细胞培养基手册

绪论
现代生物制药技术快速发展，采用动物细胞大规模培养生产抗体药物、基因工程药物、人用以及兽用疫苗等生物制品日益增长。

这些生物制品生产的核心技术之一——动物细胞大规模培养技术也在快速发展，集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应容器三个方面。

其中细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞质量直接影响表达量，故筛选、驯化优质细胞是关键。

只有好的细胞培养基才可能筛选、驯化出优质的细胞。

细胞生物反应容器也在不断发展，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合高密度培养、微载体培养、悬浮培养技术，均需要相适应的细胞培养基以充分发挥作用。

清大天一公司秉承清华大学校训和学风，以技术领先的细胞培养基产品研发、生产为基础，不断开发和引进国内外动物细胞大规模培养技术，并结合国内生物制品企业现状，努力搭建细胞培养技术平台，不断研发出特定疫苗生产专用培养基、疫苗生产高密度转瓶细胞培养技术、疫苗生产悬浮细胞培养技术、抗体药物生产悬浮细胞培养技术等生物制品生产关键技术，为生物制品企业服务。

培养基作为生物制品生产的主要原料之一，应该实施药品生产管理，遵循药品生产质量管理规范。

培养基专业生产企业——北京清大天一生物技术有限公司就是按照药品要求研发、生产和销售培养基产品的。

清大天一实施GMP管理，所有产品均按照相应质量标准生产和检验合格方可交付用户。

源于不断技术研发和吸收引进国际最新科技，清大天一独创了分子级混合技术和干燥技术，从根本上解决了产品均一性和溶解性的难题；同时清大天一的产品领先策略使得公司不断推出包括无血清培养基、低血清培养基在内的培养基新产品。

清大天一实行无缝隙服务，服务贯穿产品售前咨询、试用、商务、技术培训和交流、访问、质量投诉处理等全过程服务，将产品功能最大化延伸。

同时清大天一还提供培养基相关的个性化服务、增值服务。

技术无止境，服务无止境，我们每天都在努力做得更好一些。

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目录
一、培养基的历史 (2)
二、细胞培养目的与用途 (1)
三、细胞培养基的定义 (1)
四、动物细胞培养技术平台 (1)
五、细胞生存条件 (2)
六、细胞培养基的基本要求 (2)
七、细胞培养基组成及作用 (2)
八、细胞培养基发展趋势 (3)
九、培养基的品质 (3)
十、培养基的核心技术 (4)
十一、培养基生产的管理 (4)
十二、培养基的生产 (4)
十三、常见问题解答 (5)
十四、清大天一培养基 (8)
十五、清大天一的产品包装和随包装文件 (11)
十六、清大天一的服务 (11)
十七、清大天一培养基的应用领域 (12)
十八、清大天一的荣誉 (12)
附录一清大天一平衡盐产品目录、主要组分和使用说明 (12)
附录二清大天一细胞培养基产品目录、主要组分和使用说明 (14)
附录三清大天一细菌培养基产品目录、主要组分和使用说明 (29)
附录四参考文献 (30)
一、培养基的历史
体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。

顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。

广义组织培养与体外培养同义。

体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。

直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。

现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。

细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。

培养过程中细胞不再形成组织。

发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计不同的培养液等几个方面进行。

1885年Roux温生理盐水培育鸡胚组织；
1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养；
1907年Harrison培养蛙胚神经成功，开始创建盖片凹玻璃悬滴培养法；
1910、1912年Carrel采用无菌操作、更新培养基、传代，完善了悬滴培养法；
1924年Maximow采用双盖片悬滴培养法；
1923年Carral设计创立了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞，极大地推动了当时组织培养研究。

Earle等加以改进，使大量细胞能直接生长于玻璃瓶壁上，培养了正常细胞与肿瘤细胞的细胞株。

至此大多数研究人员都采用培养瓶培养细胞。

组织培养从二十世纪40年代起迅速发展,在培养容器、培养基和培养技术等方面出现了很多革新。

在培养容器方面, 由简单的用试管、旋转管培养，发展到多种培养瓶培养，近年来，塑料瓶、皿、多孔培养板的使用已日趋普遍。

在培养基方面，从50年代初，Parke、Eagle等设计出合成培养基后，从纯天然培养基到合成培养基、从鸡胚浸出液发展到动物血清（促细胞生长物），直至60年代设计出无血清培养基。

