营养琼脂培养基配方及使用说明
营养琼脂培养基的配置
营养琼脂培养基的配置
营养琼脂培养基其实就是一种选择性较低的营养成分的固体培养基，主要用于细菌菌落计数，也可以用于细菌的传代和増菌，但是一般不用于细菌鉴定（除非该细菌菌落有比较特殊的形态）只适合营养要求不高的细菌生长。
营养琼脂
成分：
牛肉膏3g
氯化钠5g
蛋白胨10g
琼脂 15-20g
蒸馏水 1000ml
制备步骤：
检查所用物品级别和洁净程度合格.
戴上手套.
开启天平,放上一张称量纸,调零.
称取蛋白胨g,置一玻璃容器中.
称取牛肉浸出粉g,置同一玻璃容器中.
称取氯化钠g,置同一玻璃容器中.
称取琼脂g
关闭天平.
取1000ml蒸馏水倒入上述烧杯内,用玻璃棒搅拌.
放入水浴锅内微温溶解调节pH为弱碱性. 加入琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2. 分装,121℃高压灭菌15min.。
几种培养基的配方
几种培养基的配方培养基是用于培养和繁殖微生物的营养物质的混合物。
根据微生物的特性和应用需求，可以设计出不同成分和配方的培养基。
以下是几种常见的培养基配方：1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）的配方：-牛肉膏：5g-蛋白胨：5g-水解酵母膏：1.5g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将牛肉膏、蛋白胨和水解酵母膏溶解在蒸馏水中，添加纯化琼脂，混合并加热直至溶解，然后倒入培养皿中。
2. EMB（Eosin Methylene Blue）培养基的配方：-蛋白胨：17g-明胶胨：3g-乳糖：10g-酵母提取物：3g-果糖：1g- Eosin Y：0.4g-亚甲蓝：0.065g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将蛋白胨、明胶胨、乳糖、酵母提取物和果糖溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加Eosin Y和亚甲蓝，最后加入纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
3. 铡锰培养基（Sabouraud Agar）的配方：-葡萄糖：40g-酵母膏粉：5g-水解麦粉：15g-纯化琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将葡萄糖、酵母膏粉和水解麦粉溶解在蒸馏水中，加热并搅拌至溶解，然后添加纯化琼脂，混合并倒入培养皿中。
4.胰蛋白酶-大豆酪蛋白肉汤培养基（TRYPTICASE™SOYBROTH）的配方：-胰蛋白酶胨：15g-大豆酪蛋白胨：5g-食盐：5g-葡萄糖：20g-蒸馏水：1000mL将胰蛋白酶胨、大豆酪蛋白胨、食盐和葡萄糖溶解在蒸馏水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温。
5. M9盐碱培养基（M9 minimal medium）的配方：-磷酸一氢二钾：3g-硫酸镁：0.5g-氯化钠：0.5g- 氨氯化铁：7.5mg-葡萄糖：4g-去离子水：1000mL将磷酸一氢二钾、硫酸镁、氯化钠和氨氯化铁溶解在去离子水中，混合并加热至溶解，然后冷却至室温后添加葡萄糖。
这只是几种常见的培养基配方，实际上还有很多不同成分和配方的培养基。
普通肉汤琼脂培养基使用
中文名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)英译名称：Nutrient Agar品种编号：022020营养琼脂规格：250g干粉培养基营养琼脂用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。
营养琼脂使用原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
微生物图册：营养琼脂配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠 5g琼脂15g最终pH 7.3±0.2营养琼脂使用方法：1、称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计。
营养琼脂的成份和制作方法
营养琼脂的成份和制作方法营养琼脂培养基配方蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15～20g蒸馏水1000mL营养琼脂培养基配制将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH 至7.2～7.4。
加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。
分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。
如用于菌落计数，琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面，则应为2%。
琼脂粉Agar琼脂粉质量标准符合国标GB1975-80规定：干燥失重:≤15%烧灼残渣%(灰分)：≤5 水不溶物%：≤1 砷(AS)%：≤0.0001 重金属(以Pb计)%：≤0.004 吸水力：75毫升(最高数)淀粉：合乎规定凝胶强度：>800g/cm2 产品优点凝胶强度：>800g/cm2琼脂粉Agar组培上的应用说明：培养基的配制，别名：Agar-agar;Gum agar 分子式：(C12H18O9)n 工作浓度： 3-4.5 g/L。
