降脂胶囊的质量标准提升研究

基金项目：贵州省科技计划项目（黔科合平台人才［２０１８］５７４４号）；遵义市创新人才团队培养项目（遵市科合（２０１６）７号）。

作者简介：曾芳俐（１９７７－），女，汉族，本科，执业药师，研究方向为药品检验及质量标准研究。

Ｅ－ｍａｉｌ：５５１９６２５１７＠ｑｑ ｃｏｍ
通信作者：张磊（１９９３－），男，汉族，本科，工程师，研究方向为药品检验及质量标准研究。

Ｅ－ｍａｉｌ：４３６２６３２９＠ｑｑ ｃｏｍ
降脂胶囊的质量标准提升研究
曾芳俐１　张　磊１
　冯　华１
遵义市产品质量检验检测院，贵州　遵义　５６３０００
【摘　要】　目的：建立降脂胶囊的质量标准研究。

方法：采用薄层色谱法鉴别制剂中的葛根及葛根素；采用高效液相色谱法对制剂中的活性成分葛根素进行含量测定，用Ｄｉａｍｏｓｉｌ Ｃ１８（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）为色谱柱，甲醇－水（３０∶７０）为流动相，流速１ ０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５０ｎｍ，柱温３５℃。

结果：在薄层鉴别色谱中，葛根和葛根素斑点清晰分离，效果好，Ｒｆ值达到要求，阴性对照无干扰。

含量测定中葛根素在３２ ３２～２９０ ８８μｇ的范围内与峰面积呈良好的线性关系，ｒ
＝０ ９９９９；专属性强、重现性好，平均回收率为９９ １５％、ＲＳＤ为０ ６６％（ｎ＝６）。

结论：所建立的鉴别方法操作简单，专属性强；定量方法稳定灵敏，重现性良好，该标准可以作为降脂胶囊的质量控制。

【关键词】　降脂胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准
【中图分类号】Ｒ２６８ 【文献标志码】Ａ 【文章编号】１００７－８５１７（２０２０）１７－００３５－０４
ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＱｕａｌｉｔｙＳｔａｎｄａｒｄｏｆＪｉａｎｇｚｈｉＣａｐｓｕｌｅ
ＺＥＮＧＦａｎｇＬｉ１　ＺＨＡＮＧＬｅｉ１
　ＦＥＮＧＨｕａ
１ＺｕｎｙｉＰｒｏｄｕｃｔＱｕａｌｉｔｙＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＴｅｓｔｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｚｕｎｙｉ５６３０００，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｓｔａｎｄａｒｄｏｆＪｉａｎｇｚｈｉｃａｐｓｕｌｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＲａｄｉｘｐｕｅｒａｒｉａｅａｎｄｐｕｅｒａｒｉｎｉｎｔｈｅｐｒｅｐａ ｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＴＬＣ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＰｕｅｒａｒｉｎｉｎｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．ＤｉａｍｏｓｉｌＣ１８（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｃｏｌｕｍｎ，ｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒ（３０∶７０）ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ ０ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２５０ｎｍ，ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３５℃．ＲｅｓｕｌｔｓＩｎＴＬＣ，ｔｈｅｓｐｏｔｓｏｆｐｕｅｒａｒｉｎａｎｄｐｕｅｒａｒｉｎｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｃｌｅａｒｌｙ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｗａｓｇｏｏｄ，ＲＦｖａｌｕｅｍｅｔｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ，ａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｈａｄｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．Ｉｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｐｕｅｒａｒｉｎｈａｓａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｐｅａｋａｒｅａｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ３２ ３２－２９０ ８８μｇ，ｒ＝０ ９９９９；Ｉｔｈａｓｓｔｒｏｎｇｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｇｏｏｄｒｅｐｒｏ ｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ，ｗｉｔｈａｎａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆ９９ １５％ａｎｄＲＳＤｏｆ０ ６６％（ｎ＝６）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍ ｐｌｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃ，ａｎｄｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｔａｂｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＪｉａｎｇｚｈｉｃａｐｓｕｌｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＪｉａｎｇｚｈｉＣａｐｓｕｌｅ；ＴＬＣ；ＨＰＬＣ；ＱｕａｌｉｔｙＳｔａｎｄａｒｄ
降脂胶囊主要由葛根、何首乌、银杏叶、山
楂、水蛭、海藻六味中药材组成［
１］
，具有消食除痰，活血祛瘀功效。