首先反映在设计不同种类的缓冲盐溶液，以用来培养不同的细胞和洗涤细胞。

Earle在1948年设计了含有碳酸氢钠等盐类的Earle氏盐溶液，Hank’s在1949年设计了Hank’s氏盐溶液。

在培养技术方法方面，革新进展更为迅猛，Earle、Dulbecco等于1943年创建单层细胞培养法，首建长期传代的L-细胞系。

1948年Sanford创建单细胞分离培养法，获L-细胞纯系。

1951年Gey首建人肿瘤细胞——Hela细胞系。

1961年Hayflick首建人二倍体细胞系25种，开辟了应用新方向。

从50年代末开始，组织培养技术应用进入了一个繁盛的阶段，广泛应用于生物学和医学研究各个领域。

诱变建立遗传缺陷细胞株、杂交瘤技术制备单抗、发展细胞大量培养技术、利用重组技术构建工程细胞株，已成为生物工程的重要生产手段。

在连续灌注培养工艺方面，美国Ohashi,Ryo等人2001年报道采用2L一次性生物反应器灌注培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体，以Becton Dickenson Cell Mab+10%胎牛血清+1％聚醚F-68为培养基，最高活细胞密度超过1×107cells/ml；2001年瑞士Heine, Holger等人用带超声细胞分离器(UCS)的连续灌注搅拌罐生物反应器培养鼠杂交瘤细胞生产单克隆抗体，稳态培养时活细胞密度超过2×107cells/ml；2004年德国Thomas等人在1L搅拌罐生物反应器中培养rCHO细胞生产人MUC-1糖蛋白，采取葡萄糖浓度限制的高产率灌注工艺减少有害代谢物，代谢转向TCA循环增加，活细胞密度保持在(1～2)×107cells/ml。

在流加悬浮培养工艺方面，美国麻省理工Xie Liangzhi等人2000年报道在2L生物反应器中流加培
养杂交瘤细胞，通过营养控制降低氨和乳酸的比生成速率，补充培养基包括营养成分、胎牛血清和痕量金属，最大活细胞密度达到1.7×107cells/mL。

二、细胞培养目的与用途
1．科学研究
（1）药物研究开发，如新药筛选，疫苗、基因工程药物、细胞工程药物
研究与开发、单克隆抗体制备等。

（2）基础研究，如药物作用机理、基因功能、疾病发生机理等研究。

2．生物制药
（1）疫苗生产：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)，多肽疫
苗（肿瘤疫苗)等。

（2）基因工程药物生产：如EPO等。

（3）抗体药物、基因治疗药物生产。

（4）细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等。

（5）利用细胞法体外测定生物活性物质的活性；并预测其在体内的药效和替代体内法检测其成品的生物活性。

三、细胞培养基的定义
人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质,它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。

包括：
1．天然培养基
指来自动物体液或利用组织分离提取的一些培养基，如动物血浆、胚胎浸出液、血清和人血清，水解乳蛋白等。

2．合成培养基
人工设计、配制的培养基，如MEM、199、DMEM、RPMI1640等。

四、动物细胞培养技术平台
动物细胞大规模培养已成为生物制药领域最重要的关键技术之一，并以其研究的深入和进展推动生物技术产业的迅速发展。

专家预言：蛋白治疗药物如糖蛋白、抗体和多肽药物仅仅只是刚刚开始进入市场，预计在下一个10年或20年会有更为快速的发展。

届时，蛋白治疗药物的迅速增长和市场需求将远远超过全世界的生产能力。

动物细胞规模化生产重组蛋白和抗体的工艺选择可考虑使用当前较成熟的工业化支持技术平台，以缩短产品工艺研发的时间，加快工业化进程。

当前已获FDA批准的生物技术产品以及公开发表的生产工艺中，占有主流优势的是搅拌式生物反应器悬浮培养，工艺设计是流加或灌注培养。

其大规模细胞培养生产所面临的挑战是获得最大生产力的同时注重维持产品的质量；去除所有培养环境中外源因子的污染；更为精确有效的工艺控制手段；规模化培养中氧气的限定与溶解CO2浓度累积的控制等。

