实验十 电泳技术测定99Tcm-MIBI和99Tcm-ECD的电性

实验十电泳技术测定99m TcO4-、99m Tc-MIBI
和99m Tc-NOET的电荷性质
学生：学号：同组：
一、实验目的
1．了解电泳的基本原理和DYY-Ⅲ电泳仪的操作方法。

2．用纸电泳测定99m TcO4-、99m Tc-MIBI和99m Tc-NOET的电荷性质。

二、实验原理
对于放射性药物，其所带电荷对其生物分布、摄取、代谢都有很大的影响，因此要首先了解其所带电荷的性质。

放射性药物的电荷性质可以利用电泳的方法进行测定。

在稀溶液中，带电粒子在外加电场的作用下，向相反电极方向移动的现象，称为电泳。

在两个平行电极上加一定的电压（V），就会在电极中间产生电场强度（E）。

V
E
=
L
其中，L是两个电极间距离。

在电场中，推动稀溶液中带电分子向其所带电荷相反的电极方向运动的作用力（F）等于其所带净电荷量（q）与电场强度（E）的乘积。

F＝q⋅E
在移动的过程中，带电分子同样要受到介质粘滞力（F’）的影响，粘滞力的大小与分子形状、大小、电泳介质孔径大小以及缓冲液粘度等有关，并与带电分子移动的速度成正比。

对于一个球形分子，F’的大小服从Stokes定律，即：
F′＝6πrην
其中，r为球形分子的半径，η为介质粘度，ν为分子移动速度。

当带电分子在电场中匀速运动时：
F＝F′ 即q E＝6πrην
上式交换后可写成
ν/E=Q/6πrη
ν/E的含义为单位电场强度下的移动速度，这里可用电泳迁移率μ表示，即
μ=ν/E= Q/6πrη
从上式可见，球形带电分子的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。

除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素如电泳介质pH值、缓冲液的离子强度、电渗、电场强度等也影响带电分子的电泳迁移率。

电泳按其分离原理的不同可分为区带电泳、自由界面电泳、等速电泳和等电聚焦电泳。

按支持介质的不同可分为纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂凝胶电泳、
聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳。

按支持介质形状不同可分为薄层电泳、板电泳和柱电泳。

按用途不同可分为分析电泳、制备电泳、定量免疫电泳和连续制备电泳。

按所用电压不同可分为低压电泳和高压电泳。

电泳除了可以确定分子所带电荷性质，最重要的作用是用于分离。

电泳分离方法主要就是根据大分子的分子量及电性差异将大分子在电场中彼此分开的。

本实验所用的方法是纸电泳。

为了与体液的pH值保持相同，所以采用pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液（PBS）。

在150 V电压下、以新华一号纸为支持体，利用电泳技术对TcO4- 、99m Tc-MIBI、99m Tc-NOET的电荷性质进行测定。

三、仪器与试剂
仪器：NaI（Tl）γ-井型闪烁探测器（或锝分析仪），DYY-Ⅲ电泳仪，DYY-Ⅲ 38B 电泳槽，电磁搅拌器，毛细管，pH试纸，聚酰胺薄片，新华一号纸，烧杯，试管等。

试剂：高锝酸钠淋洗液(99Tc m O4-)，MIBI药盒，NOET药盒，生理盐水，乙腈，丙酮，氯仿，甲醇，PBS缓冲溶液。

四、实验步骤
1. 制备99m Tc-MIBI配合物
将高锝酸钠淋洗液注入MIBI的药盒中，沸水浴下加热15 min，平行点样三次，在乙腈-聚酰胺薄膜体系中展开，用NaI（Tl）γ-井型闪烁探测器（或锝分析仪）测量，计算标记率。

2. 制备99m Tc-NOET配合物
将高锝酸钠淋洗液注入NOET的药盒中，室温下反应15 min，平行点样三次，分别在新华一号纸-氯仿：甲醇溶液（9:1 v/v）、新华一号纸-丙酮溶液体系中展开，用NaI（Tl）γ-井型闪烁探测器（或锝分析仪）测量，计算标记率。

