营养琼脂培养基使用说明

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微生物检验实验室营养琼脂配制标准操作规程

1.目的

规范营养琼脂培养基配制的操作规程。

2．原理

培养基含有氮源、碳源和微量无机盐，适宜细菌生长繁殖。

3．用途

供细菌培养、菌株纯化及传种使用。

4．配方

营养琼脂干粉28g、蒸馏水1000ml

5.操作步骤

将28g营养琼脂干粉溶于1000 ml蒸馏水中，混匀至完全溶解，分装，经121℃灭菌15分钟，冷藏备用。

6.储存条件

2～8℃冰箱

7.有效期

实验室自行规定，确保培养基质量。

8.质量控制

8.1 质控频度每次新配制时做质控

8.2 质控方法及结果见表5-17。

表5-17 配制营养琼脂培养基质量控制方法及结果

试验方法结果无菌试验<100块抽检5%，>100块随机取10块，35℃培养24～49h 无细菌生长

生长试验金黄色葡萄球菌ATCC25923，35℃培养24～49h 菌落浅黄色

铜绿假单胞菌ATCC27853 35℃培养24～48h 菌落无色或浅绿色直径>2.7mm

平行试验平行试验做质控时取新旧批号的培养基同时做

9．注意事项

倾倒时温度不易过高，否则冷凝水过多易污染；若温度过低，琼脂易凝固。

营养琼脂培养基的用途

营养琼脂培养基是一种常用的培养基，广泛应用于微生物学、生物学、医学等领域。它的主要用途如下：

一、微生物的培养和繁殖

营养琼脂培养基是一种富含营养物质的培养基，可以提供微生物生长所需的营养物质，如碳源、氮源、矿物质等。通过在营养琼脂培养基上培养微生物，可以繁殖大量的微生物，以便进行后续的实验研究。

二、微生物的鉴定和分类

营养琼脂培养基可以根据微生物的生长特性和形态特征，对微生物进行初步的鉴定和分类。例如，某些微生物在营养琼脂培养基上生长较快，形成典型的菌落形态，可以根据这些特征初步判断微生物的种属。

三、药敏试验

营养琼脂培养基可以用于药敏试验，即将不同的抗生素添加到培养基中，观察微生物对不同抗生素的敏感性。通过药敏试验，可以选择最适合的抗生素治疗微生物感染。

四、微生物的保存

营养琼脂培养基可以用于微生物的保存。将微生物接种到营养琼脂培养基上，培养出单一的菌落后，可以将其转移到其他保存培养基上，如冰冻保存、干燥保存等，以便长期保存和使用。

总之，营养琼脂培养基是微生物学和生物学研究中不可缺少的基础工具，它为微生物的培养、鉴定、分类、药敏试验和保存等提供了重要的支持。

营养琼脂培养基使用说明

022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)

用途：

用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定

(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。

原理：

蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

配方(每升)：

蛋白胨10g

牛肉膏粉3g

氯化钠5g

琼脂15g

最终pH 7.3±0.2

使用方法：

1、称取本培养基33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。

2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。

3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。

5、观察结果。

6、菌落计数方法：

做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

7、菌落计数的报告：

营养琼脂培养基的配置

营养琼脂培养基其实就是一种选择性较低的营养成分的固体培养基，主要用于细菌菌落计数，也可以用于细菌的传代和増菌，但是一般不用于细菌鉴定（除非该细菌菌落有比较特殊的形态）只适合营养要求不高的细菌生长。

营养琼脂

成分：

牛肉膏3g

氯化钠5g

蛋白胨10g

琼脂 15-20g

蒸馏水 1000ml

制备步骤：

检查所用物品级别和洁净程度合格.

戴上手套.

开启天平,放上一张称量纸,调零.

称取蛋白胨g,置一玻璃容器中.

称取牛肉浸出粉g,置同一玻璃容器中.

称取氯化钠g,置同一玻璃容器中.

称取琼脂g

关闭天平.

取1000ml蒸馏水倒入上述烧杯内,用玻璃棒搅拌.

放入水浴锅内微温溶解调节pH为弱碱性. 加入琼脂,调节pH值使灭菌后为7.2±0.2. 分装,121℃高压灭菌15min.

