不同低氧浓度预处理对人脐带间充质干细胞抗凋亡能力的影响

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间充质干细胞及其迁移的研究进展

临床医学研究与实践2021年2月第6卷第6期综述DOI :10.19347/ki.2096-1413.202106064基金项目：国家自然科学基金委员会资助项目（No.81903949）；浙江省基础公益研究计划项目（No.LQ19H290004）。

作者简介：戚亚钦（1999-），女，汉族，浙江绍兴人。

研究方向：临床医学。

*通讯作者：方燕，E -mail :fangyan@.间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs ）是具有自我更新能力并表现出多向分化潜能的成体非造血干细胞，广泛存在于骨髓、脂肪、外周血、脐带、胎儿组织、肌肉等中。

MSCs 具有来源丰富、获取方便、增殖率高等特点，已成为组织工程和临床研究的理想种子细胞[1]。

近年来，随着国内外对MSCS 的研究越来越深入，以MSCs 为基础的细胞移植替代治疗显现出良好的效果，MSCs 在临床试验中的安全性和有效性也已得到了更好的证明[2]。

1MSCs 的临床应用1.1MSCs 在神经系统疾病中的临床研究与应用目前，许多神经系统疾病如缺血、缺氧性脑病、恶性脑胶质瘤、神经系统退行性病变等仍无有效治疗方法，预后较差。

脑缺血后神经元的坏死将导致永久性神经功能缺陷，现有治疗手段尚不能逆转神经元和神经胶质细胞变性引起的神经功能障碍[3]。

MSCs 通过旁分泌作用，增加神经生长因子和脑源性神经营养因子的释放，促进神经障碍中丢失或损坏的神经元的恢复，减少神经元细胞的凋亡[4]。

MSCs 还可通过增加血管生成因子的分泌，促进病灶区新生血管生成；通过抑制血管内皮的凋亡和氧化应激，减少血管炎性损伤，增加脑血管的完整性[5]。

Xu 等[6]通过建立缺血缺氧性脑病的大鼠模型，证实MSCs 的脑内移植可减小脑梗塞体积，有效改善神经损伤，进而改善大鼠运动功能，为临床进一步研究提供实验依据。

但研究发现，缺血区局部不利的微环境使得能够迁移并存活在损伤区的MSCs 数量很少，严重限制了MSCs 的应用前景[7]。

RIC综述

减低预处理强度的脐血移植在成人患者中的应用【摘要】减低强度（RIC）预处理方案现已在脐血移植中得到广泛应用。

研究减低强度预处理方案是为了减少成人造血干细胞移植后的移植相关发病率及死亡率，现在它已被大部分人所接受。

RIC-UCBT实验的结果显示脐血的植入时间缩短了，从12天到24天不等，而移植相关死亡率（TRM）却并不高于清髓性UCBT。

尽管减低了预处理强度，但移植后恶性疾病复发的发生率却没有明显升高的趋势。

本文将回顾多个RIC-UCBT实验的研究结果，与清髓性UCBT进行比较，讨论RIC-UCBT的潜在植入率，并且提出RIC-UCBT的最佳治疗策略。

【关键词】减低强度预处理，脐血，成人【介绍】与亲缘或非亲缘的成人供体干细胞移植的基本原理相似，在成人及脐带血造血干细胞移植中应用减低强度预处理方案的主要原因是其可能减少骨髓抑制相关发病率及死亡率。

预处理强度不足从而影响干细胞植入一直是最受关注的问题，这种担心也阻碍了这项技术的广泛应用，尤其是在造血干细胞数量较少的脐血移植中。

这种担心被证明在很大程度上是杞人忧天，并且RIC方案在UCBT 中也已得到了逐步的应用。

本文中我们将回顾RIC方案的基本原理及RIC方案移植的主要成果。

作为一个工作定义，我们使用RIC去代表强度低于传统骨髓预处理方案的所有方案。

1、临床实验在移植物中的T反应细胞足以影响供体植入这一假说的基础上，Baker等人在成人RIC移植患者中进行了一项大样本先导实验。

在剂量逐级减低的治疗方案下，应用Flu+TBI（200 cGy）+BU（8mg/kg 总数，n=21）/CY（50mg/kg，n=22）来治疗43名患者。

超过一半的患者接受了双份脐血移植，并且所有的患者均使用环孢素及MMF进行GVHD预防性治疗。

几乎所有的脐血HLA不合均≤2/6位点，且注射的CD34+细胞中位细胞数BU组是3.7105/kg，CY组是4.3105/kg。

虽然两组的早期植入率相近（分别是88%和94%），但只在BU组中出现了移植物排斥，其移植后42天的长期植入率仅为76%，相比之下，CY组长期植入率则达到94%（P＜0.01）。

