羊痘诊断技术研究进展
浅谈羊痘的诊断与治疗
处 的浆膜 有红 色豆状 斑块 。 心 包积 液 ， 包 膜增 厚 ， 不
（ ２ ）灌服 复方 新诺 明 ， 肌注 热病 一 ０ ０ ７ （ 肌 注 一 次解 热镇 痛效 果 可 维 持 ２ ４～３ ６ ｈ ） 、 青链 霉 素 、 氨 基 比林 等 ， 同时 肌 注 干 扰 诱 导 剂 聚 肌 胞 （ ２ ￣ ４ ｍｇ ／次 ， １
触性传染病 。 分绵羊痘和山羊痘两种。临床症状为 皮肤 和黏 膜 出现痘 疹 ， 并逐 渐 发展 ， 引起 化脓 、 结 痂 和全 身发 痘 。该病 一 年 四季均 可 发生 ， 我 省 羊痘 的 发生 多 以春季最 多 ， 最 为严 重 ， 常 呈地 方性 流行 。
１ 临床 症状
４ ． １ 隔离消毒 发现疫情迅速进行隔离 ，严 防混 群， 上报 上 级有 关部 门 ， 由市政 府 发布 封锁 令 ， 疫 ３个 月 内禁 止羊 只流 动和放 牧 。对 羊舍 和用 具用 消
草 食 动 物
浅谈 羊痘 的诊 断与治疗
褚 凤 云
（ 吉林 省农 安县 动物疫 病预 防控 制 中心 ，农安 １ ３ ０ ２ ０ ０）
ＤＯ ｌ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ Ｊ ． Ｉ ＳＳＮ． １ ６ ７ １ － ６ ０ ２ ７ ． ２ ０ １ ４． ０ ２． ０ ４ ８
羊 痘 是 由羊痘 病 毒 引发 的一 种急 性 、热 性 、 接
次 ／ｄ ， 连用 ２ ～ ３ ｄ ） 效果 更好 ； （ ３ ）也 可用 四川 成 都 生 产 的奇 灵抗 病 毒 注射 液 进 行 治疗 ， 效 果较好 。
陕北白绒山羊羊痘的诊断与防治
风 沙 区 和 丘 陵 山 区 ，如 陕 北 的榆 林 、延 安 。 以辽 宁绒 山 羊 为 父 本 ，陕 北 黑 山羊 为 母 本 ， 采 用 两 品 种 简 单 杂 交 方 式 育 成 ，
分 为 产 绒 和 绒 肉兼 用 型 。近 年 来 ， 由 于 草 原 沙 化 碱 化 严 重 ， 植 被 少 而 脆 弱 。 舍 饲 养 羊 成 为 陕 北 白 绒 山 羊 的 主 要 生 产 方 式 。 在 这 样 的 饲 养 条 件 环 境 下 。一 些 养 羊 场 户 不 懂 得 饲 养 管 理 和 疫 病 防 治 ，往 往 发 生 疫 病 流行 ，其 中 ，羊 痘 就 是 威 胁 陕 北 白 绒 山 羊 的 主 要 疫 病 之 一 。 山羊 痘 是 山 羊 痘 病 毒 感 染 山羊
观 察胚 体及 鸡胚 绒 毛 尿囊 膜 病 变 。如 无 明显 病 变 ，再 将 收 到
的 鸡胚 绒 毛 尿 囊 膜 研 磨 、稀 释 、 离 心 处 理 后 ，继 续 接 种 于 ９ 日龄 鸡 胚 绒 毛 尿 囊 膜 ，孵 化 至 第 ５天 ， 收 集 鸡 胚 绒 毛 尿 囊 膜 ，发 现 接 种 处 周 围 有 黄 豆 大 小 、 圆 形 、 椭 圆 形 的 灰 色 斑 块 。与 山 羊 痘 病 毒 生 长 特 性 相 符 ，结 合 发 病 山羊 的 临 床 症 状 ，确 诊 山 羊 痘 流行 病 。 根 据 流 行 病 学 、 临床 症 状 、剖 检 变 化 、实 验 室 诊 断 及 发 病 羊 未 接 种 羊 痘 疫 苗 等 情 况 ，综 合 诊 断 为 羊 痘 。在 临 床 上 ， 羊 痘 与 羊 传 染 性 脓 疱 病 有 相 似 之处 ，应 注 意 鉴 别 。羊 传 染 性 脓 疱病 的病变通 常局 限于唇 部 、 ｌ ： １ 角 和 鼻 镜 ．患 部 出现 红 斑 、丘 疹 ，很 快 变 为 水 泡 和脓 疱 ，随 即 结 痂 ，并 往 往 互 相 融 合 ，波 及 整 个 唇 及 其 周 围组 织 ， 可 使整 个 嘴 唇肿 胀 ．外 翻 呈 桑 椹 状 。 羊 痘 则 是 全 身 性 的 ，呈 扁 平 、 圆 形 、隆 起 的 结 节 ， 界 线 明 显 ，且病 羊 体 温 升 高 ，全 身症 状 严 重 。
羊痘的诊断与治疗经验总结
中 国畜牧 兽 医 文摘
２ ０ １ ４ 年
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
３ Ｏ 卷
第２ 期
羊痘 的诊 断与治疗经验 总结
王 杰 玉
（ 青海省格尔木市动物 卫生监 督所 ，青海格尔木
１ ９ ９ ０ ～２ ０ ０ ５ 年 间 ，青 海省 每 年都 会 有痘 病 的发 生 。在青 海 省 ５ 治疗 “ １ ９ ９ ０ ～２ ０ ｏ ５ 年 羊痘 流行 情 况 ”的 调查 中 ，除 玉树 之外 的七 个 州 ５ ． １ 积 极 隔 离 ，充 分 消 毒 （ 地 、市 ） 均 有痘 病 发生 。其 中 ，贵德 、 门源 、德 令 哈 、同仁 以 旦 疫 情 出现 ，立 即 隔离 患 羊 。彻 底 消毒 患羊 生 活 过 的 圈 及 河南 县 发病 率最 高 ，而 病死 率 最 高的 为祁 连 、乐 都 、德令 哈 、 舍 、运动 场 、剖 检场 等 ，排 泄 粪便 进 行深 埋或 者 是 发酵 处 理 。常
２ 临 床症 状
围 、唇 、鼻 男 、颊 、四肢 和尾 的 内面 、阴唇 、乳 房 、 阴囊及 包皮 的血样 ，静置 烧 瓶 ３ ０ ｍｉ ｎ 左 右 ，然 后 用针 管 抽 取析 出血清 ，肌 肉 上 。 山羊大 多发 生 在乳 房皮 肤 表 面 ，随后 丘疹 逐 渐增 大 ，变 成灰 注 射 ，患病羔 羊 ，剂量 ：１ ｍ ｌ ／ ｌ ｃ ｇ 体重。 白色水 疮 ，内含 清 亮 的浆 液 。此 时病 羊体 温 下降 ，由于 白细 胞破 ６ 预 防 裂或 内容 物干 涸 ，形成棕 色痂 后痊 愈 。 （ １ ） 加 强饲 养管 理 ，定期 清洁 圈舍 ，保证 舍 内清 洁卫 生 ，抓 在疾 病 流行 期 间 ， 由于个 体体 质 略有 差异 ，各患 羊 之 间会表 好 秋膘 、 防寒 工 作 ；
羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控
羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控羊痘病，是一种由羊痘病毒引起的传染病，主要发生在绵羊、山羊等反刍动物身上，广泛分布在世界各地。
羊痘病毒属于痘疹病毒科，是一种双链DNA病毒，其感染范围广泛，易于传播，对家畜的健康和养殖业的发展都造成了严重的危害。
为了有效诊断和防控羊痘病，科学家们进行了大量的流行病学实验室研究，积累了丰富的诊断和防控方法。
以下我们将详细介绍羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控措施。
一、流行病学特点1. 传染途径羊痘病的传染途径主要包括接触传播和空气传播两种方式。
感染的动物通过呼吸道、眼结膜、皮肤、消化道等途径，将病毒排出体外，其他动物通过接触感染动物或者吸入病毒颗粒经空气传播而感染。
2. 季节分布羊痘病主要发生在春季和秋季，温暖湿润的环境有利于病毒的生存和传播。
畜牧业者在这两个季节需要加强对动物的监测和防控。
3. 群体感染羊痘病具有明显的群体感染特点，一旦有动物感染，往往会迅速在整个群体中传播。
对于有群养习性的动物，需要特别加强预防措施。
二、实验室诊断1. 病原学检测利用PCR技术可以检测羊痘病病毒的存在，该技术快速、准确，是目前检测羊痘病最常用的方法之一。
2. 血清学检测通过对患病动物的血清中抗体的检测，可以判断是否有羊痘病毒感染。
ELISA试剂盒等快速检测试剂的使用，能够在短时间内得出检测结果，为动物的及时治疗和隔离提供重要依据。
3. 病理学检测对疑似感染的动物进行组织标本的病理学检测，主要观察病变部位的组织病理学变化，包括细胞变性、炎症反应、病变程度等指标，从而确定是否为羊痘病感染。
三、防控措施1. 疫苗预防疫苗预防是预防羊痘病最有效的手段之一，目前市面上有多种羊痘病灭活疫苗和弱毒疫苗可供选择。
畜牧业者可根据实际情况选择合适的疫苗进行预防接种，提高动物的免疫力，降低感染风险。
2. 隔离治疗一旦发现动物感染羊痘病，需要立即进行隔离治疗，避免病毒的传播。
隔离治疗期间，畜牧业者应该加强对患病动物的护理和观察，确保其能够尽快康复。
羊痘病原特征的研究进展及防控措施
2014年第6期浙江畜牧兽医收稿日期：2014-09-15羊痘病原特征的研究进展及防控措施李传新（江苏省滨海县畜牧兽医站，江苏滨海224500）中图分类号：S858．27文献标识码：B文章编号：1005－7307（2014）06－0017－002羊痘是由羊的一种痘病毒引起的急性接触性传染病，其病原、症状和重要性等多方面均类似于人类的“天花”，主要病变是全身皮肤和肺部出现大量痘疹，病羊高热不退，鼻腔分泌物增多。
羊痘早在13世纪英国、15世纪法国、17世纪意大利就有报道，目前主要分布于亚洲、非洲及欧洲部分地区，世界动物卫生组织（OIE）将该病列为需申报类动物疾病，我国将其列为一类动物疫病。
近年来，该病在我国部分地区呈暴发性流行［1］。
羊痘是所有动物痘病中最为严重的一种，发病率达50% 80%，有较高的病死率（达20% 75%），可给养殖业带来巨大的经济损失，严重影响国际贸易和养羊业的发展［2］。
1病原特征羊痘病毒是一种亲上皮性病毒，大量存在于病羊的皮肤和粘膜脓疱及痂皮中，适合于羊的睾丸、肾、肺和甲状腺单层细胞上培养繁殖，能使细胞产生病变，在发育的鸡胚绒毛尿囊膜上亦可繁殖。
病毒的抵抗力表现对热敏感，50ħ以上很快使其失去感染力，在3%石炭酸、5%甲醛、2% 3%硫酸、10%高锰酸钾溶液中数分钟即可杀灭。
本病毒对10%漂白粉、2%硫酸锌溶液有一定抵抗力，在干燥环境中可生存数月或数年。
2流行病学2.1流行特点据文献资料介绍，我国甘肃、青海、宁夏，云南，湖南和福建等地是报告疫情较多的省份；华北地区报道疫情较多的是内蒙、山西、河北等地。
羊痘一年四季均可发生，尤以1、2、3、4、5、11和12月多发，6、7、8、9和10月相对少发［3］。
赫春杰（2004）［4］对庆阳山羊痘病流行病学调查表明，1999 2003年该地累计发生羊痘18543例，其中4 5月发病10521例，占发病总数的56.7%，10 11月发病4250例，占发病总数的22.9%。
山羊痘血清学诊断技术研究
ｓｏ ｄｔａ ｔｅａ ａｏｅｇｌ ｒｃ ｉ ｔ ｎｔｓ（ Ｇ ） ｓ ｕｔｄｔ ｉ ｏｅｃｉｉ ｌ ａｅ ｆ ｏｔ ｏ ｅｌｃｌ ｅ ｒ ａｙｓ ｔ ｎ ｈｗｅ ｔ ｈ ｇ ｒｓ ｅ ｐｅｉ ｔ ｉ ｔ Ａ Ｐ ｉ ｓｉ ｄａ ｓ ｌ ｃ ｓｓｏ ａ ｐ ｘｉ ｔ ｏａ ｖ ｔ ｎ ｒ ａ ｏ ｈ ｐ ａｏ ｅ ｅ ｏ ｇ ｎ ｎ ａｃ ｇ ｎｈ ｅ ｉ ｔｉ
ｐ ｘ ｖ ｃ ｉ ｅ ｉ ｈ ｍｍｕ ｅ ｏ ｔ． ｏ ａ ｃｎ ｎ ｔ ｅ ｉ ｎ ｄ ｇ ａｓ Ｋｅ ｒ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ：ｇ ａ ｏ ； ｓ ｒ ｌｇ ｃ ｄ ａ ｏ ｉ ；ｃ ｍ ｐ ｒ ｏ ｏ ｔｐ ｘ ｅ ｏ ｏ ｉ ｉ ｇ ｓｓ ｏ ａ ｓ ｎ ｎ ｉ
Ｚ Ｕ Ｂ－ ｎ，Ｆ ＮＧ Ｙｕｎｚａｇ，Ｘ Ｌ — ｎ ＨＯ ｉｕ Ｅ ａ—ｈｎ Ｕ ｅｒ ｊ ｅ
（ ， ｏｌｇ ｆ ｎｍａ Ｓｉｎ ｅ Ｇｕｚｏ ｉｅｓｙ ｕｙｎ ５ ０２ ， ｈｎ ； １ Ｃ ｌ ｅｏ ｉ ｌ ｃｅｃ ， ｉｈ ｕＵｎｖ ｒ ｔ，Ｇ ｉａ ｇ ５０ ５ Ｃ ｉａ ｅ Ａ ｉ
山羊 痘血 清 学诊 断技术 研 究
周 碧 君 ，冯 元 璋 ，许 乐仁
（， １ 贵州 大学 动 物科 学学 院 动物 医学 系， 贵州 贵 阳 ５０２ ；２ 仲 恺农 业技术 学 院 科研 处 ，广东 广 州 ５０２ ） ５０５ ． １２５
摘
要 ：本 实验 研 制 了 山羊 痘 的 五 种 血 清 学检 测 方 法 并 进 行 了比 较 分 析 ，结 果 表 明 ：琼 脂 凝 胶 扩 散 试 验
