柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA在乳酸乳球菌中的克隆与表达

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柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA在乳酸乳球菌中的克隆与表达张雪莉1，荣泽秦2，金崔尚3，何庆2，刘尚 2（1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京 100089；2.中国农业大学动物医学院，北京100094；3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001)摘要：用PCR技术特异扩增了柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA序列，克隆至质粒pMD18-T中，获得重组质粒pMD18-T-TA4，采用Kpn I/Sa c I双酶切法及PCR确认正确后，将TA4基因cDNA目的片段亚克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36n中，电穿孔法转化乳酸乳球菌LM0230，获得重组质粒pMG36n-TA4，采用Kpn I/Sac I双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。

获得TA4乳酸乳球菌表达株，经SDS-PAGE电泳分析，结果表明表达产物与预期大小的TA4蛋白分子量一致。

关键词：柔嫩艾美耳球虫；TA4抗原基因cDNA；乳酸乳球菌；克隆与表达Cloning and expression of TA4 antigen from Eimeria tenella in Lactococcus lactis ZHANG Li1, QIN Ze-rong2, CUI Shang-jin3, HE Zhao-qing2, LIU Shang-gao2(1.Beijing Municipal Academy of Agriculture & Forestry, Beijing 100089, China;2. China Agricultural University, Beijing 100094, China;3. Harbin Veterinary Research Institute of ChineseAcademy of Agricultural Sciences, Harbin 100051, China)Abstract:TA4 antigen cDNA of E.tenella was amplified by PCR and cloned into a vector pMD18-T. The positive plasmid contained TA4 antigen cDNA was determinded by restriction enzyme analysis and PCR. The plasmid pMD18-T-TA4 and the vector pMG36n were both digested by Sac I and Kpn I. The cDNA encoding TA4 antigen was subcloned into pMG36n and transferred into Lactococcus lactis LM0230 by electroporation. It proved that the positive recombinant plasmid pMG36n-TA4 contained cDNA encoding TA4 antigen by restriction enzyme analysis and sequence determination. In the positive transformants, the TA4 antigen was expressed as a fusion protein in Lactococcus lactis LM0230, which was verified by SDS-PAGE .Key words:Eimeria tenella ; TA4 Antigen; Lactococcus lactis; cloning and expression球虫子孢子表面的一种抗原TA4为25 Ku的糖蛋白，是由8 Ku和17 Ku两条多肽通过二硫键连接而成的。

柔嫩艾美耳球虫cDNA文库的构建

中图分类号：８２７２￥５．３
文献标识码：Ａ
文章编号：０７５３（０２０ —０４０１０ —０８２０）５０６ — ２
摘要：异硫氰酸胍法从孢子化７ｈ的卵囊１２方法用．为消除外源性ＲＮＡ酶污染ＲＮＡ样品，文所用本中提取总ＲＮＡ，合成引物用置换合成法合成链如吸和含ｉ溶液ｓ的总ｃＤＮＡ，ＤＮＡ与Ｅ再用ｏｉｏｄｎ纤维素的塑料制品（离心管，头）溶液（Ｔｒｃｌ（Ｔ）一ｇ
亿元人民币，还不包括因鸡球虫病和亚临床症状造这成的损失，重阻碍了我国养鸡业的发展。严我国鸡球虫研究着重集中于生物学、疫学以及免药物防治第等方面传统领域，子水平研究仍处于起分
鸡球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内，量寄生时严大
ｃＮＡ含量及长度的检测，ＤＮＡ与ＸＮＡ的连接及入ＤｃＤ体外包装以及文库的质量的检测和扩增等实验详见Ｐｏｇｒｍｅａ公司的试剂盒说明书。
维普资讯
６４
动物医学进展
２００２年
第２３卷
第５期（第１１期）总２
柔嫩艾美耳球虫ｃＮＡ文库的构建Ｄ
蒋建林，蒋金书
（国农业大学动物医学院，京１Ｏ９）中北ＯＯ４