TNF-α预处理脐血间充质干细胞移植心肌梗死大鼠心功能影响

TNF-α预处理脐血间充质干细胞移植心肌梗死大鼠心功能影响樊志刚;刘芳【摘要】目的：研究肿瘤坏死因子（TNF-α）预处理的脐血间充质干细胞（HUMSC）血管细胞黏附分子-1的表达及其对心肌梗死大鼠心功能的影响。

方法：实验组取第3代HUMSC用TNF-α（10 ng/mL)预处理24 h后，迁移黏附实验检测其体外迁移黏附能力，Western blot检测VCAM-1蛋白表达；对照组不用TNF-α处理。

动物实验分为实验组（注射TNF-α预处理HUMSC）和对照组（注射HUMSC），取第3代HUMSC移植于心肌梗死大鼠的心肌内3周后，二维超声心动图检测大鼠左心室心功能。

结果：与对照组比较，实验组体外迁移黏附力明显增强(P<0.05)；黏附分子VCAM-1的蛋白表达水平显著升高( P<0.05)；左心室射血分数明显提高( P<0.05)。

结论：移植T N F-α预处理的HUMSC更能明显改善大鼠心功能，其机制可能与TNF-α提高HUMSC黏附分子VCAM-1的蛋白表达水平相关。

【期刊名称】《现代仪器与医疗》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】5页(P4-7,18)【关键词】肿瘤坏死因子-α;脐血间充质干细胞;黏附分子【作者】樊志刚;刘芳【作者单位】河南医学高等专科学校，河南郑州451191;河南医学高等专科学校，河南郑州 451191【正文语种】中文【中图分类】R332每年全球约有1700万人死于心血管病，其中占总数1/2患者死于急性心肌梗死（AMI）[1]。

过去30年中，MI病死率(30 d内)虽然已降至10% ，但年病死率仍为20% 左右[2]。

目前，MI治疗方法以药物、介入和外科手术为主，这些方法可解除血管阻塞，缓解心室重构，延缓和改善心功能恶化及心律失常发生，但无法逆转坏死心肌，使已梗死心肌细胞再生。

而干细胞治疗给人们带来了新希望。

MSC具有多向分化潜能、支持和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离、培养时操作简便等特点[3]。

RIC综述

减低预处理强度的脐血移植在成人患者中的应用【摘要】减低强度（RIC）预处理方案现已在脐血移植中得到广泛应用。

研究减低强度预处理方案是为了减少成人造血干细胞移植后的移植相关发病率及死亡率，现在它已被大部分人所接受。

RIC-UCBT实验的结果显示脐血的植入时间缩短了，从12天到24天不等，而移植相关死亡率（TRM）却并不高于清髓性UCBT。

尽管减低了预处理强度，但移植后恶性疾病复发的发生率却没有明显升高的趋势。

本文将回顾多个RIC-UCBT实验的研究结果，与清髓性UCBT进行比较，讨论RIC-UCBT的潜在植入率，并且提出RIC-UCBT的最佳治疗策略。

预处理强度不足从而影响干细胞植入一直是最受关注的问题，这种担心也阻碍了这项技术的广泛应用，尤其是在造血干细胞数量较少的脐血移植中。

这种担心被证明在很大程度上是杞人忧天，并且RIC方案在UCBT 中也已得到了逐步的应用。

本文中我们将回顾RIC方案的基本原理及RIC方案移植的主要成果。

作为一个工作定义，我们使用RIC去代表强度低于传统骨髓预处理方案的所有方案。

1、临床实验在移植物中的T反应细胞足以影响供体植入这一假说的基础上，Baker等人在成人RIC移植患者中进行了一项大样本先导实验。

在剂量逐级减低的治疗方案下，应用Flu+TBI（200 cGy）+BU（8mg/kg 总数，n=21）/CY（50mg/kg，n=22）来治疗43名患者。

超过一半的患者接受了双份脐血移植，并且所有的患者均使用环孢素及MMF进行GVHD预防性治疗。

几乎所有的脐血HLA不合均≤2/6位点，且注射的CD34+细胞中位细胞数BU组是3.7105/kg，CY组是4.3105/kg。

临床研究用人间充质干细胞质量评价

临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。

在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。

然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。

本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。

二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。

纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。

2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。

3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。

因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。

4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。

例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。

同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。

三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。

2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。

3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。

4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。

5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。

6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。

四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。

通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。

脐带来源间充质干细胞的免疫抑制功能研究

前持评件耐觅 Drug Evaluation Research 第43卷第12期2020年12月• 2385 ・脐带来源间充质干细胞的免疫抑制功能研究杨莹，李政楠，王秀娟，李伟，牟春琳，金星，徐永胜•天津长和生物技术有限公司，天津301925摘要：目的观察人源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对异体总淋巴细胞和不同淋巴细胞亚群增殖能力的影响，以及对细胞因子分泌的影响。