营养琼脂培养基的用途

营养琼脂培养基是一种营养培养基，主要用于培养一些细菌、真菌和病毒等实验样本。它包括配方组成的琼脂、氯化钠等，其中用于支持细菌和真菌增殖的琼脂被称为营养琼脂。

营养琼脂培养基用于培养一些细菌、真菌和病毒等实验样本，可以提高实验精确度和准确性，保证细菌培养的稳定性。它还可以作为生物学和分子生物学实验的研究材料，用于分子耦联实验，尤其是在细胞毒性分析中发挥着重要作用。营养琼脂培养基也可以用于细菌、真菌培养、密集、分离和筛选，以及工厂样品的分离。

营养琼脂培养基还可以应用于实验细胞的培养，例如动物细胞、植物细胞、病毒细胞等，并可应用于病毒耐药性的研究。研究人员还可以将营养琼脂培养基作为实验材料，用于蛋白质的表达，以便在蛋白质组学和蛋白质结构方面做有效的研究和分析。

此外，营养琼脂培养基还可以应用于抗菌活性试验、生物反应性试验、抗原性试验、分子测序等，帮助探究抗感染药物的作用，提高药物的性能。

由于营养琼脂培养基具有良好的物理和化学性质，它可以用于形成细胞膜，为细胞提供合适的环境，保护细胞结构，在实验中起着重要作用。

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培养基验收-营养琼脂

药品检验所

检验原始记录

第页

检品名称培养基适用性检查批号

规格检品编号

培养基名称营养琼脂培养基厂家

数量

检查依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H P108页

培养基用法：取本品 g，加 L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装，121℃高压灭菌20min，保存备用。

对照培养基名称营养琼脂培养基厂家批号

检验者：校对者：温度：℃

日期：日期：湿度：

营养琼脂的成份和制作方法

营养琼脂培养基配方

蛋白胨10g

牛肉膏3g

氯化钠5g

琼脂15～20g

蒸馏水1000mL

营养琼脂培养基配制

将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH 至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面，则应为2%。

琼脂粉Agar

琼脂粉质量标准符合国标GB1975-80规定：干燥失重:≤15%烧灼残渣%(灰分)：≤5 水不溶物%：≤1 砷(AS)%：≤0.0001 重金属(以Pb计)%：≤0.004 吸水力：75毫升(最高数)淀粉：合乎规定凝胶强度：>800g/cm2 产品优点凝胶强度：>800g/cm2

琼脂粉Agar组培上的应用说明：培养基的配制，别名：Agar-agar;Gum agar 分子式：(C12H18O9)n 工作浓度： 3-4.5 g/L。强度：1300g/ c㎡外观：类白色粉末储存条件：室温

琼脂的用途

琼脂又名卡拉胶系用一种稀有而珍贵的热带海洋红藻—麒麟菜为原料，经科学方法取制而成。它属于关乳糖硫酸脂，含碳水化合物约75%，此外还含有人体不可缺少的无机物质—钙、碘、铁、钠等。琼脂是一类从石花菜及其它红藻类植物提取出来的藻胶，在我国及日本已有三百多年的历史。因其有特殊的凝胶性质，已被广泛使用于食品、医药、化工、纺织、国防、科研等领域，被国际上称为“新奇的东亚产品”。

琼脂卡拉胶不仅广泛应用于食品，具有清热凉肺、开胃健脾，增进食欲等功能，并可防治便秘和治疗高血压病。由于琼脂、卡拉胶溶液的胶凝性的凝胶稳定性而使琼

营养琼脂(普通琼脂)

营养琼脂（普通琼脂）

成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升

琼脂（视天气，琼脂质量而定）

制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。

用途：作普通琼脂平皿。

血琼脂平板（BA）

制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。

2．尿液，脓液

3．分离细菌标本用。

基础培养基（肉膏汤BB）

成份：蛋白胨10克牛肉膏5克

氯化钠5克水1000毫升

制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。

用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。

2 作普通琼脂斜面。

血液培养基（大管肉汤培养基）

成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升

2 PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）1g% 1毫升

3 MgSO

4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升

4 枸椽酸钠0．3g

制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。

用途：作血，骨髓培养用。

肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）

成份：蛋白胨10克乳糖10克

氯化钠5克琼脂25（22）克

水1000毫升2%伊红溶液20毫升

0．5%美兰溶液20毫升

制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖）

营养琼脂(NA)接触皿接触碟使用介绍

7、培养结束后，从培养箱中取出观察、计数。
质量控制
1. 感官、理化指标
淡黄色透明、清晰无沉淀，表面平整、无裂痕、无肉眼可见杂质和气泡，平皿表面适当突起且均匀，pH值为7.2士0.2。
2. 生物学指标
下列质控菌株接种待测试培养基，如下：
3. 无菌及持水性实验
30-35℃培养7天，无菌落生长，无脱水收缩。
营养琼脂
营养琼脂(NA)接触皿接触碟的使用说明
规格
用途ຫໍສະໝຸດ Baidu
用于设备、车间、人员、包装材料等表面微生物的测定。
检验原理
胨和牛肉浸出粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源，氯化钠能维持均衡的渗透压，琼脂是培养基的凝固剂。
培养基配方成分
使用方法
1、从储藏室(2-25℃)取出接触皿，并恢复至室温。
2、将包装整体送入取样地点，在此过程中逐步去掉外面两层包装，最后一层包装在操作间打开。
3、打开接触皿上盖，使培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触皿底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10s左右，再盖上皿盖。
4、在接触皿磨砂区域标记取样地点、取样时间和取样人。
5、用消毒剂或杀孢子剂擦拭测试区域，以消除培养基的残留。
6、将接触皿从洁净室取出，置于培养箱中按规定的温度和时间培养。