柔嫩艾美耳球虫rhomboid抗原基因在卡介苗中的克隆与表达

文献标识码：Ａ
文章编号：１０ —５９２０）４０７ —５０８０８（０９０ —２００
Ｃｌｎ９ａｄｅｐｅｓｏｆＥｉｅｉｅｅｌｈｍｏｄｇｎｎＢＣＧｏｎｘｒｓｉｎｏｍｒｔｎｌｒｏｂｉｅｅｉｉｎａａ
建了两个重组质粒，其表达产物与柔嫩艾美耳球虫阳性血清具有免疫反应性，为重组卡介苗在鸡球虫病防治方面
的研究奠定了基础
关键词：柔嫩艾美耳球虫；ｒｏｏｄ基因；ｒＣＧ；球虫病疫苗ｈｍｂｉＢ
中分类号：￥５．２８２７３
到大肠杆菌分支杆菌穿梭表达载体ｐ２１整合表达载体ｐ３１中，获得重组质粒ｐｈ一１ｐｈ一６。ＭＶ６和ＭＶ６Ｒｏ２和Ｒｏ１６３
将重组质粒电穿孔转化卡介苗，经热诱导后对其表达产物进行Ｓ —ＡＧＤＳＰＥ和ｗｅｔｒｌｔｓｎｂｏ分析。结果表明成功构ｅ
柔嫩艾美耳球虫ｒｏｏｄ抗原基因ｈｍｂｉ在卡介苗中的克隆与表达
王秋悦，，任科研，宫鹏涛，李建华，张西臣
ｆ吉林人学农学部畜牧兽医学院，古林长春１０６１３０２；２吉林省兽医科学研究所，古林长春１０６）．３０２
ｉｔｔｅＭＶ２６１ａｐＶ３ｅｒｓｉｎｖｃｏｒ，ｒｐｅｔｌＴｈｅｒｓｔｎｇｎｏｈｐｎｄＭ６１ｘｐｅｓｏｅｔｓｅｓｃｉｙ．ｖｅｅｕｌｉｐｌｓｉ，ｐＲｈｏ一６１ａｄａｍｄｓ２ｎｐＲｈ一ｗｅｅｏ３６１ｒ

柔嫩艾美耳球虫表面抗原(EtSAG)基因的分离及鉴定

ＥＳｆｉｆｒｎｉｌｙｘｒｓｅｇｎｓｆｕｐｒａｅｏｃｓｓｎｓｒａｅｏｃｓｓＢｌｓｓａｃｅｆｕｎｔａＢＷ４一０３ＴｓｏｄｆｅｅｔａｌｅｐｅｓｄｅｅｏｎｓｏｕｌｔｄｏｙｔａｄｐｏｕｌｔｄｏｙｔａｔｅｒｈｓｏｄｈｔＣ
ｏｃｓ，ｐｒｚｉｓｎｒｚｉｓ．Ｔｅ，Ｂ一０ａｃｎｄｔｔｅｐｏａｙｔｘｒｓｎｖｃｒｐＴ２ｃｏｙｔｓｏｏｏｔｄｍｅｏｔ）ｈｎＷ４Ｃ３ｗｓｌｅｏｈｒｋｒｏｃｅｐｅｉｅｔＥ一８（＋）ｈｓｅａｏｅｏｉｓｏｏ．Ｔｅ
达载体ｐＴ２Ｃ表达该基因，到的融合蛋白大小约为３Ｄ，合预期大小。经Ｗｅｔｒｌ分析，重组蛋Ｅ一８得６ｋａ符ｓｎｂｔｅｏ该
白可被兔抗柔嫩艾关耳球虫的多克隆抗血清识别，明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研表究该基因的生物学功能奠定了基础。关键词：柔嫩艾美耳球虫；面抗原；隆表达；表克抗原性分析
ＡＮＴＩＧＥＮＥＮＥＧｏＦＥｊ昆５『吼上
ＭＡＷｅ－ａ，ＡｏｇｙＪＮＧＬａ —ａＤＯＧＨｕ，ＨＡ．ｉｇ，Ｈｈｎｈｉ，ｉｉ，ＨＮＨｎ —ｕ，ＩｊｏＡｉｌｎ，ＮｉＺＯＱｉｎＺＵＳｕ —ａｎｉｐ
列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有７％以上的同源性，名为ＥＳＧ。利用荧光定量ＰＲ（ｅｌｉＣ检测２命ｔＡＣＲａｔＰＲ） —ｍｅ发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高，且随着孢子化时间的延长，转录拷贝数逐渐增加。采用原核表

