实验二 线粒体和液泡系的超活体染色解读

二、实验原理
但不是任何染料都可作为活体染色剂使用，一般应选 择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质)并配成较 稀的溶液来使用。 詹纳斯绿Ｂ和中性红两种碱性染料是活体染色中重要的 染料，对线粒体和液泡系的染色各有专一性。詹纳斯绿B 可专一性地对线粒体进行活体染色，这是由于线粒体内的 细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即 有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些 染料被还原为无色的色基。
条状，在细胞核周围分布特别多。
四、实验方法
（一）线粒体的超活染色与观察
2 ．洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察。 用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B溶液1滴滴在干净的载玻 片上，然后，撕取一小片洋葱鳞茎内表皮平铺在染液中， 染色10－15min，吸去染液，加Ringer溶液1滴，盖上盖 玻片，显微镜下观察。颗粒状的线粒体被染成蓝绿色。
实验二 线粒体和液泡系的超活体 染色与观察
一、实验目的
1 ．观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、 发育和分布；
2 ．了解细胞和细胞器的超活体染色的原理和相关
技术 。
线粒体和液泡系
线粒体是细胞内一种重要细胞器，主要功能是进行氧
化磷酸化，合成ATP，为细胞生命活动提供直接能量，是
细胞进行呼吸作用的场所。此外与细胞中氧自由基的生成、 细胞凋亡、细胞信号转导、细胞内多种离子的跨膜转运及
四、实验方法
（二） 绿豆幼根根尖液泡系的中性红染色观察
用刀片把初生的绿豆幼苗根尖（1 －2cm）小心切一纵 切面，放入载玻片上的 1/3000 中性红溶液中，染色 5 － 10min，吸去染液，加Ringer溶液1滴，盖上盖玻片压扁 根尖，显微镜下观察。在高倍镜下，先观察根尖部分的生 长点的细胞，可见细胞质中散着很大大小不等的染成玫瑰 红色的圆形小泡，这是初生的小液泡，然后，由生长点向 延长区观察，在一些已分化的细胞内，液泡的染色较浅， 体积增大，数目变少，在成熟区一般只有一个淡红色的大 液泡，占住细胞的绝大部分，将细胞核挤到壁处。
四、实验方法
（3）分离细胞 染色后，用两根解剖针同时左右手操作，将 两根针压住组织块，然后用右手稍稍用力拉开组织块，这 样就会有一些细胞或细胞群和组织块分离开。
（4）制片观察 用吸管吸分离的细胞，滴一滴在洁净的载玻
片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察。在高倍镜或油镜下
观察，可见肝细胞中的线粒体染成蓝绿色，呈颗粒状或线
液泡系是细胞内一种重要的细胞器，它普遍存在于植物 细胞，通常为圆形泡状，数目多少不定，液泡是细胞内浓 缩产品的重要场所，有十分重要的生理功能：1、强维持
细胞的紧张度是它所起的明显作用，2、贮藏各种物质，3、
含有水解酶，它可以吞噬消化细胞内破坏的成分，4、液 泡在植物细胞的自溶中也起到一定作用。动物细胞内的液
五、作业
1 ．绘出家兔肝细胞和洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的形态与分 布并简要分析。 2 ．绘出绿豆幼根根尖组织液泡系的形态与分布并简要分析 。
下次实验：细胞主要化学成分的检测
泡因为很小，如不经活体染色，很难显示出来。
二、实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又 无毒害的一种染色方法。其目的是显示生活细胞内的某些 结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致 引起细胞死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细 胞形态结构和生理、病理状态。
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二、实验原理
电解质稳态平衡的调控有关。线粒体的形态、大小、数量、
分布在不同细胞中和细胞的不同生理状况下变化很大，具 有多形性、易变性、运动性和适应性等特点。
（1）形态：线状和颗粒状最常见，也可呈哑铃状、环状与
枝状；
（2）大小：一般直径为0.5-1.0μ m，长1.5-3.0μ m，线粒体 的形状、大小随着细胞代谢条件的不同而改变； （3）数量：一般动物细胞中线粒体有几百到几千个不等， 植物细胞的线粒体数量少于动物细胞的线粒体，而许多哺 乳动物成熟的红细胞缺少线粒体，新陈代谢旺盛的细胞中 线粒体多； （4）分布：分布不均匀，要满足细胞的能量供应需要，代 谢旺盛的部位线粒体比较集中。
三、实验用品
1 ．器材： 显微镜、剪刀、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸管、解剖 针、吸水纸
2 ．试剂：
Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红
3 ．材料：家兔肝脏、洋葱、绿豆幼根根尖
四、实验方法
（一）线粒体的超活染色与观察
1. 家兔肝细胞线粒体的超活体染色与观察 （1）取样 用割断颈动脉的方法处死家兔，置于解剖盘中， 迅速打开腹部，取出边缘较薄的肝组织，放入盛有Ringer 溶液的培养皿中，洗去肝组织中的血液，一般要洗3-4次 才能将绝大部分血液洗去。 （2）染色 另取一个干净的培养皿，将洗净的肝组织移入， 向肝组织上滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，但不可将组织块 完全浸没，要让组织上面部分半裸露在空气中，这样肝细 胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。一般需要 染色30 min当组织块边缘被染成蓝绿色即可。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，活体染色 可分为体内活体染色与体外活体染色两类。体内活体染色 是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定 于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的。体外活 体染色又称超活体染色，是由活的动植物分离出部分细胞 或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其”电化学”特性 与被染部分相互吸引被选择固定在活细胞的某种结构中而 显色。
二、实验原理
中性红染色液泡的原理：在中性或微碱性环境中，植物 的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在 一般情况下呈酸性反应，因此进入液泡的中性红便解离出 大量阳离子呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞 壁一般不着色，死细胞由于原生质变形凝固，胞液不能维 持在液泡内，因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现 象。中性红对液泡系的染色具有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核和细胞质不着色，这可能与液泡 中的某些蛋白质有关。