强度：1300g/ c㎡外观：类白色粉末储存条件：室温琼脂的用途琼脂又名卡拉胶系用一种稀有而珍贵的热带海洋红藻—麒麟菜为原料，经科学方法取制而成。
它属于关乳糖硫酸脂，含碳水化合物约75%，此外还含有人体不可缺少的无机物质—钙、碘、铁、钠等。
琼脂是一类从石花菜及其它红藻类植物提取出来的藻胶，在我国及日本已有三百多年的历史。
因其有特殊的凝胶性质，已被广泛使用于食品、医药、化工、纺织、国防、科研等领域，被国际上称为“新奇的东亚产品”。
琼脂卡拉胶不仅广泛应用于食品，具有清热凉肺、开胃健脾，增进食欲等功能，并可防治便秘和治疗高血压病。
由于琼脂、卡拉胶溶液的胶凝性的凝胶稳定性而使琼脂广泛应用在食品工业中，可作为食品食品的稳定剂。
琼脂、卡拉胶比其它胶类作出的食品味道好得多，口感更隹。
琼脂除了可作稳定剂外，还可以防止包装粘连。
琼脂的浓度达到0.5%至1.0%时，可作为油饼透明糖衣的稳定剂，同时提高了黏度和表面的黏着力，快速凝固并增加食品柔韧性，减少表面缺陷和裂纹。
营养琼脂(普通琼脂)
营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。
用途：作普通琼脂平皿。
血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。
基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。
用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。
2 作普通琼脂斜面。
血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。
2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。
用途：作血，骨髓培养用。
肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。
（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。
罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。
营养琼脂培养基配方及使用说明
营养琼脂培养基配方及使用说明022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(Nutrient Agar)营养琼脂培养基用途：营养琼脂培养基NA用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。
营养琼脂培养基检测原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
营养琼脂培养基配方(每升)：蛋白胨 10g牛肉膏粉 3g氯化钠 5g琼脂 15g最终pH 7.3±0.2培养基使用方法：1、称取营养琼脂培养基NA 33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
营养琼脂配制
1、营养琼脂配制：（33g营养琼脂+1000ml水）
2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨配制：（35.6g月桂基+1000ml水）
3、生理盐水配制：（8.5g氯化钠+1000ml水）
微生物操作：共9跟试管，第一个三根移取9ml双料月桂基，第二、三个三根移取9ml单料月桂基
第一步：称取25g样品于225ml生理盐水无菌质杯中摇匀制成1：10的样品匀液A
第二步：用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液B。
第三步：同第二步的方法制成1:1000的样品匀液C。
实验室常用培养基配方
实验室常用培养基配方1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是最为常用的一种培养基，用于微生物的一般培养、分离和鉴定，其配方如下：-水：1000mL-肉浸膏或胨：三到五克-水解酪蛋白：五克-氯化钠：五克-琼脂：十五克2. 培养基ONE（BHI Agar）培养基ONE用于灭菌后的微生物收集、保存和复苏，配方如下：-砂糖：十五克-胨：二十克-水：1000mL-酵母膏：二十克-酵母蛋白胨：十克-溶血素：十克-十％NaCl：五百毫升-甘油：百毫升3. 霍乱弧菌选择性琼脂培养基（TCBS Agar）TCBS Agar用于霍乱弧菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-TCBS粉：一百克4. MacConkey琼脂培养基（MacConkey Agar）MacConkey琼脂培养基是一种选择性琼脂培养基，用于大肠杆菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-肉浸膏：十七克-水解酪蛋白：十五克-氯化钠：五克-紫蘑菇素：六十毫克-琼脂：十五克5. Sabouraud琼脂培养基（Sabouraud Agar）Sabouraud琼脂培养基用于真菌的分离和培养-水：1000mL-葡萄糖：四十克-琼脂：十五克-氯化钠：五克-氯已二维硫酸钾：二十克这些仅仅是一些常见的培养基配方，实验室常根据不同微生物的要求而有所调整。
此外，还有许多特殊的培养基用于特殊微生物的培养和分离，如MRS培养基用于乳酸菌、EC培养基用于大肠杆菌O157:H7等。
在使用培养基时，需要注意权威的文献和生产厂家的指导。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基是为了满足微生物的生长和繁殖需要而制备的特定组分的物质。