ａｄｔｅｃｕ ｔｒｍｍｕ ｏ ｌ ｔ ｐ ｏｅｉ ｔ ｔＣ Ｅ ｃｎｒ ｅｄ ｅｅ ｃ ｆ ｃ ｏ ｒｃ ｉｔ ｎｔ ｓ ｎｉｅ ｒａｔ ｏ ｙ ａｄｔｅｆ ・ ｎ ｏ ｎｅ ｈ ｉ ｎ ｅ ｃ ｏ ｈ ｒｓ ｓ（ Ｉ ） ａ ｉ ｉ ｒｎ ｅｅ ｅｔ ｆ ｅｉ ｔ ｉ ｉ ｔ ｎｏ ｎｉ ｄ ， ｎ ｕ ｅｒ ｓｅ ｓ ｆ ｐ ｐ ａｏ ｏ ｔａ ｇ ｂ ｈ ｌ
一起山羊痘病的诊治报告
地 方
４ 防 制
预 防流 行 性 乙 型 脑炎 ， 应从 畜 群 免 疫 接 种 、 灭 消 传 播媒 介 和宿 主动物 的管理 ３个方 面 采取措 施 。
患 乙 型脑 炎恢 复 后 的家 畜 可 获 得 较 长 时 间 的 免
据 了解 ，该 批种 羊 在 隆林 进行 山羊 痘 免 疫 接 种
时 ，有 部 分种 羊 的免疫 注 射 工 作是 由 当地 没 有 经 过
膜 有水 疱 ， 溃烂 。鼻 及上 下唇 有小 红 斑生 成 ， 部 、 易 颈
腋窝 、 股沟 、 阴、 腹 会 阴囊 、 乳房 及 尾 根 部皮 肤 出现 大 量 丘疹 。
引进 隆林 黑 山羊 青年 母 羊 １ ０只 、 羊 ｌ ８ 公 ０只 、 月 龄 １
羔羊 ２ ５只 。该 批 羊在 隆林 隔 离 圈养 ３ Ｏ天 ， 间进 行 期
对 无食 欲 的病羊 静 脉 注 射 １％葡 萄糖 生 理 盐水 ０
５ ０毫 升 、肌 苷 ２毫 升 、 Ｔ 升 及 “ 抗 强效 ” ０ Ａ Ｐ２毫 双 （ 主要 成 分为 黄芪 多糖 ） 升 ， ， ， ３毫 １次 天 连用 ３天 。
烧 、 食 、 涎 、 下 唇 及 鼻部 皮 肤 出 现 小 红 斑 等 症 厌 流 上 状 ； 病 后 第 ３天 ， ３只 羔 羊 病 死 ， 余 羔 羊 也 全 发 有 其
部 出现 上述 症 状 ， 羊 全 部 流产 ， 且 病 羊 陆 续 发 现 孕 并
在 全 身 的无 毛 处 ， 大 量 的丘 疹 。到 ５月 ５日止 ， 有 所
疫 力 。为 提 高 畜群 的免 疫 力 ， 接种 乙型 脑 炎 疫 苗 。 可 马属 动 物 和 猪使 用 我 国研 制选 育 的仓 鼠肾 细 胞 培 养 的弱 毒 活疫 苗 ， 全有 效 。预 防 注射应 在 当地流 行 开． 安
一例羊痘的诊治
死亡率２ ０ ％ ５ ０ ％，母羊易流产或产死胎 ，而且致 使 多数病羊丧失生产 力。本文 主要介绍一例羊痘
４ 防治措施
本镇畜牧兽医站确认这起疫病后，按照 “ 早、 快 、严 、小”的原则 ，立 即禁止此养殖户所饲养的 羊进行放牧和贩卖 ，同时对病羊进行隔离饲养 ，做
好 圈舍 和场地 的消毒 工作 ，防止疫情 扩散 。
２ ０ １ ３ 年 第１ 期
致犊牛出生后维生素Ａ 缺乏症。因此为了预防犊牛
维生 素Ａ 缺 乏症 ，泌乳期 的母 牛 应添 加 富含维 生 素
Ａ 的饲料 。
根据饲养管理情况 ，病史和临床特征初 步诊 断 为维生 素Ａ 缺 乏症 。 １ ． ４ 药 物治疗
治疗 原则 ：排 除致 病 因素 ，补 充维 生素 Ａ 和对 症 治疗 。 肌 肉 注 射 维 生 素 Ａ２ ～ ５ 万Ｉ ｕ，每 日 １ 次 ， 连 用５ ｄ 。 为 了 强 心 补 液 及 解 毒 ，２ ５ ％葡 萄 糖 溶 液 ５ ０ ０ ｍｌ 、１ ０ ％安 钠 咖 １ ０ ｍｌ 、１ ０ ％氯 化 钙溶 液 ５ ０ ｍ ｌ 、
的诊治体会 ，供广大同仁参考 。
１ 发病情况及临床症状
本镇 十三 户村 甘某 饲养 ６ ６ 只 萨福克 羊 ， 自
２ ０ １ ２ 年ｌ Ｏ 月１ ５日起 ，１ ５ 只羊 陆 续 发 病 。开 始病 羊
精神 沉郁 ，食 欲 减退 ，有 黏性 分 泌物从 鼻 孔 流
出 ，温度升至４ １ ４ ２ ℃。在 四肢内侧等无 毛或少 毛部位 的皮肤有红色斑疹 ，１ — ２ ｄ 后形成丘疹 ，突
２ ０ １ ３年 第 １ 期
疫
一
例羊痘的诊治
刘 颖
（昌吉市 六工镇 畜牧 兽 医站 ，新 疆 昌吉
羊痘病的诊断与防治
X u m u s h o u y i羊痘病的诊断与防治张建兵羊痘病别称为绵羊“天花”，该种疾病是由羊痘病毒引发的，该种疾病的发病较快对且具有接触传染性。
绵羊发病后再无毛或少毛部位皮肤粘膜会发生大量的斗争，该病的流行期为冬末春初。
绵羊和山羊都属于羊痘病的传播体，一旦发病羊群的死亡率非常高，对养殖场形成重大的经济损失威胁。
妊娠的母羊患病后，会发生流产，影响其生育能力，故而需要做好羊痘病的预防，以及病情控制工作，争取将疫病的影响降至最低，本文主要分析羊痘病的诊断以及预防防治工作，旨在为该病的防疫提供借鉴。
一、羊痘病的诊断羊痘病的病原共计有绵羊痘病毒和山羊痘病毒两种。
绵羊痘病毒的病毒粒子相对较大，可耐干燥以及寒冷环境，故而在自然环境中的生存能力较强，羊群脱落皮肤结痂中能够生存长达数年的时间且生物毒性不减弱，山羊痘病毒对消毒剂和高温的耐受力较差，可使用石炭酸、甲醛对病羊进行杀灭。
山羊痘病毒属于山羊痘病毒属成员，致病力相对其他疫病病毒较弱，可在山羊群体中传播，不会感染其他动物。
1、流行情况羊痘病具备非常强的传染性，极短时间内整个羊群能够被病毒所侵染，相较于绵羊痘，山羊痘的传染力要低。
已经发病的羊属于主要传染载体，发病羊能够通过呼吸道传播疾病。
发病羊羊痘破溃以后的液体以及分泌物具有较强的传染性，一旦这些物质混入饲料和饮用水中，并健康羊吸入会导致感染。
羊痘病还会通过破溃皮肤及黏膜伤口途径感染。
羊群日常饲养管理中未做好病样隔离工作，会导致整个圈舍和饲养用具早病毒污染，健康羊群受到染病威胁。
由于该病的流行期处于气温较低的冬末春初时节，发病的病羊得不到良好的饲养管理，受气温和病毒的双重作用将会产生应激反应，致使病情加重。
2、病羊临床症状羊痘病有两天至十二天不等的潜伏期，羊感染病毒后通常可在六天至八天内发病，发病后病羊的体温会逐渐上升，温度可达到41-42摄氏度。
病羊会拒绝进食，无精神，鼻腔中流出带有脓性的鼻液，心率、呼吸以及脉搏均会大幅上升。
羊痘的诊断和治疗技术
