耐药基因TopoⅡ及Ki-67在食管鳞癌的表达
乳腺癌组织中HER-2、TOPOIIα、Ki-67的表达及临床意义
乳腺癌组织中HER-2、TOPOIIα、Ki-67的表达及临床意义马士辉;凌飞海【摘要】Objective To probe into the expression and clinical significance of human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2),DNA topoisomerase II alpha (TOPOIIα),Ki-67 in breast cancer.Methods Clinical pathological data of 212 patients with breast cancer in our department from January,2012 to December,2012 were retrospective analyzed.Then,the expression of HER-2,TOPOIIαand Ki-67 in breast cancer tissues were detected by fluorescence in situ hybridization (FISH) and SP immuno-histochemical method respectively,and its correlation with clinical pathological characteristics was analyzed.Results In 212 cases of breast cancer,the HER-2,TOPOII,Ki-67 positive expression rate were respectively25%(53/212),9.4%(20/212),60.4%(128/212),and the simultaneous amplification of TOPOII gene in 17 cases of HER-2 gene amplification,Amplification or high expression of HER-2,TOPOII,Ki-67 gene was associated with tumor size,lymph node metastasis and histological grading.Conclusion The joint detection of HER-2,TOPOII,and Ki-67 in breast cancer tissues which it is of great significance to evaluate the prognosis of breast cancer and provide individualized treatment.%目的：探讨人表皮生长因子受体2（HER-2）、DNA拓扑异构酶Ⅱα（TOPOIIα）、Ki-67在乳腺癌组织中的表达及临床意义。
免疫组化临床意义
临床免疫组化意义1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标志全套4项:P－gP,GＳＴπ,ＴＯＰＯⅡ,Ki-６7。
2、乳腺癌免疫组化耐药预后标志全套7项:Ｐ—gp,GＳTπ,TOPOⅡ,Ki—67,EＲ,PR,Ｃ-erbB－2。
3、意义:标志物作用阳性部位临床意义(1)、多药耐药基因蛋白(P—Gｐ)药泵作用胞膜/胞浆,阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。
(２)、谷光甘肽S转移酶(GＳTπ)解毒作用胞浆,阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。
(3)、拓扑异构酶Ⅱ(TOPＯⅡ)靶点作用胞核,阳性率越高,对下列药物越无效:蒽环类抗生素与鬼臼毒素类,如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VＭ26。
阳性率高者对VP16尤其无效。
(4)、雌激素受体(ER)性激素作用胞核,阳性率越高,肿瘤对内分泌医治越无效,预后越好。
(5)、孕激素受体(PR) 性激素作用胞核,阳性率越高,肿瘤对内分泌医治越无效,预后越好。
(6)、C—eｒbB—2癌基因产物,胞浆阳性率越高,肿瘤恶性水平越高。
ER、PＲ阳性而C-erbB—2也阳性者,用三苯氧胺医治效果不好。
(７)、Ki-67细胞增殖标志,胞核阳性率越高肿瘤增殖越快,恶性水平越高。
Ki—６７为细胞增值得一种标志,在细胞周期G１、S、Ｇ2、M期均有表达,G0期缺如,其与许多肿瘤分化水平、浸润、转移、预后亲密相关。
PCNA(增埴细胞核抗原)、(8)、ＣEA 少数腺癌表达CEA(９)、Rb(reｔiｎoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因就是肿瘤抑制基因,调理细胞周期、(10)、Ｐ５３在免疫组化中均为渐变型,阳性率越高,预后约差。
野生型半衰期很短(1１)、Nm23就是转移抑制基因,其阳性表达与肿瘤转移呈负相关。
目前已被普遍使用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤得检测。
四种耐药基因蛋白及Ki-67在浸润性乳腺癌组织中表达的临床意义
（ 州 医 学 院病 理 学 研 究 室 ， 川 泸 州 ６ ６ ０ ） 泸 四 ４０ ０
摘
要 目的 ： 讨 Ｐ Ｐ Ｔ 、 Ｔ 竹、 ｏ ｏ Ｉ Ｋ－ ７在 浸 润 性 乳 腺 癌 组 织 中 的 表达 ， 探 讨 其 临 床 意 义 。方 法 ： 用免 疫 探 ｇ 、 Ｓ ＧＳ 一 Ｔ ｐ Ｉ和 ｉ６ 并 采
Ｐｐ Ｓ ｇ ，Ｔ ，ＧＳ －３ａ ｄ Ｔ ｐ １ ａ ９２ ％ ，６ ．４ ，２ ．０ ａ ｄ ２ ．１ ，ｒ ｓ ｅ ｔ ｅｙ ｈ ｒ ｒ ｉｎｆ ａ ｔ Ｔ－ ＂ ｎ ｏ ｏＩ ３， ｗ ｓ ６ ．９ ４０ ％ ３６ ％ ｎ ９２ ％ ｅｐ ｃｉ ｌ．Ｔ ｅｅ ｗｅｅ ｓ ｉ ｃ ｎ ｖ ｇ ｉ
异有统计 学意义 （ ＜ ． ） 而与淋 巴结有 无转 移 、 Ｒ、 Ｐ０ ５ ， ０ Ｅ
Ｐ 的表 达 无 相 关 性 （＞ ．５； Ｓ的表 达 与 肿 块 直 Ｒ Ｐ ００ ）Ｔ
Ｅ Ｐ 的表达 呈负相 关 。 Ｒ、Ｒ
