毛诃子提取物对小鼠肝损伤的保护作用_包艳芳

收稿日期：2015-05-24；修订日期：2015-11-28基金项目：中国博士后科学基金（No．20090460744）作者简介：包艳芳（1989-），女（汉族），甘肃定西人，兰州大学生命科学学院在读硕士研究生，主要从事中药的抗氧化研究工作．*通讯作者简介：李红玉（1964-），男（汉族），甘肃兰州人，兰州大学生命科学学院教授，博士学位，主要从事中药的发现和新用途研究工作．毛诃子提取物对小鼠肝损伤的保护作用包艳芳1，马晓艳2，郑丽芳2，李红玉1*（1．兰州大学生命科学学院，甘肃兰州730000；2．兰州大学药学院，甘肃兰州730020）摘要：目的研究毛诃子提取物对四氯化碳（CCl 4）和异烟肼（INH ）诱导的肝损伤的保护作用。

方法给药2000，4000mg /kg ，72h 内观察小鼠中毒迹象和死亡数；建立CCl 4对小鼠肝损伤模型，检测毛诃子提取物对血清丙氨酸氨基转移酶（ALT ）、门冬氨酸氨基转移酶（AST ）、肝匀浆总超氧化物歧化酶（T －SOD ）的影响；建立INH 对小鼠肝损伤模型，检测肝匀浆T －SOD 活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH －Px ）活性、丙二醛（MDA ）含量，进行组织病理学分析。

结果给药2000mg /kg ，72h 内小鼠无异常反应；毛诃子提取物明显降低了CCl 4肝损伤小鼠血清ALT 、AST 活性，提高了肝脏T －SOD 活性；该提取物明显提高了INH 肝损伤血清T －SOD 活性和肝脏GSH －Px 活性，降低了肝脏MDA 含量，减少了异烟肼对肝脏的破坏。

结论毛诃子提取物毒性小，具有一定肝保护作用，它可以和异烟肼联用，减少其对肝脏的损伤。

关键词：毛诃子；抗氧化；藏药；肝损伤DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2016．02．030中图分类号：Ｒ285．5文献标识码：A 文章编号：1008-0805（2016）02-0342-04Hepatoprotective effects of the extract of Terminalia billerica （Gaertn．）Ｒoxb．on miceBAO Y an-fang 1，MA X iao-yan 2，ZHENG L i-fang 2，LI H ong-yu 1*（1．School of Life Sciences ，Lanzhou University ，Lanzhou 730000，China ；2．School of Pharmacy ，Lanzhou U-niversity ，Lanzhou 730020，China ）Abstract ：Objective In this study ，the hepatoprotective effect of the extract of Terminalia billerica （Gaertn．）Ｒoxb．on Kun-ming mice was investigated．Methods Graded doses of the extract （2000and 4000mg /kg ）were administered to mice ，animals were observed for symptoms of toxicity and mortality for 72h ；The carbon tetrachloride （CCl 4）was used to induce the liver injury in mice ，the levels of alanine aminotransferase （ALT ）and aspartate aminotransferase （AST ）in serum and the activities of total superoxide dismutase （T －SOD ）in liver homogenates were examined ；The isoniazide （INH ）was also used to induce the liver in-jury in mice ，the activities of T －SOD ，glutathion peroxidase （GSH －Px ）and the concentrations of MDA in liver homogenates were determined ，and a histopathological analysis was performed．Ｒesults The results showed that animals injected and adminis-tered orally with extract did not exhibit any symptoms of toxicity and mortality when dosed at 2000mg /kg ；The extract could re-duce the ALT and AST levels in serum of mice with CCl 4－induced liver injury ，enhance T －SOD activities in the liver tissue ；And the extract could also increase T －SOD ，GSH －Px activities ，decrease the MDA concentration in the liver tissue with INH －induced liver injury ，and finally decrease the INH damage to liver tissue．Conclusion The Terminalia billerica （Gaertn．）Ｒoxb．extract with low toxicity has hepatoprotective effects on mice．It could be administered in combination with INH to reduce the INH －induced liver injury．Key words ：Terminalia billerica （Gaertn．）Ｒoxb．；Antioxidant ；Tibetan medicine ；liver damage毛诃子是一种藏药，以君子科植物毗黎勒的果实入药，主要功能为“清热解毒，收敛养血，调和诸药”［1］，治“培根病”“赤巴病”以及“黄水病”等［2］，它被用于许多古方中，也是治疗肝脏疾病“二十五味松石丸”中的一味药。