他性 出血 性 炎 症 ， 胃 、 管 等 有 硬块 结 节 ， 表 皮 肤 瘤 肠 体
币大 小 的疹 块 ， 块 破 溃后 ， 疹 有淡 黄 色 液体 流 出 ． ３ ４ 经 ￣
日后 ． 没有 破 溃 的 脓疱 渐 渐 被 吸 收 ， 干缩 ， 成 褐 色 痂 。 结 再 过 几 天 后 ， 皮 脱 落 ， 留色 较 淡 的疤 痕 即 愈 合 。 痂 遗 全 过 程 为 ３ ４周 。山羊 痘 可并 发 呼 吸道 、 ￣ 消化 道 疾病 和关 节 炎症 ． 重时 可 引起 脓 毒 败血 症 而死 亡 。 严
欲减 退 或 不 食 ， 初 鼻 孔 闭 塞 、 搏 和 呼 吸 加 快 ． 有 病 脉 偶
咳嗽 ． 的 山羊 流 浆 液 或 黏 液 性 鼻 涕 ， 睑 肿 胀 、 膜 有 眼 结 充 血 ， 浆 液性 分 泌 物 ， １ ２日后 ， 无 毛部 位 ． 有 经 － 在 例如
鼻孔 周 围 、 部 、 部 、 部 、 腹 部 、 肢无 毛 区 ， 硬 面 耳 背 胸 四 有
皮 内 注射 。注苗 后 第 ８天 起 未见 新 的病 例 出现 。 疫情 得
以控制 。 ４ 治 疗
羊 痘 一 年 四 季均 可 发 生 ．给养 羊 户 造 成 了很 大 的
经济 损 失 。绵 羊痘 的潜 伏期 为 ４ ２天 ， 均 为 ６ ８天 。 １ 平 ～
病 羊体 温 升 高 达 ４ ℃～ ２ 。 膜 、 睑红 肿 ． ｌ ４℃ 结 眼 呼吸 和 脉
４ １ 病 初 可 注 射 免 疫 血 清 ．． 克 左 右 重 的羊 注 射 ． １５千
２ ０毫升 ． 重大 者 应加 量 。 体 ４２ 皮 下 注射 ０１ ． ．％麝 香 酒精 溶 液 。配 制方 法 ： 麝 香 将
吉林绵羊痘病毒诊断方法及防治对策探讨
羊痘病是一种急性传染病，传播方式主要是通过接触羊的唾液、鼻涕、泪液、粪便等体液或分泌物。
羊痘病在全球范围内广泛存在，是影响养殖业的重要疾病之一。
该种疾病的危害性主要表现在对羊的免疫功能造成影响，使得羊易患其他疾病，甚至造成死亡。
此外，羊痘病还对人体健康造成一定危害，人接触羊痘病病毒后也可能感染疾病。
为了减少羊痘病的发病率，保障养殖业的健康发展，必须让养殖户了解羊痘病的危害性，制定防治对策，提高防治效果。
一、前郭县绵羊养殖业发展现状前郭县是中国重要的绵羊养殖基地之一，羊养殖业在当地的发展较为迅速，前郭县积极推广良种改良技术，引进了许多高产、抗病的品种，提高了绵羊的育种水平。
随着人们认识的提高和技术的进步，前郭县的羊养殖业也逐渐向规模化、专业化方向发展，许多农民已经开始采用科学的饲养方式和管理模式，提高了养殖效益。
同时前郭县不断推进羊养殖业的科技创新，针对一些常见疾病和养殖问题，开展相关技术研究，促进了羊养殖业的健康、高速发展。
羊养殖业不仅带来了农民收入的增加，还带动了相关产业的发展，如饲料生产、草地管理等，形成了羊产业链。
目前前郭县的羊养殖业发展较为快速，创新能力较强，取得了一定的成效。
但是仍然存在一些问题和挑战，比如环境保护、市场营销，尤其是疫情防控方面需要进一步加强。
二、流行病学1、病原学特征痘病毒是一种大型双链DNA病毒，世界卫生组织(WHO)对其进行了分类，属于痘病毒科、病毒属，大小为200-250纳米，由外壳和内核两部分组成。
痘病毒基因组是一条长度为186kbp的双链DNA，共有约200个基因，其中包括诱导免疫反应的抗原基因、膜蛋白基因、酶基因等。
痘病毒在人类和动物体内繁殖，主要通过皮肤和黏膜传播，感染后可引起发热、头痛、呕吐、皮疹等症状。
痘病毒表面有多种抗原，包括糖蛋白抗原、膜蛋白抗原和酶抗原，这些抗原能诱导机体产生抗体反应，形成持久的免疫保护。
另外痘病毒具有一定的免疫逃逸能力，其抗原表面容易发生变异，降低人体对病毒的识别和攻击能力。
羊痘病的诊断与防治
羊痘病的诊断与防治羊痘，是一种由卡波病毒引起的急性传染病，主要感染羊和山羊。
羊痘病具有强烈的传染性，对羊群的健康和养殖业的发展造成了严重威胁。
本文将介绍羊痘病的诊断与防治方法。
一、羊痘病的传播途径羊痘病主要通过接触传播，即健康动物与感染动物接触、呼吸液飞溅、皮肤损伤以及污染物的传播等途径均可导致疾病的传播。
由于卡波病毒具有很强的环境稳定性，可能会通过空气或物体表面传播。
加强羊舍和饲养环境的卫生管理非常重要。
二、羊痘病的临床症状羊痘病的临床症状主要包括发热、咳嗽、打喷嚏、流泪、腹泻、呕吐、皮肤和黏膜的出血点、水痘疹等。
有些羊只表现为轻度发热，有的则表现为严重的全身症状。
通过临床症状的表现可以初步诊断出羊是否感染了羊痘病。
三、羊痘病的实验室诊断确定羊是否感染了羊痘病，需要进行实验室检测。
常用的检测方法包括抗体检测、病毒分离和PCR检测。
抗体检测可以通过血清学方法进行，包括补体结合试验、凝集素试验、血凝试验等。
病毒分离则需要从患病的羊体内组织、分泌物或血液中分离出病毒。
PCR检测则是通过检测患病羊的体液或组织中的病毒DNA进行诊断。
四、羊痘病的防治措施1. 疫苗接种目前，预防羊痘病的最有效方法是接种疫苗。
疫苗接种可以显著减少羊痘病的发病率，降低疫情的传播风险。
在疫情高发地区，建议对羊群进行定期疫苗接种，确保羊只的免疫力。
2. 加强管理和控制加强养殖场的卫生管理和防疫措施，是防控羊痘病的关键。
及时清理羊舍和饲养环境的污物，定期消毒，减少传染源的存在。
对于已经患病的羊只，要及时隔离治疗，并做好消毒工作，避免疫情的扩散。
3. 加强免疫力加强羊只的抵抗力，有利于降低感染病毒的风险。
可通过合理的饲养管理、优质饲料的供给、定期的驱虫和除菌等措施，提高羊只的免疫力。
4. 加强监测与报告一旦发现有疑似羊痘病病例，应立即进行隔离处理，并向当地畜牧部门报告。
及时进行病例监测和疫情报告，有利于有效控制和防范疫情的发生。
羊痘病的诊断与防治
羊痘病的诊断与防治羊痘病是由羊痘病毒引起的一种高度传染性疾病，主要通过直接接触和呼吸道传播，会对羊的健康造成极大的影响，因此及时的诊断和防治非常重要。