用于脾运失常所致的头晕、头痛、胸闷、四肢沉重及高血脂等症。

目前，该制剂已应用于临床治疗中，由于该中药复方制剂具有药味较多，成分复杂等特点，现行标准难以保证降脂胶囊质量。

为有效控制降脂胶囊的生产质量，本文对其质量标准进行了系统的研究。

１　仪器与材料
１ １　仪器　岛津ＬＣ－２０ＡＤ高效液相色谱议（包括二元泵，紫外检测器，柱温箱，自动进样器，Ｓｈｉｍａｄｚｕ分析仪器工作站和处理软件），Ｄｉａｍｏｓｉｌ Ｃ
１８（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）为色谱柱；ＡＢ２６５－Ｓ型梅特勒电子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），ＫＱ－３００ＤＥ型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

１ ２　材料　葛根对照药材、葛根素对照品（购于中国食品药品检定研究院，批号分别：１２１５５１－２０１１０３，１１０７５２－２０１８０６），甲醇为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：２０１８０４０９），水为娃娃哈纯净水，其他试剂均为分析纯，３批降脂胶囊（批号分别为：１６１２０１、１８０３０９、１８０９０１）遵义市中医院购买，阴性样品自制。

２　方法与结果
２ １　薄层鉴别［２－６］　取样品约２ ０ｇ，加甲醇
１０ｍＬ，放置２小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇０ ５ｍＬ使溶解，作为供试品溶液。

另取葛根对照药材１ｇ，同法制成对照药材溶液，再取葛根素对照品，加甲醇制成每１ｍＬ含１ｍｇ的溶液，作为对照品溶液，同样品制法制成阴性样品溶液。

吸取上述４种溶液各１０μＬ，分别点于同一硅胶Ｇ板上，以三氯甲烷－甲醇－水（１０∶３∶０ １）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（２５４ｎｍ）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

结果表明，分离度好，斑点显色清晰，而阴性无干扰，见图１。

１－３ 样品　４ 对照药材５ 阴性样品　Ｓ 葛根素对照图１　ＴＬＣ薄层色谱图
２ ２　含量测定
［２－９］
２ ２ １　色谱条件　Ｄｉａｍｏｓｉｌ Ｃ
１８（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ
，５μｍ）为色谱柱，甲醇－水（３０∶７０）为流动相，流速１ ０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５０ｎｍ，柱温３
５℃。

进样量１０μＬ，相连两峰分离度应符合规定，理论塔板数按葛根素峰计，应不低于４０００。

２ ２ ２　对照品溶液的制备　精密称取葛根素照品适量，加甲醇溶解制成含葛根素１６ １６μｇ／ｍＬ的对照品溶液，摇匀，用０ ４５μｍ的微孔滤膜滤过，即得。

２ ２ ３　供试品溶液制备　取内容物约１ ０ｇ（批号：１
８０９０１），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇２
５ｍＬ，超声处理３０ｍｉｎ，取出，放冷至室温，用甲醇补足损失的重量，滤过，取续滤液，即得。

２ ２ ４　阴性溶液制备　取缺葛根药材处方下自制阴性样品，按“
２ ２ ３”项下供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。

精密吸取１０μＬ注入高效液相色谱仪，按照色谱条件下测定，结果表明阴性对照的色谱图在葛根素相应的保留时间无干扰峰，详见色谱图２。

２ ２ ５　线性关系的考察　精密吸取对照品溶液２μ
Ｌ、６μＬ、１０μＬ、１４μＬ、１８μＬ，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，分别以葛根素浓度（μｇ）为横坐标，峰面积积分值（Ａ）为纵坐标，绘制标准曲线，计算，回归方程为：Ｙ＝６３４１５Ｘ－３０１ ５，Ｒ＝０ ９９９９；在３２ ３２～２９０ ８８μｇ／ｍＬ范围内呈良好的线性关系。

２ ２ ６　精密度试验　精密吸对照品溶液１０μＬ，注入高效液相色谱仪中，连续测定６次，记录峰面积，结果葛根素峰面积的ＲＳＤ为１ ３３％％，结果表明仪器精密度良好。

２ ２ ７　稳定性试验　分别吸取（批号１８０９０１）同一供试品溶液于０、４、８、１２、１６、２０、２４ｈ，精密吸（批号１８０９０１）样品制备的供试品溶液１０μＬ进样，测得峰面积，ＲＳＤ均值为０ １２％，表明在２４ｈ内稳定。