方法分离并培养hUC-MSCs 及健康成人外周血淋巴细胞，以淋巴细胞为阴性对照，MTT 法检测共培养(淋巴细胞：hUC-MSCs 为1：0.5、1 ： 1、1 ： 5、1 ： 10) 3 d 后淋巴细胞的增殖情况；流式细胞仪检测共培养体系中 CD4 CD25 FOXP3\ CD3 CD16* C D56\ CD4 CD45RA CCR7*的细胞比例；ELISA 法检测白细胞介素(IL) -2、IL-4、IL-10、 Y-干扰素(INF-?)细胞因子分泌情况。

结果与阴性对照组比较，hUC-MSCs 对淋巴细胞的增殖具有显著抑制作用(P< 0.05),抑制效果随数量增加而增强；hUC-MSCs 能够显著增加共培养体系中CD4CD25FOXP3*细胞比例(PV0.05),显著降低CD4*C D45RA'CCR7‘细胞比例(PV0.05),对CD3 CD16 CD56*细胞比例无显著影响；hUC-MSCs 能够显著降低IL-2、 IL-4、INF-y 水平，显著增加IL-10的分泌水平(P<0.05)。

结论hUC-MSCs 具有免疫抑制功能。

收稿日期：2020-09-11基金项目：国家重点研发计划"干细胞及转化研究"重点专项(2019YFA0112100)；天津市科技计划项目(17ZXXYSY00020)*通信作者：徐永胜 E-mail :***********************关键词：脐带间充质干细胞；淋巴细胞；免疫反应；细胞因子中图分类号：R329 文献标志码：A 文章编号：1674-6376 (2020) 12-2385-05DOI ： 10.7501/j.issn.l674-6376.2020.12.005Research on immunosuppressive function of umbilical cord mesenchymal stem cellsYANG Ying, LI Zhengnan, WANG Xiujuan, LI Wei, MU Chunlin, JIN Xing, XU Yongsheng Ever Union Biotechnology Company Limited, Tianjin 301925, ChinaAbstract: Objective To observe the effects of human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUC-MSCs) on the proliferation of allogeneic total lymphocytes and different lymphocyte subsets, as well as the secretion of cytokines. Methods hUC-MSCs and peripheral blood lymphocytes of healthy adults were isolated and cultured; MTT method was used to detect the proliferation of lymphocytes by after co-culture for 3 days; the proportion of CD4+CD25 FOXP3 ., CD3 CD16 CD56* and CD4 CD45RA CCR7 in the co-culture system was detected by flow cytometry; ELISA was used to detect the secretion of IL-2, IL-4, IL-10 and INF-y. Results hUC-MSCs could significant inhibit the proliferation of T lymphocytes, and the anti-proliferative effect was enhanced with the increase of the number of lymphocytes; the proportion of CD4 CD25 FOXP3 cells in co-culture system was increased by hUC- MSCs (P < 0.05); the proportion of CD4TD45RA +CCR7+ cells showed a downward tendency, and the difference was statistically significant (P < 0.05); however, there was no significant difference in CD3 CD16 CD56+ cells. hUC-MSCs could reduce the levels of IL-2, IL-4 and INF-y, but increase the secretion level of IL-10, and the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion HUC-MSCs had immunosuppressive function.Key words: umbilical cord mesenchymal stem cells; lymphocytes; immune response; cytokines间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs) 来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞，因其具有多向分化潜能⑴、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

缺氧情况下的线粒体自噬调节机制研究进展

缺氧情况下的线粒体自噬调节机制研究进展摘要】真核细胞会在基因干扰、营养缺乏、衰老、氧化应激和毒性环境性受损，细胞中由一种高度自律的“自食”程序负责处理相关异常细胞，其过程被称为自噬。

自噬能及时清除异常线粒体，并以此保证细胞的能量供应正常。

线粒体自噬的调节与细胞衰老、基因组稳定、肿瘤形成、缺血性病变等有关，本文尝试描述细胞在缺氧环境下所发生的线粒体自噬的相关调节机制。

【关键词】缺氧；自噬；线粒体自噬；缺氧诱导因子；动力相关蛋白【中图分类号】R54 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）12-0009-021.引言自噬这一概念时至今日，发展为指真核细胞的蛋白质、受损的线粒体、过氧化物酶体、核糖体、内质网、核内体、脂滴和病原体等[1]被溶酶体进行降解并再次利用的过程，有机体通过自噬来达到抵御不良环境及清除有害因子的目的。

