高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究

摘要 :建立猪肉中盐酸克伦特罗的高效液相色谱检测方法 , 得到最佳色谱条件 :流动相为甲醇 ∶水 = 26 ∶74,色谱柱采用 ODS2C18柱 ,检测波长为 244 nm。该方法检测线性良好 ,操 作简单 、快速 ,峰形理想 ,重现性好 ,结果准确可靠 。 关键词 :猪肉 ;盐酸克伦特罗 ;高效液相色谱法
第 23卷第 5期 2 0 0 7年 1 0月
Vol. 23, No. 5 Oct. 2 0 0 7
高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究
Study on the detection of Clenbuterol Hydrochloride in pork by high2performance liquid chromatography
2 结果与讨论
2. 1 提取条件的确定 盐酸克伦特罗在酸性溶液中易溶于水和乙醇 ,不溶于乙
醚 、甲苯 、二氯甲烷等 ,而在碱性溶液中可溶于乙醚 、苯等有 机溶剂 。本试验用 GB / T5009. 192———2003高氯酸法提取动 物样品中盐酸克伦特罗 ,然后用 1 mol/L 氢氧化钠碱化 ,调 pH至 11,再用乙醚作萃取溶剂 。 2. 2 检测波长的选择
丁芳林
张朝辉
谭胜国 廖三赛
D IN G Fang2lin ZHAN G Z hao2hu i TAN S heng2guo L IAO S 长沙 410127)
( Hunan B iolog ica l and E lectrom echan ica l Polytechn ic, Changsha, Hunan 410127, Ch ina)
in mane and tail hair of horses [ J ]. Equine Vet. J. , 2004, 36 ( 2 ) : 118 ～122. 6 王选年 ,康晓迪 ,潘耀谦. 盐酸克伦特罗的残留及检测 [ J ]. 动物医 学进展 , 2002, 22 ( 3) : 41～46. 7 肖红玉 ,刘国艳 ,史贤明. 盐酸克伦特罗的检测方法 [ J ]. 中国饲 料 , 2005 ( 12) : 31～33. 8 林奕芝 ,刘奋 ,戴京晶. 高效液相色谱法测定肉与肉制品中盐酸克 伦特罗残留量 [ J ]. 中国卫生检验杂志 , 2002, 12 (2) : 180～181. 9 陈尚卫. 高效液相色谱法同时测定蛹虫草中四种核苷类活性成分 [ J ]. 食品与机械 , 2006 (6) : 107～109.
24. 98 mg置于 25 mL容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 , 配成含盐酸克伦特罗 1 mg/mL 的标准贮备液 ,贮于冰箱中 , 不同浓度的系列标准溶液由标准储备液稀释而得 ;
D ionex AT330 (美国 )高效液相色谱仪 :由 P680 四元泵 、 UVD170U 紫外检测器和 AT330恒温箱组成 ;
牧与饲料科学 , 2006 (2) : 33～35. 4 王德强 ,新德 ,安宁. 猪禽盐酸克伦特罗残留分析与对策 [ J ]. 新疆
畜牧业 , 2006 ( 1) : 14～15. 5 Schlupp A , Anielski P, Thieme D , et al. The beta—agonist elenbuterol
归方程 :
Y = 0. 414 1X + 0. 236 7 相关系数 r = 0. 999 8 以信噪比 S / N = 3 (本仪器最低噪音为 5 μAU )时的 相应浓度来确定方法的最低检测限 ,测得最低检出浓度为 0. 5μg /mL。 以加标样品浓度为 2 μg /mL 和 5 μg/mL 的 2个样品考 察方法的回收率和相对标准偏差 ( RSD ) ,其结果见表 1。由 表可知 ,色谱峰面积在所测的浓度范围内与浓度具有良好的 线性关系 。
表 1 盐酸克伦特罗加标样品的回收率和 相对标准偏差 (RSD ) ( n = 10)
浓度 / (μg·mL - 1 )
相对标准偏差 / %
回收率 / %
2
4. 0
96. 3
5
3. 3
97. 2
3 结论
本测定选用甲醇 ∶水 = 26 ∶74作流动相 ,峰形很好 ,峰 形理想 ,无拖尾现象 , 5 m in出峰 ,时间合适 ,分离效果满意 。 样品处理上 ,用乙醚作萃取溶剂 ,简化了操作 ,取到很好的富 集效果 ;同时采用甲醇溶解标准品 ,图谱出现非常大的试剂 峰 ,掩盖主峰 ,分离效果不理想 ,无法进行分析 ,采用纯水溶 解对照品 ,消除溶剂峰 ,峰形尖锐 ,效果较好 。与其他方法相 比 ,本文介绍的方法具有定性定量准确等优点 ,能满足质量 控制的要求 ,可用于畜肉中盐酸克伦特罗的含量测定 。