1996年1月至2002年12月美国获得成功批准的不同的治疗剂和诊断剂产品共31种，其中用哺乳动物细胞培养生产的就有21种。

动物细胞培养技术已经成为一个受到普遍信任的产业化生产技术，并逐步形成商业化操作水平。

动物细胞大规模培养技术集中在细胞系、细胞培养基和细胞生物反应容器三个方面，构成生物制品生产的必要条件。

其中细胞是病毒、蛋白的表达载体，细胞质量直接影响蛋白的表达量或病毒的滴度，故筛选、驯化优质细胞是关键。

而只有好的细胞培养基才可能筛选、驯化出优质的细胞。

细胞生物反应容器也在不断发展，以转瓶、反应器为主要细胞生产设备，配合高密度培养、微载体培养、悬浮培养技术，均需要相适应的细胞培养基以充分发挥作用,获得高表达、高产量，降低生产成本。

清大天一公司致力于动物细胞培养技术的开发和服务，跟随生物技术的发展，针对各种生物制品特点不断开发针对性培养基新产品，建立多种细胞体系的疫苗、抗体药物生产细胞培养技术平台，以提高相应细胞培养水平和生物制品表达水平，促进生物制药发展。

细胞培养技术对生物制品成本的影响
1．表达量提高
通过细胞培养技术的不断改进可以充分利用现有设备，大幅度提高生物制品表达量，降低生物制品的单位制造成本；同时，由于产量提高并不新增固定资产投资，也带来生物制品的单位固定成
本的降低。

因此提高表达量可以有效降低生物制品的单位成本，既降低变动成本，也降低固定成本，使得制品利润率提高，市场竞争能力增强。

2．培养液成本降低
在很多使用牛血清的细胞培养液中，为牛血清支付的成本远远高于培养液中的细胞培养基等其它成分，因此通过采用低血清细胞培养基，降低牛血清用量，可以降低细胞培养液总成本。

3．纯化成本低，制品安全性提高
牛血清的使用量不仅增加了细胞培养液的成本，更严重的是带来动物来源成分、杂蛋白，以及不安全因素，这些成分越多，纯化的成本越高、生物制品原液损失越大，生物制品的成本越大。

因此采用低血清、无血清培养细胞可以有效降低纯化成本何损失，提高生物制品成品率和利润率。

4．综合成本降低
综上所述，动物细胞培养技术是生物制品产业化的核心技术之一，在生产中，应该系统、全面的研究细胞培养技术对生物制品成本的综合影响，不断追求最佳的细胞培养技术，提高生产效率，有效降低生物制品成本，提高利润率，增强产品市场竞争力。

五、细胞生存条件
1．基本营养物质
（1）糖
六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。

（2）氨基酸
维持生存需12种氨基酸（精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬）。

谷氨酰胺需量最大,缺乏时细胞生长不良。

单细胞培养或细胞量少时,所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。

（3）维生素
细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。

2．促生长因子、激素类物质
3．其它物质: 基本元素、微量元素、促细胞贴附物质(纤粘连蛋白、层粘连蛋白laminin、IV型胶原、氨基多糖类)
4．水: 主要成分和生存环境,要求高纯度水。

5．温度: 哺乳动物及人源细胞最适培养温度为35℃—37℃,对低温耐受力比高温强。

39℃以上受损→死亡；不低于0℃时（0℃-34℃），细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。

6．气体环境和pH
需O2、CO2，通氧量过大对细胞有毒害。

CO2主要与维持pH有关，细胞培养最佳pH为7.2—7.4，通过缓冲系统和调节CO2含量，维持正常pH。

开放培养要求5%CO2环境、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)10—50mmol/ml可防止pH变化。

含Earle’s缓冲系统的培养基适合于5％CO2的培养条件，Hanks’缓冲系统的培养基仅含有
0.35g/L NaHCO3，不能用于5％CO2的环境，若放入CO2培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。

