell小室细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力;Western-blotting法检测肿瘤细胞GSK-3β、P-GSK-3β和β-catenin的表达水平变化.结果:MTT法显示细胞分化增殖能力随氯化锂浓度的增加受到明显抑制,具有浓度依赖性变化.同时,随着检测时间的延长,在低浓度药物作用下(<10mmol/L)细胞出现增殖增强现象,可能存在药物时间耐受;平板克隆形成实验显示细胞增殖受到不同浓度氯化锂的抑制,增殖能力的变化亦具有氯化锂浓度依赖性;划痕实验、Transwell实验证实:氯化锂处理细胞后,细胞迁移、侵袭能力下降;Western-blotting法显示:氯化锂处理肺腺癌A549细胞后,GSK-3β总蛋白表达下降、P-GSK-3β表达增加,β-catenin总蛋白表达增多.结论:高浓度的氯化锂能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖和侵袭迁移,氯化锂抑制肺腺癌A549细胞增殖和侵袭迁移可能是通过GSK-3β/β-catenin信号通路实现的.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2015(021)001【总页数】6页(P9-13,21)【关键词】肺腺癌;氯化锂;迁移侵袭;GSK-3β/β-catenin通路【作者】林高阳;徐克【作者单位】天津医科大学总医院肺部肿瘤外科,天津市肺癌研究所,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津300052;天津医科大学总医院肺部肿瘤外科,天津市肺癌研究所,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津300052【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌占全球恶性肿瘤发病率的12.7%,死亡率的18.2%,均高居首位[1]。
氯化锂对骨质疏松症的作用
DOI:10.3969/j.issn.l674-2591.2021.02.014•综述・氯化锂对骨质疏松症的作用张浦燊1,田发明1,张柳2,李赫桐1[摘要]氯化锂(lithiumchloride,LiCl)在治疗精神疾病方面已经安全有效地使用了半个多世纪。
近年来,LiCl在抗骨质疏松症中的作用逐渐得到证实。
本文综述LiCl对促进骨形成并改善骨骼质量的效果,如LiCl可对成骨细胞(osteoblast,OB)增殖和分化产生影响进而调控OB的生长发育,且能够减少破骨细胞(osteoclast,OC)的数量并抑制其活性,它还能促进骨髓基质细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSC)向成骨细胞的分化,从而对原发性及继发性骨质疏松动物模型产生治疗作用。
综上,LiCl在抗骨质疏松症方面有着很好的临床应用价值,可作为一种潜在治疗骨质疏松症的药物。
[关键词]氯化锂;骨质疏松症;研究进展中图分类号:R589;R681文献标志码:AEffects of lithium chloride on osteoporosisZHANG Pu-shen',TIAN Fa-ming',ZHANG Liu2,LI He-tong1.North China University of Science and Technology,Tangshan063210,Hebei,China;2.Department of Orthopedics,Emergency Management General Hospital,National Mine Medical Security Center,Beijing100028,China[Abstract]Lithium chloride has been used safely and effectively in the treatment of mental illness for more than half a century.In recent years,the role of lithium chloride(LiCl)in anti-osteoporosis has been gradually confirmed.This paper introduces that LiCl can promote bone formation and to improve bone mass,can affect the proliferation and differentiation of osteoblasts(OB)and regulate the growth and development of OB,can reduce the number of osteoclasts(OC)and inhibit their activity.It can influence the differentiation of bone marrow stromal cells,and play roles on animal model with primary or secondary osteoporosis.LiCl has good clinical application potential asa medicine for osteoporosis.[Key words]lithium chloride;osteoporosis;research progress骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种以骨量下降、骨组织微结构破坏为特征,使骨脆性增加,易发生骨折的代谢性骨病[1]。
锂盐促进成骨机制及研究现状_邓立庆
因此,锂盐通过激活成骨细胞 Wnt 通路,增加骨 量,对于骨质疏松症等骨量减少疾病的治疗具有重要 意义。 3. 2 多发性骨髓瘤
锂对 GSK - 3β 活性的抑制进一步抑制了 GSK - 3β 介导的对 Wnt 信号下游转录分子 β - catenin 的磷 酸化、抑制 β - catenin 被蛋白酶复合体降解,使胞浆 内 β - catenin 的浓度升高,并促进 β - catenin 进入胞 核,促进细胞核内转录因子 Lef / Tcf 调控的相关基因 表达,相当于锂盐间接激活、促进 Wnt 信号通路的表 达; Wnt 信号激活表达进一步调控 MSCs 向成骨细胞 分化、增殖及活性表达[2 ~ 。 5、29、31]
由于外伤、感染、肿瘤等因素而使机体丧失了一
第22 卷第3 期 2014 年2 月
中国矫形外科杂志 Orthopedic Journal of China
Vol. 22,No. 3 Feb. 2014
些骨质,形成较大的间隙,称为骨缺损。由于很多骨 缺损间 隙 大,成 骨 细 胞 难 以 爬 过 间 隙 而 不 能 正 常 愈 合,仅由纤维组织充填,最后形成骨不连。骨缺损的 治疗是骨科领域的一个有挑战性的课题。临床上主要 通过自体、异体组织移植和生物替代材料来达到一定 的治疗目的。目前最常用的自体组织移植,由于来源 不足、创伤大、供区合并症等不利因素,限制了在临 床上的应用; 而异体组织移植存在异体排斥反应、来 源有限、价格昂贵及具有传播疾病的危险等弊端,所 以寻找既不损害自身,又可达到预期骨缺损修复功能 效果的替代物成为临床工作者追求的目标。Chen 等通 过小鼠的骨折愈合模型发现,在骨折早期使用 LiCl 会 使间充质细胞停留在增殖期而延迟愈合,只有在间充 质细胞已向成骨细胞分化后给予 LiCl,才能促进骨折 的愈合[39]。Vestergaard 等 发 现,使 用 LiCl 治 疗 的 患 者,骨折的相对危险度较低。口服 LiCl 可促进小鼠骨 折的愈合,使骨量增加[40 - 41]。同时,Khorami 等将掺 加有锂盐的生物玻璃体与 Wistar 鼠颅骨源性成骨细胞 共培养,结果显示成骨细胞具有更高的增殖、分化能 力,ALP 活性在含有锂盐的材料表面活性明显提高; 表明锂盐的生物材料可以促进成骨细胞增殖、分化及 活性表达,促 进 新 骨 合 成, 具 有 骨 修 复 能 力[1,42]。 故 锂盐在骨组织工程领域应用前景广阔。
液态浓缩生长因子对人牙周膜干细胞成骨能力的影响
液态浓缩生长因子对人牙周膜干细胞成骨能力的影响液态浓缩生长因子对人牙周膜干细胞成骨能力的影响摘要:牙周疾病是一种常见的口腔疾病,其主要导致牙周组织的破坏和牙齿的丧失。
干细胞治疗成为牙周疾病的一种新兴治疗方法。
本研究旨在探究液态浓缩生长因子对人牙周膜干细胞成骨能力的影响。
通过对人牙周膜干细胞进行培养,加入不同浓度的液态浓缩生长因子,观察其对干细胞的生长、增殖和成骨能力的影响。
结果表明,不同浓度的液态浓缩生长因子对人牙周膜干细胞的成骨能力有显著的影响。
适当的浓度液态浓缩生长因子可以提高干细胞成骨能力,增加新骨生成率。
本研究对引导牙周膜干细胞成骨治疗提供理论基础。
关键词:液态浓缩生长因子;干细胞;牙周膜;成骨能力。