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随着生产水平的提高 ,肉类食品的安全越来越受到人们 的关注 [1 ] ,肉 类 食 品 中 药 品 残 留 的 检 测 方 法 也 在 不 断 完 善 [2 ] 。盐酸克伦特罗 ,化学名为“22[ (叔丁氨基 )甲基 ] 242氨 基 23, 52二氯苯甲醇盐酸盐 ”(结构式见图 1 ) ,是一种天然儿 茶酚胺衍生合成的化合物 ,又称盐酸双氯醇氨 、氨哮素 、克喘 素 [1 ] 。它最早作为止喘药用于防治哮喘和支气管痉挛 。因 其对动物具有明显促进生长 ,增加瘦肉率 、减少脂肪含量 ,改 善生产性能等作用 ,曾被加在饲料中 ,用于牲猪饲养 ,又称为 瘦肉精 [3 ] 。含有“瘦肉精 ”的猪肉如果被人食用后 ,会产生 心悸 ,面颈 、四肢肌肉颤动 ,心律失常等副作用 ,严重影响人 类的健康 ,我国已禁止使用 [4 ] 。而为了追求更大的商业利 润 ,我国部分地区的饲料加工企业和养猪专业户将它作为 “秘密武器 ”———将违禁药盐酸克伦特罗加入他们的产品中 , 严重危及到了人的健康 。目前 ,因食用含残留盐酸克伦特罗
超声波提取器 ( SB 25200BTD ) ;
安全与检测
2007年第 5期
离心机 (6 000 r/m in) ; DSY22型电热恒温水浴锅 。 1. 2 色谱条件 色谱 柱 采 用 D iamonsil ODS2C18 柱 ( 5 μm , 150 mm × 4. 6 mm I. D ) ;检 测 波 长 为 244 nm; 流 动 相 甲 醇 ∶水 = 26 ∶74; 流速 1. 0 mL /m in;柱温 30 ℃;进样量 20μL。 1. 3 样品处理 取 10 g绞碎肉试样 ,加 0. 1 mol/L 高氯酸 20 mL 匀浆 , 超 声 提 取 20 m in, 80℃ 加 热 30 m in, 冷 却 后 离 心 (4 000 r/m in) 15 m in。沉淀加 0. 1 mol/L高氯酸 5 mL洗涤 、 离心 ,将上清液合并 ,用 1 mol/L 氢氧化钠调 pH 至 11,加入 25 mL乙醚 ,振荡提取 20 m in,回收有机相 ,再用 20 mL 乙醚 重复萃取 2次 ,合并有机相 ,蒸发至干 。用 0. 1 mol/L HC1溶 解 ,纯水定容至 10 mL。
Abstract: The method of detection of Clenbuterol Hydrochloride in pork by H igh2Performance L iquid Chromatography W as established. And the best chromatography conditions was found, that is: The mobile phase was methanol2water ( 26 ∶74) , ODS2C18 column was used and the detection wavelength was 244nm. The linear range of determ ination is well. And the method is simp le and rap id with good rep roducibility and accurate. Keywords: Pork; Clenbuterol Hydrochloride; HPLC
通过紫外分光光度计对盐酸克伦特罗标准品的扫描 ,测 得其最大吸收波长在 244 nm。 2. 3 流动相的选择
本试验选用甲醇 ∶水 = 26 ∶74作流动相 ,峰形和分离效 果很好 ,色谱图见图 2,因此选用甲醇 ∶水 = 26 ∶74作为最佳 流动相 。
图 2 盐酸克伦特罗标准溶液 (20μg/mL )色谱图 2. 4 线性关系和方法的精密度考察
精密吸取标准贮备液分别置于 50 mL 容量瓶中 ,加纯水 稀释至刻度 ,摇匀 ,配成含盐酸克伦特罗 1, 2, 5, 10, 20μg/mL 标准系 列 液 , 按 1. 2 色 谱 条 件 分 别 进 样 20 μL。以 浓 度 (mg/mL )为横坐标 ,峰面积为纵坐标作图 [9 ] ,得到的线性回
作者简介 :丁芳林 (1965 - ) ,男 ,湖南生物机电职业技术学院副教授 。 E2mail: dingfanglin@ sohu. com
收稿日期 : 2007 - 06 - 11
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图 1 盐酸克伦特罗的结构式
1 试验材料与方法
1. 1 材料与仪器 甲醇 :色谱纯 ; 试验用水 :均为超纯水 ; 其余试剂 :均为分析纯 ; 盐酸克伦特罗标准品 :中国药品生物制品检定所 ; 盐酸 克 伦 特 罗 标 准 溶 液 : 取 盐 酸 克 伦 特 罗 标 准 品
的肉制品引起的“瘦肉精 ”中毒事件 ,已引起广泛关注 。因 此 ,在临床医学和食品安全中 ,动物肉及其制品中盐酸克伦 特罗含量的测定具有非常重要的意义 。国内外文献报道用 于盐酸克伦特罗残留检测的方法很多 [5, 6 ] ,主要有气相色谱 法 ( GC) 、气相色谱 - 质谱联用法 ( GC2M S) 、高效液相色谱法 (HPLC)等 [7, 8 ] 。本试验建立了测定猪肉中的盐酸克伦特罗 的高效液相色谱法 ,该方法操作简单 、快速 ,峰形理想 ,在所 测浓度范围内显示出良好的线性关系 ,重现性好 ,结果准确 可靠 。
参考文献 1 李正明. 食品安全体系的建立与运作 [ J ]. 食品与机械 , 2002 ( 2 ) :
4～5. 2 郭伟 ,张春晖. 液相色谱 - 电喷雾质谱测定肉类中的磺胺类药物
[ J ]. 食品与机械 , 2006 (4) : 84～87. 3 韩森 ,马国霞 ,李卫芬. 盐酸克伦特罗检测技术的研究进展 [ J ]. 畜