一、诊断1.临床症状诊断：羊痘病患羊的症状明显，表现为体温升高、呼吸急促、食欲减退、粪便稀软等。
同时，在其鼻子上还会出现颗粒状的疱疹，这些疱疹会逐渐扩大，形成一个个完整的红色水泡，随后会膨胀并发生破溃，流出清亮液体，最后结痂。
2.病理诊断：对死亡的羊进行解剖检查，可以发现肺和胃肠道等部位存在病变，疹子中也可发现羊痘病毒。
同时，还可以通过患羊的血清学检验，检测出抗体水平的升高。
3.病原学诊断：通过对患羊的分泌物、血液、皮肤等样本进行采集，再进行实验室检测，最终确定羊痘病病毒的存在。
二、防治1.预防措施：为了有效地控制羊痘病的传播，可以采取以下几种预防措施：（1）加强卫生管理：定期对养殖场进行卫生消毒，保持干净卫生的养殖环境。
（2）加强检疫工作：要求新进羊只能通过专门通道进入养殖场，并进行隔离观察，待确保其健康后方可与其他羊混养。
（3）加强疫苗接种：定期给羊接种羊痘病疫苗，提高其免疫能力，进而减少感染的可能性。
2.治疗措施：对于已经感染羊痘病的患羊，需要及时进行治疗，从而缓解其症状，避免病情继续加重。
（1）中药治疗：可以采用中草药或中药配方，以清热解毒、祛风散痹为主要治疗方法，促进体内的代谢和免疫功能的恢复。
（2）西药治疗：若症状较严重，可以根据具体情况采用抗生素、消炎药等药物进行治疗。
总之，加强羊痘病的预防和防治，对于保障羊的健康和养殖业的发展具有重要的意义。
同时，在进行防治时，要科学合理组合使用不同的治疗手段，以便尽快恢复患羊的健康。
山羊痘病毒属病毒检测技术研究进展
Ｉ ＨＡ）
３ 分子 生物 学检 测 技术 随 着 聚 合 酶 链 式 反 应 （ ｏｙ ｒｓ ｈｉ Ｐ ｌｍｅａｅＣ ａ ｎ Ｒ ａｔ ｎ Ｃ 方法 的 日益 成 熟 ， ｅｃｉ ，Ｐ Ｒ） ｏ 该技 术 已广泛 用 于 病 毒 的分 类 、 定 和疾 病 诊 断 。Ｃ Ｐ 鉴 ａ Ｖ属 于 双股 ＤＮＡ 病 毒， 适 于 Ｐ Ｒ检测 ｎ 之。 更 Ｃ 已报 到 的 羊 痘 病 毒 Ｐ Ｒ检 测 方 法 中， 物 多根 据 编码 羊 痘 衣 壳 蛋 白 Ｐ ２ Ｃ 引 ３ 和 反 向末 端 重 复 序 列 （ｎ ｅｔｄｔｒ ｎｌｅｅｔ Ｔ Ｉｖｒ ｍｉａ ｒｐａ，ＩＲ） ｅ ｅ 设 计 。 外 Ｉ ｌ ｄ［ 国 ｒ ａ ２ Ｈｅ ｅ等 【 根 据 Ｐ ２基 因序 ｅ ｎ 和 ｉ ｎ ３ 列 设计 了相应 的 引物 ， 建立 了检测 皮 肤样 品 中羊痘 病 毒 的 Ｐ Ｒ方 法 ， 利 用 限 制 性 内切 酶做 了进 一 步 的 Ｃ 并
蛋 白的体 外表 达 已成为 国际上 羊痘研 究 的热 点 ［之 。 １ ｒｍｍｕｅｅ ｃ ｏｈ ｒｓ ， ｎ ｌ ｔ ｐ ｏｅｉ ｅｒ ｓ
ＣＩ Ｅ）
Ｃ Ｅ是一 种 常用 的检 测抗 原或 抗 体 的方法 ，１ ８ Ｉ ９８
年 首次 用 于检 测 羊 痘病 毒 抗 体 ， 果显 示 用 灭活 的抗 结 原 与抗 体 具 有 同等 的敏感 性 ， ＡＧＰ相 比， 检 出率 与 其 更 高 。１９ 年 ，Ｊｓｉ 用 生理 盐 水 溶 液 替代 巴 比妥 ９９ ｏｈ 等 缓 冲 液 ， 进 的后 Ｃ Ｅ与 常 规 Ｃ Ｅ相 比 ， 提 高检 测 改 Ｉ Ｉ 可 的灵 敏度 。 碧 君等 ［研 究发 现 ＣＥ能提 高 对抗 原或 周 ９ 】 Ｉ 抗 体 的分 辨 能 力 ， Ａ Ｄ敏 感 且 速 度 快 。 方 法 比 较 ＧＩ 该 较简 单经 济 ， 需要 一定 的设 备 。 但
羊痘的诊断与防控技术浅谈
１ ． １ 羊痘 病 毒 是 一 种 乙醚 敏 感 的Ｄ Ｎ Ａ 病毒， 在 电镜 下 呈 圆柱 形 ， 末端 凸出 ，
中 央 有 致 密 的ＤＮＡ核 心 和 一 宽 阔 的 、 层 板状 衣 壳 。其 大 小 为２ ０ ０ ￣ ３ ０ ０ ｎ ｍ。
状 或 车 轮 状结 构而 有 诊 断 价 值 。
１ 病 原 特 性
危 害 较轻 ，死 亡 率 为 １ ％一 ２ ％， 而 患 病
５
诊 断 要 点 根 据 接 触 史 ，典 型 皮 疹 ， 自愈 过
羔羊 的死 亡率 则 很 高 ， 可达 ５ ０ ％ 以上 。
３ 临 床 症 状
程 ， 一 般不难诊 断 ； 如 有怀 疑 ， 可 将 损 害 的 痂 皮 或 活 检 组 织 放 在 电 镜 下 观 察， 如 发 现 病 毒包 涵体 可 明 确诊 断 ， 在 组织 培养 上病 毒 生 长 缓 慢 。 早 期 皮 疹 为 斑 块 上 多 个 坚 硬 结 节， 晚 期 易 破 溃 并 伴 出血 ． 组 织切 片 见
成纤维 细胞排列 成特殊 的旋涡状 ， 扇
３ ． １ 本 病 潜 伏期 为６ ～ ８ ｄ 。
３ ＿ ２ 体 温 升 高 至４ ｌ ～ ４ ２ ｏ ｃ，鼻 腔 和 眼
结膜有 卡他性脓 性炎症 。在颜 面 、 乳 房、 外阴、 四 肢 内侧 等 无 毛 或 少 毛 部 位 的皮 肤 发 生 暗 红 色 斑 疹 ，并 迅 速 发 展 为丘疹 。 ３ ． ３ 疹块 逐渐增大呈圆形 、 椭 圆 形 和
层板状衣壳 。 其 大 小 为２ ０ ０ ｘ ３ ０ ０ ｎ ｍ， 能
在人 羊膜 细胞 和原 始恒 河 猴 肾 细 胞 培
（ 重 庆 市 忠 县兽 医服 务 中心 花 桥 镇 站， 重 庆 忠 县
羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控
羊痘病的流行病学实验室诊断及其防控羊痘病是由羊痘病毒引起的一种急性传染病，主要感染羊和山羊，是一种严重威胁畜牧业发展的疾病。
为了有效控制羊痘病的传播，需要进行流行病学实验室诊断并采取相应的防控措施。
流行病学实验室诊断是通过对疫区进行流行病学调查和病毒学检测，以确认疫情的爆发和传播情况。
在羊痘病的流行病学调查中，需要收集并分析疫区的流行病学资料，包括发病情况、年龄和性别分布、感染途径等，以便确定疫情的来源和传播途径。
病原学诊断是通过实验室检测，确认疫区的疫情是否由羊痘病毒引起。