柔嫩艾美耳球虫LZ株MIC-5基因的克隆与表达

柔嫩艾美耳球虫LZ株MIC-5基因的克隆与表达孟庆玲;乔军;才学鹏;景志忠;田广孚;闫鸿斌【期刊名称】《甘肃农业大学学报》【年(卷),期】2007(042)006【摘要】提取柔嫩艾美耳球虫兰州株孢子化卵囊总RNA,运用RT-PCR技术扩增EtMIC-5基因片段进行测序,并克隆人大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达.结果表明,该基因片段长918 bp,编码306个氨基酸.与GenBank报道的柔嫩艾美耳球虫Houghton株MIC-5基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列同源性为99.2%和99.6%.在推导的MIC-5氨基酸序列中,第15～89、90～160、173～242和245～306位保守的cys残基形成4个Apple样结构域(A-domain),推测该蛋白可能在虫体与宿主细胞的黏附中起重要作用.转化重组质粒pETMIC-5的BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE和western blot分析证实目的蛋白成功表达,重组蛋白的表达量可占菌体蛋白的15.2%.【总页数】5页(P8-12)【作者】孟庆玲;乔军;才学鹏;景志忠;田广孚;闫鸿斌【作者单位】中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730070;甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730070【正文语种】中文【中图分类】S851.347.203;Q786【相关文献】1.柔嫩艾美耳球虫甘肃株钙调域蛋白激酶基因的克隆与表达 [J], 周建民;鲍杰;汪明2.柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG7基因的克隆与表达 [J], 李红炳3.柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达 [J], 程军;孔春林;李婷;黄兵;董辉;郭涛;韩红玉;姜连连;赵其平;朱顺海;马卫娇;曾艳波4.柔嫩艾美耳球虫rhomboid抗原基因在卡介苗中的克隆与表达 [J], 王秋悦;任科研;宫鹏涛;李建华;张西臣5.柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)杂交株F2 SO7基因ORF的克隆与表达 [J], 杨桂连;张西臣;赵权;李建华;尹继刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析

柔嫩艾美耳球虫烯醇化酶基因的克隆表达和抗原性分析郭长明;袁橙;张步彩;朱善元;严若峰;徐立新;宋小凯;李祥瑞【摘要】Enolase gene of Eimeria tenella ( GenBank Accession No.GU169333) ( EtENO) was amplified from total RNA extracted from E. tenella second-generation merozoites by RT-PCR. The sequence of EtENO contains an open reading frame of 1338 bp and encodes 445 amino acid. DNAstar software analysis showed that EtENO has high antigenic index, lots of hydrophilicity plots and T cell motif. The recombinant plasmid pET-28a ( + )-ENO was constructed and transformed into Escherichia coliBL21(DE3) for expres-sion. SDS-PAGE indicated that the fusion protein (5.17× 104 ) was expressed in the supernatant after induction by IPTG. Western blotting revealed that the protein was spe-cifically recognized by polyclonal antibodies against E. tenella, suggesting that the fusion protein is antigenic.%从纯化的柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中提取总RNA,应用RT-PCR技术克隆获得了烯醇化酶基因(GenBank Accession No.GU169333).烯醇化酶基因开放阅读框长1338 bp,编码445个氨基酸.应用DNAstar软件对氨基酸序列的亲水区域和疏水区域的分布、抗原指数及T细胞基序进行分析,结果显示该蛋白质亲水性较强,抗原指数高,含较多T细胞表位.同时构建了烯醇化酶原核表达重组质粒pET-28a(+)-ENO.用IPTG对重组质粒pET-28a(+)-ENO进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白大小约为5.17×104,主要存在于裂解上清中.Western blotting结果显示该重组蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗体识别,表明该蛋白质具有较好的免疫原性.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2017(033)003【总页数】7页(P642-648)【关键词】柔嫩艾美耳球虫;烯醇化酶;克隆;表达;免疫原性【作者】郭长明;袁橙;张步彩;朱善元;严若峰;徐立新;宋小凯;李祥瑞【作者单位】南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏泰州 225300;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095【正文语种】中文【中图分类】S858.312.72+3鸡球虫病是严重危害养禽业的寄生虫病，每年造成巨大的经济损失。

鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达

鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达高翔;杜爱芳;张娟敏;侯玉慧;庞林海【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2008(030)005【摘要】本试验对E.tcnella ZJ株的TA4基因进行了克隆和表达.根据已报道的柔嫩艾美尔球虫TA4基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR的方法扩增得到一特异片段,将扩增产物克隆至pMD18-T,转化DH5-α感受态,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序.测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99.1%.然后将重组质粒和表达载体pGEX-4T2分别以EcoR Ⅰ、Xbo Ⅰ酶切后构建重组表达载体pGEX-TA4,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IFTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示,TA4基因在大肠杆茵中获得表达;融合蛋白的分子量约为43 ku,以包涵体形式存在;诱导6 h的蛋白表达量可达到35.9%,采用抗GST抗体进行Western blot,成功检测到了该特异性条带.【总页数】5页(P366-370)【作者】高翔;杜爱芳;张娟敏;侯玉慧;庞林海【作者单位】浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州,310029;嘉兴市畜牧兽医站,浙江嘉兴,314000;浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】S852.723【相关文献】1.鸡柔嫩艾美耳球虫江苏分离株5401基因的克隆、序列分析及原核表达 [J], 黄欣梅;宋小凯;徐立新;严若峰;李祥瑞2.柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)BJ株TA4基因的克隆和序列分析 [J], 李安兴;秦泽荣;张欣萍3.鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株5401基因在大肠杆菌中的表达 [J], 杜爱芳;王素华;索勋4.柔嫩艾美耳球虫ZJ株5401基因的克隆和序列分析 [J], 杜爱芳;王素华;索勋5.鸡柔嫩艾美尔球虫ZJ株3-1E基因的原核表达及鉴定 [J], 徐慧;张红丽;曲道峰;周前进;杜爱芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡柔嫩艾美耳球虫2种假定致密颗粒蛋白基因的克隆与表达

鸡柔嫩艾美耳球虫2种假定致密颗粒蛋白基因的克隆与表达李天恩;周思含;孙洪超;付媛;石团员;闫文朝【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2024(36)3【摘要】柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确切报道。

为发掘柔嫩艾美耳球虫GRAs并研究其功能,采用生物信息学、分子生物学、免疫学等技术从E.tenella北京株中鉴定到2种假定致密颗粒蛋白(hypothetical dense granule protein,hEtGRA)hEtGRA12、hEtGRA9,并用纯化后的蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA、Western blot方法检测2种蛋白的抗原性。

分子克隆结果表明,hEtGRA 12、hEtGRA 9基因编码区长度分别为1188、1110 bp,分别编码395、369个氨基酸,与其他顶复合器门原虫致密颗粒蛋白GRA12、GRA9物种间相似性分别为28.8%~39.6%、27.5%~29.5%;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9条带大小分别为63.6、67.0 ku;ELISA与Western blot结果表明,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9均能诱导小鼠产生较高的抗体水平,且均可被鸡抗E.tenella阳性血清识别,表明具有较好的抗原性。

该研究鉴定到2种球虫假定致密颗粒蛋白基因hEtGRA 12、hEtGRA 9,获得了重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9,为球虫致密颗粒蛋白基因功能和免疫应用研究奠定了基础。

【总页数】12页(P503-514)【作者】李天恩;周思含;孙洪超;付媛;石团员;闫文朝【作者单位】河南科技大学动物科技学院;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S858.31【相关文献】1.鸡柔嫩艾美耳球虫江苏分离株5401基因的克隆、序列分析及原核表达2.柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP559基因克隆与真核表达3.鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株TA4基因的克隆及原核表达4.鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白(Etmic-2)与鸡泛素融合蛋白基因的DNA疫苗表达载体的构建5.柔嫩艾美耳球虫杨凌株3-1E基因的克隆、表达与蛋白结构预测因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达

柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达王卫婷;姚鹏;周赛;王黎霞;安健【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2011(26)3【摘要】The sequences of EtMIC4-N gene were amplified by RT-PCR and deleted N terminal signal peptide. Meanwhile, in order to facilitate detection and purification of the expression, the designation of primers for changing the 3 'end of the stop co-don was carried out, and the target protein was labeled with a C-terminal c-myc and 6His antigen. The processed MIC4-N gene was connected to pPICZaA, an expression vector of Pichia Pastoris by double digestion and transformed into JM109 competent cells. The recombinant expression vectors being identified by double digestion, PCR and sequencing were linearized and transformed into GS115 competent cells. After being screened by YPD containing high concentrations of Zeocin and PCR. The positive clone was cultured in flask with BMMY and induced by methanol. The results of SDS-PAGE and Western Blot analysis suggested that this recombinant protein was successfully expressed and secreted into BMMY supermatant.%应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc 和6His抗原标签.通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞.再经EcoR Ⅰ与Not Ⅰ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中.用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功.【总页数】4页(P24-27)【作者】王卫婷;姚鹏;周赛;王黎霞;安健【作者单位】北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京农业职业学院,北京102442;北京农学院动物科学技术学院,北京102206【正文语种】中文【中图分类】S831.7【相关文献】1.柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶真核表达质粒的构建及其在DF-1细胞中的表达 [J], 朱雪龙;黄兵;韩红玉;赵其平;朱顺海;李聪;门启斐;王自文;夏伟丽2.柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2真核表达质粒的构建及在细胞中的表达 [J], 杨斯涵;赵其平;韩红玉;朱顺海;李莎;翟颀;梁思婷;杨亮宇;黄兵3.柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达 [J], 王晔;姜连连;韩红玉;薛璞;赵其平;董辉;朱顺海;舒凡帆;黄兵4.柔嫩艾美耳球虫Serpin基因真核表达载体的构建及其瞬时表达 [J], 李文超;吕强;顾有方;宫鹏涛;李建华;张西臣5.柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白序列分析与真核表达 [J], 王黎霞;张鹏;张建军;安健因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡柔嫩艾美耳球虫表达序列标签和不同发育阶段基因表达谱分析的开题报告

