高中生物实验还原性糖,脂肪,蛋白质

4．在可溶性还原糖的鉴定中，在对盛有组织样液与斐林试剂混合物的试管直接用酒精灯加热易破，因为试管受热不均匀，若要触及烧杯底部，试管口不要朝向实验者，以免溶液沸腾时冲出试管造成烫伤。
5．双缩脲试剂并不是双缩脲分子。所谓双缩脲是由两分子尿素经脱氨缩合而成的化合物。该化合物在碱性溶液中能与CuSO4反应产生紫色络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应。特别要提醒学生的是实验桌上两瓶不同浓度的CuS04溶液，避免拿错。
过滤：将玻璃漏斗插入试管中，漏斗上垫一层纱布
注入组织样液2ml
加斐林试剂：2ml（由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成，不能分别加入）
水浴加热：煮沸2min
观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色。
结论：还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀
2、实验成功的要点：
①还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
③还可设计一只加底物的试管，不加双缩脲试剂，进行空白对照，说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应，而不是空气的氧化引起。
七.疑难精析
1．生物组织中的还原糖是指分子结构中含有还原性基团(如游离醛基或酮基)的糖，如葡萄糖、麦芽糖、果糖，淀粉、蔗糖不具有还原性，斐林试剂只能检验可溶性还原糖的存在，而不能鉴定可溶性非还原糖或不溶性糖。
2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+0.05g/mL的CuSO4溶液)；②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④ 体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。
六．（一）、还原糖的鉴定
1、还原糖的鉴定步骤:
制备生物组织样液 取样 注入试剂 加热和观察
选材： 苹果：洗净、去皮、切块，取5g放如研钵中
制备组织样液 研磨成浆：加石英砂，加5 ml水研磨
2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。
3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。
五、仪器、试剂
1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。
②斐林试剂要两液混合均匀且现配现用。
斐林试剂的配制过程示意：
斐林试剂甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）
斐林试剂乙液（0.05g/ml的CuSO4溶液）
③在鉴定尿液中是否含有葡萄糖时还能用其他那些鉴定方法？还可以用斑氏试剂产生砖红色沉淀；及糖尿试纸据糖的由少到多产生浅蓝、浅绿、棕或深棕色。
（二）、脂肪的鉴定
只能检验生物组织中可溶性的还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。
可溶性还原糖与斐林试剂（质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/ml的硫酸铜溶液配制而成）混合后,可以生成砖红色沉淀。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，
溶液的颜色变化过程为：浅蓝色-棕色-砖红色
二、脂肪的鉴定原理：
生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
一、可溶性还原糖的鉴定原理：
生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。
前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛基，因此叫还原性糖；蔗糖的分子内
没有游离的半缩醛基，因此叫非还原性糖，不具有还原性。实际上本实验中，用斐林试剂
2．可溶性还原糖鉴定实验的选材原则。选用可溶性还原糖含量较高的生物组织，而且组织的颜色较浅，或近于白色。常用的植物组织是：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。双子叶植物光合作用的主要产物为淀粉，其叶不理想。有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾等，其叶内含有大量的可溶性单糖，但由于叶片中叶绿素颜色较深，影响鉴定时实验现象的观察，也不宜作实验材料。
答案：(1)用韭菜叶片做还原糖实验不能成功，因为叶片内虽然含有大量可溶性还原糖，但
叶片中叶绿素含量较多，颜色较深，对鉴定时的颜色反应起着遮盖作用；
(2)若用蓖麻种子做脂肪鉴定实验，从理论上说可以成功，因为该种子含较多的脂肪，种子也比较大，便于进行徒手切片；
(3)由于卵白中含有大量的蛋白质，从理论上讲做蛋白质鉴定实验是会成功的。
中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+ 作用，形成紫色或紫色的络合物，这个反应叫双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应，从而用来鉴定蛋白质的存在
四、实验材料
1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