7．湿度和光
开放培养相对湿度控制在95%。

细胞培养需避光，紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。

8．影响细胞生长的其它因素: 接触橡胶用品、收集细胞时离心速度过大、细胞接种浓度过低等。

六、细胞培养基的基本要求
1．营养成分
氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。

2．促生长因子及激素
3．渗透压
4．pH
5．无毒、无污染
七、细胞培养基组成及作用
1．氨基酸
组成蛋白质的基本单位。

不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。

其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。

必需氨基酸包括L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸等。

2．维生素
维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。

在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。

●脂溶性维生素如：A、D、E、K。

●水溶性维生素如：B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸、生物素、C、烟酰胺等。

许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分，没有它们，酶便没有活性，代谢活动将无法进行。

V A是细胞合成糖蛋白时寡糖基的载体，对上皮细胞有重要的维护作用。

VD参与调节钙的吸收。

VE是抗氧剂，可防止组成生物膜的磷脂中不饱和脂肪酸被氧化。

VK缺乏会引起低凝血酶原及凝血时间延长。

叶酸是合成四氢叶酸的重要原料，四氢叶酸在核酸的生物合成和蛋白质的生物合成过程中起重要作用。

生物素是一些特异羧化酶的组成部分，参与糖代谢和脂肪酸的合成过程。

3．碳水化合物
碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。

主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。

4．无机离子
钠、钾、镁、钙、磷等基本的无机离子，这些都是细胞组成所必须并参与细胞的代谢。

培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。

此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。

培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg −320 mOsm/kg。

标准培养液的渗透压在此范围内波动。

特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。

Na+是细胞外液中最主要的阳离子，对维持渗透压的恒定有决定性的作用。

K +主要分布在细胞内液，细胞内K +的对于激活某些酶是必需的，它在调节细胞内环境的酸碱平衡也有极重要意义。

Ca2+在细胞外液中的作用是将组织内部细胞之间相互粘着，在细胞内参与许多重要的细胞生理活动，如传导、参与肌肉细胞收缩等。

Mg2+是构成细胞间质的重要成分，对于细胞间相互稳定结合有很重要的意义。

磷的化合物对细胞物质代谢和生理功能调控的功用是十分广泛而不可缺少。

八、细胞培养基发展趋势
1．无血清培养基
是设计用来在无血清条件下促使特殊类型的细胞生长或进行专门应用的培养基。

需要添加生长因子和/或细胞因子，含有个别蛋白或大量蛋白组分。

其主要优点：
●增加确定性；
●性能更一致；
●容易进行纯化和下游加工；
●提高制品安全性和/或产量。

2．无蛋白培养基
培养基中没有添加蛋白，但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分（如低分子量肽的各种水解物）。

3．化学限定培养基
培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分，所有的成分均有已知的化学结构。

九、培养基的品质
1．外观
颜色、粉末细度须均匀。

2．溶解性
培养基完全溶解，可以避免培养基内营养成分的流失。

3．pH值
哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，同时pH值的测定也可以检查培养基的批间差异。

4．水分
培养基的营养成份很丰富，利于微生物的滋长，因此水分的含量控制可以延长有效期。

5．冰点渗透压
细胞必须生活在合适的渗透压环境中；同时渗透压值的测定也可以检查培养基的批间差异。

6．菌落总数
粉末培养基不是无菌制剂，培养基本身的营养成分很丰富，容易滋生微生物，因此菌落的控制可以延长有效期
7．细胞生长试验
可检查细胞培养基是否有促生长的能力，以及是否有不利细胞生长的毒素。

8．细菌内毒素
为满足生物制品细菌内毒素的控制要求，作为生物制品生产原料的培养基同样需要细菌内毒素控制。

9．稳定性
确定产品的储存、运输条件，产品的保质期限。

10．一致性
验证产品的均一性。

十、培养基的核心技术
1．配方
基础细胞培养基的基本配方是公开的，但随着生物制药的发展，更多的性能优越的新型和专用培养基不断出现，例如无血清细胞培养基、低血清培养基、专用细菌培养基等等，清大天一不断追随生物技术发展，研发、吸收引进国际最新技术，不断推出新产品。

2．生产工艺
培养基生产的核心技术是解决培养基的均一性和溶解性问题，根据原料的配比量和理化性质，研发出独特的混合工艺、干燥工艺，保证产品的溶解性、均一性。

认为培养基粉末颗粒无限小溶解性就好是片面的。

3．技术源泉
技术领先才能产品领先。

清大天一不断充实自身研发实力，同时引进消化国际、国内先进技术，并与客户合作，使得公司保持技术领先。

十一、培养基生产的管理
1．制药专业管理团队
团队是清大天一的核心，优秀的团队造就一流的产品和服务。

清大天一之所以制造出国际品质的培养基产品，得益于其制药行业背景的团队，以及他们将培养基视为药品的追求。

2．按照药品实施GMP管理
尽管国家对培养基还暂时没有标准，但清大天一对这一生物制品的主要原料1均按照药品生产的要求进行生产管理，主要体现在：
（1）参照药典要求制定产品企业标准。