Abstract: Periodontal disease is a common oral disease, which mainly leads to the destruction of periodontal tissues and the loss of teeth. Stem cell therapy has become an emerging treatment for periodontal disease. The purpose of this study was to investigate theeffect of liquid concentrated growth factors on the osteogenic ability of human periodontal ligament stem cells. Human periodontal ligament stem cells were cultured and different concentrations of liquidconcentrated growth factors were added to observetheir effect on the growth, proliferation, and osteogenic ability of stem cells. The results showed that different concentrations of liquid concentrated growth factors had a significant effect on the osteogenic ability of human periodontal ligament stem cells. Appropriate concentration of liquidconcentrated growth factors can improve the osteogenic ability of stem cells and increase the new bone formation rate. This study provides a theoreticalbasis for guiding periodontal ligament stem cells to become osteogenic therapy.Keywords: Liquid concentrated growth factors; stem cells; periodontal ligament; osteogenic abilityPeriodontal disease is a prevalent dental problem, characterized by the destruction of tooth-supporting tissues. One of the treatment methods for periodontal diseases is regenerative therapy, which aims torebuild the damaged tissues. Stem cell-based therapy has emerged as a promising approach for periodontal tissue regeneration. Among various types of stem cells, human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs) have gained considerable attention due to their osteogenic potential and accessibility.In recent years, concentrated growth factors (CGFs) have been used as a source of growth factors fortissue regeneration. CGFs are derived from thepatient's own blood and contain a high concentration of growth factors, including platelet-derived growth factor, transforming growth factor-β, insulin-like growth factor, and vascular endothelial growth factor. Liquid concentrated growth factors (LCGFs) are a newer form of CGFs, which are obtained by centrifuging the whole blood without adding anticoagulants.In this study, the researchers investigated the effect of LCGFs on the osteogenic ability of hPDLSCs. The results showed that LCGFs significantly improved the osteogenic differentiation of hPDLSCs in a concentration-dependent manner. The optimal concentration of LCGFs was found to be 10% (v/v). Moreover, LCGFs increased the expression of osteogenic markers, such as alkaline phosphatase, osteopontin, and osteocalcin, and enhanced the mineralization of extracellular matrix.These findings suggest that LCGFs can enhance the osteogenic ability of hPDLSCs and promote bone formation. LCGFs may have potential applications in the field of periodontal tissue regeneration. However,further studies are needed to investigate the long-term effects and safety of LCGFs in clinical settingsIn addition to the potential applications in periodontal tissue regeneration, LCGFs may also have implications in other fields of tissue engineering and regenerative medicine. For instance, LCGFs may serve as an alternative or complementary approach to traditional growth factors in promoting bone healing and regeneration in orthopedic surgery.Furthermore, the use of LCGFs may also have advantages in terms of cost-effectiveness and safety. Traditional growth factors can be expensive and may have adverse effects, such as inflammation and tumor formation, which limit their clinical application. LCGFs, on the other hand, are derived from autologous blood and are therefore inexpensive and safe.Nevertheless, there are still several challenges that need to be addressed before the clinical translation of LCGFs. One challenge is the standardization of the preparation and administration protocol of LCGFs. Currently, there is a lack of consensus on the optimal concentration and volume of LCGFs to be used in different clinical scenarios. Therefore, standardization of the protocol is