CdSe／ZnS量子点免疫标记法快速检测O157∶H7大肠埃希菌的方法学研究论文

引用格式：陈栎江，吴庆，徐春泉，等．ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点免疫标记法快速检测Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的方法学研究［Ｊ］．中华临床感染病杂志，２０１６，９（４）：３７３－３７５．・临床实验研究・ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点免疫标记法快速检测Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的方法学研究 陈栎江　吴庆　徐春泉　周翠　周铁丽３２５０００温州医科大学附属第一医院医学检验中心通信作者：陈栎江，Ｅｍａｉｌ：２９３４０４４２＠ｑｑ．ｃｏｍＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－２３９７．２０１６．０３．０【关键词】　肠出血性大肠埃希菌；　ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点；　荧光抗体技术基金项目：温州市科技计划项目（Ｙ２０１４０４０１）ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｄＳｅ／ＺｎＳｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓｉｎｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＯ１５７∶Ｈ７Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ　ＣｈｅｎＬｉｊｉａｎｇ，ＷｕＱｉｎｇ，ＸｕＣｈｕｎｑｕａｎ，ＺｈｏｕＣｕｉ，ＺｈｏｕＴｉｅｌｉＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０００，Ｃｈｉｎａ【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】　ＥｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ；　ＣｄＳｅ／ＺｎＳｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓ；　ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅＦｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＰｒｏｊｅｃｔｏｆＷｅｎｚｈｏｕ（Ｙ２０１４０４０１） Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌是引起人类肠道疾病最为严重的致病菌之一，属于肠杆菌科埃希菌属，是肠出血性大肠埃希菌（ＥＨＥＣ）的主要血清型，致病力非常强，尤其对儿童与老人的危害更大。

据报道，摄入１０个Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌就可致病，引起出血性结肠炎（ＨＣ）、溶血性尿毒综合征（ＨＵＳ）和血栓性血小板减少性紫癜（ＴＴＰ）等严重后果［１］。

目前对细菌的检测主要依靠传统的微生物学和分子生物学检测等方面的技术，这些方法普遍存在周期长，操作繁琐，且需要在获得纯菌株的基础上操作，难以满足实时快速检测的目的。

本研究将ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点标记技术引入荧光免疫检测中，建立Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌快速、简便、灵敏的检测平台。

通过对方法学的研究，希望能拓宽ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点标记技术在微生物检测中的应用范围，找到快速检测细菌的新途径。

１　材料和方法１．１　主要仪器与试剂　ＯｌｙｍｐｕｓＢＸ５１荧光显微镜（日本奥林帕斯公司），ＪＥＭ－２１００Ｆ高分辨透射电子显微镜（日本电子株式会社），Ｈ１８５０高速离心机（湖南湘仪离心机仪器有限公司），ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００超微量分光光度计（美国赛默飞世尔科技公司）。

大肠埃希菌Ｏ１５７∶Ｈ７标准菌株、大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２和金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３（温州康泰生物科技有限公司），鼠抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的单克隆抗体（英国Ａｂｃａｍ公司），该抗体识别区域为菌体外膜脂多糖中的寡糖。

１．２　实验方法１．２．１　ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点的合成　巯基乙酸修饰的水溶性ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点的制备参照文献［２］的方法，并经适当的改进措施获得，具体如下：将油溶性ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点（合成方法参照文献［３］）用丙酮沉淀并重新分散于三氯甲烷中，加入适量的甲基丙烯酸，充分混合后静置反应２ｈ。

离心除去上清液，加缓冲溶液使其完全溶解，再加入丙酮提纯。

如此反复２～３次，最后将沉淀分散于磷酸盐缓冲溶液中，４℃储存备用。

合成的量子点通过ＪＥＭ－２１００Ｆ高分辨透射电子显微镜进行测量，检测显示制备的量子点具有良好的分散性，且粒径均匀，约为３畅６ｎｍ。

１．２．２　量子点与抗体的耦合　０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．０磷酸盐缓冲液１０倍稀释量子点，加入０．１ｇ／ｍＬＥＤＣ、０．１ｇ／ｍＬＮＨＳ各２０μＬ，充分混匀，总体积４００μＬ，室温下于摇床上摇动３０ｍｉｎ，１６０００×ｇ离心１５ｍｉｎ，弃去上清液，用０．０２ｍｏｌ／ＬｐＨ９．０硼酸盐缓冲液悬浮１６０００×ｇ离心１５ｍｉｎ，弃去上清液，反复３遍，加入４００μＬ０．０２ｍｏｌ／ＬｐＨ９．０硼酸盐缓冲液悬浮沉淀，加入３０μＬ１ｍｇ／ｍＬ鼠抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的单克隆抗体混匀，室温下于摇床上摇动３ｈ；１００００×ｇ离心２０ｍｉｎ，沉淀用保存液悬浮，１００００×ｇ离心２０ｍｉｎ，弃去上清液，反复３遍；最后用４００μＬ０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．４磷酸盐缓冲液悬浮，于４℃保存。