目前的研究表明在酵母及哺乳动物中的过程及调节机制高度类似。

目前根据将胞浆底物运输至溶酶体的机制不同,可将自噬分为3类：分子伴侣介导自噬、微自噬、巨自噬。

其中巨自噬是自噬过程中最常见的一种，通常称呼的自噬即为巨自噬，其中包括重要的线粒体自噬。

本文尝试描述细胞在缺氧环境下所发生的线粒体自噬的相关调节机制。

1.1 ROS-HIF相关缺氧调节途径细胞因供氧不足导致线粒体电子传递受损，电子从氧化呼吸链中的NADH脱氢酶、琥珀酸脱氢酶中脱离，脱离的电子与氧气分子结合，生成了大量活性氧（ROS）。

ROS的大量生成能使HIF-1稳定，并促使其与HRE结合，并随后激活下游靶基因的转录[2]，过量的ROS生成会导致细胞膜的脂质过氧化损伤及DNA断裂[3]。

缺氧介导因子家族（HIFs）是机体维持氧稳态信号系统中关键的二聚体转录因子，均由α、β亚基构成，α亚基主要包括HIF-1α、HIF-2α、HIF3α这3个氧依赖亚基，β亚基即HIF-1β亚基，α亚基与β亚基结合成二聚体结构时即HIF-1、HIF-2和HIF3[4]。

临床研究用人间充质干细胞质量检验规范-讨论版

临床研究用人间充质干细胞质量评价规范（讨论稿）前言人间充质干细胞(human MSCs, hMSCs)是一类具有一定的自我复制更新和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于胎儿和成人各组织中，如骨髓、脂肪、皮肤、牙髓、肌腱，以及新生儿附属组织，如脐带、胎盘、羊膜等等组织。

除一定程度的分化潜能外，hMSCs还具有独特的免疫调控和组织再生功能，参与调控异常免疫反应、维护免疫平衡，帮助机体形成有利于病损组织细胞修复或再生的微环境，以促进损伤组织细胞的修复或再生。

hMSCs独特的生物学功能决定了其应具有广泛的临床适应症，并使其成为近十年来细胞治疗领域中发展最为广泛、最为迅速的干细胞类型。

过去10年来所积累的大量临床前及临床研究数据显示，不同组织来源的hMSCs均具有不同程度，针对不同临床适应症的治疗效果。

目前在登记的各种自体或异体组织来源的hMSCs临床适应症类型或疾病亚型已有上百种，其中常见的临床适应症类型包括骨关节疾病、心血管疾病、器官功能衰竭、神经退行性疾病、移植物抗宿主病、多发性硬化、脊髓损伤、炎性结肠炎、脊髓侧索硬化、系统性红斑狼疮，等等。

然而，无论是临床前或临床研究阶段，现有的研究结果仍都存在不同程度的问题，而所有问题又都不同程度地汇聚到hMSCs的质量问题上。

其中临床前研究所表现的问题是，不同研发者所使用的hMSCs来源、培养体系、制备工艺、质量标准、评价技术等存在很大差异，也存在质量评价内容和技术的合理性等问题，因此导致不同研究者间的研究结果很难具有可比性，或结果难以重复，因此也很难形成相对统一的质量标准。

而临床研究中所存在的问题是，绝大多数临床研究还处在早期阶段，所观察的病例数还很有限，临床研究中细胞质量的标准化和细胞使用的规范性仍存在巨大差异，所有这些尚不足以完全支持hMSCs的安全性和/或疗效。

除此以外，因hMSCs临床前研究还远不够完善，对其临床研究的指导作用还不强，或者临床前研究与临床研究存在严重脱节现象，临床研究阶段细胞质量的稳定性研究欠缺，细胞质量评价和受试者评估体系尚未建立，等等。

低氧对再生医学中间充质干细胞培养的研究进展

低氧环境可以改善干细胞的移植效果，提高治疗效果
03
低氧在再生医学中的应用
低氧在组织工程中的应用
低氧环境可以促进干细胞的增殖和分化低氧环境可以增强干细胞的抗炎和免疫调节能力低氧环境可以促进干细胞的迁移和血管生成低氧环境可以促进干细胞的存活和功能恢复
低氧在细胞治疗中的应用
低氧环境可以促进干细胞的增殖和分化低氧可以增强干细胞的抗炎和免疫调节作用低氧可以改善干细胞的存活率和功能低氧可以促进干细胞的迁移和归巢能力
01 添加章节标题
02
低氧对中间充质干细胞的影响
低氧对干细胞增殖的影响
低氧环境可以促进干细胞增殖
低氧可以激活干细胞的自我更新和增殖
低氧可以诱导干细胞向特定方向分化
低氧可以增强干细胞的抗凋亡能力
低氧对干细胞分化的影响
低氧环境可以促进干细胞的分化低氧可以诱导干细胞向特定方向分化低氧可以增强干细胞的再生能力低氧可以调节干细胞的基因表达，影响其分化过程
低氧环境模拟：通过控制氧气浓度，模拟人体组织缺氧状态
细胞培养：在低氧环境下培养间充质干细胞，观察其生物学特性和功能
添加标题题
疾病模型构建：利用低氧环境，构建各种疾病模型，如缺血性心脏病、脑卒中等
药物筛选：利用低氧疾病模型，进行药物筛选和评价，寻找有效的治疗方法
04
调节、组织修复等
干细胞的来源与分化调控
干细胞来源：骨髓、脐带血、脂肪等
干细胞分化调控：基因表达、信号通路、细胞因子等
低氧对干细胞分化的影响：促进或抑制干细胞分化
低氧对干细胞培养的挑战：细胞存活率、细胞分化效率等
低氧对干细胞培养的前景：提高干细胞分化效率、改善细胞功能等