常用的病原学诊断方法包括病毒分离、酶链反应（PCR）和血清学检测等。
病毒分离是通过将患病动物的病原体分离出来，进一步鉴定其特性和株系。
PCR是一种高效敏感的病原学诊断方法，通过扩增病毒DNA或RNA序列，可以快速检测出疫区中是否存在羊痘病毒。
而血清学检测则是通过血清抗体的检测，确定感染动物的免疫状况，以及判断其是否感染了羊痘病毒。
针对羊痘病的防控措施主要包括疫苗接种、动物隔离和消毒等。
疫苗接种是最有效的羊痘病防控措施之一。
羊痘病疫苗是由弱毒病毒制成，接种后可以引起动物的免疫反应，增强机体抗病能力。
定期对羊和山羊进行疫苗接种是预防羊痘病的关键。
动物隔离也是防控羊痘病的重要措施之一。
在疫情爆发时，需要将患病动物隔离并进行治疗，以防止疫情的进一步传播。
需要对患病动物的粪便、尸体和污染物进行安全处理，避免病毒进一步传播。
对于疫区的场所和设备进行定期消毒，也是防控羊痘病的重要措施。
可以使用消毒剂对畜舍、饲料槽等进行彻底的消毒，杀灭潜在的病毒和细菌，减少病原体的存活和传播。
羊痘病的流行病学实验室诊断和防控措施在有效控制疫情的传播方面起到了重要的作用。
通过流行病学调查和病原学诊断，可以及时发现和确认疫区的羊痘病疫情，采取相应的防控措施，减少疫情的发生和传播风险。
定期疫苗接种、动物隔离和消毒等防控措施也是预防羊痘病的重要手段，需要做好日常的防疫工作，保障畜牧业的健康发展。
羊痘病毒及其疫苗研究进展
羊痘病毒及其疫苗研究进展赵志荀;吴国华;颜新敏;张强【摘要】国内外已对羊痘病毒及对羊痘的预防控制做了大量的研究工作.羊痘病毒的流行病学特征、分离及体外培养、体外检测已有了较快的发展,而其致病机制和基因组结构、分子表位、结构蛋白及非结构蛋白等分子生物学特征的研究尚待逐渐进入更加深入的研究.近年来的研究主要是针对结构基因如p32的各类载体的构建、表达和对非结构基因如TK基因的研究及其缺失载体的构建、IRT的功能研究等等.全面而深入的分子生物学和免疫学基础的研究,将为发展更为有效的检测诊断方法,并为安全有效的亚单位疫苗、重组疫苗及核酸疫苗的研制奠定基础.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)004【总页数】5页(P77-81)【关键词】羊痘病毒;毒力相关基因及蛋白;ITR基因及分子诊断;疫苗【作者】赵志荀;吴国华;颜新敏;张强【作者单位】中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046【正文语种】中文【中图分类】S852.654羊痘病毒(Capripox virus,CPV)是最重要的动物痘病毒,在分类地位上属于痘病毒科(Poxviridae)脊椎动物痘病毒亚科(Chordopoxrinae)中的羊痘病毒属(Capripoxvirus)成员,包括山羊痘病毒(Goat pox virus,GPV)、绵羊痘病毒(Sheep pox virus,SPV)和牛结节疹病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)[1]。
羊痘综合诊断与防控技术要点
设施农业2023-0869农业工程技术（设施农业）羊痘综合诊断与防控技术要点摘要:羊痘作为羊养殖中的多发疾病，是一种由羊痘病毒感染导致的急性、热性、接触性传染性疾病，以发病急切、蔓延快速、发病率与死亡率居高不下为主要特征，严重扰乱羊养殖秩序。
尤其在近年来各种羊疾病发病形势愈发复杂的背景下，紧抓羊痘的综合诊断与防控是当务之急，该文主要就相关要点加以分析，以期引导羊场有条不紊地推进诊断与防控管理，将养殖损失降至最低。
关键词: 羊痘；诊断；防控随着人民对优质羊肉的需要逐渐增长，羊场数量逐渐增多，并由传统养殖方法转向自动化、规模养殖，这不仅体现在日常饲养管理中，也体现在疾病防疫上。
以针对性、科学性、有效性的综合诊断与防控措施强化对各类疾病的日常监管，是羊场提升养殖收益、赢得市场竞争的必然之举，羊痘这一发病率与死亡率颇高的疾病，其诊断与防控必须引起羊场管理人员的重视。
1 羊痘的综合诊断要点1.1 临床症状羊痘潜伏期通常为4～8天，病羊发病后其体温迅速升高，可升至42℃左右，状态萎靡不振，进食量大减，眼结膜潮红，鼻腔当中流有清亮鼻涕，病程继续推进后，病羊的呼吸变深变快，脉搏频次也随之加快。
病羊体表毛发稀薄的地方长有痘疹，一般集中在嘴唇、鼻子、眼周等处，发病母羊的双乳、阴唇等处以及发病公羊的阴囊、包皮等处同样会长有痘疹，痘疹面积会继续扩大，继而变成红色丘疹。
这些丘疹通常凸起于表皮，其中央部分会慢慢内陷，外观颜色呈现为灰白色，丘疹内含有淋巴液，最后成为水疱或脓疱，等到水疱或脓疱干涸之后便会形成痂皮，颜色一般为棕色，痂皮自然脱落后会留下红色瘢痕[1]。
病程一般会持续3周，有些病羊发病之后会出现一些非典型症状，诸如体温升高、黏膜炎性病变等，孕期母羊在发病之后常常突发流产或者产下弱胎、死胎，就算顺利生产，这些羔羊也很容易死亡。
付马明（甘肃省陇南市宕昌县临江铺镇畜牧兽医站，甘肃 宕昌 748504）1.2 流行趋势羊痘的发病表现为显著的季节性特征，一般在冬春二季最为多发，气候变化大、温度差异明显等是诱发本病的重要原因，已经发病的羊只以及带毒羊只是主要传染源，除了直接接触传播之外，呼吸道、消化道传播同样是不可忽视的传染渠道。
羊痘诊断与治疗PPT
加强营养：提供充足的营养，提高病羊的抵抗力和恢复能 力
观察病情：密切观察病羊的病情变化，及时调整治疗方案
预防措施：加强羊群的免疫接种，提高羊群的免疫力和抵 抗力
保持羊舍清洁卫生，定期消毒 加强羊群管理，避免过度拥挤 提供充足营养，提高羊只抵抗力 定期进行疫苗接种，提高羊群免疫力
羊痘疫苗的研究进展 羊痘治疗方法的研究进展 羊痘诊断技术的研究进展 羊痘防控策略的研究进展
羊痘疫苗的研究进展
羊痘治疗方法的研究进展
羊痘诊断技术的研究进展
羊痘流行病学研究进展
疫苗研发：提高疫苗的效力和稳定性，降低副作用 诊断技术：开发快速、准确的诊断方法，提高诊断效率 治疗方法：探索更有效的治疗方法，降低死亡率和后遗症 预防措施：研究羊痘的传播途径和预防措施，降低感染风险