不同的微生物对培养基的组分有不同的要求，因此有一系列常用的培养基配方。
下面介绍几种常用的培养基配方。
1.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是最常用的培养基之一，可以满足大多数微生物的生长需求。
其基本配方如下：-蛋白胨：5g-酵母粉：2.5g-琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将蛋白胨、酵母粉和琼脂加入蒸馏水中，加热溶解，然后加热熔化琼脂，混合均匀后倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
2.大肠杆菌富集培养基大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在微生物学实验中经常使用。
它具有良好的生长能力，但在培养基中易受到其他菌群的竞争。
因此，需要使用富集培养基来选择性地培养大肠杆菌。
其基本配方如下：-脱水牛肉粉：10g-酵母提取物：5g-氯化钠：5g-蒸馏水：1000mL将脱水牛肉粉、酵母提取物、氯化钠加入蒸馏水中，加热溶解后加入琼脂，混合均匀后倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
3.血平板培养基血平板培养基用于检测细菌对血液的溶血能力以及细菌的形态特征。
其基本配方如下：-马肉膏：6g-鸡蛋膏：5g-硫酸镁：0.5g-酚红指示剂：0.025g-蒸馏水：1000mL将马肉膏、鸡蛋膏、硫酸镁加入蒸馏水中，加热溶解后加入酚红指示剂，混合均匀后倒入培养皿中，待凝固后用刀或针在培养基上划线，然后点菌于线上即可使用。
4. Sabouraud葡萄糖琼脂培养基Sabouraud葡萄糖琼脂培养基是一种选择性培养基，常用于真菌的培养。
其基本配方如下：-葡萄糖：40g-氯化钠：10g-氯仿：0.1mL-青霉素：0.1g-琼脂：15g-蒸馏水：1000mL将葡萄糖、氯化钠、硫酸镁加入蒸馏水中，加热溶解后加入氯仿和青霉素，混合均匀后加热熔化琼脂，在冷却至40-45℃时倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
以上是一些常用的培养基配方，不同微生物可能有不同的培养基要求，所以在实际应用中还需要根据具体情况进行调整和优化。
营养琼脂对照培养基使用说明
营养琼脂对照培养基营养琼脂对照培养基产品说明：本品是一种最基本的非选择性培养基，含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。
因含有动、植物两种蛋白质，苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。
营养琼脂对照培养基用途：细菌计数培养基适用性试验或检验营养琼脂对照培养基注意事项：1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用；2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰；3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可；4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人员指示方法处理。
保存：避光保存，放于阴凉干燥处。
营养琼脂对照培养基其他相关对照培养基：硫乙醇酸盐流体对照培养基改良马丁对照培养基营养琼脂对照培养基营养肉汤对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基胆盐乳糖对照培养基甘露醇氯化钠琼脂对照培养基沙氏葡萄糖肉汤对照培养基麦康凯琼脂对照培养基沙门、志贺菌属琼脂对照培养基4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基念珠菌显色对照培养基绿脓菌素测定用对照培养基基础梭菌增菌对照培养基哥伦比亚琼脂对照培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础乳糖发酵对照培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基胰酪大豆胨肉汤对照培养基R2A琼脂对照培养基三糖铁琼脂对照培养基麦康凯液体对照培养基紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基肠道菌增菌液体对照培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐对照培养基。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同，因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基（Nutrient Broth）营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，高压灭菌，分装，即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基（MacConkey Agar）大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基，用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为：蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基（Sabouraud Dextrose Agar）Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为：脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基（Vogel-Johnson Agar）VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属（如克雷伯菌）的培养基。