211099472_hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究

细胞与分子生物学hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究赵元元，吴小华△摘要：目的探究人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源的外泌体miR-1260a靶向CASP8对多囊卵巢综合征（PCOS）患者颗粒细胞凋亡的影响。

方法取健康足月胎儿的脐带进行组织块贴壁法分离培养获得hUC-MSCs，采用流式细胞仪检测其标志性蛋白CD73和CD90的表达。

收集hUC-MSCs培养上清液，提取hUC-MSCs外泌体，透射电镜观察其形态，Western blot检测外泌体膜表面标志物热休克蛋白70（HSP70）和肿瘤易感基因101（TSG101）的表达。

PKH67标记外泌体，采用激光共聚焦显微镜观察PCOS颗粒细胞对外泌体的内化作用。

Western blot检测hUC-MSCs外泌体对PCOS颗粒细胞凋亡的影响。

利用GSE69909临床样本进行生物信息学分析，得到hUC-MSCs外泌体中异常高表达的miRNAs，并通过实时荧光定量PCR进行验证。

合成miR-1260a模拟物及其对照转染至KGN细胞中，流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。

利用Target Scan Human7.2数据库进行miR-1260a靶基因的预测，采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-1260a对靶基因的调控作用。

qPCR检测PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体前后miR-1260a及CASP8的表达情况。

结果经鉴定所培养的细胞符合hUC-MSCs的特征，hUC-MSCs外泌体为直径30~150nm的圆形或椭圆形囊泡状结构，表达标志物蛋白HSP70和TSG101，并且可被PCOS颗粒细胞摄取。

与对照组相比，hUC-MSCs上清液处理组及hUC-MSCs外泌体处理组Cleaved-Caspase-8、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达显著下调，抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著上调（P＜0.05）。

人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响

第 50 卷第 1 期2024年 1 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.1Jan.2024DOI：10.13481/j.1671‑587X.20240110人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响武梦雪, 陈士玲, 刘艳, 米旭光, 林秀英, 付建华, 方艳秋（吉林省人民医院生殖医学中心，吉林长春130021）［摘要］目的目的：探讨人脐带间充质干细胞培养上清（hUCMSCs-Sup）对米非司酮（Ms）处理的人子宫内膜基质细胞（hEndoSCs）增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响，并阐明其可能的作用机制。

方法方法：体外培养hEndoSCs，分为对照组和40、60、80及100 μmol·L－1 Ms组，MTT法检测各组细胞存活率。

hEndoSCs分为对照组、40 μmol·L－1 Ms组和60 μmol·L－1 Ms组，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平并计算Bcl-2/Bax比值。

hUCMSCs-Sup作用后，hEndoSCs分为对照组、Ms组、Ms+hUCMSCs-Sup组和Ms+hUCMSCs-Sup+3-甲基腺嘌呤（3-MA）组，MTT法检测各组细胞存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）和微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ（LC3B-Ⅰ）蛋白表达水平并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中子宫内膜容受性标志分子mRNA表达水平。

结果结果：与对照组比较，40、60、80和100 μmol·L－1 Ms组细胞存活率明显降低（P<0.05），且具有时间和剂量依赖性。

间充质干细胞条件培养基对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

间充质干细胞条件培养基对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响作者：邱杰洪张昌林李田来源：《新医学》2021年第04期【摘要】目的观察人脐带间充质干细胞条件培养基（MSC-CM）对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞（HPV18 HeLa细胞）凋亡相关基因的調控作用，以及对HPV18 HeLa细胞凋亡的影响。

方法制备MSC-CM，设置空白组、低剂量组和高剂量组，配制相应浓度分别为0%、20%和60%的MSC-CM处理HPV18 HeLa细胞，使用CCK-8法、克隆形成实验检测细胞活力和克隆形成能力;磷脂结合蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法凋亡染色和流式细胞术检测细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因mRNA表达量。

结果与空白组相比，在低剂量组或高剂量组的MSC-CM作用下，HPV18 HeLa细胞的生长活性和克隆形成能力均降低，细胞凋亡率升高（P均< 0.05），且高剂量组作用效果均比低剂量组明显（P均<0.05）。

与空白组相比，HPV18 HeLa细胞在低剂量或高剂量组MSC-CM的作用下，HPV18 HeLa细胞中p53、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9、Bax的mRNA表达量升高，而B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的mRNA表达量降低（P均< 0.05），高剂量组比低剂量组的作用效果更明显（P < 0.05）。