essential to ensurethe efficacy and safety of LCGFs.Another challenge is the identification of the optimal source of LCGFs. As mentioned earlier, the concentrations of growth factors in blood can vary depending on the donor's age, health status, and other factors. Therefore, the identification of the optimal source of blood and the standardization of the collection and processing protocol are crucial for the successful application of LCGFs in clinical settings.Overall, LCGFs show great promise in promoting tissue regeneration in various clinical scenarios. Further studies are needed to investigate the long-termeffects and safety of LCGFs in clinical settings and to optimize the protocol for their preparation and application. With further research, LCGFs may become a valuable tool for tissue engineering and regenerative medicineIn addition to their use in tissue engineering and regenerative medicine, LCGFs have also shown potential in other clinical applications. For example, a recent study demonstrated the efficacy of LCGFs in reducing pain and promoting healing in patients with diabetic foot ulcers. The LCGFs were prepared from thepatient's own blood and applied directly to the ulcersite, resulting in significant reductions in pain and improvements in healing.LCGFs have also been investigated as a potential treatment for osteoarthritis. In a preclinical study, LCGFs were injected into the knee joints of mice with induced osteoarthritis, leading to increased cartilage regeneration and improvements in joint function. Additionally, a clinical trial is currently underway to investigate the safety and efficacy of LCGFs in treating knee osteoarthritis in humans.Another potential application of LCGFs is in the treatment of hair loss. Several studies have demonstrated the ability of LCGFs to promote hair growth and increase hair density in patients with androgenetic alopecia. The LCGFs were prepared from the patient's own blood and injected into the scalp, resulting in significant improvements in hair growth and thickness.Overall, LCGFs show great promise in a wide range of clinical applications. However, further research is needed to fully understand their mechanism of action, optimize their preparation and application protocols, and investigate their long-term safety and efficacy. With continued research, LCGFs may become an importanttool in the field of regenerative medicine and tissue engineering, offering new opportunities for the treatment of a variety of conditions and injuriesIn conclusion, LCGFs have shown great potential for use in regenerative medicine and tissue engineering applications. They have been shown to promote cell proliferation and differentiation, enhance wound healing, and possess anti-inflammatory properties. However, further research is necessary to fully understand their mechanism of action and optimize their preparation and application protocols. With continued investigation, LCGFs may become a valuable tool for treating a variety of conditions and injuries。
氯化锂对培养神经干细胞增殖分化的影响及其机制研究
・基 础Βιβλιοθήκη 究 ・ 氯 化 锂 对 培 养 神 经 干 细 胞 增 殖 分 化 的 影 响 及 其 机 制 研 究
景 秀 京 杨 继 飞 张 建 胡 远 兵 杨 忠。 , , , ,
[ 要 ] 目的 观 察 氯 化锂 对 培 养 神 经 干 细胞 ( C ) 殖 及 分 化 的 影 响 , 讨 wn 信 号 途 径 对 N C 增 殖 分 化 的调 控 作 用 。 摘 NS s增 探 t Ss
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中国康复理论与实践 2 0 年 9 07 月第 1 卷第 9 C i J e aiT e r P at S p 0 7V 1 1 , o 9 3 期 h R hbl h oy rc, e.20 , o. 3 N . n
Abta t 0be t e Toiv siaet eefc flh u c lrd Li ) n ihbtro lc g n s n h s ia e3 ea ( K一 sr c : j ci n etg t h feto i im ho ie( CI ,a n iio fgy o e y ta ekn s- b t GS v t
c ced n miso Cswa x mi e t lw y o ty y l y a c fNS se a n dwi f h o c tmer .An h x rs ino K一 pa d c tnnwa x mi e u n i t ey d tee p eso f GS 3 n ae i se a n dq a tt i l av
3b t ),on p olf r ton a fe e ta in eu als e c ls (NSCs . M e ho s h NSCs w e e iolt d fom o t x ofr tf t s ea r ie a i nd difr n i to ofn r t m e l ) t d T e r s a e r c r e a e u a d e pa de n c t i g s s e . T her mor h og c c ng s a ta hm e r e s we e o e ve n x n d i ulurn y t m i p ol ial ha e nd a t c nt p oc s r bs r d und r m ir c e c os ope The c l . el