鸡柔嫩艾美耳球虫表达序列标签和不同发育阶段基
因表达谱分析的开题报告
引言：
鸡脑是鸡柔嫩艾美耳球虫的主要寄生场所，也是鸡神经系统研究的重要领域。

研究鸡脑中基因表达谱的变化，可以揭示鸡柔嫩艾美耳球虫对鸡神经系统产生的影响及其相关生物学机制。

近年来，随着高通量测序技术的不断发展，RNA-seq技术已成为研究基因表达谱的首选方法。

本文拟通过鸡柔嫩艾美耳球虫表达序列标签和RNA-seq技术分析鸡脑不同发育阶段中基因表达谱的变化，以期为深入探究鸡柔嫩艾美耳球虫对鸡神经系统的影响提供重要的分子生物学依据。

方法：
1.建立鸡柔嫩艾美耳球虫cDNA文库与基因表达谱分析
将鸡脑中不同发育阶段的总RNA提取出来，然后用Oligo（dT）与cDNA合成反应得到完整的cDNA。

接着将cDNA进行捕获，将其转化为文库，并进行高通量测序，得到高质量的基因表达清单。

2.基因注释及差异表达基因筛选
将测序结果介绍到数据库中进行注释，采用差异表达分析方法筛选出不同发育阶段鸡脑中的差异表达基因，以期获得对鸡柔嫩艾美耳球虫寄生和毒理生成关键调控作用的基因集。

3.重要基因生物学功能分析及信号通路富集分析
通过BLAST分析及注释，分析差异表达的基因的生物学功能。

接着对筛选出来的有很重要的生物学功能的差异表达基因，系统分析其所涉及的信号通路，找到可能的生物学机制。

预期结果：
通过本研究的开展，我们可以筛选出鸡脑中不同发育阶段的差异基因表达清单，揭示鸡柔嫩艾美耳球虫寄生过程中毒理学影响所产生的调控影响，为揭示鸡柔嫩艾美耳球虫对鸡神经系统的影响及其相关的生物学机制提供理论和实验基础。

柔嫩艾美耳球虫Diclazuril抗性株与Clopidol抗性株的实验室诱导

柔嫩艾美耳球虫Diclazuril抗性株与Clopidol抗性株的实验室诱导甘德培[1];汪明[2];吴志光[3]【期刊名称】《中国农业大学学报》【年(卷),期】1998(000)0S2【摘要】在药物浓度递增的情况下,经过10次传代,诱导出对1.25mg·kg-1地克球利产生抗药性的 Eimeriatenella 虫株,初始诱导浓度为0.07mg·kg-1;经过6次传代,诱导出对150mg·kg-1克球粉产生抗药性的 E.tenella 虫株,初始诱导浓度为75mg·kg-1.低浓度(0.125mg·kg-1)地克球利产生了较为稳定的抗药性,则诱导过程便进行得很快,一步一个台阶,即球虫的抗药性突破某一阈值后很容易对高一级浓度的药物产生抗药性.因此,在鸡场球虫病的防治中,虽然地克株利具有高效抗球虫作用,但无论采用何种用药方案,其使用【总页数】1页(P160-160)【作者】甘德培[1];汪明[2];吴志光[3]【作者单位】[1]中国农业大学动物医学院;[2]中国农业大学动物医学院北京100094;[3]北京 100094【正文语种】中文【中图分类】S852.7【相关文献】1.柔嫩艾美耳球虫氯嗪苯乙氰抗性株与rn氯羟吡啶抗性株的实验室诱导 [J], 甘德培;汪明;吴志光;郭建宏2.柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株的实验室诱导 [J], 王慧珍;沈祥广;刘雅红3.柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导 [J], 王海霞;韩红玉;赵其平;朱顺海;黄兵;董辉;王青杰;余水兰;于钰;梁珊珊4.柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导 [J], 韩红玉;赵其平;陈兆国;黄兵5.柔嫩艾美耳球虫拉沙里菌素抗性虫株的实验室诱导 [J], 余丽芸;汪明;蒋金书;侯喜林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柔嫩艾美耳球虫两种表面抗原基因的原核表达与鉴定