表 ２ ６ 例 浸 润 性 乳 腺 癌 一 ７ Ｐ ｐ Ｔ 、 Ｓ 一 ＴＴ ｐ 的 表达 与 临 床 病 理 特征 的 关 系 ２ ７ ６ 、ｇ 、 Ｓ Ｇ Ｔ １、 ｏ ｏＩ Ｉ
２ ｓ ｃ ｍｅ ｓ ｆ ｉ ｖ ｓｖ ｂ ｅ ｓ ｃ ｎ ｅ ｒ ｅ ａ ｎ ｄ ｙ ６７ ｐｅ ｉ ｎ ｏ ｎ ａ ｉ ｅ ｒ ａ ｔ ａ ｃ ｒ ｗｅ ｅ ｘ ｍｉ ｅ ｂ Ｅｎ ｉｉ ｎ ｍｍｕｎ ｈ ｓｏ ｈ ｍｉｔｙ ｖｓｏ ｉ ｏ ｉｔｃ ｅ ｓｒ ．Ｔｈ ｒ ｌｔｏ ｓ ｉ ｅ ｅ ａｉ ｎ ｈ ｐ
Ｔ 、 Ｔ 百呈 正 相 关性 ， ｏ ｏ Ｉ Ｔ Ｓ ＧＳ 一 Ｔ ｐ Ｉ与 ｓ呈 负 相 关性 ， Ｋ－ ７呈正 相 关 性 。 结 论 ：ｇ 、 Ｓ Ｇ Ｔ一 Ｔ ｐ Ⅱ及 Ｋ － ７ 乳 腺 癌 的 与 ｉ６ Ｐ Ｐ Ｔ 、 Ｓ 、 ｏ ｏ ｉ６ 在
免疫组化的临床意义
但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达villin，如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌。也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。
肝癌的诊断
Villin免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构，因此它也可能在表达部分肝癌的管状结构上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一种试剂，而且CD10 (CALLA)在表达肝癌的该结构上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10 (CALLA)在肝癌病例上的表达，相互之间并没有任何的冲突，因此如果怀疑肝癌的可能性，建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例的诊断。
CD44 是一种分布广泛的跨膜糖蛋白分子，分CD44s和CD44v两大类。CD44s主要作为透明质酸受体，结合透明质酸后影响肿瘤的生长和转移。而CD44v则主要表达于转
移的肿瘤细胞。李道明等用免疫组化LSAB法检测了42例食管鳞癌CD44v4／5的表达，结果发现，淋巴结转移组的阳性表达率为76．19％ (16／21)，而非转移组的阳性率为42．86％(9／12)，两组间有显著性差异。癌巢周边的癌细胞、肌间浸润的癌细胞、有核分裂的癌细胞和癌栓中的 癌细胞及浸润脉管壁的癌细胞均呈强阳性表达。张成武等检测了20例正常胃粘膜上皮、43例异型增生和85例胃癌组织CD44v6的表达，结果正常胃粘膜无 表达，而异型增生和胃癌 组织阳性率分别为30．2％和74．1％，其表达强度与胃癌浸润深度、淋巴结转移、肿瘤生长方式、静脉和淋巴管侵袭及远 处 转移密切相关。以上结果均表明，CD44v的高表达构成了肿瘤细胞的侵袭性与易转移性。
CD117 胃肠间质瘤
CD10 作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原，主要表达于未成熟淋巴细胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系统疾病的诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外的某些肿瘤中有表达，如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断和鉴别时有一定的参考价值。
Ki-67在不同肿瘤中的表达及意义论文
Ki-67在不同肿瘤中的表达及意义【中图分类号】r739 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）08-0583-01肿瘤的发生、发展与细胞的异常增殖密不可分。
细胞增殖是一个被高度协调机制控制的基本生物过程，人体复杂的调控机制负责胚胎的正常发育、伤害和感染等的调控，一旦调控平衡被打破，就可能产生肿瘤[1]。
1983年gerdes从何杰金瘤细胞系ia28的粗核成分免疫鼠制备名为ki-67的抗体，发现此抗体仅认可处于细胞周期的增殖细胞核抗原，其表达在人增殖细胞的g1、s、g2、m期，但在g0期无此抗原表达，由此命名这种抗原为ki-67抗原。
ki-67抗原基因定位于第l0号染色体上，ki-67蛋白由分子量为358761d 和319508d的两条多肽链组成，并由两个缝接的9768bp和8686bp 的m-rna所编码。
最近的研究证明，ki-67抗原是核基质的一部分，具有非蛋白的特点，它的表达因细胞周期而异。
通过详细的细胞周期分析显示：它从g1后期开始出现，分布于核仁周围，s和g2期逐渐升高，分布于细胞核内，m期达高峰，呈网状结构包绕整个染色体，而不出现在g0期，在有丝分裂中，ki-67出现在所有增殖细胞的染色体，并在后期迅速减少，半衰期不到一个小时，故ki-67的表达与细胞周期严格相关[1]。
这说明ki-67可作为标记细胞的“生长指数”来衡量肿瘤细胞的生长速度，与恶性肿瘤的发展、转移和预后高度相关。
1 肺癌宋作庆[3]采用免疫组化方法(s-abc法和s-p法)检测70例nsclc和20例同期良性病变肺组织中ki-67的表达，ki-67的阳性表达率为85.7％，而正常肺组织中无表达，差异有统计学意义。
说明ki-67的表达与肺癌的发生关系密切，是恶性肿瘤的特征性表现。
国内外多数学者研究发现，腺癌中ki-67的表达低于其他组织类型，可能与腺癌细胞增殖速度较低有关[1]。
李英杰[4]等运用免疫组化方法检测ki-67的表达，发现肺癌分期越晚，ki-67表达越高。
教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单
教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单免疫组化是用标记的特异性抗原（抗体）对组织内抗体（抗原）的分布进行检测。
免疫组化虽然价钱昂贵，却有不能替代的作用：①恶性肿瘤的诊断和鉴别②确定转移性恶性肿瘤的原发部位③对某类肿瘤进行病理分型④明确软组织肿瘤的正确组织学分类，明确软组织的诊断⑤发现微小转移灶⑥为临床治疗方案提供支持虽然免疫组化有那么多作用，但是很多患友拿到手了根本就看不懂，都是些英文缩写，代表着什么意思呀，别着急，下面小编就按照字母顺序列张表，告诉大家各个代表什么意思：项目临床意义Actin肌动蛋白，间叶组织来源标记，平滑肌、血管内皮、肌上皮组织表达。
