积雪草苷对脂多糖诱导急性肺损伤的白细胞介素-10和血红素氧合酶-

积雪草苷对脂多糖诱导急性肺损伤的白细胞介素-10和血红素氧

合酶-

章卓姜鲜万敬员李华李亮张红

【摘要】目的观察积雪草苷对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）白细胞介素-10（IL-10）、血红素氧合酶（H-1）影响。方法40只Balb/小鼠随机分为空白组，模型组，积雪草苷5,15,45g·kg-15组，每组8只。脂多糖（2.5g·kg-1）气管滴注造急性肺损伤模型，24h后处死小鼠，免疫印迹法检测肺组织H-1蛋白表达，ELISA法检测血浆IL-10表达。结果积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性增加脂多糖所致急性肺损伤模型肺组织H-1蛋白和IL-10表达。结论积雪草苷对LPS诱导急性肺损伤保护效应可能与促进H-1表达和IL-10含量有关。

【关键词】积雪草苷脂多糖急性肺损伤抗炎因子

Abstrat：bjetiveTbservetheeffetfasiatiside(AS)nH-1andIL-

10fautelunginjury(ALI)induedbylipplysaharides(LPS).ethds40Balb/ieererandlyd ividedintntrl,del,del+asiatiside5,15,45g·kg-

1grups.delfALIasestablishedbyintratr ahealinstillatinfLPS20μl（2.5g·kg－1）.ieerekilled24hlater,andH-1prtEinflungasdetetedbyestern-blt.ThententfIL-10inplasaasdetetedbyenzye-

linkediunsrbentassay(ELISA).ResultsASuldinreasethententsfH-1flungandIL-

10inplasainadse-

dependentanner.nlusinAShasprtetiveeffetnALIinduedbyLPSandtheehansiayberelat edithinreasingtheutentsfH-1flungandIL-10inplasa.

Keyrds：Aisatiside;Lipplysaharide;Autelunginjury,Anti-inflaatryfatrs急性肺损伤(autelunginjury,ALI)是以肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞广泛损伤为病理特征的一种失控的炎症反应［1］，起病急而严重，国内发病率和病死率达20%~40%，尤其在IU病房中更是高达50％左右［2］。体内失控性释放的大量炎症介质与抗炎因子间的平衡决定了ALI的发展，血红素氧合酶-1(H-1)和白细胞介素-10(IL-10)作为炎

症过程中重要的两个抗炎介质，在ALI发病过程中扮演着重要角色。积雪草苷（Asiatiside，AS）为积雪草entellaasiatia(L.)Urb.提取物三萜皂苷的主要成分之一［3］，目前积雪草苷研究主要集中在对抑郁和伤口愈合的治疗上，研究显示积雪草苷对革兰阴性菌感染，在10g/kg即可抑制N等炎症因子表达［4］。但对于抗炎因子研究还未见相关报道。本课题组前期研究已经证实积雪草苷对脂多糖（LPS）诱导ALI 有保护作用，因此本研究通过复制LPS诱导的ALI小鼠模型，观察血清IL-10和肺组织匀浆H-1的表达，明确积雪草苷对LPS诱导的ALI保护效应是否与促进H-1和IL-10表达有关。

1器材

1.1药品与试剂积雪草苷，广西昌洲天然产物开发有限公司，批号，20061478,纯度95％。LPS（siga，L2880）。BA试剂盒，Piere公司。IL-10酶联免疫吸附法试剂盒，ayan化学公司。兔抗鼠β-atin和兔抗鼠H-1IgG单克隆抗体以及辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG抗体，Aba公司。

1.2动物Balb/小鼠，雌雄各半，18~22g，10周龄，由重庆医科大学动物中心提供,合格证号：SYXK(渝)2002007。

1.3仪器3K30型超低温离心机（siga,德国），PA300型垂直型电泳槽和湿式电转膜槽转膜仪（bi-rad,美国），550型酶标仪（bi-rad,美国）。

2方法

2.1分组与给药将40只Balb/小鼠随机分为空白组、模型组（LPS2.5g·kg-1）及积雪草苷孝中、大（5，15，45g·kg-1）剂量组，每组8只。积雪草苷溶解于0.5％羧基纤维素钠。药物组造模前连续灌胃3d，空白组和模型组给予等量蒸馏水。

2.2急性肺损伤模型的建立［5］3％水合氯醛(0.3g·kg-1，ip)麻醉小鼠，颈部正中切口5，分离气管，微量注射器由气管向肺方向滴注LPS溶液（2.5g·kg-1），1in内滴注完毕，消毒缝合切口，小鼠保温护理。

2.3免疫印迹法检测H-1蛋白表达ALI建模后24h处死动物，取肺组织放于EP管中，-80℃保存。准确称量肺组织100g，加入含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解液1l，冰

上匀浆，超声波断裂蛋白，转入1.5lEP管中，4℃，12000g×15in，吸取上清，BA法

测量蛋白浓度。配好4％浓缩胶和10％分离胶后加样，SDS-PAGE电泳，配转移液，将

滤纸、醋酸纤维膜浸泡其中，按滤纸、硝酸纤维膜、凝胶、滤纸的顺序叠放于电转膜

板上，排除气泡，100v转膜120in，转膜后将硝酸纤维膜放入封闭液中，摇床缓慢摇动，封闭1.5h，加入一抗，4℃孵育过夜，TBST洗膜3次，加入二抗，孵育，洗膜。

暗室中加入显色剂，压片显影，以β-atin为内参，用图像分析仪对免疫反应条带进

行扫描，蛋白条带吸光度值用Iagepr-plus软件测定。

2.4ELISA法检测IL-10表达ALI建模后24h处死动物，眼球取血，1500g×10in,

取血浆放于EP管中，-80℃保存。按照EIA试剂盒说明书测定血浆IL-10水平，酶标

仪上读取A450n。

2.5统计学处理实验数据以±s表示，数据分析采用单因素方差分析，组间均值比较采用SNK法。P0.05表示有统计学差异。统计学数据用SPSS12.0软件分析处理。

3结果

3.1积雪草苷对H-1蛋白表达的影响LPS致ALI小鼠模型肺组织H-1有表达，其

灰度值高于空白组。AS各组灰度值则明显高于模型组和空白组。同模型组比较，AS5，15,45g·kg-1组表达增加，灰度值比较有统计学意义（P0.05）。见图1，表1。

图1积雪草苷对LPS致ALI小鼠肺H-1表达的影响（略）

3.2积雪草苷对IL-10影响与空白组比较，模型组IL-10表达增加，但明显低于

AS各组。同模型组比较，AS5,15g·kg-1组IL-10表达增加，有统计学意义（P0.05）。AS45g·kg-1增加明显，有显著统计学意义（P0.01）。见表1。

表1积雪草苷对ALI小鼠血浆IL-10和肺组织H-1蛋白表达灰度值影响（略）

与模型组比较，*P＜0.05,**P＜0.01

4讨论LPS是引起ALI的常见因素。ALI发病急而严重，尽管临床上采取彻底引流局部感染灶、选用强力抗生素、进行机械通气以及呼吸末正压通气(PEEP)纠正低氧血

症等措施进行治疗，但目前对ALI尚无特殊的治疗手段改善其死亡率［2］。LPS感染

致ALI过程中，多形核中性粒细胞在肺微血管内的募集和激活起着关键作用，促发了