近年的研究发现它对疟疾［3］、糖尿病［4］、癌症［5］等都有功效，但是关于其对药物性肝脏损伤的保护作用尚未见报道。

另一方面，研究发现，许多肝脏疾病和自由基（ＲOS ）相关，药物性肝损伤是其中的一种［6 8］，而抗氧化剂可以清除ＲOS ，从而预防或减轻这些疾病。

因为特殊的生长坏境，近年的研究发现许多藏药有很好的抗氧化活性［9］。

因此，本研究建立四氯化碳（CCl 4）和异烟肼（INH ）对小鼠的药物性肝损伤模型，测定了毛诃子提取物对小鼠体内抗氧化相关酶的影响，旨在对毛诃子提取物保肝活性和抗氧化活性进行研究，以期为其生物活性的研究、筛选抗氧化药物提供理论依据。

1材料与仪器1．1动物清洁级昆明小鼠雌雄各半，由兰州大学实验动物中心提供。

1．2药物与试剂毛诃子Terminalia billerica （Gaertn．）Ｒoxb．（TBＲ）原药材购自青海西宁市“八一路藏药市场”，经兰州大学药学院教师李建银鉴定；水飞蓟宾胶囊（Silibinin Capsules ，SC ，天津天士力制药股份有限公司，批准文号：国药准字H20040299）；CCL 4（分析纯，天津市百世化工有限公司）；橄榄油（益海嘉里食品营销有限公司）；MDA 、AST 、ALT 、T －SOD 、GSH －PX 、考马斯亮蓝试剂盒（生产厂家：南京建成生物工程研究所，生产批号：MDA ：20120920，MST /GOT ：20120918，MLT /GPT ：20120901，T －SOD ：20120903，GSH －Px ：20120920，考马斯亮蓝：20120808）。

1．3仪器分析天平（T2A00B ，上海精密科学仪器有限公司）；调温型电热套（MH－100，北京科伟永兴仪器有限公司）；循环式多用真空泵（SHB－III，郑州科工贸有限公司）；电热恒温水浴锅（GSY－II，北京市医疗设备厂）；低温超速离心机（z36HK，Herm-le）；低温冷冻干燥机（LABCONCO）；紫外分光光度计（PerkinElmer）；可调式电热板（ML－1．8－4，北京市科伟永兴仪器有限公司），电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司），超声清洗器（KQ5200B，昆山市超声仪器有限公司），pH计（PHS －3C，上海雷磁）。

2方法2．1提取物的制备粉碎的毛诃子粉末准确称取50g，于圆底烧瓶中按1ʒ10加入蒸馏水，加热煮沸2h。

待冷却后，用两层纱布过滤，取滤液，药渣再按1：5提取一次，取滤液。

滤液于4ħ、5000 r/min离心15min，取上清。

将如上方法提取的水提液置于烧杯中，加热，浓缩，分装浓缩冷冻干燥24h，取出后迅速封装于青霉素瓶中，封口膜封口，保存。

2．2毛诃子急性毒性实验［10，11］取12只昆明小鼠，雌雄各半，分两组为灌胃组和腹腔注射组，每组六雌六雄。

在禁食一夜后，分别灌胃和腹腔注射毛诃子2000，4000mg/kg体重，记录24，48，72h小鼠体重的变化，观察其各种生物学反应（运动量、体重、腹腔刺激、呼吸、腹泻、震颤、死亡）情况。

2．3毛诃子对CCl4诱导的肝损伤的保护2．3．1动物分组和实验处理购买56只昆明小鼠，体重（20ʃ2）g，雌雄各半，每笼中放四只，培养条件温度（25ʃ1）ħ、相对湿度为30% 60%、光照12h、黑暗12h，自由进食和水。

总分7组，每组8只，雌雄各半。

第1组为空白对照，前6天给0．2mL生理盐水；第2组为毒性对照组，在注射CCl4之前六天内也注射0．2 mL无菌蒸馏水，第3组为SC对照组，在前六天注射SC（成人给药量每天140mg）100mg/kg；第4、第5、第6组每天分别给予毛诃子提取物100，200，400mg/kg，共6天。

第6天，在给完药两小时后，分别给2、3、4、5、6组腹腔注射CCl410mL/kg（10%CCl4溶于橄榄油中），第1组对照组给予相同量的橄榄油。