AE1/AE3细胞角蛋白AE1/AE3，标记上皮及上皮来源的肿瘤，鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性，如胆管细胞阳性，肝细胞阴性，鉴别肝癌和胆管癌。
AFP甲胎蛋白，肝癌细胞表达，胃和肝脏同时肿瘤时，胃肝样腺癌HepPar-1、AFP、CK19 和CDX-2等4 种不同程度阳性表达，而肝细胞癌CK19 和CDX-2不表达。
ALK间变型淋巴瘤激酶，用于淋巴造血来源标记，间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤的诊断。
AMACR甲基酰基辅酶A消旋酶，癌特异性指标，只存在于癌症组织。
结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤等过度表达，以结直肠癌和前列腺癌表达最高。
Bax促进凋亡蛋白，同Fas/FasL。
Bcl-2抑制细胞凋亡相关基因-2，肿瘤预后指标，高表达者对多数抗癌药物、放射治疗耐受，高表达者预后差。
Bcl-6B淋巴细胞凋亡相关基因-6，抑制细胞凋亡作用，淋巴造血细胞来源标记，用于B淋巴瘤诊断。
Bel-XL抑制细胞凋亡相关基因-XL，Bcl-2 抑制细胞凋亡基因家族成员之一，作用同Bcl-2 。
Cam5.2人角蛋白抗原决定簇，正常分泌上皮表达，复层鳞状上皮不表达，用于鉴别腺癌和鳞癌。
CD10分化簇10，间叶组织来源标记，未成熟淋巴细胞阳性表达，用于B细胞淋巴瘤、慢性髓性白血病等诊断，某些非造血肿瘤子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌也可阳性。
TopoⅡ、Ki—67、P53在胃食管结合部腺癌新辅助化疗疗效预测中的意义
TopoⅡ、Ki—67、P53在胃食管结合部腺癌新辅助化疗疗效预测中的意义目的探讨Topo Ⅱ、Ki-67和P53 在Siewert Ⅱ型胃食管结合部腺癌中的表达与化疗敏感性之间的关系。
方法回顾性分析本院2010年6月～2013年12月行新辅助化疗的胃食管结合部腺癌患者72例。
对所有患者均行SOX方案化疗，以RECIST 1.0评价标准评价疗效。
用免疫组化方法评价3种蛋白的表达情况，分析各蛋白表达情况及与化疗疗效的关系。
结果年龄和病理类型与化疗敏感性无关，本组72例患者中新辅助化疗有效率为48.6%，其中5例达病理完全缓解。
3种蛋白的表达情况分别为：Topo Ⅱ阳性率为73.6%，Ki-67阳性率为59.7%，P53阳性率为33.3%。
Ki-67和P53的表达与化疗敏感性有关（P=0.023，P=0.031），但Topo Ⅱ的表达与化疗敏感性无关（P>0.05）。
结论Ki-67高表达和P53低表达是AGEJ SOX方案新辅助化疗敏感性的影响因素，为AGEJ个体化新辅助化疗方案的选择提供有益的参考。
[Abstract] Objective To investigate the expression of Topo Ⅱ，Ki-67，P53 in advanced adenocarcinoma of gastroesophageal junction（AGEJ）and its relationship to sensitivity of neoadjuvant chemotherapy. Methods Clinical data of 72 patients of locally advanced AGEJ between June 2010 and Dec 2013 were analyzed retrospectively. All patients were given SOX neoadjuvant chemotherapy and the responses to treatment were evaluated according to RECIST 1.0. Expressions of 3 proteins were detected by in all patients before neoadjuvant chemotherapy. Detecting the expressions of Topo Ⅱ，Ki-67，P53 by immunohistochemistry is to analyze its relationship to neoadjuvant chemotherapy. Results The chemotherapy sensitivity had no correlation with age and pathological types（P>0.05）. The overall response rates was 48.6%，including complete response in 5 cases and progressive disease in 6 cases.The positive expression rates of Topo Ⅱ，Ki-67 and P53 in AGEJ were 73.6%，59.7% and 33.3%. Ki-67 and P53 were significantly correlated with chemotherapy sensitivity（P=0.003，P=0.020），while Topo Ⅱwas not correlated with chemotherapy sensitivity（P>0.05）. Conclusion An elevated expression of Ki-67 and depressed expression of P53 are important factors for SOX insensitivity in AGEJ. They may provide an useful reference for designing individualized chemotherapeutic regimens for AGEJ patients.[Key words] Gastroesophageal junction neoplasms；Neoadjuvant chemotherapy；Topo Ⅱ；Ki-67；P53；Chemosensitivity近年来胃食管结合部腺癌（adenocarcinoma of gastroesophageal junction，AGEJ）的发病呈增长趋势[1，2]。