其配方为：葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸，冷却至55-60°C，加入胆盐酯高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
营养琼脂平板说明书
营养琼脂平板说明书营养琼脂培养基使用说明书【产品名称】通用名称：营养琼脂培养基英文名称：Nutrient Agar Medium【包装规格】Φ90㎜和Φ70㎜，5块／包。
【预期用途】营养琼脂培养基是一次性微生物培养基，主要适用一般细菌总数测定，保存菌种及纯培养。
（【检验原理】培养基（Medium）是指由人工方法配制而成的，专供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存用的混合营养制品。
培养基按用途分为基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基和厌氧培养基等，按原料来源分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
按形态分为液体培养基、流体培养基、半固体培养基和固体培养基等。
本产品是以人工的方法配制而成的，针对不同种类的肠道微生物适宜生长的培养基不同，利用细菌的培养特性、生化特性等方法对肠道菌进行分离、培养。
【主要组成成份】营养琼脂培养基由蛋白胨、牛肉浸粉、氯化钠、葡萄糖和琼脂粉等培养基原料经配制、高压灭菌，定量灌入一次性塑料培养基内而成。
【贮存条件及有效期】2-8℃，避光保存，有效期3个月，用前复温。
【样本要求】标本可以是液体也可以是固体，液体标本可以直接使用，固体标本需用适量无菌生理盐水溶解后，取溶液使用。
根据浓度需要决定是否采用10倍稀释法进行稀释。
【检验方法】用接种环或棉签以无菌方法取标本直接画线接种于培养基中，或无菌吸取0.1ml适当浓度的标本溶液用玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，置35~37℃温箱中培养。
【检验结果的解释】大肠埃希氏菌生长良好，呈半透明；金黄色葡萄球菌生长良好，菌落呈白色或金黄色；铜绿假单胞菌生长良好，呈绿色。
【检验方法的局限性】正确的标本采集及良好的细菌划线分离技术是检出细菌的基础，所检出细菌要经镜检、生化鉴定来确认。
【注意事项】1．该培养基仅用于体外诊断。
2．使用前必须检查培养基，若培养基有污染迹象或超过有效期不得使用。
3．采集的标本必须尽快接种培养，以保证结果准确。
4．所用标本及其培养废弃物应视为有潜在传染性的物质，应按传染病实验室操作规范处理。
实训三 营养琼脂培养基的制备(ok)
实训三营养琼脂培养基的制备目的要求熟悉培养基制备的基本程序，学会制备常用的培养基。
仪器及材料高压蒸汽灭菌器、电炉、天平、量筒、试管、培养皿、营养琼脂粉等。
方法与步骤1．配料营养琼脂粉 38g 用天平称量蒸馏水 1000ml 用量筒量取称量好后将两种材料放入搪瓷缸中。
2．溶化用电炉加热煮沸2-3min使其完全溶解，注意用玻璃棒不断搅拌，防止烤焦和沸出。
3．测定及校矫pH ……省略4．过滤……省略5．分装分装于试管或培养皿中，不需无菌操作。
试管：1/3试管，分装后加试管塞；培养皿：厚度3-4mm。
（培养皿开盖，一字摆开，直接倒入）6．灭菌 121.3℃ 20min。
试管：成捆放入，试管塞用纸或纱布包扎固定；培养皿：正放，以组为单位摞在灭菌器中。
7．冷却、凝固试管：灭菌后解捆，单支摆成斜面；不要拔下试管塞。
培养皿：灭菌后一字摆开，凝固成平板。
凝固前保持静置状态；不能开盖。
8．无菌检验，备用（1）无菌检验：抽样，置恒温箱中（培养皿需倒置）37℃培养18-24h，无任何生长物即为合格。
（2）保存：冰箱冷藏，4℃，倒置。
补充：血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃,无菌操作加入5%～10%的无菌血液(或脱纤血)，然后倾注灭菌平皿或分装试管制成斜面。
供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种用。
高压蒸气灭菌器的使用1．加水：加到外筒中，与支架相平或略低于支架。
2．放入待灭菌的物品：放入内筒中。
耐热、耐高压；不要过于拥挤，物品间留有空隙；盖或塞要固定。
3．封盖：对称固定，拧紧；检查密封胶圈是否放好；导气管插入管槽。
4．通电灭菌：明确温度、压力和时间；阀门操作：安全阀始终关闭，放气阀一开始打开，待冷空气排净后关闭；计时：从达到预定温度后开始计时；温度控制：≥121.3。
在121.3和123之间徘徊。
5．取出物品的条件：压力为零或指针回到原点。
6．保养：将水倒出。
营养琼脂有哪些用途
培养基名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)品种编号：022020培养基英译名称：Nutrient Agar培养基规格： 250g营养琼脂(用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。