3. 99m TcO4-、99m Tc-MIBI和99m Tc-NOET的电荷测定
将电泳槽中加入PBS溶液，使其两侧液面等高，且不超过红线标记处。

将电压调至150 V。

将新华一号纸裁剪至约15 cm，放置于电泳槽中，纸条两边浸在PBS溶液中。

PBS溶液逐渐浸润纸条，待两液面前沿即将重合时，将高锝溶液点在中央。

放置15 min，取下纸条，以点为中心，向左右各5 mm取为中心，分别测量正极、中心、负极三部分的计数。

重复上述操作，分别在中央点99m Tc-MIBI、99m Tc-NOET，放置时间为2小时。

五、实验数据处理
1. 99m Tc-MIBI和99m Tc-NOET的标记率的计算（所列数据均以扣除本底）。

表一99m Tc-MIBI和99m Tc-NOET的相关数据及处理结果
99m Tc-MIBI聚酰胺薄膜-生99m Tc-NOET新华一号滤纸99m Tc-NOET新华一号滤纸
Rf 平行1 平行2 平行3 平行1 平行2 平行3 平行1 平行2 平行3 0-0.1 1183 1010 787 12200 11712 14467 15549 12131 11138 0.1-0.2 156 110 142 259 231 256 214 143 124 0.2-0.3 91 86 162 240 263 240 195 140 179 0.3-0.4 91 74 186 204 269 301 253 190 153 0.4-0.5 108 87 106 310 282 351 253 236 192 0.5-0.6 285 122 187 413 432 441 365 316 285 0.6-0.7 476 376 395 820 606 711 439 392 412 0.7-0.8 654 482 981 926 973 775 662 661 728 0.8-0.9 1079 1183 2774 2722 2258 2092 1433 1647 2053 0.9-1 102507 89177 87437 34671 34973 36079 28786 29145 27100 总计数 106630
92707 93157
52765
51999 55713
48149
45001 42364
标记率 97.15% 97.47% 96.84% 70.87% 71.60% 68.51% 62.76% 68.43% 68.82%
平均标记率
97.15%
70.33%
66.67%
由此得出99m Tc-MIBI 配合物的平均标记率为97.15%，标记率较高。

99m Tc-NOET 配合物的平均标记率为分别为70.33%和66.67%，低于90%，标记十分不成功。

2. 绘制99m TcO 4-、99m Tc-MIBI 和99m Tc-NOET 的电荷分布图，判断所带电荷（所列数据均以扣除本底）。

表二 电泳后各物质在正极中心负极的计数 99m
TcO 4-
99m
Tc-MIBI 99m
Tc-NOET 正极 104349 264
2162 中心 246 133020 79542 负极
402
563 36
10000
2000030000400005000060000700008000090000100000110000120000130000图1
99m
TcO 4-、99m Tc-MIBI
和
99m
Tc-NOET 的电荷分布图的电荷分布图
由图可见，99m TcO 4-在正极的计数为主要，说明其带负电；99m Tc-NOET 在原
点的计数为主要的，说明其为电中性。

99m
Tc-MIBI 本应该在负极的计数为主要的，
但实验结果为中心计数为主要，因为99m Tc-MIBI脂溶性较高，在含无机盐的水溶液中运动较慢，因而时间较短，向电极运动的距离短。

最终导致中心计数较高。

五、实验结果分析与思考
1. 99m Tc-NOET标记率较低，主要是用于所用的药盒已经超过了药物保质期，因而导致标记率较低。

另外，想保证电泳实验的成功，适宜的电泳时间是前提，时间太短不能让离子很好的向电极两端运动。

2. 测定99m Tc-配合物电荷的目的是什么？
对于放射性药物，其所带电荷对其生物体内分布、摄取、代谢都有很大的影响，因此对于一个药物，要首先了解其所带电荷的性质。

3. 影响99m Tc-配合物电荷测定的因素有哪些？
影响99m Tc-配合物电荷测定的因素有：配合物半径、所带电量、介质粘度、电泳介质pH值、缓冲液的离子强度、电渗、电场强度等。