消化道肿瘤多药耐药基因的表达与临床相关性的研究
消化道肿瘤多药耐药基因的表达与临床相关性的研究摘要目的：为了研究消化道肿瘤多药耐药基因及其产物表达对化疗效果的影响。
方法：应用免疫组化SP法检测106份消化道肿瘤组织中pgp、GST-π和TopoⅡ表达并分析其与消化道肿瘤临床病理特征的关系。
结果：消化道肿瘤组织中pgp、GST-π和TopoⅡ阳性率分别为63.1%、62.5%和52%，与性别、肿瘤大小、部位、临床分期及浸润深度无明显关系(P＜0.05)；高、中分化腺癌pgp 阳性率明显高于低分化腺癌(P＜0.05)；GST-π和TopoⅡ表达与肿瘤淋巴结转移有关(P＜0.05)；印戒细胞癌TopoⅡ阳性率明显低于其他组织学类型(P＜0.05)。
结论：pgp、GST-π及TopoⅡ在消化道肿瘤MDR发生中起重要作用，同时检测BCL-2基因在消化道肿瘤中的表达及其与MDR的消长变化，四者联合检测对化疗方案的制定及药物的选择意义重大，为开展个体化治疗提供依据。
关键词消化道肿瘤多药耐药基因产物检测个体化治疗目前化疗是恶性肿瘤治疗中除手术、放疗以外最重要的手段，然而许多肿瘤常规化疗效果差，甚至失败。
近年来研究表明肿瘤多药耐药（MDR）已成为肿瘤成功化疗的重要障碍之一。
因此，克服MDR就成为肿瘤成功化疗的当务之急。
选取消化道肿瘤患者106例，探讨MDR基因产物pgp、GST-π、TopoⅡ在消化道肿瘤MDR发生中的作用，为消化道肿瘤化疗药物的选择提供依据。
资料与方法2006年3月～2010年12月收治消化道肿瘤患者106例，经病理学检查证实。
病理类型：胃腺癌47例，胃印戒细胞癌11例，直结肠腺癌33例，食管腺癌15例。
组织标本的采集及贮存：全部标本均在手术切取肿瘤时收取，取材时避免取到肿瘤中心的坏死组织，106例消化道恶性肿瘤患者手术切除标本，经10%的福尔马林固定液固定，经脱水、包埋、切片进行免疫组织化学染色，试剂选自福州迈新公司。
所选试剂有多药耐药化学基因糖蛋白-PgP，拓扑异构酶Ⅱ-Topo-Ⅱ，谷胱甘肽S转移酶-GST-π，Bcl-2。
耐药基因蛋白和Ki67在原发性肝癌中的表达及其在预后中的价值
２０ｌ８年 ２月 第 ７卷 第 ｌ期 Ｃｈｉｎ ＪＨｅｏａｔ Ｓ
２Ｏｌ８．Ｖ０Ｉ＿７．Ｎｏ．１
· ７７ ·
基 础 研 究 ·
耐药 基 因蛋 白和 ６７在 原发 性肝 癌 中 的 表 宇 杨 军 熊 书名 高森 朱 茂群 李建 平
【摘要 】 目的 探 讨 Ｐ一糖 蛋 白 （ＰｇＰ）、胎 盘 型谷 胱 甘 肽 ．Ｓ一转 移 酶 （ＧＳＴ－ｎ）、拓 扑异 构 酶 Ⅱ （Ｔｏｐｏ Ｉ１）和胸苷酸合 酶 （ＴＳ）４种耐药 基 因蛋 白及 Ｋｉ６７在原发性 肝癌 （肝癌 ）中的表达及其在预 后 中 的价 值。方 法 标本来源于 ２００８年 ３月至 ２０１６年 １２月在南通大学第 三附属医院接受诊治的 ４１例 肝 癌 患者 。患者 均签 署知 情 同意 书 ，符合 医学伦 理 学规 定。其 中男 ２６例 ，女 １５例 ；平 均年 龄 （５６± ｌ０）岁。采用 免疫组化 法检测肝 癌组织 中 ＰｇＰ、ＧＳＴ－ｎ、Ｔｏｐｏ ｌ／、ＴＳ和 Ｋｉ６７的表达水平 。相关性 分析 采用 Ｓｐｅａｒｍａｎ相关 分析 ，生 存率分析采用 Ｋａｐｌａｎ．Ｍｅｉｅｒ法和 Ｌｏｇ－ｒａｎｋ检验 ，患者的预后影 响因素采用 Ｃｏｘ比例风险 回归模 型分析 。结果 ＰｇＰ、ＧＳＴ－ｎ、Ｔｏｐｏ Ｉ／、ＴＳ和 Ｋｉ６７在 肝癌组织中存在 阳性表达 ，阳 性 率分 别 为 ７３％ （３０／４１）、７％ （３／４１）、６１％ （２５／４１）、３９％ （１６／４１）和 ５１％ （２１／４１ ｏ ＴＳ表达 与 ＰｇＰ、 ＴｏｐｏⅡ表达呈 正相关 （ ＝０．４８４，０．３３３；尸＜Ｏ．０５ ｏ生存分 析结果显示 Ｔｓ和 Ｋｉ６７阳性 患者和 阴性 患者 生存情 况差 异有统 计学 意义 （ ＝４．６９５，５．７８４；尸ｌ ＜０．０５ ｏ Ｃｏｘ多 因素 回归分 析显示 ＴＳ和 Ｋｉ６７为影 响 患 者总体 预后 的独立 危险 因素 （ＨＲ＝３．００７，１７．１０８； ：Ｏ．０５ ｏ结论 Ｐｇｐ、ＧＳＴ－ｎ、Ｔｏｐｏ ＩＩ、ＴＳ在肝癌 中均有表达 ，且 ＴＳ和 ＰｇＰ、Ｔｏｐｏ ＩＩ的表达呈正相关 ，ＴＳ和 Ｋｉ６７是影 响患者预后 的独立危 险因素 。
DNA拓扑异构酶Ⅱ在食管癌的表达及意义
DNA拓扑异构酶Ⅱ在食管癌的表达及意义作者：张妍，王翠芳，宦大为，季迁【关键词】食管癌；免疫组织化学；DNA拓扑异构酶Ⅱ［摘要］目的：观察DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)在食管癌的表达，初步探讨其临床生物学意义。
方法：应用S-P免疫组织化学方法检测原发性食管癌103例，其中鳞状细胞癌100例，腺癌3例和癌周正常黏膜组织32例TOPOⅡ的表达。
结果：TOPOⅡ在食管癌的表达明显高于癌周组织，癌周鳞状上皮基细胞可见少数核阳性表达。
鳞状细胞癌高于腺癌的表达。
食管鳞状细胞癌的分化程度与TOPOⅡ的表达呈正相关。
结论：TOPOⅡ在食管癌周的表达早于食管癌分生过程中的细胞形态变化，可能成为食管癌发生的早期标志物。
TOPO Ⅱ食管癌表达低，符合其比食管鳞状细胞预后差，对放疗、化疗不敏感的事实。
TOPOⅡ在高中分化食管鳞状细胞癌的表达低分化者，提示食管癌高分化者对拓扑异构酶抑制剂化疗药敏感、预后好。