营养琼脂使用原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠 5g琼脂15g最终pH 7.3±0.2营养琼脂(使用方法：1、称取营养琼脂(33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、菌落计数的报告：选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。
平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计A：稀释度的选择：应选择平均菌落数在30—300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
营养琼脂培养基配置使用操作规程
江门大诚医疗器械有限公司
标准操作规程文件编号版本号
标题：营养琼脂培养基配制使用操作规程页码1/1
目的：建立营养琼脂培养基配制使用操作规程。
范围：本操作规程适用于营养琼脂培养基的配制使用。
职责：质检室质检员负责本操作规程的执行，质保室质监员负责本操作规程的监督检查。
内容：：
1．仪器与试剂：
1.1 JY2002电子天平、85_2数显恒温磁力搅拌器、LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器、电冰箱、250ml三角瓶、500ml量筒、线绳、培养皿。
1.2. 纯化水、营养琼脂、75%酒精。
2.操作方法
2.1. 使用JY2002电子天平称取营养琼脂8克，于250ml三角瓶内，加入250ml纯化水，加热溶解，充分搅拌均匀后，包好扎紧瓶口。
2.2. 置LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器内，于121℃高压灭菌15分钟，取出放置至室温后，放入冰箱，备用（冰箱温度控制在1－4℃）。
2.3. 使用时从冰箱取出，放置室温后，置85_2数显恒温磁力搅拌器中加热，使融，全部融化后取出，放置约45℃时使用。
2.4. 使用时，用75%乙醇擦瓶子外围，打开包扎外壳，左手拿培养皿，右手拿三角瓶，慢慢倾倒至培养皿中，每皿注入约15ml完毕后，立即包好瓶口，用线绳扎好，留下次使用。
（此瓶培养基只允许使用两次，且每次首先倾注一个空白平皿作为对照培养）。
3.参考文件：85_2数显恒温磁力搅拌器操作规程
LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器操作规程
JY2002电子天平校准规程。
营养琼脂培养基配方及使用说明2页
营养琼脂培养基配方及使用说明2页
以下是一种常见的营养琼脂培养基的配方和使用说明:
营养琼脂培养基配方:
1. 蛋白胨：5克
2. 羊肉提取物：3克
3. 酵母提取物：3克
4. 胆盐：1.5克
5. 硫酸镁：0.2克
6. 琼脂：15克
7. 蒸馏水：1000毫升
使用说明:
1. 将蛋白胨、羊肉提取物、酵母提取物、胆盐和硫酸镁加入蒸馏水中，充分溶解。
2. 加热溶液至沸腾，然后煮沸2分钟。
3. 将琼脂添加到热溶液中，搅拌均匀。
4. 冷却至40-45°C，然后倒入培养皿中。
5. 等待琼脂凝固并变为固态后，即可用于细菌的培养。
营养琼脂培养基是一种常用的通用培养基，适用于各种细菌的生长。
制备过程中需要严格控制温度和时间，以确保培养基的质量稳定。
使用时要注意无菌操作，避免细菌的污染。
营养琼脂培养基配置操作规程
营养琼脂培养基配置操作规程
营养琼脂培养基的配置操作规程如下：
1.准备所需物品：营养琼脂干粉、蒸馏水、电炉、玻璃器皿、三角瓶、电子天
平、药匙、量筒等。
2.按照配方要求，将营养琼脂干粉溶于蒸馏水中。
3.用电炉加热，同时搅拌至完全溶解。
注意控制温度，避免烫伤。
4.将琼脂溶液分装到玻璃器皿中，注意避免产生气泡。
5.在室温下冷却至室温，然后放入35℃的恒温培养箱中培养24小时。
6.观察培养结果，记录菌落特征和生长情况。
7.对培养基进行质控，包括无菌试验、生长试验等。
8.根据质控结果，对培养基配方进行优化或调整。
9.按照优化后的配方重新配置培养基，并进行培养试验，观察菌落特征和生长
情况。
10.如果需要长期保存培养基，可以将其分装到无菌的试管或瓶子中，并在4℃
下冷藏保存。
11.使用时，根据需要取出适量培养基，加热融化后使用。
注意事项：
1.在配置培养基的过程中，要注意卫生条件，避免污染。
2.在加热溶解时，要控制温度和时间，避免破坏琼脂的营养成分。
3.在分装时，要注意避免产生气泡，以免影响菌落的生长。
4.在培养时，要注意控制温度和湿度，以保证菌落的正常生长。
5.在质控时，要注意观察菌落特征和生长情况，以便及时发现问题并进行调
整。
6.在保存时，要注意温度和时间，以免影响培养基的质量。
7.在使用时，要根据需要取出适量培养基，加热融化后使用。
MUG营养琼脂培养基
MUG营养琼脂培养基MUG营养琼脂培养基(NA-MUGAgarMedium)用途：用于滤膜法测定生活饮用水及其水源水中的大肠埃希氏菌(GB/T5750.12-2006)。
原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；琼脂是培养基的凝固剂;大肠埃希氏杆菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（4-Methylumbellifery-β-D-Glucuronide简称MUG）的β糖醛酸苷键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm 紫外灯下产生蓝白色荧光。