加强管理：加强羊群的管理， 防止羊群过度拥挤，保持良好 的卫生环境
观察病情：密切观察病羊的病 情变化，及时调整治疗方案
抗病毒药物：如阿昔洛韦、利巴韦林等 抗生素：如青霉素、头孢菌素等，用于预防继发感染 免疫增强剂：如干扰素、胸腺肽等，提高机体免疫力 局部治疗：如外用消毒剂、抗病毒软膏等，用于治疗皮肤病变
定ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ对羊舍进行消毒，使用高 效消毒剂
保持羊舍清洁，及时清理粪便 和污物
定期对羊群进行疫苗接种，提 高免疫力
加强羊群管理，避免羊群过度 拥挤和接触病原体
疫苗种类：羊痘疫苗、羊痘-羊瘟二联疫苗等 接种时间：羔羊出生后2-3周，成年羊每年接种一次 接种方法：皮下注射或肌肉注射
注意事项：接种前确保羊只健康，接种后观察羊只反应，如有异常及时处理
科研成果：羊痘疫苗的研发和 应用
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羊痘诊断技术研究进展陈轶霞(西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州730030)摘要 从病原学方法、血清学方法和分子生物诊断方法几个方面阐述了羊痘的快速诊断与检测技术研究进展,并对羊痘诊断技术研究的发展方向进行了展望。
关键词 羊痘;快速诊断;研究进展中图分类号 S858.26 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)34-15008-02R e se a rch Pro g re s s on th e D ia gn o s t ic T e c h n iq ue s o f G o a tpo x a n d Sh e ep po x CHEN Y i-x ia (C o lle ge o f L ife S c ien ce an d E n g i n e e rin g ,N o r thw e st U n iv e rsity fo r N a tion a litie s ,L an zh ou,G an su 730030)A b s tra c t F ro mth e aspects o f e tio lo g ica l m e th ods ,sero lo g ica l m e th ods an d m o lecu la r b io log ica l d ia gn ostic m e th od s ,th e resea rch pro gre sse s onth e rap i d d iagn o sis and de tectiontech n iqu es o f go a tpox an d sh eeppox w ere expou n ded .A n d th e dev e lopm en ta l direction s o f th e resea rch es onth e d iagn o stic tech n o lo-gy w e re pred icted.K e y w o rd s G oa tpox an d sh eeppox ;R ap id dia gn os is ;R esea rch p ro g re ss基金项目 西北民族大学中青年科研基金(08-09)资助。
作者简介 陈轶霞(1969-),女,甘肃陇西人,博士,副教授,从事动物病毒分子生物学研究。
收稿日期 2008-10-09羊痘(S heepp ox and goa tpox ,SGP )又称绵羊痘和山羊痘,是由羊痘病毒属(Cap ripoxv irus ,C PV)的绵羊痘病毒(S h eeppox v iru s ,S PPV )或山羊痘病毒(G oa tp ox v iru s ,G TPV )引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病。
其主要表现为发热、无毛或少毛部位皮肤黏膜发生丘疹和疱疹,是所有动物痘病中最为严重的一种,有较高的死亡率,能造成巨大的经济损失。
有该病的国家和地区的易感动物及其相关产品被世界各国列为严格限制进出的对象,严重影响国际贸易和养羊业的发展。
世界上许多地区有该病发生的报道,如印度、尼日利亚、希腊等。
我国的江苏、广东、贵州、山东、浙江、广西、甘肃、黑龙江、福建等地均有该病发生,有的地区呈暴发流行。
羊痘病毒(SGPV )还可作为生物武器,成为世界恐怖分子威胁世界和平的有力手段,被美国疾病控制中心(C DC )划归到Ⅱ类危险病毒。
世界动物卫生组织(O IE)将该病列为法定通报传染病,我国将其列为Ⅰ类动物疾病[1]。
1 病原学方法1.1 电镜观察采取病羊皮肤和黏膜的丘疹和水疱病料作成切片负染后直接在电镜观察病毒粒子是诊断羊痘的常用方法,但在发病区往往没有这样的设备,难以满足快速诊断的需要。
1.2 病毒培养病毒培养有较高的特异性,羊痘病毒可在牛、绵羊、山羊源的组织培养细胞上生长,原代或次代羔羊睾丸细胞和羔羊肾细胞最为敏感[2]。
多数细胞培养物在接种病毒3～4d 后,可于多数细胞内发现嗜伊红性胞浆内包涵体。
包涵体随后逐渐增大,嗜碱性增高,且被一个明显的晕圈围绕。
应用P a sch en 染色法进行特殊染色后在电镜下观察,可清楚地见到其中许多密集成堆的原生小体———病毒粒子。
SG PV 也可在某些传代细胞系中增殖,如BH K -21细胞、V e ro 细胞等。
周碧君等的研究结果表明,组织病料样本对V e ro -E 6细胞的适应性优于B HK -21细胞,其呈现细胞病变效应的时间稳定在24～48h ,而在BHK -21细胞中要盲传至第4代时才可观察到稳定规律的病变效应,由此可见,V e ro-E 6细胞可用于临床组织样本中G TPV 的初次分离,比用原代细胞分离病毒省时省力[3]。