［关键词］食管癌；免疫组织化学；DNA拓扑异构酶ⅡExpression and Significance of DNA Topoisomerase Ⅱin Esophageal CarcinomaAbstract:Objective To study the pattarn of expression and clinical significance of topoisomerase Ⅱ(TOPOⅡ)in esophageal carcinoma.Methods 103 cases of primary esophageal carcinoma and 3 cases of normal esophageal epithelia were studied for the expression of TOPOⅡby means of SP immunohistochemistry.Results The expression of TOPOⅡwas higher in esophageal carcinoma than in normal esophageal epithelia There was a tendency of positive correlation between defferentiated degrees of squamous carcinoma and dxpression of TOPOⅡ.Conclusion TOPOⅡmay serve as an early marker for the development of esophageal carcinoma.The expression of TOPOⅡmay be of significant clinical value in the chemotherapy design.Key words:Esophageal carcinoma;Immunohistochmistry;DNA Topoisomerase Ⅱ在生物体整个生命过程中，细胞DNA的代谢是极为重要的。
CDX2和Ki-67在Barrett食管治疗前后的表达的开题报告
CDX2和Ki-67在Barrett食管治疗前后的表达的开
题报告
背景：
Barrett食管是一种预癌性疾病，最早发现于20世纪50年代，由于胃食管反流病的流行而得到更广泛的关注。
胃食管反流病通常会导致食
管黏膜的损伤，其中较严重的为Barrett食管。
目前，常用的治疗方法包括内镜下消融疗法和手术切除疗法。
而近年来，分子标志物的应用也逐
渐受到了关注。
其中，CDX2和Ki-67是两种常用的分子标志物，已被证
明对于Barrett食管的预后和治疗效果有重要意义。
但是，目前对于同一患者在治疗前后CDX2和Ki-67的变化情况还缺乏系统性的研究。
目的：
本研究的目的是分析同一患者在治疗前后CDX2和Ki-67的表达情况，以探究其对于Barrett食管治疗效果的影响。
方法：
选取20名Barrett食管患者，收集其治疗前和治疗后的食管黏膜组
织样本，采用免疫组化技术检测CDX2和Ki-67的表达情况，并进行比较分析。
结果：
在20例Barrett食管患者中，CDX2和Ki-67的表达均有显著差异。
治疗前，CDX2的表达率为85%，治疗后下降至50%；而Ki-67的表达
率为70%，治疗后下降到了40%。
两种标志物在治疗后的表达显著下降，说明治疗对于Barrett食管的影响显著。
结论：
CDX2和Ki-67在Barrett食管治疗前后的表达变化具有显著性差异，这表明它们作为分子标志物在Barrett食管的治疗和预后评价中具有重要作用。
但是，本研究的缺点是样本数较少，需要进一步扩大样本量以确
立结论。
乳腺癌p53与Ki-67和TopoⅡ的相关性研究及其预后价值探讨
乳腺癌p53与Ki-67和TopoⅡ的相关性研究及其预后价值探讨摘要】目的：探讨p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者预后之间的关系。
方法：通过免疫组织化学法检测乳腺癌组织中p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白的表达情况，采用Kaplan-Meier检验进行预后分析，并结合临床病理资料分析其对乳腺癌的预后诊断价值。
结果：p53蛋白表达与TopoⅡ蛋白表达呈正相关，Ki-67蛋白表达与ER表达呈正相关；p53蛋白阳性患者5年生存率低于p53蛋白阴性患者，且差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：p53蛋白与TopoⅡ蛋白呈密切相关，且p53蛋白检测可评估乳腺癌患者生存预后，这提示TopoⅡ可能有乳腺癌预后价值。
Ki-67蛋白表达与有无淋巴结转移有关，提示可作为评价乳腺癌转移的指标，而联合检测p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白更有助于乳腺癌临床预后评估。
【关键词】乳腺癌；预后；p53；Ki-67；TopoⅡ【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）22-0139-03本研究拟通过p53、Ki-67和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)各指标的蛋白检测以及与临床病理特征的关系和各蛋白之间的相关性，来探讨其对乳腺癌患者的预后价值。
1.资料及方法1.1 资料来源厦门市某医院2003年2月－2008年5月接受乳腺癌手术的乳腺癌病例。
1.2 检测方法所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片，采用二步法（EliVision试剂盒）检测。
采用已知乳腺癌阳性标本作阳性对照；以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断所有切片采用双盲观察，p53、Ki-67和TopoⅡ以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。
阳性百分率采用半定量判断标准，即选5个不同高倍视野，每个视野计数100个细胞，计算出其中阳性细胞的百分率。
阳性细胞数＜10%为（-），10%～25%为（+），26%～50%为（++），＞50%为（+++）。
CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性
CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中的表达及其与临床病理特征及预后的相关性牛东生【摘要】目的探讨CDC20、TOP2A、NEK2在食管鳞癌中表达及其与食管鳞癌临床病理特征及预后的相关性.方法选取实施根治性手术的食管鳞癌患者70例,均术中做病理取材标本,A组(癌组织)、B组(癌旁组织)、C组(正常组织),采用免疫组化法、半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CDC20、TOP2A、NEK2表达情况.结果 A组CDC20、TOP2A、NEK2表达水平最高,与B、C组差异明显(P＜0.05);B组CDC20、TOP2A、NEK2表达水平高于C组,差异明显(P＜0.05).食管鳞癌患者性别、年龄、瘤体大小、位置等因素与CDC20、TOP2A、NEK2表达无相关性(P＞0.05);TNM分期、淋巴转移及浸润因素与CDC20、TOP2A、NEK2呈正相关性(P＜0.05);肿瘤分化与CDC20、TOP2A、NEK2阳性表达率呈负相关.TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴转移、静脉浸润及CDC20、TOP2A、NEK2阳性表达均是影响食管鳞癌患者预后存活的危险因素.结论 CDC20、TOP2A、NEK2高表达与食管鳞癌转移、复发、预后均有密切相关,三项指标联检可准确评估食管癌病理状态,为患者预后判定提供参考.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2018(033)010【总页数】4页(P1579-1582)【关键词】食管鳞癌;CDC20;TOP2A;NEK2;相关性【作者】牛东生【作者单位】056002 河北省邯郸市第一医院【正文语种】中文【中图分类】R735.1多项研究报道，食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)已由全球恶性肿瘤第8位上升至第7位，且有着极高的死亡率[1]。
随着医疗研究对ESCC生物机制及分子研究的不断深入，ESCC相关的基因和蛋白质发生机制亦有重大突破，如Kim等[2]证实TOPA2表达与肿瘤细胞凋亡有着密切关联，研究亦发现细胞分裂周期蛋白20(CDC20)可以促进肿瘤细胞浸润性；有丝分裂监管相关激酶2(NEK2)在肿瘤的终末阶段病理组织中被证实大量表达[3]。
TopoⅡ、Ki-67、P53在胃食管结合部腺癌新辅助化疗疗效预测中的意义
TopoⅡ、Ki-67、P53在胃食管结合部腺癌新辅助化疗疗效预测中的意义张志忠;刘志强;张伟;李保中;李守淼【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2015(053)004【摘要】目的探讨TopoⅡ、Ki-67和P53在SiewertⅡ型胃食管结合部腺癌中的表达与化疗敏感性之间的关系.方法回顾性分析本院2010年6月～2013年12月行新辅助化疗的胃食管结合部腺癌患者72例.对所有患者均行SOX方案化疗,以RECIST 1.0评价标准评价疗效.用免疫组化方法评价3种蛋白的表达情况,分析各蛋白表达情况及与化疗疗效的关系.结果年龄和病理类型与化疗敏感性无关,本组72例患者中新辅助化疗有效率为48.6％,其中5例达病理完全缓解.3种蛋白的表达情况分别为:Topo Ⅱ阳性率为73.6％,Ki-67阳性率为59.7％,P53阳性率为33.3％.Ki-67和P53的表达与化疗敏感性有关(P=-0.023,P=0.031),但TopoⅡ的表达与化疗敏感性无关(P＞0.05).结论 Ki-67高表达和P53低表达是AGEJ SOX 方案新辅助化疗敏感性的影响因素,为AGEJ个体化新辅助化疗方案的选择提供有益的参考.【总页数】4页(P113-116)【作者】张志忠;刘志强;张伟;李保中;李守淼【作者单位】河南省安阳市肿瘤医院外科,河南安阳455000;河南省安阳市肿瘤医院外科,河南安阳455000;河南省安阳市肿瘤医院外科,河南安阳455000;河南省安阳市肿瘤医院外科,河南安阳455000;河南省安阳市肿瘤医院外科,河南安阳455000【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.Her-2阴性乳腺癌中激素受体、Ki-67、P53的表达与蒽环类新辅助化疗疗效的关系 [J], 徐玲玉;江勇;杨澜2.TOPOⅡα、Ki-67及p53在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义 [J], 周广正;陈守华;顾禾;张丽丽3.EGFR、HER2、Ki-67、P53在进展期胃癌新辅助化疗疗效预测中的应用 [J], 崔海滨;葛怀娥;白希永;张维;张媛媛4.SUV_(max)、Ki-67、p53、EGFR对三阴性乳腺癌新辅助化疗疗效的预测价值[J], 李雯;冯彦林5.新辅助化疗对乳腺癌患者survivin、Ki-67、ER、C-erbB-2、p53和肿瘤组织学分级的影响及其疗效预测意义 [J], 林奇;陈慧玉;刘洋;唐强;金灌培因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Ki-67抗原表达与食管鳞癌临床病理特征及其预后的关系
Ki-67抗原表达与食管鳞癌临床病理特征及其预后的关系赵晖;顾晓萌;王善政
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2003(043)006
【摘要】为探讨食管鳞癌患者癌组织中增殖细胞核相关抗原Ki-67表达的临床意义,采用免疫组织化学S-P法检测了62例食管鳞癌患者癌组织标本中Ki-67的表达水平.结果证实,Ki-67表达与性别、年龄、淋巴结转移、远处转移无相关性(P>0.05),与肿瘤长径、食管壁浸润程度、pTNM分期及肿瘤分化程度呈正相关关系(P<0.01).高表达组患者术后3年生存率低于低表达组,但无统计学差异.认为Ki-67抗原表达与反映食管鳞癌恶性程度的临床病理参数呈正相关关系,但对预后无评价意义.
【总页数】2页(P14-15)
【作者】赵晖;顾晓萌;王善政
【作者单位】山东大学齐鲁医院,山东,济南,250012;山东大学齐鲁医院,山东,济南,250012;山东大学齐鲁医院,山东,济南,250012
【正文语种】中文
【中图分类】R735.1
【相关文献】
1.Ki-67的表达与胃癌患者临床病理特征及预后的关系 [J], 黄天臣;肖建安;王青兵;王雁军;张勇;白东晓;邱新光
2.喉鳞癌Ki67抗原表达与临床病理特征及预后的关系 [J], 何培杰;肖宽林;李筱明;周梁;陆洪芬
3.甲状腺癌组织CXCR4、Ki-67表达与临床病理特征及预后的关系研究 [J], 汤一冰; 王万铁
4.食管鳞癌患者上消化道肿瘤家族史与其临床病理特征及预后的关系 [J], 范莹莹;侯志超;李强明;刘天阳;李向楠
5.腹膜恶性间皮瘤中肿瘤浸润淋巴细胞和Ki-67表达与临床病理特征及预后的关系[J], 杜雪梅;李鑫宝;马玲;高颖;孙萍萍;李雁