１．２．３　ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点和标记抗体的表征量子点和抗体的耦合率通过ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００超微量分光光度计检测，标记前的抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体浓度通过检测为１畅００６ｍｇ／ｍＬ，取３０μＬ单克隆抗体加入到４００μＬ的反应体系中进行量子点与抗体的耦合，将耦合后的复合物超速离心取上清液检测未标记的单克隆抗体浓度，为０．０２６ｍｇ／ｍＬ。

计算耦合率约为６２．８％。

１．２．４　量子点标记抗体检测细菌　取浓度为１０５ＣＦＵ／ｍＬ的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌、普通大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌菌液各１００μＬ混合，并加入１０μＬ抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体耦联的量子点，３７℃孵育１ｈ，使抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体耦联的量子点选择性标记混合菌液中的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌，形成“量子点－抗体－细菌”复合物。

４０００×ｇ离心１ｍｉｎ后，用３００μＬ磷酸盐缓冲液洗涤３次，清除与细菌非特异性结合的量子点，用磷酸盐缓冲液重悬后并取１０μＬ置于载玻片上，并在荧光显微镜下用４５０ｎｍ波长光激发后观察，以不含有Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的菌液作为对照组。

２　实验结果采用耦联有红色量子点的抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体作为探针，对混合菌样本中的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌进行了特异性检测。

混合细菌中的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌与量子点标记抗体特异性结合，在荧光显微镜下显示为红色，而其他几种细菌由于未加任何荧光标记而不显出任何荧光信号（图１），同时在不含有Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌菌液的对照组中，也未显示红色荧光信号。

图１　含Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的混合菌液在荧光显微镜（Ａ）和普通光源显微镜下的图像（Ｂ）（×４００）３　讨论免疫荧光技术因其特异性和敏感性高、速度快等优点在致病菌的检测中受到了青睐，但目前国内的研究多采用有机荧光染料或镧系配合物作为标记物，该类标记物存在着发射光谱窄，光稳定性差等缺点，因此，应用也受到了很大的限制［４－６］。

量子点作为一类新的荧光标记物，它展现出传统荧光染料所没有的许多光化学优点［７－８］。

近年来，量子点荧光探针引起了生物和医学研究人员的广泛关注［９－１１］，特别是其用于癌症等重大疾病的诊断和治疗已逐渐成为研究的热点［５］，但在微生物检测尤其是肠道致病菌方面的研究报道还比较少。

本研究采用的ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点为核壳结构的量子点，是以ＣｄＳｅ为核心，用ＺｎＳ包覆，形成核壳结构的量子点，相比ＣｄＳｅ单核结构的量子点，量子效率从原来的５％～１５％提高到３０％～５０％［８］。

本研究的目的是为了测定耦联有ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点的抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体在多细菌混合物中进行标记的特异性，采用Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌、普通大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的混合菌液代替纯培养物进行检测。

结果如图１所示，Ａ图中的红色荧光便是由耦联有抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体的红色量子点发出，Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌从混合菌液中被特异性地检测出来，Ｂ图为和Ａ图同一视野下用普通光源拍摄的数码照片，可以看到在视野中有很多种细菌，其中只有部分杆菌被红色荧光标记，即为特异性检测出来的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌；而作为阴性对照组的不含Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的混合菌液在同等实验条件下不显示任何信号，即其他细菌不能与量子点结合发出红色荧光，不会干扰Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的检测。

这说明耦联有抗Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌单克隆抗体的红色量子点没有与普通大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌发生非特异性吸附和结合，也验证了单克隆抗体对Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌有很高的特异性。

食品检验中的假阳性结果会导致食品被误毁，造成极大的损失，而假阴性则会造成食物污染无法控制，引起食物中毒和食源疾病。

本实验中经量子点标记的单克隆抗体能特异性捕获目标细菌，相互之间没有影响，在没有目标细菌的阴性对照组中没有检测到任何荧光，排除了结果为假阳性的可能，而对目标细菌的特异性标记以及敏感检测有效地防止了假阴性发生的可能。

传统的细菌鉴定方法需要在获得Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌纯菌前提下进行，但由于食品、患者粪便样本本身存在大量非致泻性大肠埃希菌，培养无法区分两者的菌落差别。

该法能特异性地标记Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌，且不受普通大肠埃希菌的干扰，同时，相比传统的细菌鉴定方法，该法大大缩短了检测时间，从标记到获得最终信号仅需６０ｍｉｎ。