营养琼脂对照培养基使用说明

营养琼脂对照培养基

营养琼脂对照培养基产品说明：

本品是一种最基本的非选择性培养基，含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。因含有动、植物两种蛋白质，苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。

营养琼脂对照培养基用途：

细菌计数培养基适用性试验或检验

营养琼脂对照培养基注意事项：

1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用；

2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰；

3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，

然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可；

4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人

员指示方法处理。

保存：避光保存，放于阴凉干燥处。

营养琼脂对照培养基其他相关对照培养基：

硫乙醇酸盐流体对照培养基

改良马丁对照培养基

营养琼脂对照培养基

营养肉汤对照培养基

玫瑰红钠琼脂对照培养基

胆盐乳糖对照培养基

甘露醇氯化钠琼脂对照培养基

沙氏葡萄糖肉汤对照培养基

麦康凯琼脂对照培养基

沙门、志贺菌属琼脂对照培养基

4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基

沙氏葡萄糖琼脂对照培养基

念珠菌显色对照培养基

绿脓菌素测定用对照培养基基础

梭菌增菌对照培养基

哥伦比亚琼脂对照培养基

溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础

四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础

乳糖发酵对照培养基

酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基

胰酪大豆胨肉汤对照培养基

R2A琼脂对照培养基

三糖铁琼脂对照培养基

麦康凯液体对照培养基

紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基

普通营养琼脂的灭菌条件

普通营养琼脂是一种常用的培养基，广泛应用于微生物学、生物学等领域的实验研究中。在使用琼脂培养基进行实验前，必须进行灭菌处理，以确保培养基中不存在任何微生物。本文将介绍普通营养琼脂的灭菌条件，以帮助读者在实验中正确使用琼脂培养基。

一、灭菌方法

灭菌方法主要包括物理灭菌和化学灭菌两种。物理灭菌包括高温灭菌和紫外线灭菌，化学灭菌则包括乙醛灭菌和过氧化氢灭菌。在使用普通营养琼脂时，一般采用高温灭菌和乙醛灭菌两种方法。

1. 高温灭菌

高温灭菌是指将琼脂培养基放入高压蒸汽灭菌器中进行灭菌处理。一般情况下，灭菌时间为15-20分钟，温度为121℃。在进行高温灭菌前，应先将琼脂培养基倒入试管或烧杯中，以免在高温下发生翻涌或爆炸。

2. 乙醛灭菌

乙醛灭菌是指将琼脂培养基放入乙醛溶液中进行灭菌处理。乙醛浓度一般为2%，灭菌时间为2-3小时。在进行乙醛灭菌前，应先将琼脂培养基倒入试管或烧杯中，加入适量的乙醛溶液，然后用铝箔纸封好，放入灭菌箱内进行灭菌处理。

二、灭菌条件

在进行灭菌处理时，应注意以下几点：

1. 清洁环境

在进行琼脂培养基灭菌前，应先清洁工作台和灭菌器，以保证灭菌环境的干净卫生。

2. 严格控制温度和时间

在进行高温灭菌时，应严格控制温度和时间，以保证琼脂培养基完全灭菌。在进行乙醛灭菌时，应严格控制乙醛浓度和时间，以避免对琼脂培养基产生影响。

3. 确保密封性

在进行乙醛灭菌时，应使用铝箔纸封好琼脂培养基，以确保密封性。在进行高温灭菌时，应使用密封的试管或烧杯，以避免在高温下发生翻涌或爆炸。

营养琼脂培养基

一、目的要求
熟练掌握平板划线法的方法、步骤及注意事项。
二、仪器材料
实验用菌种、营养琼脂培养基、接种环、酒精灯、镊子、打火机。
三Leabharlann Baidu步骤
1、右手持接种环于酒精灯上烧灼灭菌,待冷。
2、无菌操作取细菌，用灭菌接种环从实验用菌种的培养基取细菌。
3、左手持培养皿，用拇指、食指及中指将皿盖打开一侧(角度大小以能顺利划线为宜，但以角度小为佳，以免空气中细菌污染培养基)，将已取细菌的接种环伸入，并涂于培养基一侧，然后自涂抹处以腕力在平板表面轻轻地分区划线，可间断划线，也可连续划线。
4、划线完毕，烧灼接种环，将培养皿盖好，倒置于37℃温箱中，培养 18～24h后观察结果。
谢谢大家！

