primerstar 说明书

PrimeSTAR ® HS

DNA Polymerase with GC Buffer

使 用 说 明 书

TaKaRa Code：DR044A

●包装量： 250 U

●制品说明

PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase with GC Buffer适用于高保真扩增具有复杂二级结构的DNA模板（GC rich、重复序列等）。PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase具有极强的3’→5’Exonuclease活性，显示出超群的校正功能，同时还具有优于Taq DNA Polymerase的高扩增效率。本制品对cDNA克隆等要求高保真的PCR反应能够发挥强大威力,并能对高GC含量模板进行高效扩增。使用本制品扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端，经磷酸化后可直接克隆于具有平滑末端的载体中。

● 制品内容

* Mg 2+

浓度为2 mM。

●保 存 -20℃。

●活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

●纯 度

1）10 U 的本酶和0.6 μg 的λDNA-Hin d III 在

74℃下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。

2）10 U 的本酶和0.6 μg 的Supercoiled

pBR322 DNA 在74℃下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。

●用 途

PCR 法高保真扩增DNA 片段。

●PCR 反应性能

1） 以λDNA 为模板，可以很好地扩增8、10、

12、15 kbp 的DNA 片段。

2） 以人基因组DNA 为模板，可以很好地扩增

APO E 基因520 bp（GC 含量74.8%）的DNA 片段。

●反应条件 1. 按下列组份配制PCR 反应液。

2×PrimeSTAR ® GC Buffer

dNTP Mixture（2.5 mM each）

Primer 1 Primer 2

Template*

PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase（2.5 U/μl） dH 2O

*【50 μl PCR 反应体系中模板DNA 推荐使用量】

人基因组DNA 大肠杆菌基因组DNA λDNA 质粒DNA cDNA Library

25 μl

4 μl 0.2-0.3 μM （final conc.） 0.2-0.3 μM（final conc.）<200 ng

0.5 μl

PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase（2.5 U / μl） 2×PrimeSTAR ® GC Buffer (Mg 2+plus)* dNTP Mixture（2.5 mM each） 100 μl 1.7 ml×3 800 μl 2. PCR 反应条件*。 98℃ 10 sec

68℃ 1 min/kbp or

98℃ 10 sec

60℃ 5 sec 30 Cycles 72℃ 1 min/kbp

* ① 通常进行2 Step PCR 反应，当2 Step PCR

反应得不到良好反应结果时，可以试用 3 Step PCR 反应进行实验。 ② 本酶具有高退火效率，在进行3 Step 的PCR 条件设定时，可以缩短退火时间。

up to 50 μl 5 ng～200 ng(<200 ng)

100 pg～100 ng 10 pg～10 ng 10 pg～1 ng 1～200 ng 30 Cycles

●实验例

使用Taq DNA Polymeras 、PrimeSTAR®HS DNA Polymeras、PrimeSTAR®HS DNA Polymerase with GC Buffer，按照各自的反应条件，分别扩增了人APO E基因（520 bp，GC 含量74.8%）和Tth HB8基因（3，005 bp，GC含量73.2%），进行了各种DNA聚合酶的反应性能比较，结果如下：

【APO E 520 bp DNA 片段的扩增结果】

【Tth HB8 3,005 bp DNA 片段的扩增结果】 【结论】

以上两基因的扩增结果显示，对于GC含量高的模板，PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer的扩增效果优于其它DNA 聚合酶。

●注意事项

PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR 过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M 1 2 3 M 3Step

520 bp

M

3Step2Step2Step

Taq DNA pol. PrimeSTAR® HS PrimeSTAR®HS

with GC Buffer

M: 100 bp DNA Ladder

1: 1 ng Human Genomic DNA的PCR扩增产物

2: 10 ng Human Genomic DNA的PCR扩增产物

3: 100 ng Human Genomic DNA的PCR扩增产物

Taq DNA PrimeSTAR® HS PrimeSTAR®HS

pol.with GC Buffer

M: λ-Hin d III digest

1: 100 pg Tth HB8 Genomic DNA的PCR扩增产物

2: 1 ng Tth HB8 Genomic DNA的PCR扩增产物

3: 10 ng Tth HB8 Genomic DNA的PCR扩增产物

3S t e p3S t e p2Step2Step3Step

3,005 bp

V2010.02