该方法在模拟混有Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌粪便的样本检测中也有很好的特异性，但因没有对粪便样本中的致病菌进行浓集，因此检测灵敏度受限，所以在后续的试验中将考虑引入磁粒子包被抗体对致病菌进行浓集，以提高检测的灵敏度。

该方法也可以将不同荧光波长的量子点分别耦联不同的肠道致病菌单克隆抗体，以达到对多种肠道致病菌同时检测的目的［１２－１３］。

本研究建立的利用ＣｄＳｅ／ＺｎＳ量子点标记法快速检测Ｏ１５７∶Ｈ７大肠埃希菌的思路同样适于其他病原微生物的检测，为利用量子点标记的荧光免疫检测病原微生物奠定了技术基础。

利益冲突　无参　考　文　献［１］ＲｉｔｃｈｉｅＪＭ，ＣａｍｐｂｅｌｌＧＲ，ＳｈｅｐｈｅｒｄＪ，ｅｔａｌ．ＡｓｔａｂｌｅｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｃｏｎｓｔｒｕｃｔｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７∶Ｈ７ｆｏｒｈａｚａｒｄａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓｏｆｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｓｕｒｖｉｖａｌｉｎｔｈｅｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ［Ｊ］．ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，６９（６）：３３５９－３３６７．ＤＯＩ：１０．１１２８／ＡＥＭ．６９．６．３３５９－３３６７．２００３．［２］ＣｈａｎＷＣ，ＮｉｅＳ．Ｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓｆｏｒｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８１（５３８５）：２０１６－２０１８．ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．２８１．５３８５．２０１６．［３］ＰｅｎｇＺＡ，ＰｅｎｇＸ．Ｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈ－ｑｕａｌｉｔｙＣｄＴｅ，ＣｄＳｅ，ａｎｄＣｄＳｎａｎｏｃｒｙｓｔａｌｓｕｓｉｎｇＣｄＯａｓｐｒｅｃｕｒｓｏｒ［Ｊ］．ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，２００１，１２３（１）：１８３－１８４．ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊａ００３６３３ｍ．［４］ＰａｔｈａｋＳ，ＣａｏＥ，ＤａｖｉｄｓｏｎＭＣ．ｅｔａｌ．Ｑｕａｎｔｕｍｄｏｔａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｔｏｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ：ｎｅｗｔｏｏｌｓｆｏｒｐｒｏｂｉｎｇｎｅｕｒｏｎｓａｎｄｇｌｉａ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ，２００６，２６（７）：１８９３－１８９５．ＤＯＩ：１０．１５２３／ＪＮＥＵＲＯＳＣＩ．３８４７－０５．２００６．［５］ＷｕＸ，ＬｉｕＨ，ＬｉｕＪ，ｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌａｂｅｌｉｎｇｏｆｃａｎｃｅｒｍａｒｋｅｒＨｅｒ２ａｎｄｏｔｈｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｔａｒｇｅｔｓｗｉｔｈｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓ［Ｊ］．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，２１（１）：４１－４６．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｂｔ７６４．［６］Ｐａｎｃｈｕｋ－ＶｏｌｏｓｈｉｎａＮ，ＨａｕｇｌａｎｄＲＰ，Ｂｉｓｈｏｐ－ＳｔｅｗａｒｔＪ，ｅｔａｌ．Ａｌｅｘａｄｙｅｓ，ａｓｅｒｉｅｓｏｆｎｅｗｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｙｅｓｔｈａｔｙｉｅｌｄｅｘｃｅｐｔｉｏｎａｌｌｙｂｒｉｇｈｔ，ｐｈｏｔｏｓｔａｂｌｅｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ［Ｊ］．ＪＨｉｓｔｏｃｈｅｍＣｙｔｏｃｈｅｍ，１９９９，４７（９）：１１７９－１１８８．ＤＯＩ：１０．１１７７／００２２１５５４９９０４７００９１０．［７］ＭｕｒｒａｙＣＢ，ＮｏｒｒｉｓＤＪ，ＢａｗｅｎｄｉＭＧ．ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｎｅａｒｌｙｍｏｎｏｄｉｓｐｅｒｓｅＣｄＥ（Ｅ＝Ｓｕｌｆｕｒ，Ｓｅｌｅｎｉｕｍ，Ｔｅｌｌｕｒｉｕｍ）ｓｅｍｉｃｏｎｄｕｃｔｏｒｎａｎｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｔｅｓ［Ｊ］．ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，１９９３，１１５（１９）：８７０６－８７１５．ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊａ０００７２ａ０２５．［８］ＨｉｎｅｓＭＡ，Ｇｕｙｏｔ－ＳｉｏｎｎｅｓｔＰ．ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｔｒｏｎｇｌｙｌｕｍｉｎｅｓｃｉｎｇＺｎＳ－ｃａｐｐｅｄＣｄＳｅｎａｎｏｃｒｙｓｔａｌｓ［Ｊ］．ＪＰｈｙｓＣｈｅｍ，１９９６，１００（２）：４６８－４７１．ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊｐ９５３０５６２．［９］ＭｉｔｃｈｅｌｌＧＰ，ＭｉｒｋｉｎＣＡ，ＬｅｔｓｉｎｇｅｒＲＬ．ＰｒｏｇｒａｍｍｅｄａｓｓｅｍｂｌｙｏｆＤＮＡｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓ［Ｊ］．ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，１９９９，１２１（３５）：８１２２－８１２３．ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊａ９９１６６２ｖ．