氯化镧对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响
组 、 1 1 m lL L C 组 , X 0~ o a 1 / 以及 阴性 对 照组 , 组 每 设 4个 复孔 。细胞 饥饿 同步化 后加 药 。各 孔加入 含
不 同浓 度 LC,的 D M 培 养 液 和 不 含 【c 的 aI ME al D D培养基 作 为 阴性 对 照 , 养 2 ME 培 4h后 弃 培 养 液, 各孔 加入 2 0 5m/ LMT ,7o  ̄m T 3 C培养 4h ,
摘要 : 目的
探讨 不 同浓度 的氯 化镧 对人 牙周 膜成 纤 维细 胞 ( D F ) P L s 增殖 的影 响。方法 原 代 细胞 培养
P L s MT D F , r法检测 5种不同浓 度氯化镧 ( O 1 0 1 0 1X1 及 1 0 m VL 对 P L s 1 l 一、 1 一、 ×1 一、 X X 0 1 o ) X D F 增殖 的
细胞 的增 殖 。还有 文 献 报 道 1×1 ~、 0 1×1 。m l 0 o /
LL C 对犬 骨髓 基 质 细 胞 增 殖 有抑 制 作 用 J a 1 。这 些结 果 与 以上 文 献报 道 差 异 较 大 , 能与 细 胞 种属 可
以及 实 验条件 的差 异有 关 。可见关 于稀 土元 素对组 织 细胞 的增殖 作用 , 尚需 进一 步 的研究 。 细 胞增 殖 时 胞 质 中钙 浓度 增 加 , 并且 需 要 外 源 性钙 离 子 。姚 惠 英 等 采 用 放 射 性 钙 示 踪 法 研 究 发 现, 在浓 度为 1 ~ ~1 m lL范 围 内 , 土能 促进 0 0 o / 稀
山东医药 2 1 第 5 02年 2卷第 3 3期
氯 化 镧对 人 牙 周膜 成 纤 维 细胞 增 殖 的影 响
基于雌激素受体研究氯化锂干预成骨细胞的分化及自噬
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2019)05-00680-05680 www.CRTER .org·研究原著·付殷,女,1985年生,辽宁省凌源市人,汉族,2015年黑龙江中医药大学毕业,博士,主要从事药理学研究。
通讯作者:孙贵才,博士,主任医师,南昌大学第四附属医院骨科,湖北省南昌市 330003文献标识码:B稿件接受:2018-11-23Fu Yin, MD, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150000, Heilongjiang Province, ChinaCorresponding author: Sun Guicai, MD, Chief physician, Department of Orthopedics, the Fourth Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330003, Hubei Province, China基于雌激素受体研究氯化锂干预成骨细胞的分化及自噬付 殷1,孙贵才2,陈水林2,樊祥伟2,彭宇飞3 (1黑龙江中医药大学,黑龙江省哈尔滨市 150000;2南昌大学第四附属医院骨科,湖北省南昌市 330003;3黑龙江中医药大学附属第一医院骨伤一科,黑龙江省哈尔滨市 150000) DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1613 ORCID: 0000-0002-1515-9378(孙贵才)文章快速阅读:文题释义:氯化锂:是白色的晶体,具有潮解性,味咸。
易溶于水及乙醇、丙酮、吡啶等有机溶剂,具有低毒性。
但对眼睛和黏膜具有强烈的刺激和腐蚀作用。
氯化锂主要用于空气调节领域,用作助焊剂、干燥剂、化学试剂,并用于制焰火、干电池和金属锂等。
氯化锂对Aβ1-42引起的星形胶质细胞谷氨酸释放的抑制作用及其对海马神经元损伤的保护作用
第47卷第1期2021年1月吉林大学学报(医学版)Journal of Jilin University(Medicine Edition)Vol.47No.1Jan.2021DOI:10.13481/j.1671⁃587Ⅹ.20210105氯化锂对Aβ1-42引起的星形胶质细胞谷氨酸释放的抑制作用及其对海马神经元损伤的保护作用刘琪,张显晨*,李香雨*,林钰淼*,杨颜齐*,闫恩志(锦州医科大学基础医学院药理学教研室,辽宁锦州121001)[摘要]目的目的:研究氯化锂对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)引起的星形胶质细胞(AS)谷氨酸释放的抑制作用,并探讨其对海马神经元损伤的保护作用及机制。
方法方法:原代培养AS及海马神经元,AS 分为对照组和Aβ1-42+不同剂量氯化锂组(分别加入0.25、0.50和1.00mmol∙L-1氯化锂作用2周,加入250nmol∙L-1Aβ1-42刺激),采用荧光探针技术检测AS中Ca2+水平,采用高效液相色谱法检测AS谷氨酸的释放量,Western blotting法检测AS中瞬时受体电位通道蛋白1(TRPC1)、钠-钙交换蛋白1(NCX1)和电压门控钙离子通道(Cav1.2)蛋白表达水平。
海马神经元成熟化后分为对照组、Aβ1-42组和Aβ1-42+不同剂量氯化锂组,加入Aβ1-42处理的含AS的条件培养基(ACM)培养并以不含AS的条件培养基为对照,倒置相差显微镜下观察海马神经元突起总长度(TDBL)、一级突起数(PDN)和最大分支级数(MBO),Griess法测定培养液中一氧化氮(NO)释放量。
结果结果:与对照组比较,Aβ1-42+不同剂量氯化锂组AS中Ca2+水平明显降低(P<0.05),Ca2+再充功能降低(P<0.05),谷氨酸释放量明显减少(P<0.05),TRPC1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),NCX1和Cav1.2蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。
氯化锂对苯并[a]芘暴露致大鼠胚胎海马神经元损伤的改善作用
摘要:
[背景] 诸多研究证实苯并[〇】芘 (B a P )可透过胎盘屏障及血脑屏障引起胚胎神经毒性,而目 前关于外源化合物对BaP暴露所致健康损害的干预作用研究鲜有报道。氯 化 锂 (LiCI) 在临床 上 广 泛 应 用 于 情 绪 调 节 ,具 有 神 经 营 养 和 神 经 元 保 护 作 用 。
通信作者 张文平,E-mail ••wpzhang@
伦理审批已获取 利益冲突无申报 收 稿 日 期 2020-10-28 录 用 日 期 2021-03-11
文章编号 2095-9982(2021)05-0482-07 中 图 分 类 号 R114 文献标志码A
-引用 张 楠 ,张 英 英 ,王 鹤 霏 ,等 . 氮 化 锂 对 苯 并 [〇1 芘暴露致大鼠胚胎海马神经元损伤的改善 作 用 ⑴ . 环 境 与 职 业 医 学 ,2021, 38 ( 5 ) : 482-488.
[结果] 实 验期间,对照组、植 物 油 组 和 LiC I组孕鼠体重及胎鼠发育指标差异均无统计学意 义 (P> 0 .0 5 )。GD14和 GD18, BaP组 孕 鼠 体 重 [(323.34±5.71)g、(364.34±10.41)g]均低于对照 组 [(339.17±7.10)g、(390.32±11.35) g] (P < 0 .0 5 ) , 而 LiCI 干预组孕 鼠 体 重 [(345.05±7.72) g、 (398.73±12.32) g ]均高于BaP组 (P<0.05)。BaP组胎鼠的体重、身长、尾长分别为(2.325±0.061) g、 (3.072±0.077) cm、(1.135±0.068) cm , 均 低 于 对 照 组 的 相 应 指 标 值 [ (2.563±0.091) g、 (3.284±0.078) cm、(1.276±0.041) cm] (P < 0.05) ; LiCI 干 预 组 胎 鼠 上 述 发 育 指 标 值 为 (2.669±0.096) g、(3.356±0.107) cm、(1.206±0.041) cm , 均较 BaP 组 有 上 升 (P <0 .0 5 )。形态 学 观 察 发 现 ,B a P 组 胎 鼠 海 马 组 织 齿 状 回 区 出 现 神 经 元 皱 缩 和 染 色 加 深 ,L iC I干 预 组 有 改 善 。 Western blotting结 果 显 示 :与 对 照 组 相 比 ,BaP组 pGSK-3P表 达 降 低 (对 照 组 和 BaP组的灰 度值比值分别为 0.87±0.04、0.50±0.04, f=19.64, P < 0 .0 0 1 ), GSK-3P 表 达 升 高 (对照组和 BaP 组 的 灰 度 值 比 值 分 别 为 1.53±0.14、2.09±0.11, f=5.90, P=0.011), P-catenin表 达 降 低 (对照 组 和 BaP组 的 灰 度 值 比 值 分 别 为 1.41±0.14、0.90±0.04, f=11.16, P=0.001) ; LiCI干预可明显 逆 转 由 BaP暴露引起的pGSK-3P表达降低、GSK-3P表达升高及P-catenin表 达 降 低 的 现 象 (灰 度 值 比 值 分 别 为 :pGSK-3P, 0.69±0.08, P=0.036 ; GSK-3P, 1.59±0.15, P=0.042 ; P-catenin, 1.33±0.08, P=0.006)〇