在不同地点和不同时间分离获得的羊痘病毒株,对各种细胞培养物的敏感性不尽一致。
因此,在由病料初代分离羊痘病毒时,最好多用几种细胞培养物。
羊痘病毒在细胞培养物中生长缓慢,病毒培养比较耗时、费力,不适合进行快速诊断。
2 血清学方法2.1 传统血清学方法诊断SGPV 的血清学方法有病毒中和试验(VN T )、荧光抗体试验(FA T)、琼脂扩散试验(AG ID)、免疫电泳(IE)、对流免疫电泳(C IE )、反向被动血凝试验(R PH A)、乳胶凝集试验(LA T))、单向辐射状溶血试验(SRH )、单辐射免疫扩散和酶联免疫吸附试验(E L ISA )等[4-5]。
周碧君等建立了山羊痘(GP )的5种血清学检测方法并进行了比较分析,结果表明,琼脂扩散试验适于基层兽医开展山羊痘病例的诊断,对流免疫电泳能提高对抗原或抗体的分辨能力,荧光抗体试验能对感染细胞进行GTPV 定位检测,反向被动血凝试验主要用于临床痘疹痂皮和感染细胞中GT PV 抗原的定量测定,正向间接血凝试验(I H A )不失为一种GT PV 抗体的最佳监测方法[6]。
2.2 EL ISA 方法酶联免疫吸附试验(E L ISA )因其操作便利、快速、敏感、特异性强,便于自动化,能检测群体特异性抗体而倍受青睐。
目前国外已建立了许多种检测SG PV 抗原或抗体的E L ISA 方法。
C a rn 建立了用于检测从山羊、绵羊、牛的活组织样品中分离的羊痘病毒的抗原捕捉E L ISA 方法,该法适合检测组织培养物中的病毒;R ao 等建立了用于检测皮肤活组织中的GT PV 抗原的免疫捕捉IC -E L ISA 方法,证明其特异性为80%～100%,敏感性为70%～86%,该法也可用来诊断绵羊痘(S P)。
有一些E L ISA 方法已成功用于监测疫苗免疫后的抗体,R ao 等建立了检测S P 特异性IgM 抗体的敏感、特异的E L ISA 方法[7];R ao 等建立了用于检测G TPV 抗体的A v id in -b iot in(抗生素蛋白-生物素)E L ISA 方法,特异性为91.8%,敏感性为94.1%[8]。
由于羊痘病毒和副痘病毒有相似的血清型,以上提到的常规血清学方法因会出现抗体交叉而无法区分来源于牛、绵羊和山羊的病毒毒株以及副痘病毒(P a rap oxv iru s)。
2.3 应用特异性重组蛋白建立的诊断方法 P 32蛋白是SG PV 共有的特异性很强的具有免疫原性的结构蛋白,可用于诊断与预防,是目前羊痘研究领域的热点之一。
研究结果安徽农业科学,J ou rn a l o f A n h u i A g ri.S c i .2008,36(34):15008-15009 责任编辑 张杨林 责任校对 张士敏表明,全长P32蛋白可溶性最大,且在E L ISA中的反应性最好,但由于其跨膜区对细胞的毒性,使其表达量低,很难纯化到重组P32蛋白[9]。
国内外研究者多以截去跨膜区的P32基因为研究对象,研究其重组蛋白的用途。
如C a rn等用截取跨膜区的重组P32蛋白为抗原,研究了检测抗体的间接E L ISA 方法,该法快速、可靠,且没有传染性[10];同样,以抗重组P32蛋白抗体为基础的检测抗原的E L ISA方法的研究也有报道[11]。
虽然以重组P32为基础建立的E L ISA方法具有高度的特异性,与正痘病毒和副痘病毒没有交叉反应,但由于在E L ISA中的反应性最好的全长P32表达量低,因此其推广受限,至今未见商品化的诊断检测试剂盒问世。
陈轶霞等的研究结果表明,全长P32蛋白截取跨膜区后,对其免疫原性有一定的影响[12]。
鉴于此,很有必要进行羊痘病毒其他特异性强且表达量高的功能基因在羊痘诊断中的应用研究。
3分子生物学诊断方法用PC R方法可以简单、快速、特异地从组织培养上清液、活组织样品中检测出SG PV的DN A片段,还可以通过对PCR 产物的酶切分析进行C PV种的鉴定。
Ire la nd等以SG PV基因组的附着蛋白基因和融合蛋白基因序列设计的引物具有SG-PV特异性,可利用限制性内切酶EcoⅠ和D raⅠ的识别位点来证实PCR产物的特性[13];M a ng an a V ou g iouk a等建立了鉴别绵羊痘病毒的简单、快速、特异的PCR方法,该方法的引物来自羊痘病毒K S-1和InS-1株的倒置末端重复序列,能将S P PV 与C PDV和疱疹病毒(H e rpesv iru ses)区分开[14];M a rk ou la tos等用倒置末端重复序列和α微管蛋白为目的基因设计引物,建立了多重PCR技术检测皮肤组织中的S PPV,该技术采用3对引物、一步扩增方法,这比用单一引物的PC R方法具有更高的敏感性和特异性,还相当节省时间,是一种简单、快速、准确且特异性强的诊断方法[15];H osam an i等依据G TPV和S PPV P32基因序列的差异,对产物进行限制性酶切分析,建立了区分G TPV和S PPV的PCR-R FLP(限制性片段长度多态性)方法,可鉴别G TPV和S PPV[16];O rlova等建立了一种快速、简便的鉴别羊痘病毒种的多重PCR方法,该法用羊痘病毒种特异性的引物,产物无需进行序列或限制性酶切分析; O rlova等为了区分俄国和前苏联一些国家应用的绵羊痘疫苗株与流行株,建立了一种对锚蛋白重复序列基因的PCR产物进行限制性分析的方法。
由于这2种方法都具有很高的特异性,可以用作羊痘病毒的常规诊断[17]。
B a lin sky等建立了用于快速检测潜伏期、临床发病的和死后的羊体中羊痘病毒DN A的实时PCR方法,能在2h内得到结果[18]。
国内郭巍等依据P32基因和α微管蛋白基因,初步建立了诊断山羊皮肤组织中GT PV的PCR方法[19];康文玉等参照SG PV P32基因序列,建立了快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品的实时荧光定量PCR技术[20]。