结论 MSC-CM能诱发HPV18 HeLa细胞凋亡，可能与p53、Caspase-3、Caspase-9、Bax以及Bcl-2等基因表达差异相关。

【关键词】人乳头瘤病毒18型;宫颈癌;HeLa细胞;间充质干细胞;细胞凋亡Effect of umbilical cord-derived mesenchymal stem cell-conditioned medium on apoptosis of HPV18-infected HeLa cell lines Qiu Jiehong， Zhang Changlin， Li Tian. Department ofGynecology and Pelvic Floor Disorders Center， the Seven Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University， Shenzhen 518107， ChinaCorresponding author， Li Tian， E-mail：*******************【Abstract】 Objective To evaluate the effect of umbilical cord-derived mesenchymal stem cell-conditioned medium （MSC-CM） on regulating the apoptosis-related genes and determine the impact upon the apoptosis of human papillomavirus type18-infected HeLa cell lines. Methods Primary cervical cancer HeLa cells were divided into the blank， low-dose and high-dose groups. HeLa cells were cultured and treated with 0%， 20% and 60% of MSC-CM in three groups， respectively. The cell viability and clone formation ability of HeLa cells were detected by CCK-8 assay and clone formation assay. The apoptosis of HeLa cells was detected by Annexin V-Fluorescein isothiocyanate/Propidium iodide （V-FITC/PI） staining and flow cytometry. The expression levels of p53， Bax， Caspase-3， Caspase-9 and Bcl-2 mRNA in HeLa cells were quantitatively measured by RT-PCR. Results In the low- and high-dose groups， the cell viability and clone formation ability were significantly decreased， whereas the apoptosis rate was significantly elevated compared with those in the blank group （all P < 0.05）. The effects in the high-dose group were more evident than those in the low-dose group （all P < 0.05）. The expression levels of p53， Bax， Caspase-3 and Caspase-9 mRNA in the low- and high-dose groups were significantly up-regulated， whereas that of Bcl-2 mRNA was significantly down-regulated compared with those in the blank group （all P <0.05）. The effects in the high-dose group were more pronounced than those in the low-dose group （all P < 0.05）. Conclusions Under the effect of MSC-CM， the apoptosis of HPV18 cervical HeLa cells can be induced， probably associated with the differential expression patterns of p53， Bax，Bcl-2， Caspase-3 and Caspase-9 mRNA.【Key words】 Human papillomavirus type18;Cervical cancer;HeLa cell;Mesenchymal stem cells;Apoptosis人乳头瘤病毒（HPV）是一种闭合双链DNA病毒[1]。

低氧培养对间充质干细胞生存与生长的影响

低氧培养对间充质干细胞生存与生长的影响张君;汪保和【摘要】Cultruing mesenchymal stem cells ( MSCs) under hypoxia condition could influence their characteristics of survival and growth, such as vitality, proliferation, senesce, dealth, and so on. The mechanism of MSCs resistance/sensitivity to hypoxia impact is complex and multiple. It involves in energy metabolism, HIFs signal pathway and others signal pathways and kinds of molecules of regulation or transduction. Because of the difference of MSCs source, the methods of isolation, the cell surface markers, the way of establishing hypoxia environment and others methodological fac-tors. It seems that the currently available experimental data on hypoxia impact to MSCs are so contradictory. It is necessary to summarize recent researches on the survival and the growth of MSCs under low oxygen conditions in order to lay the foun-dation for establishing the best culture system of MSCs in future and the research of the clinical application of MSCs.%低氧培养能影响间充质干细胞( Mesenchymal stem cells, MSCs)细胞活力、增殖能力、衰老、死亡等生存和生长相关特性,其分子机制复杂多重,涉及能量代谢途径、低氧诱导因子( HIFs)信号通路以及诸多其他信号通路、调控和转导分子。

干细胞应用安全性及其影响因素的研究

干细胞应用安全性及其影响因素的研究摘要：目前，对于干细胞的研究局限于干细胞应用引发的安全性问题，对于影响干细胞安全性因素的研究甚少，或仅局限于其中一种因素的分析。

现就干细胞应用安全性及其影响因素的研究进行综述，以综合分析各影响因素及其之间的相互作用、评估干细胞治疗技术的效果，并有望在未来拓宽干细胞应用的领域，提高其临床治疗的安全性，为疾病治疗提供更有效的治疗手段。