氯化锂促进骨髓间充质干细胞增殖分化的作用途径
付殷,1985 年生,辽宁省 凌源市人,汉族,博士, 中级研究员,主要从事方 剂配伍规律相关研究
通讯作者:孙贵才,博士, 主任中医师,南昌大学第 四附属医院骨科,江西省 南昌市 330003
文献标识码:A 稿件接受:2019-02-16
Hale Waihona Puke 文题释义: 氯化锂:是糖原合成酶激酶 3β 的高度选择性抑制剂,通过抑制 GSK-3β 的活性,使 Wnt/β-catenin 的降解减 少,激活 Wnt/β-catenin 信号途径。 Wnt 信号通路:Wnts 是由高度保守的分泌信号糖蛋白组成的家族,控制细胞增殖、分化、凋亡、存活和迁移。 Wnt 信号刺激可以促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化,同时抑制其向成脂细胞分化。
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research
氯化锂促进骨髓间充质干细胞增殖分化的作用途径
·研究原著·
付 殷1,孙贵才2,涂远青2,凌小鹏2 (1黑龙江中医药大学,黑龙江省哈尔滨市 150036;2南昌大学第四附属医院骨科,江西省南昌市
Lithium chloride promotes proliferation and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells via Wnt/beta-catenin signaling pathway
Fu Yin1, Sun Guicai2, Tu Yuanqing2, Ling Xiaopeng2 (1Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150036, Heilongjiang Province, China; 2Department of Orthopedics, Fourth Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330003, Jiangxi Province, China)
氯化锂对激素性股骨头坏死大鼠股骨头微观结构的影响
氯化锂对激素性股骨头坏死大鼠股骨头微观结构的影响李云矗;孙平;徐刚;徐成福【摘要】Objective To investigate the effect of lithium chloride on microstructure of femoral head in rats with steroid-induced osteonecrosis of the femoral head (S-ONFH) and its significance.Methods Thirty SD rats were randomly divided into the blank control group, model group and lithium chloride group, with 10 rats in each group.In the lithium chloride group and model group, we used escherichia coli endotoxin combined with large dose of steroid shock to make the rat models of the S-ONFH.At 24 h after the last injection of steroid, rats in the lithium chloride group were given lithium chloride (140 mg/kg) by gavage, 1 time per day for 8 weeks.Rats in the model group and the blank group were given equal amount of normal saline.Rats were sacrificed and HE staining was performed on the right femoral head.Histopathological changes and necrosis of the femoral head were observed.The left femoral head was used for micro CT examination, and each bone mineral density (BMD), bone volume fraction (BV/TV), trabecular space (Tb.Sp), trabecular bone number (Tb.N), trabecular bone thickness (Tb.Th) were recorded.Results HE staining showed that the trabecular bone in the blank group was complete and regularly arranged, and the bone lacunae were filled with bone cells;the trabecular bone in the model group was disorder, narrow, and fractured, and the marked necrosis of bone widely existed in the empty bone lacunae;the trabecular bone shape in the lithium chloride group wasbetter without obvious stenosis or fracture.However, there were empty bone lacuna in the lithium chloride group which was less than that in the model group.In the blank control group, model group and lithium chloride group, 0, 8 (80%) and 3 (30%) rats with femoral head necrosis were found, respectively (all P<0.05).Compared with the blank control group, the Tb.N and Tb.Th of the model group and the lithium chloride group were all decreased, Tb.Sp was increased, but these in the model group expressed more significantly (all P<0.05), the BMD and BV/TV in the model group was lower than that of the the blank control group and lithium chloride group (all P<0.05).Conclusion Lithium chloride can increase the bone mass of S-ONFH rat femoral head and improve its microstructure, and it has a protective effect on the femoral head.%目的探讨氯化锂对激素性股骨头坏死(S-ONFH)大鼠股骨头微观结构的影响及意义.方法将30只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、氯化锂组,每组10只.氯化锂组和模型组采用大肠杆菌内毒素联合大剂量激素冲击法建立S-ONFH模型,末次注射激素24 h,氯化锂组给予氯化锂140 mg/kg灌胃,1次/d,连续8周.模型组和空白对照组均给予等量生理盐水灌胃.各组灌胃8周处死,取右侧股骨头行HE染色,观察股骨头组织病理学改变及股骨头坏死发生情况;取左侧股骨头进行显微CT检查,记录骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁间距(Tb.Sp)、骨小梁数目(Tb.N)和骨小梁厚度(Tb.Th).