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食管鳞状细胞癌中MCM2蛋白与Ki-67的表达及对比研究
食管鳞状细胞癌中MCM2蛋白与Ki-67的表达及对比研究陶玉梅;陶仪声;马莉【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2011(27)4【摘要】目的探讨微小染色体维持蛋白2(minichromosome maintenance 2 protein,MCM2)与Ki-67在食管癌中的表达及两者表达的差异和相关性.方法采用免疫组化EliVision方法,分别检测90例食管鳞状细胞癌组织中MCM2,Ki-67的表达,计算其标记指数(labeling index,LI),分析MCM2,Ki-67在食管鳞癌中的表达及两者之间的差异和相关性.结果 90例食管癌组织均表达MCM2及Ki-67抗原,其中MCM2 LI高于Ki-67,两者差异有统计学意义(P＜0.05).同时显示MCM2及Ki-67的表达与食管鳞癌的分化程度具有相关性,MCM2在食管鳞癌各级组织间表达差异均有统计学意义(P＜0.01),而Ki-67只在Ⅰ级与Ⅲ级食管鳞癌组织间差异有统计学意义(P＜0.01).并且MCM2与Ki-67在食管鳞癌中的表达呈正相关关系(P＜0.01).结论 MCM2是优于Ki-67的细胞增殖标记物,可用于对食管鳞癌的分级和判断食管鳞癌恶性程度的高低.%Purpose To investigate the level of minichromosome maintenance 2 protein( MCM2 ) and Ki-67 expression in esophageal squamous cell carcinoma and to compare the differences and correlation between them. Methods We examined the immunohistochemical staining of MCM2 and Ki-67 in 90 cases of esophageal squamous cell carcinoma, and quantified MCM2 and Ki-67 expression by calculating a labeling index ( LI ). The pattern and LI of MCM2 and Ki-67 expression in esophageal squamous cell carcinoma werecompared. Results MCM2 and Ki-67 expressed in nearly all the 90 esophageal squamous cell carcinomas. Compared with the LI of Ki-67 , the LI of MCM2 was higher. The difference of LI between MCM2 and Ki-67 was significant ( P ＜ 0. 05 ). A significant difference was found between MCM2 and Ki-67 LI and also between the differentiation degrees of esophageal squamous cell carcinoma. In addition, the differences of MCM2 LI among the three grades of esophageal squamous cell carcinoma were significant ( P ＜ 0. 01 ) . The difference of Ki-67 LI between the grades Ⅰ and Ⅲ of esophageal squamous cell carcinoma was also significant ( P ＜ 0. 01 ). Conclusion MCM2 is a better diagnostic marker for esophageal squamous cell carcinoma than Ki-67 , and also useful in evaluating the degree of malignancy in esophageal squamous cell carcinoma,which helps predict the clinical prognosis.【总页数】3页(P382-384)【作者】陶玉梅;陶仪声;马莉【作者单位】蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠,233030;蚌埠医学院病理学教研室,蚌埠,233030;南通市妇幼保健院病理科,南通,226006【正文语种】中文【中图分类】R735.1【相关文献】1.食管鳞状细胞癌中 VEGF 、P53及 Ki-67的表达及临床意义 [J], 刘汉忠;杨继洲;肖兰;何慧华;王岚2.Foxo1与Ki-67在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其意义 [J], 朱允和;向小勇;陈力;沈学远3.整合素α3和Ki-67在食管鳞状细胞癌中的表达及其与术后复发转移和预后的关系 [J], 朱小康;朱自江;陈学忠;薛继军;郑凤长;汪淑芸4.MCM2、Ki-67在甲状腺滤泡性肿瘤中的表达及其意义 [J], 黄震;赵亚娟5.基于iTRAQ蛋白组学技术筛选的关键差异蛋白PCNA和MCM2在食管鳞癌中的表达及意义 [J], 李超;刘文颖;马遇庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
食管癌变过程中C-erbB-2和Ki-67基因表达变化及意义
食管癌变过程中C-erbB-2和Ki-67基因表达变化及意义摘要】目的探讨食管肿瘤癌变机制。
方法对1998年食管内镜普查诊断为食管异型增生的57例患者随访2年，40例仍为异型增生（未癌变组），17例进展为早期癌（癌变组）。
对2次活检组织标本分别采用免疫组织化学S-P法进行C-erbB-2和Ki-67蛋白检测。
结果 1998年标本C-erbB-2和Ki-67在两组表达差异无统计意义（P＞0.05）；2000年标本两者表达均升高，但癌变组中高于非癌变组，（P＜0.05）。