关键词：干细胞；安全性；致瘤性；影响因素1干细胞临床应用的安全性干细胞治疗临床应用中存在致瘤性、移植物抗宿主病(GVHD)、血栓等安全性问题，其中以致瘤性为主。

干细胞可能具有促进肿瘤发生的作用，一般可分化成畸胎瘤、畸胎癌和继发性肿瘤，干细胞在应用前多经过连续传代扩增，长期的体外培养导致细胞端粒长度变化，染色体不稳定性增加，易引发基因突变，最终导致细胞恶性转化；除致瘤性问题外，干细胞移植还会发生GVHD；此外，血栓问题也偶有发生，因为干细胞输入体内后易分布在肺、脾、肾和皮肤等血供丰富的器官，当大量干细胞在脏器内滞留时，可导致局部小血管内血栓形成。

除上述安全性问题外，变态反应、头痛、腰痛等也有发生，但一般不会对患者产生严重影响，一段时间后症状可自行消失。

2影响干细胞临床应用安全性的因素2.1干细胞种类目前广泛应用于临床的干细胞主要有间充质干细胞(MSCs)、胚胎干细胞(ESCs)、诱导多能干细胞(iPSCs)等，其中以MSCs为主。

干细胞临床应用的安全性因干细胞种类不同而有所差异，MSCs主要引发致瘤性和血栓，造血干细胞(HSCs)则主要引起GVHD，而ESCs及iPSCs主要促进畸胎瘤的发生发展。

MSCs是成体、成纤维细胞样的多能细胞，来源广泛、易于分离和扩增、免疫原性低，具有旁分泌和广泛的免疫调节能力，可从多种成人和胎儿组织(如骨髓、脂肪、脐带血、胎儿肺、胎盘、羊水)中分化而来，在疾病治疗和组织工程等方面具有广阔的应用前景。

其中，以骨髓间充质干细胞(BMSCs)，脐带间充质干细胞(UC-MSCs)及脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的临床应用最为广泛。

不同氧体积分数下脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞的旁分泌能力

不同氧体积分数下脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞的旁分泌能力杨记农;姜亦瑶;袁超;刘志刚;刘晓程【摘要】背景:间充质干细胞治疗急性心肌梗死的机制与间充质干细胞的迁移、定植和分化相关,更重要的是间充质干细胞的旁分泌作用.目的:评估低氧体积分数下脂肪间充质干细胞和脐带间充质干细胞的旁分泌及促血管再生能力,为选择合适的间充质干细胞应用于治疗急性心肌梗死提供依据.方法:分离并培养人脂肪间充质干细胞和人脐带间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞的免疫表型;2种细胞按氧体积分数不同各分为体积分数3%O2预处理组、体积分数5%O2预处理组和体积分数21%O2对照组,培养24 h;酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液肝细胞生长因子、血管内皮生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子水平.结果与结论:①2种间充质干细胞阳性表达CD73、CD90、CD105,阴性表达CD34、CD45、CD54、HLA-DR;②各氧体积分数条件下,人脂肪间充质干细胞分泌血管内皮生长因子水平均显著高于人脐带间充质干细胞(P<0.01);③在体积分数5%O2条件下,人脂肪间充质干细胞分泌肝细胞生长因子水平显著高人脐带间充质干细胞(P<0.05);④在体积分数3%O2和体积分数5%O2条件下,人脐带间充质干细胞分泌神经生长因子水平显著高于人脂肪间充质干细胞(P<0.01);⑤在体积分数3%O2和体积分数5%O2条件下,人脐带间充质干细胞分泌角质细胞生长因子水平显著高于人脂肪间充质干细胞(P<0.01或P<0.05),在体积分数21%O2条件下,人脂肪间充质干细胞分泌角质细胞生长因子水平显著高于人脐带间充质干细胞(P<0.01);⑥结果表明,低氧能够提高2种干细胞旁分泌效应.人脂肪间充质干细胞在血管内皮生长因子旁分泌能力上明显优于人脐带间充质干细胞,故认为人脂肪间充质干细胞可能更适合用于心肌梗死的干细胞治疗.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)021【总页数】6页(P3322-3327)【关键词】急性心肌梗死;脂肪间充质干细胞;脐带间充质干细胞;低氧;旁分泌;干细胞【作者】杨记农;姜亦瑶;袁超;刘志刚;刘晓程【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院,泰达国际心血管病医院心外科,天津市 300457;蚌埠医学院第一附属医院心脏外科,安徽省蚌埠市 233000;南开大学,天津市 300071;中国医学科学院北京协和医学院,泰达国际心血管病医院心外科,天津市 300457;南开大学,天津市 300071;中国医学科学院北京协和医学院,泰达国际心血管病医院心外科,天津市 300457;中国医学科学院北京协和医学院,泰达国际心血管病医院心外科,天津市 300457【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：旁分泌效应：细胞分泌某种细胞因子对邻近靶细胞(可以同种细胞也可以是异种细胞，主要与内分泌长程效应相对)表现出的生物学作用。