结果 HE 染色显示,空白对照组骨小梁完整,排列规则,骨陷窝内有骨细胞填充;模型组骨小梁结构紊乱并有狭窄或断裂,广泛存在以空骨陷窝为标志的坏死骨;氯化锂组骨小梁形态较好,未见明显狭窄或断裂,存在空骨陷窝,但数量较模型组少.空白对照组、模型组、氯化锂组分别有0、8、3只出现股骨头坏死,组间两两比较P均<0.05.与空白对照组比较,模型组和氯化锂组Tb.N、Tb.Th均降低,Tb.Sp均增高,但模型组变化更明显(P均<0.05).模型组BMD、BV/TV均低于空白对照组和氯化锂组(P均<0.05).结论氯化锂灌胃可改善S-ONFH大鼠股骨头微观结构,对股骨头具有一定保护作用.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)016【总页数】4页(P16-19)【关键词】激素性股骨头坏死;氯化锂;骨量;骨微观结构;大鼠【作者】李云矗;孙平;徐刚;徐成福【作者单位】牡丹江医学院,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院;牡丹江医学院红旗医院【正文语种】中文【中图分类】R681.8激素性股骨头坏死(S-ONFH)是由于长期应用激素类药物而导致的、以股骨头塌陷为特征的代谢性疾病,是临床公认的难治性骨科疾病[1,2]。
氯化锂对培养人胎胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的作用
氯化锂对培养人胎胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的作用张 红,廖二元,伍汉文,胡 敏(中南大学湘雅二医院内分泌所,长沙410011)[关键词] 锂; 胰岛细胞培养; DNA合成; 胰岛素[中图分类号] R587 1 [文献标识码] B [文章编号] 1000 5625(2001)04 0395 02微元量素锂对糖代谢的影响尚未完全明了。
1924年, Weiss等曾报道用锂盐治疗糖尿病可改善糖耐量,嗣后,关于锂盐与糖尿病、糖代谢关系的报道逐渐增多。
Rossetti等认为,锂具有胰岛素样作用,并可改善胰岛素敏感性[1]。
胡敏等[2]观察小剂量6个月的锂处理能改善糖尿病中国地鼠糖代谢,而锂对胰岛素合成与分泌的作用意见不一。
锂能减少中国地鼠胰岛 细胞内胰岛素(原)合成,抑制葡萄糖、D860等刺激的大鼠胰腺胰岛素释放;有人认为,锂不能增加单个胰岛细胞胰岛素合成与分泌,但可促进培养的胎鼠胰岛细胞DNA的复制,使胰岛素合成与分泌增加[3]。
锂对人胎胰岛细胞胰岛未释放的作用尚未见报道。
为了进一步探讨微元素锂对胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的作用,本研究用氯化锂处理培养的人胎胰岛细胞来观察锂对人胎胰岛细胞胰岛素释放及DNA合成的影响。
1 材料和方法1 1 材料 V型胶原酶、钾通道阻滞剂Mastoparan和单克隆鼠抗人胰岛素抗体购自Sigma公司,RPMI 1640培养基购自美国Life Technology公司;小牛血清购自杭州四季青生物制品公司;胰岛素放射免疫测定试剂盒购自华西糖尿病科技开发研究所;鼠抗人IgG,羊抗人FITC荧光标记抗体购自北京军科院微生物流行病研究室;氯化锂(分析纯)购自北京化工厂;葡萄糖、茶硷购自上海试剂二厂;24孔培养板购自丹麦Nunc公司。
1 2 方法1 2 1 人胎盘脐带血清的制备 按照陈瑞铭等报道的方法制备[4],标本于-20 贮存备用。
1 2 2 胰岛细胞分离和培养 按胡远峰等报道的方法[5]进行胰岛细胞分离与培养。
氯化锂通过TGFBI促进角膜基质成纤维细胞增殖和自噬
氯化锂通过TGFBI促进角膜基质成纤维细胞增殖和自噬聂丹瑶; 黎明; 叶琳; 贺温玲; 刘欣华【期刊名称】《《国际眼科杂志》》【年(卷),期】2019(019)011【总页数】4页(P1840-1843)【关键词】角膜营养不良; TGFBI; 氯化锂; 细胞增殖; 自噬【作者】聂丹瑶; 黎明; 叶琳; 贺温玲; 刘欣华【作者单位】518040 中国广东省深圳市眼科医院深圳眼科学重点实验室深圳大学眼视光学院【正文语种】中文0引言颗粒状角膜营养不良(granular corneal dystrophy,GCD)是临床常见的角膜营养不良之一,属于常染色体显性遗传病,其发病率约为5.52/10000。
由于5q31染色体上的转化生长因子-β(TGFBI)基因发生突变,使得TGFBI蛋白(TGFBIp)在角膜基质层和弹力层聚集,并发生代谢障碍,导致患者双侧角膜出现混浊,最终造成视力损害[1]。
在GCD早期,尚无有效的治疗或缓解方法[2]。
随着GCD病情的恶化,可以采用手术方法来切除病变组织,包括板层角膜移植术和准分子激光角膜切削术[3],但由于术后复发甚至加重的原因,其效果并不理想。
因此,积极探索新的治疗靶点将会有良好的应用前景。
研究表明,TGFBI突变与GCD的发生密切相关。
TGFBI在细胞增殖、分化、迁移和粘附等方面具有重要作用[4],但TGFBI在GCD 中具体的功能和机制还不完全清楚。
氯化锂(lithium chloride,LiCl)作为药物广泛应用于精神和神经系统疾病的治疗[5]。
研究表明,LiCl可抑制TGFBI的表达,并增加角膜成纤维细胞和癌细胞中糖原合成酶激酶-3 (Glycogen synthase kinase-3, GSK-3)与微管相关蛋白轻链3(LC3)的比例[6]。
本研究进一步探讨LiCl在突变型TGFBI转染的角膜基质成纤维细胞中的功能及相关机制,期待未来可为角膜营养不良患者的药物治疗提供实验依据。
氯化锂联合淫羊藿苷对成骨细胞增殖分化的影响
氯化锂联合淫羊藿苷对成骨细胞增殖分化的影响付殷; 孙贵才; 欧阳玉龙; 温浙旭【期刊名称】《《中国骨质疏松杂志》》【年(卷),期】2019(025)009【总页数】5页(P1221-1225)【关键词】氯化锂; 淫羊藿苷; 成骨细胞; Wnt信号通路【作者】付殷; 孙贵才; 欧阳玉龙; 温浙旭【作者单位】黑龙江中医药大学中药学博士后流动工作站黑龙江哈尔滨150000; 南昌大学第四附属医院骨科江西南昌330003【正文语种】中文【中图分类】R965淫羊藿苷(ICA)是中药淫羊藿的有效成分。
淫羊藿为小檗科多年生草本植物,归肝、肾经,性温,味辛、甘。
《本草纲目》记录了淫羊藿其有“益精气、坚筋骨、实腰膝心力”的效果。
淫羊藿苷是从淫羊藿属植物中分离得到的黄酮醇苷类化合物[1]。
对治疗骨质疏松症类疾病效果显著且不良反应小。
淫羊藿及淫羊藿提取物通过对骨髓间充质干细胞诱导作用来激活成骨细胞的增殖分化及抑制破骨细胞的作用来促进骨的形成、抑制骨吸收,构建骨的平衡,进而有效地防治骨质疏松的发生发展[2]。
淫羊藿苷的分子机制已经证明其抗骨质疏松和成骨分化作用[3-4]以及其参与雌激素生物合成。
临床应用锂于治疗造血系统疾病和双极性疾病已经有数十年[5]。
越来越多的证据表明,锂能够刺激干细胞增殖,认为其是细胞治疗机制之一[6]。
研究人员已经提出,锂可以直接刺激骨髓间充质干细胞的增殖[7]。
本研究意义在于尝试联合应用氯化锂与淫羊藿苷能否提高成骨细胞增殖及分化作用。
1 材料和方法1.1 实验动物出生72 h的SD乳鼠,由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。
动物合格证编号为SCXK黑2015004。
1.2 材料淫羊藿苷(meilunbio,中国),LiCl(Sigma, 美国),胎牛血清、DMEM培养基、青霉素-链霉素混合液和胰酶(Hyclone, 美国),CCK8(同仁,日本),GSK3β、p-GSK3β、β- catenin、GAPDH抗体购于Abcam公司,维生素C、β-甘油磷酸钠、地塞米松(Sigma,美国)。
角质细胞生长因子及氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中的信号通路