8.填表比较实验1和3
比较项目
试剂及成分
原理
溶液浓度
方法
加热与否
结果
可溶还原糖的鉴定
斐林试剂NaOH和CuSO4
新配制的Cu(OH)2溶液
NaOH浓度为0.1g/mL，CuS04的浓度为0.05g／mL
先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，而后立即使用。
水浴加热
砖红色沉淀
蛋白质的鉴定
双缩脲试剂NaOH和CuSO4
在碱性环境下的Cu2+
NaOH的浓度为0.1g／mL，CuS04的浓度为O.01g／mL
先加入Na0H溶液，然后再加CuS04溶液。
(不能过量)
不需要
溶液呈紫色
9.本实验为验证性实验，也用注意对照。如在鉴定可溶性还原糖和蛋白质时，鉴定之前需留
一部分样液，以便与鉴定后样液颜色变化作对比。
例1用下列实验材料做特定实验，从理论上讲能否成功?说明依据的道理。
选材：卵清稀释液或黄豆（浸泡1-2d）豆浆滤液
结论：蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。
2、实验成功的要点：
①蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白稀释液)。
②双缩脲试剂的使用，一定要先加入A液(即0.1g/ml的NaOH溶液)，再加入双缩脲试剂B液(即0.01g/ml的CuSO4溶液)。
2、实验成功的要点：
①.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。
②该试验成功的关键是获得只含有单层细胞理想薄片。
③滴苏丹Ⅲ染液染液染色2-3min，时间不宜过长，以防细胞的其他部分被染色。
（三）、蛋白质的鉴定
蛋白质的鉴定步骤：
制备生物组织样液 注入组织样液 注入试剂A 注入试剂B 观察颜色变化
△实验成功的关键在于实验材料的选择
(1）可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，或近于白色的。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。
(2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功。
(3）蛋白质的鉴定实验，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋。
(1)用韭菜叶片做可溶性还原糖的鉴定实验；
(2)用蓖麻种子做脂肪鉴定实验；
(3)用卵白做蛋白质鉴定实验。
[解析]此题是要求根据课本实验原理进行拓展和应用，这也是近几年高考的一个趋势。韭菜在进行光合作用时并不能将光合作用的产物葡萄糖转变成淀粉，
因此叶内含有大量的可溶性还原糖，但是，由于叶片中叶绿素含量较多，绿色较深，对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用，导致实验现象不明显，因此不宜用这些单子叶植物作此实验材料；后两个实验材料从理论上说是可行的。
鉴定生物组织中是否含有脂肪时，可用苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ，苏丹Ⅲ染液遇脂肪的染色反
应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的染色反应为红色。
三、蛋白质的鉴定原理：
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g/ml的硫酸铜溶液。在碱性溶液NaOH
1、脂肪的鉴定步骤:
制备生物组织实验材料 染色 去浮色 制作临时装片→放在显微镜下观察（先低倍镜后高倍镜）
取材：花生种子（浸泡3-4h）,将子叶削成薄片
制片:取理想薄片
在薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液
去浮色
制成临时装片
观察：先在低倍镜下，找到材料的脂肪滴，然后，转为高倍镜观察。
结论：细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色。
3．可溶性还原糖鉴定实验的关键性的步骤在于斐林试剂现用现配及用量。很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g／mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g／mL的CuS04溶液)分别配制、储存；使用时，再临时配制，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完混合均匀后[得到淡蓝色的Cu(OH)2沉淀的悬浊液]立即使用。如果过早混合会产生Cu(OH)2沉淀，加入到组织样液中并加热时会产生黑色CuO沉淀。而临时混合所得斐林试剂立即用于实验，即可使新制的Cu(OH)2作氧化剂与可溶性还原糖发生氧化-还原反应，生成砖红色的Cu2O沉淀。溶液的变化过程：淡蓝色→棕色→砖红色沉淀。
6．蛋白质鉴定实验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材
料常用的是鸡蛋。其关键性步骤在于先加双缩脲试剂A (0.1g/mLNaOH溶液)再加双缩脲试剂B(0.01g/mLCuSO4溶液)。如果用鸡蛋白稀释液，则浓度不宜过大，以免实验后粘住试管壁，不易洗净。
7.脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，其关键性步骤在于子叶要削成理想薄片。为了作好徒手切片，种子浸泡的时间不宜过长。也可改成刮取种子子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，染色时间不宜过长。