( 2 ) 实施GMP管理。

十二、培养基的生产
清大天一的培养基是按照GMP管理生产的。

1．原料
严格供应商及其产品的质量审计，采用GMP企业生产的注射级原料药作为培养基原料，经检验和验收方可使用。

2．生产环境
10000级净化车间，控制相对湿度和温度。

3．生产用水
专用设备自制除热原纯化水。

1参见《中华人民共和国药典》（2005）第三部
4．设备和生产能力
采用经过验证的制药设备；每年40吨粉末培养基的生产能力。

5．混合干燥工艺
独创的分子级混合技术和干燥技术，从根本上解决了产品均一性和溶解性的难题。

6．产品检验
清大天一建有质量检验实验室、细胞培养实验室；CHO 、VERO 、BHK21等细胞系组成的细胞库；CO 2培养箱、分光光度计、pH 计、渗透压仪、摇床、转瓶机等检验和实验设备。

所有产品在生产记录无误情况下，经质量管理部门检验合格后方可放行进入成品合格库。

7．冷藏条件
清大天一建有285立方米冷库，用于成品和中间体，以及需要冷藏原料的储存。

十三、常见问题解答
1．如何选用培养基？
选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考：
（1） 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。

可以查阅文献，或
在购买细胞株时咨询。

（2） 本单位惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。

（3） 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。

如小鼠细胞株多选1640；进行细胞杂
交、基因转移实验，可选择IMDM 。

（4） 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标
判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

2．选择便宜的培养基品种成本就低吗？
（1） 通常，培养基可以适合多种细胞，细胞也可以在不同培养液中生长；例如在MEM 中培
养的细胞，很可能在DMEM 或M199中同样很容易生长。

（2） 培养基养份不同会导致细胞生长效果不同，病毒或蛋白表达不同，应该选择效果最好的
培养基，考虑生物制品的综合成本；
（3） 最终目的是追求生物制品的得率——得率高则成本低。

3．L －谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L －谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，脱掉氨基后， L －谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和核酸代谢。

但L －谷氨酰胺在溶液中不稳定，在高温下会分解成吡咯烷酮和羧酸，也有一些毒降解产物如NH 4+会不可逆转地损坏细胞壁。

L-谷氨酰胺在不同温度、不同pH 值条件下的稳定性研究如下。

图1 7.6PH不同温度2mM谷氨酰胺的稳定性
20
4060801001200246810121416182022日期（天）
谷氨酰胺保持量（％）
图2 室温下不同PH时10mM谷氨酰胺的稳定性0
20
40
60
80
100
120
02468101214161820
22日期（天）谷氨酰胺保持量（％）
4．为什么培养基中可以省去酚红？
酚红在培养基中被用来作为pH 值的指示剂，研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特
别是雌激素），为避免固醇类反应，用无酚红培养基。

5．在新鲜培养基中添加了血清和抗生素后，有效期是多长？
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。

因为一些抗生素
和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

6．为什么不要用碳酸氢钠调pH 值？
如图所示，培养基pH 值随着碳酸氢钠量的增加，呈抛物线增长，当碳酸氢钠加到一定量时，
pH 变化越来越小。

而培养基的渗透压值随着碳酸氢钠量的增加，呈直线增长，碳酸氢钠量越大，渗透压值越大。

如果为了达到工作pH 值仅加入少量的碳酸氢钠，而忽略渗透压，一来可能会达不到缓冲效果
而引起细胞培养过程中pH 值变化较剧烈，二来会使培养基成为低渗溶液，在培养细胞时易造成细胞膨胀破裂；如果为了达到工作pH 值而加入大量碳酸氢钠，一来可能会难以达到期望的pH 值，二来会使培养基成为高渗溶液，在培养细胞时易造成细胞萎缩。

生产中最好通过实验找到合适渗透压和pH 值情况下的碳酸氢钠加入量。

下面是DMEM(HED)
和MEM 培养基的碳酸氢钠与pH 值、渗透压的曲线。

（1） DMEM(HED)培养基
（2） MEM 培养基。