氯化钴模拟低氧环境下人脐带间充质干细胞增殖及基因蛋白的表达

氯化钴模拟低氧环境下人脐带间充质干细胞增殖及基因蛋白的表达韩潇;白海;尹娇娇;杨柯;韩燕霞;欧剑锋;王存邦【摘要】BACKGROUND:Cobalt chloride (CoCl2) may promote the proliferation of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cels (hUC-MSCs) in a time- and concentration-dependent manner, and meanwhile, CoCl2 can regulate the expression of genes and proteins in hUC-MSCs. OBJECTIVE:To explore the effects of CoCl2 induced-hypoxia on the proliferation of hUC-MSCs and gene and protein expressions in hUC-MSCs, thereby establishing an effective method for MSCs culture and amplificationin vitro. METHODS: hUC-MSCs were extracted using tissue explant method. Under hypoxia conditions induced by CoCl2 (0, 100, 150, 200, 250 μmol/L) for different periods (0, 1, 2, 3, 4 days), flow cytometry was used to identify cel surface-associated antigens; cel counting kit-8 was used to detect cel proliferation; RT-PCR was used to determine levels of hypoxia inducible factor-1α, inducible nitric oxide synthase, stromal cel-derived factor-1, interleukin-6, transforming growth factor-β mRNA; western blot assay was used to detect protein expression of hypoxia inducible factor-1α. RESULTS AND CONCLUSION:The cels were positive for CD29, CD73, CD90, CD105, while negative for CD31, CD14,CD34, CD45, CD11b, HLA-DR. Moreover, the antigen expression was not affected by CoCl2 induced-hypoxia. CoCl2 induced-chemical hypoxia could promote the proliferation of hUC-MSCs in a time- and concentration-dependent manner. RT-PCR results showed thatunder hypoxia, hypoxia inducible factor 1α, inducibl e nitric oxide synthase and stromal cel-derived factor-1 mRNA expressions were significantly up-regulated, but interleukin-6 and transforming growth factor-β mRNA expressions were down-regulated significantly (P < 0.05). Additionaly, the protein expression of hypoxia inducible factor 1α was increased under hypoxia conditions. These findings indicate that CoCl2 induced-hypoxia environment may promote the proliferation of hUC-MSCs and the optimal concentration of CoCl2 is 200μmol/L. However, a higher concentration of CoCl2 (≥250μmol/L) inhibits the proliferation of hUC-MSCs, and the mechanism may be related to the increase of hypoxia inducible factor-1α at protein and mRNA levels.%背景：氯化钴可促进人脐带源性间充质干细胞的增殖，具有时间和浓度依赖性，并对其基因蛋白表达具有调控作用。

无血清培养体系分离培养人脐带间充质干细胞

无血清培养体系分离培养人脐带间充质干细胞张丽;王文芳;郭芸;邓丹琪;黄雅亮;纪秋琴;张佩莲【摘要】目的用体外无血清培养体系分离培养人脐带间充质干细胞.方法取1例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带,采用组织块贴壁培养,使用无血清培养体系培养获得人脐带间充质干细胞.通过形态学观察,成脂、成骨、成软骨诱导分化能力检测及流式细胞术免疫表型检测进行鉴定.结果组织块贴壁培养6天后可见细胞从组织块边沿爬出;培养15天后,达到80％汇合,生长状况良好,细胞呈梭形,为典型的成纤维细胞形态,极性整齐排列,集落呈涡旋状,形态较均一.传代培养的第三代细胞CD29、CD44、CD90、CD105均为阳性表达,不表达CD34和CD45,均具有成脂、成骨、成软骨分化的能力.结论无血清培养体系组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞法成功率高,其生物学特性稳定,并能消除由未确定的病原体引起的风险.【期刊名称】《皮肤病与性病》【年(卷),期】2019(041)001【总页数】3页(P4-6)【关键词】脐带间充质干细胞;分离;贴壁培养【作者】张丽;王文芳;郭芸;邓丹琪;黄雅亮;纪秋琴;张佩莲【作者单位】昆明医科大学基础医学院,云南昆明650500;昆明医科大学第二附属医院皮肤科,云南昆明650101;昆明医科大学第二附属医院皮肤科,云南昆明650101;昆明医科大学第二附属医院皮肤科,云南昆明650101;昆明医科大学第二附属医院皮肤科,云南昆明650101;昆明医科大学第二附属医院皮肤科,云南昆明650101;昆明医科大学第二附属医院皮肤科,云南昆明650101【正文语种】中文【中图分类】R392-33人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells，HUC-MSCs）是从人脐带组织中分离的间充质干细胞，具有增殖能力，如：神经元样细胞、星形胶质细胞、脂肪细胞及少突胶质细胞分化的能力，由于脐带体外细胞能迅速扩增，生物性能稳定，取材比较容易并且细胞来源相对广泛，在细胞移植、基因治疗等领域具有广阔的前景，已经成为治疗的一种新的种子细胞来源[1、2]。