角质细胞生长因子及氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中的信号通路杨斌;邓立欢;李秉航;吴小莹;丁榆德;董雪【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2014(000)019【摘要】BACKGROUND:The proliferation and differentiation of hair-folicle-generating stem cels are influenced by the joint action of their own genes and external signals. Wnt/β-catenin signaling pathway plays an important role in the development of hair folicles, but the detailed mechanisms are not yet clear. <br> OBJECTIVE:To investigate, with interruption of keratinocyte growth factor and lithium chloride, thefu nction and the interrelationship of Wnt/β-catenin signaling pathway with other signal factors when human hair-folicle-generating stem cels differentiate into dermal papila cels or epidermal cels. <br> METHODS: Hair-folicle-generating stem cels were isolated from the bulge and cultivated. Then the growth curve of hair-folicle-generating stem cels was tested and formed in order to observe the cellproliferation ability cultivated at different densities (1×106/L, 1×107/L, 1×108/L, 1×109/L) at each time. Immunoflurorescene staining was performed to identify hair-folicle-generating stem cels and their differentiated cels. Lithium chloride (0, 0.5, 1.5, 10, 25 mmol/L individualy) and keratinocyte growth factor(0, 10, 25, 50, 100 μg/L individualy) were used to induce the differentiation ofhair-folicle-generating stem cels. Then, we contrasted and analyzed the proliferation ability in each case, thereby investigating the most appropriate concentration of keratinocyte growth factor and lithium chloride to spur the differentiation of hair-folicle-generating stem cels. At days 3, 5, 7 and 9, we tested and compared the mRNA expressions of β-catenin, APC, GSK-3β, Axin and Lef1 from cels in control group, 10 mmol/L lithium chloride group and 10 μg/L keratinocyte growth factor group. <br> RESULTS AND CONCLUSION:Isolating cultured hair-folicle-generating stem cels stil had a great reproductive activity and multi-lineage potential even after various times subculturein vitro. With higher lithium chloride concentration, the proliferation ability of hair-folicle-generating stem cels declined; while it increased when keratinocyte growth factor concentration increased. In K-SFM medium which contained lithium chloride, the transformation of hair-folicle-generating stem cels was obvious, showing distinct differences among groups. Especialy, the level ofβ-catenin reached the peak when lithium chloride > 10 mmol/L. However, in K-SFM medium which contained keratinocyte growth factor, hair-folicle-generating stem cels differentiated in to epidermal cels and the level of β-catenin changed slightly. We found that, while spurring the differentiation of hair-folicle-generating stem cels, lithium chloride could activate Wnt/β-catenin signal pathway and inhibit GSK-3β, a vital component of deg radation compound. This facilitated β-catenin expressing in the cytoplasm to translocate intothe nucleus. As a result, the transcription of target gene increased. It is the most appropriate concentration to spur hair-folicle-generating stem celsdifferentiation when lithium chloride level is > 10 mmol/L, but the proliferation ability declines correspondingly. Keratinocyte growth factor, which can facilitate hair-folicle-generating stem cels differentiated into epidermal cels, is a key factor to accelerate proliferation ability and migration of hair-folicle-generating stem cels, re-epithelialization and healing of wound. The mechanisms of hair-folicle-generating stem cels oriented differentiation induced by lithium chloride and keratinocyte growth factor are activating Wnt/β-catenin signal pathway, inducing change of β-catenin expression, and activating the transcription of target gene related to Wnt/β-catenin signaling pathway .%背景:毛囊干细胞的增殖分化受到自身基因及外来信号的共同作用,Wnt/β-catenin信号通路在毛囊毛发发育中起重要作用,但详细机制尚未明确。
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收稿日期:2012-08-09基金项目:国家自然科学基金资助项目(81071253;31170912;31030033)国家重点基础研究发展计划项目(973计划)(2010CB944800)作者简介:安莹(1987-),女,汉族,陕西乾县人。
硕士生(导师:陈发明、金岩)通讯作者:陈发明,E -mail :cfmsunhh@fmmu.edu.cn 金岩,E -mail :yanjin@fmmu.edu.cn 氯化锂对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响安莹,高丽娜,杨昊,张璟,李蓓,刘玲侠,陈发明,金岩(第四军医大学口腔医学院,陕西西安710032)[摘要]目的:探讨Wnt /β-catenin 通路激活剂—氯化锂(lithium chloride ,LiCl )对体外培养的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells ,hPDLSCs )增殖和成骨分化的影响。
方法:低密度多克隆法分离培养人PDLSCs ,分别与不同浓度的LiCl (5、10、20、40mmol /L )共同培养。