癌变组C-erbB-2和Ki-67 2年中由阴性变为阳性的比率分别高于非癌变组中（P＜0.05）。
17例食管早期癌标本中C-erbB-2和Ki-67的相关分析示两者存在正相关（P＜0.05）。
结论 C-erbB-2和Ki-67可能在食管癌变中起关键作用【关键词】食管早期癌异型增生免疫组织化学C-erbB-2基因又称neu或HER-2 ,定位于17q21 ,编码分子量为185KD的跨膜蛋白,该蛋白与表皮生长因子受体(EGFR) 具有高度的同源性,故又称为人类表皮生长因子相关基因[1]。
该基因扩增或过表达出现于某些肿瘤组织中，参与肿瘤的发生和发展过程，并与预后有关。
Ki67是一种与增殖细胞相关的核抗原，是近年来认为更能有效评估肿瘤细胞增殖活性的重要标记物。
本实验用免疫组化的方法通过动态观察基因C-erbB-2和Ki-67在食管癌变过程中的表达，以探讨其在食管癌变过程中的作用。
1 材料与方法1.1 组织标本本实验采用的标本为安阳市肿瘤医院1998年和2000年内镜普查的食管活检组织标本。
对1998年普查诊断为异型增生的57例进行随访，两年后仍为异型增生40例，定为未癌变组，进展为早期癌17例，为癌变组。
均经病理证实。
1.2 试剂与方法所用抗体、免疫组化试剂盒和DAB试剂盒均购自北京中杉公司。
所有组织均用体积分数10％甲醛固定，常规石蜡包埋，切片。
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【 要 】 目的 探 讨 Ｔｐ Ｉ及 Ｋ 一６ 食 管 鳞 癌 的 表 达 及 其 与 肿 瘤 分 化 程 度 、 巴 结 转 移 的 关 系。方 法 应 用免 摘 ｏｏＩ ｊ ７在 淋
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２０ 年 ９月 第 １ ０８ Ｏ卷第 ５期
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耐药 基 因 Ｔ ｐ 及 一６ ｏ ｏＩ Ｉ ７在 食 管鳞 癌 的表 达
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一
【 键 词 】 食 管 鳞 癌 ； ｏｏ ； ｉ ７ 免 疫 组 化 关 Ｔｐ Ⅱ ｋ一６ ； 【 图分 类 号 】 Ｒ７５２ 中 ３ ． 【 献标 识 码 】 Ａ 文 【 章 编 号 】 １７．１３ ２０ ） ．０８０ 文 ６２７９ （０８０ ００ —２ ５
Ｔｈ ｐｒ ｓｉｎ ｆＴｏ ｏ Ⅱ ａ ｅ Ｅｘ ｅ ｓｏ ｏ ｐ ｎｄ Ｋｉ一６ ｎ Ｅｓ ｈａ ｅ ｌＳｑ ｍ ｏ ｓＣｅｌＣａ ｃｎｏ ７ ｉ ｏｐ ｇ ａ ｕａ ｕ ｌ ｒ ｉ ｍａ
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疫 组 化 检 测 ７ 例 食 管鳞 癌 组 织 中 Ｔｐ Ｉ和 Ｋ 一６ ５ ｏｏＩ ｊ ７的表 达 情 况 。结 果 ６ ７的表 达 可作 为 判 断食 管 鳞 癌 预 后 的 重 要 指 标 。 Ｔｐ ｏ Ｕ和 ｋ 一６ ｏ ｉ ７的表 达 与 食 管 鳞 癌 的 组 织 分 化
程 度 和 淋 巴结 转 移 均 有 密切 关 系（ ＜ ． ） 并 且 Ｔｐ １和 ｋ 一６ 性 表 达 具 有 较 强 的一 致 性 。结 论 栓 测 Ｔ ｐ Ｉ和 ｋ Ｐ ００ ， ５ ｏｏｉ ｉ ７阳 ｏｏＩ ｉ
表 １ Ｔ ｐ Ｉ 表 达 与 食 管 鳞 癌 分 化 程 度 及 淋 巴 结 转 移 的 关 系 ｏｏ１的
其 结 合 而 行 使 抗 肿 瘤 作 用 。当 基 因 突 变 时 ， 酶 的转 录 水 平 或 此 活 性 下 降 ， 癌药 物不 能 与 其 结 合 而 产 生 耐 药 ， 抗 肿 瘤 药 物 抗 使
ｓｏ Ｒｅ ｕ ｔ Ｔ０ ｏ Ｉ ｎ ｉｎ． ｓ ｌ ｓ ｐ Ｉａ ｄ Ｋｉ一６ ｒ ｌｓ ｌ ｅａｅ ｏ ｔｅ ｈｉｔｄｆｅｅ ｔａｉｎ ｇａ ｅ ｎ ｙ ｈ ｎ ｄ ｔｓａ ｉ ｆｅ ｏ ｈ ｇ ａ ｑｕ — ７ ｗｅ ｅｃｏ ｅｙ ｒｌｔｄ ｔ ｈ ｓ ｉ ｒ ｎｉｔｏ ｒ ｄ ｓａ ｄ ｌｍｐ ｏ ｅ ｍｅａ ｔｓｓｏ ｓ ｐ ａ ｅ ｌｓ ａ ｏ ｍｏ ｓｃ ｌ ａ ｃｎ ｍａ・ａ ｄ ｔｅｅ ｅ ｉｔｄ ａｇｅ ｔｃ ｎ ｉｔｎ ｅｂ ｔ ｅ ｈ ｏ ｉｉｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆＴ Ｐ Ｉａ ｄＫｉ ６ Ｃｏｎ ｌｓｏｎ Ｔｈ ｘ ｕ ｅ ｃ ｒｉ ｏ ｎ ｈ ｒ ｘｓｅ ｒ ａ ｏ ｓｓｅ ｃ ｅｗｅ ｎ ｔｅｐ ｓｔ ｘ ｒｓ ｉｎｏ Ｏ Ｉ ｎ 一 ７． ｖ Ｏ ｃｕ ｉ ｓ ｅｅ —
不 能 发 挥 抗 癌 活 性 而 耐 药 。 细 胞 增 殖 和 凋 亡 在 肿 瘤 发 生 时 起 着 相 当重 要 的 作 用 。 因 此 ， 了解 肿 瘤 增 殖 动 力 学 参 数 ， 以 监 可 测 病 变 的 进 展 、 导 临 床 治 疗并 对 预 后 进 行 判 断 。 ｌ 一６ 指 （ ７是 一 ｉ 种 与 细 胞 增 殖 有 关 的核 抗 原 ， 的 阳 性 率 与 肿 瘤 的 恶 性 程 度 、 它 分 级 ， 巴结 转移 也呈 正 相 关… 。但 在 食 管 鳞 癌 中 的 表 达 报 道 淋
ＫＥＹＷ ＯＲＤＳ ｅ ｏ ｈ ｇ ａ ｑｕ ｍ ｏ ｓ ｃ ｌ ｃ ｒｉ ｏ Ｔ ｐ Ｉ Ｋｉ一６７ ｓ ｐ ａ ｅ ｓ ａ ｕ ｅｌ ａ ｃｎ ｍａ ｌ ｏ Ｉ ｏ ｉ ｍｍｕ ｏ ｉｔｃ ｅ ｓｒ ｎ ｈｓｏ ｈ ｍｉｔｖ
Ｄ Ａ拓普 异 构 酶 （ｏ １） 一 种 核 内酶 ， Ｄ Ａ复 制 时 必 Ｎ Ｔｐ Ｉ 是 ｏ 是 Ｎ 需 的 酶 ， 是 某 些 抗 肿 瘤 药 物 的 “ 分 子 ” 抗 肿 瘤 药 物 通 过 与 也 靶 ，
ｓ ｉ ｉ ｈ ｉ ｄｆ ｒ ｎｉｔ ｎ ｇａ ｅ ｎ ｙ ｈ ｎ ｄ ｔｓ ｓ ．Ｍｅｈ ｄ Ｉ ｈｐ ｗ ｔ ｔｅ ｈｓ ｉ ｅｅ ｔ ｉ ｒ ｄ ｓａ ｄ ｌｍｐ ｏ ｅ ｍｅａ ｔ ｉ ｈ ｏ ｔ ａｏ ａｓ ｔｏ ｓ ｍｍｕ ｏ ｉ ｃ ｅ ｉｔ ａ ｐ ｆ ｄ ｔ ｔ ｄ ｈ ｘ ｒ ｓ ｎ ｈｓ ｈ ｍ ｓ ｙ ｗ ｓａ ｐ ｅ ｏ ｓ ｙ ｔｅ ｅ ｐ ｅ — ｏ ｔ ｒ ｉ ｕ