柔嫩艾美耳球虫两种表面抗原基因的原核表达与鉴定陈会亚;费陈忠;杨帆帆;王霄旸;薛飞群【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)007【摘要】为进一步研究柔嫩艾美耳球虫表面抗原蛋白,应用RT-PCR从柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子总RNA扩增表面抗原基因SAG19(Q70CD0)和SAGfm(U6L233),与pGEM-T easy载体连接,扩增目的片段后分别双酶切扩增产物与pET-28a(+),连接转化至BL21后,诱导表达,分别获得两种重组蛋白.SDS-PAGE 结果表明,两种重组蛋白的分子质量均为32 ku,为包涵体蛋白形式.分别以感染柔嫩艾美耳球虫的鸡血清和重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的多克隆抗体作为一抗,经Western blot分析,结果表明重组蛋白具有良好的免疫原性和抗原性.通过对这两种表面抗原基因的研究,为基因工程疫苗的研究提供一定的理论依据.【总页数】6页(P17-22)【作者】陈会亚;费陈忠;杨帆帆;王霄旸;薛飞群【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室 /农业部动物寄生虫病学重点开放实验室,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室 /农业部动物寄生虫病学重点开放实验室,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室 /农业部动物寄生虫病学重点开放实验室,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室 /农业部动物寄生虫病学重点开放实验室,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所/中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室 /农业部动物寄生虫病学重点开放实验室,上海 200241【正文语种】中文【中图分类】S852.723【相关文献】1.鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因sag10在毕赤酵母中的表达及鉴定 [J], 韩德强;丁宏标;乔宇;索勋;郝永清2.柔嫩艾美耳球虫GZ株子孢子表面抗原基因的克隆及序列分析 [J], 秦睿玲;张西臣;李建华;秦建华;田宗成;尹继刚3.柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因(λMZ5-7) 在大肠杆菌中的表达 [J], 韩红玉;黄兵4.柔嫩艾美耳球虫表面抗原(EtSAG)基因的分离及鉴定 [J], 马卫娇;韩红玉;姜连连;董辉;赵其平;朱顺海;程军;曾艳波;黄兵5.柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因(λMZ5-7)的克隆及序列分析 [J], 韩红玉;黄兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）免疫应答的形态学观察

鸡柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）免疫应答的形态学观察陈明勇;蒋金书【期刊名称】《北京农业大学学报》【年(卷),期】1991(017)004【摘要】用柔嫩艾美耳球虫卵囊活苗对京白雏鸡进行一次免疫、二次免疫及涓滴免疫试验,对免疫后、雏鸡腔上囊、脾脏、胸腺及盲肠扁桃体等组织器官的免疫应答作了较为详细的观察。

免疫后上述组织器官淋巴细胞明显增多,形成大量淋巴滤泡;通过对免疫组和对照组雏鸡上述免疫组织器官的对照检查,表明三种免疫方法免疫后腔上囊、脾脏、胸腺及盲肠扁桃体均呈现不同程度的增生,其中以涓滴免疫和二次免疫比较明显。

试验结果提示,一次免疫、二次免疫及涓滴免疫均可刺激机体免疫组织器官淋巴细胞大量增生,产生有效的免疫应答反应,对强毒攻击表现有效的抵抗力。

【总页数】4页(P113-116)【作者】陈明勇;蒋金书【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】S858.315.9【相关文献】1.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)小配子发育超微结构的观察 [J], 安健;汪明;孔繁瑶;殷佩云2.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)裂殖子超微结构的观察 [J], 安健;汪明;孔繁瑶;殷佩云3.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)早熟株与亲本株致病性和繁殖力的研究 [J], 古少鹏;韩克光;韩春来;曹宏卿;郑明学4.TA4和Et MIC-2表达产物免疫后对感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)鸡增重和盲肠卵囊数的影响 [J], 潘晓亮;丁熙成;蒋金书5.柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染鸡IgG生成细胞及血清IgG变化 [J], 郑明学;高建广;史喜菊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。