97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶。
配方（g/L）：蛋白胨 5.0g牛肉膏粉 3.0g琼脂15.0gMUG 0.1g最终pH=6.8±0.2使用方法：1、称取本品23.1g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，在无菌操作条件下倾注直径50mm平板备用，倒好的平板在4℃下可保存两周。
2、将总大肠菌群滤膜法有典型菌落生长的滤膜进行大肠埃希氏菌检测。
在无菌操作条件下将滤膜转移到NA－MUG平板上，细菌截流面朝上，进行培养。
36±1℃培养4h。
3、观察结果：在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示大肠埃希氏菌为阳性。
质量控制：本品接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下菌名菌号生长状况荧光大肠埃希氏菌ATCC25922 良好+产气肠杆菌CMCC(B)45103 良好－沙门氏菌CMCC(B)50115 良好－粪链球菌CMCC(B)32223 被抑制－贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
贮存期二年。
规格：100g,参考文献：1.GB/5750.12－2006中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验方法微生物指标。
肉汤琼脂培养基使用说明
应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。
若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
金黄色葡萄球菌 ATCC6538 良好 黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。
贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格： 250g
（来源：广东环凯微生物）
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。
若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。
图鉴：
配方(每升)：
蛋白胨10g
牛肉膏粉3g
氯化钠 5g
琼脂15g
最终pH 7.3±0.2
使用方法：
1、 称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、 (食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。
5 27 11 5 —— 270 270或2.7×102
6 0 0 0 —— <1×10 <10
营养琼脂配制标准操作规程
营养琼脂配制标准操作规程
1.目的
规范营养琼脂培养基配制的操作规程。
2．原理
培养基含有氮源、碳源和微量无机盐，适宜细菌生长繁殖。
3．用途
供细菌培养、菌株纯化及传种使用。
4．配方
营养琼脂干粉28g、蒸馏水1000ml
5.操作步骤
将28g营养琼脂干粉溶于1000 ml蒸馏水中，混匀至完全溶解，分装，经121℃灭菌15分钟，冷藏备用。
6.储存条件
2～8℃冰箱
7.有效期
实验室自行规定，确保培养基质量。
8.质量控制
8.1 质控频度每次新配制时做质控
8.2 质控方法及结果见表5-17。
表5-17 配制营养琼脂培养基质量控制方法及结果
试验方法结果
无菌试验<100块抽检5%，>100块
随机取10块，35℃培养24～
49h
无细菌生长
生长试验金黄色葡萄球菌
ATCC25923，35℃培养24～
49h
菌落浅黄色
铜绿假单胞菌ATCC27853 35℃培养24～48h 菌落无
色或浅绿色
直径>2.7mm
平行试验平行试验做质控时取新旧批号的
培养基同时做
9．注意事项
倾倒时温度不易过高，否则冷凝水过多易污染；若温度过低，琼脂易凝固。
参考文献
[1] 谢正旸主编。
现代微生物培养基和试剂手册。
福州：福建科学技术出版社，1994
[2] 王钦升，周正明，高屹主编。
实用医学培养基手册。
北京：人民军医出版社，1999
编写人：AAA、BBB 操作人：本室操作人员
批准人：。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
营养琼脂培养基配方及使用说明
022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)
(Nutrient Agar)
营养琼脂培养基用途：
营养琼脂培养基NA用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。
营养琼脂培养基检测原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。
营养琼脂培养基配方(每升)：
蛋白胨 10g
牛肉膏粉 3g
氯化钠 5g
琼脂 15g
最终pH 7.3±0.2
培养基使用方法：
1、称取营养琼脂培养基NA 33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。
依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、观察结果。
6、菌落计数方法：
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。