［１０］ＷａｎｇＪ，ＬｉｕＧ，ＭｅｒｋｏｃｉＡ．ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｄｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅＤＮＡｔａｒｇｅｔｓ［Ｊ］．ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，２００３，１２５（１１）：３２１４－３２１５．ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊａ０２９６６８ｚ．［１１］ＭａＬ，ＷｕＳＭ，ＨｕａｎｇＪ，ｅｔａｌ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）ｏｎｍａｉｚｅｍｅｔａｐｈａｓｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓｗｉｔｈｑｕａｎｔｕｍｄｏｔ－ｌａｂｅｌｅｄＤＮＡｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａ，２００８，１１７（２）：１８１－１８７．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００４１２－００７－０１３６－２．［１２］ＹａｎｇＬ，ＬｉＹ．ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７∶Ｈ７ａｎｄＳａｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍｕｓｉｎｇｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｓａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｌａｂｅｌｓ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｓｔ，２００６，１３１（３）：３９４－４０１．ＤＯＩ：１０．１０３９／ｂ５１０８８８ｈ．［１３］ＧｏｌｄｍａｎＥＲ，ＣｌａｐｐＡＲ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＧＰ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄｔｏｘｉｎａｎａｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇｆｏｕｒｃｏｌｏｒｓｏｆｑｕａｎｔｕｍｄｏｔｆｌｕｏｒｏｒｅａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００４，７６（３）：６８４－６８８．ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃ０３５０８３ｒ．（收稿日期：２０１６－０１－１３）（本文编辑：彭芳）（上接第３６８页）［８］张金龙，马玉海，叶孝乾，等．武警某部体格复检实施新征兵体检标准结果分析［Ｊ］．中华灾害救援医学，２０１５，３（１）：２６－２８．ＤＯＩ：１０．１３９１９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－６２７４．２０１５．０１．００８． ＺｈａｎｇＪＬ，ＭａＹＨ，ＹｅＸＱ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｎｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｈｙｓｉｃａｌｒｅ－ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎａｆｔｅｒｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｗｐｈｙｓｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓｔａｎｄａｒｄｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＤｉｓａｓｔｅｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１５，３（１）：２６－２８．ＤＯＩ：１０．１３９１９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－６２７４．２０１５．０１．００８．［９］林存智，王海荣，朱新红，等．结核菌素皮肤试验阳性人群是否应该接受化学预防治疗［Ｊ／ＣＤ］．中华临床医师杂志：电子版，２０１４，８（２３）：５－８．ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－０７８５．２０１４．２３．００２． ＬｉｎＣＺ，ＷａｎｇＨＲ，ＺｈｕＸＨ，ｅｔａｌ．Ｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎｓｋｉｎｔｅｓｔｓｈｏｕｌｄａｃｃｅｐｔｃｈｅｍｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ［Ｊ／ＣＤ］．ＣｈｉｎＪＣｌｉｎｉｃｉａｎｓ：ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｄｉｔｉｏｎ，２０１４，８（２３）：５－８．ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－０７８５．２０１４．２３．００２．［１０］张金龙，梅浩浩，莫国生．结核菌素试验在新兵结核病筛查中的应用［Ｊ］．中华灾害救援医学，２０１５，３（１１）：６５０－６５２．ＤＯＩ：１０．１３９１９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－６２７４．２０１５．１０．０１４． ＺｈａｎｇＪＬ，ＭｅｉＨＨ，ＭＯＧＳ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎｔｅｓｔｉｎｔｈｅｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｍｏｎｇｒｅｃｒｕｉｔｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＤｉｓａｓｔｅｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１５，３（１１）：６５０－６５２．ＤＯＩ：１０．１３９１９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－６２７４．２０１５．１０．０１４．（收稿日期：２０１５－１０－１５）（本文编辑：金建华）。