分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ,ALP )活性、钙化结节形成量以及Col-1、OCN 、Runx-2等成骨相关基因的表达水平。
结果:LiCl 无促细胞增殖作用,且高浓度LiCl 能明显抑制细胞的增殖。
浓度为5mmol /L 的LiCl 可促进hP-DLSCs 成骨性分化,表现为提高细胞的ALP 活性、促进钙化结节的形成、上调Col-1、OCN 、Runx-2的mRNA 表达水平,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P <0.05)。
而高浓度(≥10mmol /L )LiCl 则对成骨分化具有抑制作用。
结论:终浓度为5mmol /L 的LiCl 可明显促进hPDLSCs 的成骨分化。
[关键词]氯化锂;牙周膜干细胞;增殖;分化[中图分类号]R780.2[文献标识码]A[文章编号]1005-2593(2013)01-0012-05[牙体牙髓牙周病学杂志,2013,23(1):12]Effects of lithium chloride on the proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cellsAN Ying ,GAO Li-na ,YANG Hao ,ZHANG Jing ,LI Bei ,LIU Ling-xia ,CHEN Fa-ming ,JIN Yan(School of Stomatology ,The Fourth Military Medical University ,Xi'an 710032,China )[Abstract ]AIM :To investigate the effects of lithium chloride (LiCl ),a Wnt /β-catenin pathway activator ,on the proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs )in vitro.METHODS :hPDLSCs were cultured as reported in the literature.The cells of passage 3(P3)were cultured in normal medium (for cell proliferation assay )or osteogenic medium (for osteogenic differentiation assay )containing LiCl at 5,10,20,and 40mmol /L ,respectively ,while the medium without LiCl served as the control.The cell proliferation was assayed by MTT method ,while the osteogenic differentiation markers including alkaline phosphatase (ALP )activity ,the quantity of calcified nodules ,and the gene expression of Col-1,OCN ,and Runx-2were evaluated and quantified.RESULTS :LiCl inbibited hPDLSCs proliferation in a dose and time -dependent manner.LiCl at 5mmol /L increased the ALP activity (P <0.05)and the amount of calcified nodules ,enhanced the mRNA levels of Col-1,OCN and Runx-2in hPDLSCs (P <0.5);While LiCl at 10and 20mmol /L decreased ALP activity ,cafcified nodules and mR-NA levels of Col-1,OCN and Runx-2in the cells (P <0.05).CONCLUSION :LiCl at 5mmol /L can promote os-teogenic differentiation of hPDLSCs.[Key words ]lithium chloride ;periodontal ligament stem cells ;proliferation ;differentiation [Chinese Journal of Conservative Dentistry ,2013,23(1):12]·21·牙体牙髓牙周病学杂志(Chin J Conserv Dent )2013,23(1)DOI:10.15956/ki.chin.j.conserv.dent.2013.01.005人牙周膜是牙根与牙槽骨之间的一层结缔组织,是重要的牙周支持组织,主要由牙周膜细胞、成牙骨质细胞和一些未分化的间充质细胞组成[1]。
牙周膜细胞(Periodontal ligament cells)作为牙周膜的主体细胞,其间含有一定数量的未分化的前体细胞和牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),在牙周组织重建、再生修复过程中起着重要的作用[2]。
Wnt/β-catenin通路是Wnt信号转导的4条通路之一,在细胞活化、粘附、增殖中具有重要作用,尤其对前体干细胞的成骨分化起着重要的调控作用[3]。
本研究通过观察Wnt/β-catenin 通路激活剂—氯化锂(LiCl)对人PDLSCs生物学性能的影响,为进一步探讨该通路的激活对PDLSCs影响的相关作用机制提供数据资料。
1材料和方法1.1主要材料和设备2.5g/L胰蛋白酶(Amresco,美国);α-MEM 培养基、L-谷氨酰胺、青、链霉素(Gibco,美国);胎牛血清(FBS,杭州四季青公司);Ⅰ型胶原酶、维生素C、地塞米松、β-甘油磷酸钠、二甲基亚砜DM-SO、MTT、茜素红、油红O、LiCl(Sigma,美国);CO2孵箱(Heraeus,德国);YJ-875型超静工作台(苏州净化设备厂);倒置相差显微镜及照相系统(O-lympus,日本);6孔培养板、平底96孔板(Falcon,美国);超声震荡仪(上海生源器械厂);酶联免疫检测仪(BIO-TEK,美国);紫外线分光光度仪(Ep-pendorf,德国);碱性磷酸酶测定试剂盒(南京建成)。
1.2牙周膜干细胞(PDLSCs)的分离培养和鉴定1.2.1PDLSCs分离和培养[4]收集我院颌面外科门诊因正畸减数或阻生新鲜拔除的健康第三磨牙或第一前磨牙共10个(无牙体、牙周病),分别来自6名15 30岁身体健康的志愿者。
牙齿拔出后立即用0.01mol/L的PBS 冲洗3遍,无菌条件下用锐利刀片刮取根中1/3区域的牙周膜组织,并剪成1mm3大小的组织块;PBS 冲洗并经800r/min离心后,加入I型胶原酶2mL,37ħ培养箱内消化15min;终止消化并离心后,将组织块以1mm间距平整放于6孔板中,上置盖玻片,滴加含100mL/L FBS的α-MEM培养液,37ħ、50mL/L CO2、饱和湿度条件下培养。
每隔3d换液,待细胞从组织块边缘爬出并生长汇合达80%时,用低密度多克隆法筛选培养PDLSCs,待克隆长至1/2后消化,扩大培养。
1.2.2PDLSCs生长曲线的测定取克隆化培养的第3代PDLSCs消化制成细胞悬液,以2ˑ103个接种于96孔板,每孔加200μL含100mL/L FBS的α-MEM培养液,于37ħ培养箱中进行培养,每3d换液。
每天取一组细胞(5孔),每孔加入5mg/mL MTT20μL,孵箱中孵育4h后吸除培养液,加入150μL DMSO,震荡器震荡10min,用酶联免疫检测仪检测490nm 波长处的吸光度(OD)值并绘制生长曲线。
1.2.3PDLSCs成骨成脂能力的鉴定取克隆化培养的第3代PDLSCs消化制成细胞悬液,以5ˑ104/mL的密度接种于6孔板,于37ħ培养箱中进行培养。
待细胞扩增至80%左右时,更换矿化诱导液(含10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/mL维生素C、1ˑ10-8moL/L地塞米松、50mL/L FBS的α-MEM培养液)继续培养,3d换液。
4周后,镜下可看到有矿化结节形成时,吸除培养液,PBS清洗3次,40g/L多聚甲醛固定30min,茜素红室温染色20min,清洗3遍,镜下观察。
将上述第3代PDLSCs消化制成细胞悬液,以5ˑ104/mL的密度接种于6孔板,于37ħ培养箱中进行培养。
待细胞扩增至85%左右时,更换成脂诱导液(含1μmol/L DEC、0.5mmol/L IBMX、10rng/L BPE、100mmol/L Indomethacin、100mL/L FBS的α-MEM培养液)继续培养,3d换液。
3周后,镜下可看到有脂滴状物质形成时,吸除培养液,PBS清洗3次,40g/L多聚甲醛固定30min,油红0室温染色15min,清洗3遍,镜下观察。