营养琼脂有哪些用途

培养基名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)

品种编号：022020

培养基英译名称：Nutrient Agar

培养基规格： 250g

营养琼脂(用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。

营养琼脂使用原理：

蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

配方(每升)：

蛋白胨10g

牛肉膏粉3g

氯化钠 5g

琼脂15g

最终pH 7.3±0.2

营养琼脂(使用方法：

1、称取营养琼脂(33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。

3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

5、观察结果。

6、菌落计数方法：

做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

7、菌落计数的报告：

选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计

营养琼脂培养基配置使用操作规程

江门大诚医疗器械有限公司

标准操作规程文件编号版本号

标题：营养琼脂培养基配制使用操作规程页码1/1

目的：建立营养琼脂培养基配制使用操作规程。

范围：本操作规程适用于营养琼脂培养基的配制使用。

职责：质检室质检员负责本操作规程的执行，质保室质监员负责本操作规程的监督检查。

内容：：

1．仪器与试剂：

1.1 JY2002电子天平、85_2数显恒温磁力搅拌器、LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器、电冰箱、250ml三角瓶、500ml量筒、线绳、培养皿。

1.2. 纯化水、营养琼脂、75%酒精。

2.操作方法

2.1. 使用JY2002电子天平称取营养琼脂8克，于250ml三角瓶内，加入250ml纯化水，加热溶解，充分搅拌均匀后，包好扎紧瓶口。

2.2. 置LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器内，于121℃高压灭菌15分钟，取出放置至室温后，放入冰箱，备用（冰箱温度控制在1－4℃）。

2.3. 使用时从冰箱取出，放置室温后，置85_2数显恒温磁力搅拌器中加热，使融，全部融化后取出，放置约45℃时使用。

2.4. 使用时，用75%乙醇擦瓶子外围，打开包扎外壳，左手拿培养皿，右手拿三角瓶，慢慢倾倒至培养皿中，每皿注入约15ml完毕后，立即包好瓶口，用线绳扎好，留下次使用。（此瓶培养基只允许使用两次，且每次首先倾注一个空白平皿作为对照培养）。

3.参考文件：85_2数显恒温磁力搅拌器操作规程

LDZX-50FA立式压力蒸汽灭菌器操作规程

JY2002电子天平校准规程

营养琼脂培养基配方及使用说明2页

以下是一种常见的营养琼脂培养基的配方和使用说明:

营养琼脂培养基配方:

1. 蛋白胨：5克

2. 羊肉提取物：3克

3. 酵母提取物：3克

4. 胆盐：1.5克

5. 硫酸镁：0.2克

6. 琼脂：15克

7. 蒸馏水：1000毫升

使用说明:

1. 将蛋白胨、羊肉提取物、酵母提取物、胆盐和硫酸镁加入蒸馏水中，充分溶解。

2. 加热溶液至沸腾，然后煮沸2分钟。

3. 将琼脂添加到热溶液中，搅拌均匀。

4. 冷却至40-45°C，然后倒入培养皿中。

5. 等待琼脂凝固并变为固态后，即可用于细菌的培养。

营养琼脂培养基是一种常用的通用培养基，适用于各种细菌的生长。制备过程中需要严格控制温度和时间，以确保培养基的质量稳定。使用时要注意无菌操作，避免细菌的污染。

改良马丁琼脂培养基的使用

品种名称：改良马丁琼脂培养基的使用

品种编号：021041

(Fungi Agar)

改良马丁琼脂培养基用途：

改良马丁琼脂培养基(真菌营养琼脂培养基)用于真菌培养及药品和生物制品无菌检查用。(《中华人民共和国药典》2010年版) 改良马丁琼脂培养基原理：

胨提供碳源和氮源;酵母浸出粉提供B族维生素;葡萄糖提供能源;磷酸氢二钾为缓冲剂;硫酸镁提供必须的微量元素;琼脂是培养基的凝固剂。

配方(每升)：

胨 5.0g

酵母浸出粉 2.0g

葡萄糖 20.0g

磷酸氢二钾 1.0g

硫酸镁 0.5g

琼脂 14.0g

最终pH 6.4±0.2

使用方法：

1、称取改良马丁琼脂培养基(真菌营养琼脂培养基)42.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，摆成斜面，115℃灭菌30min。

2、将菌株接种至斜面培养基上，置于23～28℃按规定时间进行培养3d。

3、观察结果。

质量控制：

本品倾注平皿，质控菌株接种后于23～28℃培养3d，结果如下：

贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规格：250g

参考文献：

1. 《中华人民共和国药典》2010年版，附录XI H 无菌检查;附录XI J 微生物限度检查。