多聚赖氨酸处理

配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。

最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。

保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。

注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。

(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。

我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。

一个能最多有效过滤200ml。

铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。

消毒后30分钟进入实验室。

事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。

具体细节就不多说了。

首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。

将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。

取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。

换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。

再将水吸出来。

反复三次。

注意换吸管，要无菌操作的。

最后将铺好的板子放于培养箱待用。

如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。

我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。

我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。

1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。

我问过博士德公司，他们分装的多聚赖氨酸是用来作免疫组化的，没有做过细胞培养实验，他们不保证能否用在细胞培养中，建议你买其他公司的吧，有固体的，分子量为15-30万，我们实验室用浓度0.01%的来促进神经细胞贴壁。

我们用的多聚赖氨酸浓度为100ug/ml,一般包被3-4小时即可用.我们包被完后一般放在培养箱里,临用时拿出来洗三次，吹干即可．如果不急着用，放在培养箱里较长时间也没关系，把瓶盖拧紧即可，我最长放了２星期也没有问题。

左旋和右旋的多聚赖氨酸都可以用于包被细胞培养器具,主要看你的细胞贴壁能力如何,左旋的更利于细胞贴壁.我们一般使用0.01%浓度的,包被过夜,第二天用双蒸水洗两三次,超净台紫外照射,风干。

可以直接买sigma的原装粉剂自己配。

还有,配好的多聚赖氨酸在4度时间不能放置太久,大概就一两周吧。

存放于-20度中的一般为0.1%的,而且不能反复冻融,只能融化一次。

最好是配好后分装。

方法是：浓度为50ng/1ml的多聚赖氨酸，加入培养板或培养瓶能均匀覆盖底部就可，放置在无菌操作台中过夜。

第二天早上用时先用双蒸水冲洗三遍再用。

各位生物秀才们，我在做细胞培养时。

用多聚赖氨酸包被过的培养皿，种细胞后，第二天发现里头根本没有细胞存活。

请教了老师后得知，在使用PLL包被过的皿时，应当用基培平衡一下Ph。

我于是用基培平衡后的皿种细胞，发现细胞还是死掉了。

反倒是用未经多聚赖氨酸包被的皿，培养细胞，里头倒是长得很好。

因为我的实验需要用多聚赖氨酸包被，你们觉得我应该如何改进？请高手指导指导，谢谢诸位了。

涂完PLL后的板要用灭菌的去离子水洗3遍，无水乙醇洗2遍，灭菌去离子水再洗3遍，试试这样如何因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。

个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。

注：收集过程中，因为减少时间没有表明每一句话来自哪位战友，只是在前面标明出处帖子的链接地址。

要具体知道哪句建议出自哪位战友请到该相关帖子里查询。

我只是摘了一个帖子里某段或某句话。

一般一段话来自某一位战友。

/bbs/post/view?bid=76&id=9327093&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#9327093常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：/upload/2007/06/18/49456826.snap.jpg我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。

工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。

多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。

/bbs/actions/archive/post/1683809_1.html我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教．PH应该在7.0~7.4PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟/bbs/actions/archive/post/3631859_1.html我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌 .能否干烤灭菌Sigma的产品说明书上写的很明白的。

另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-lysine-coated tissue culture surfacesTo coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at −20°C.When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at −20°C.When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。

玻片也是事先泡洗洁精，泡酸，双蒸水洗，烘干后高压灭菌，待用。

培养的前一天包被培养板时先把玻片放入培养孔然后把PLL加到玻片上，静置15分钟，洗出多余的PLL，然后用高压过的双蒸水洗板，培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了。

/bbs/actions/archive/post/3979612_1.html多聚赖氨酸消毒该怎么办？？紫外照射消毒我没试过，但用0.22um的滤器消毒是没问题的（小的一次性滤器可以过滤200ml)。

在液体消毒时，如果所含成份经过高温，钴60照射发生变性者，建议用滤器（0.22），多聚赖氨酸为氨基酸类，建议用滤器，如果要求程度高，可以两个滤器过滤两次。

资料：多聚赖氨酸溶液（Poly-L-Lysine Solution）Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃Thimerosal, 0.01%, added as preservative 多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。