２ ２ ８　重复性试验取同一批样品（批号１８０９０１）６份，精密称定，按照“２ ２ ３”项下方法制备成供试品溶液。

测定峰面积，计算葛根素平均含量为０ ３６ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０ １３％，结果表明重复
性好。

２ ２ ９　加样回收试验取（已知含量含葛根素０ ３６ｍｇ／ｇ）的样品６份，每份约０ ５ｇ，精密称定，精密称取葛根素对照品适量，按“
２ ２ ３”项下的方法操作，计算回收率，葛根素平均回收率为９９ １５％、ＲＳＤ为０ ６６％，见表１。

图２　ＨＰＬＣ图谱
表１　葛根素加样回收试验结果
序号取样量样品含量／ｍｇ加入量／ｍｇ测得量／ｍｇ回收率／％平均值ＲＳＤ／％１０ ５０１００ １８０４０ １８０００ ３５８０９８ ６７
２０ ５０１４０ １８０５０ １８０００ ３６０１９９ ７８
３０ ５０３２０ １８１２０ １８０００ ３６１０９９ ８９
４０ ５０６４０ １８２３０ １８０００ ３６１６９９ ６１
５０ ５０１８０ １８０６０ １８０００ ３５７２９８ １１
６０ ５００６０ １８０２０ １８０００ ３５８１９８ ８３
９９ １５０ ６６％
２ ２ １０　３批样品含量测　结果详见表２。

表２　３批样品含量测定结果（ｎ＝３）
样品批号葛根素／ｍｇ／ｇＲＳＤ／％
１６１２０１１８０３０９１８０９０１０ ３４８
０ ３４５
０ ３６３
０ ９８
０ １８
０ １３
３　讨论
葛根和葛根素的薄层鉴别研究中分别比较了含
４％醋酸钠的硅胶Ｇ薄层板、聚酰胺薄层板、硅胶Ｇ
薄层板和硅胶ＧＦ２５４薄层板的效果，结果发现硅胶
Ｇ薄层板清晰圆整和，硅胶ＧＦ２５４薄层板展开的斑
点次之，Ｒｆ值到不到要求，而聚酰胺层析板和４％
醋酸钠的硅胶Ｇ薄层板的斑点分离不理想，所以鉴别过程中选择硅胶Ｇ板用。

试验过程中，对不同的展开剂进行了对比研究，分别尝试了以二氯甲烷－甲醇－水（７∶２ ５∶０ ２５）、三氯甲烷－甲醇（８∶２）、三氯甲烷－甲醇－水（１０∶２ ５∶０ ２５）、三氯甲烷－甲醇－水（１０∶３∶０ １）４种展开剂。

结果表明，以三氯甲烷－甲醇－水（１０∶３∶０ １）为展开剂的斑点与周围杂质斑点分离较好。

降脂胶囊为复方制剂，为了制定出一种适合降脂胶囊的科学、合理、可行的质量控制分析方法，本论文作了如下研究工作：本实验使用甲醇－水（１５∶８５）、甲醇－０ １％磷酸溶液（１０∶９０）、乙睛－水（１５∶８５）作为流动相，但是葛根素分离效果不好，并且样品峰不能回到基线上，所以最后确定以甲醇－水（３０∶７０）为流动相，不但分离效果最好，并且样品峰能回到基线。

综上所述，本试验对降脂胶囊中的葛根分别进行了薄层鉴别和含量测定研究，所建立的方法稳定可靠、重复性好、专属性强，阴性无干扰，可以有效控制降脂胶囊中葛根药材的质量，适用于降脂胶囊的质量控制。

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檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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ＬｉｇｎａｎｓｆｒｏｍＳａｇｅｒｅｔｉａｔｈｅｅｚａｎｓＵｓｉｎｇｉｎＳｉｌｉｃｏＭｏｌｅｃｕｌａｒ
ＮｅｔｗｏｒｋＡｎｎｏｔａｔｉｏｎＰｒｏｐａｇａｔｉｏｎ－ＢａｓｅｄＤｅｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ
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ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｖｉａｔｈｅＡｋｔ／ＧＳＫ３βｓｉｇｎａｌｉｎｇ
ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＮｕｔｒＲｅｓＰｒａｃｔ，２０１８，１２（１）：３－１２．
（收稿日期：２０２０－０４－０８　编辑：程鹏飞）。