甲型流感以及乙型流感病毒核酸检测用引物、探针[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011404664.6
(22)申请日 2020.12.05
(71)申请人 江苏迅睿生物技术有限公司
地址 221000 江苏省徐州市经济技术开发
区新微半导体加速器17、19、22号楼
(72)发明人 傅明华　李世宝　李美琼　聂晶　
(74)专利代理机构 亳州速诚知识产权代理事务
所(普通合伙) 34157
代理人 杜家波
(51)Int.Cl.
C12Q 1/70(2006.01)
C12N 15/11(2006.01)
C12R 1/93(2006.01)
(54)发明名称
甲型流感以及乙型流感病毒核酸检测用引
物、探针
(57)摘要
本申请公开了甲型流感以及乙型流感病毒
核酸检测用引物、探针；属于生物检测技术领域
领域；其技术要点：给出了FLU A ,FLU B两种病毒
的引物和探针核酸序列。

本申请旨在提供一种甲
型流感病毒、乙型流感病毒设计了引物以及探
针，该引物的特异性好，用于荧光检测的灵敏度
搞。

本申请检测的方法准确性好，灵敏度搞，对于
相关疾病的诊断能够快递的提供科学依据。

权利要求书1页 说明书3页序列表2页 附图1页CN 112522442 A 2021.03.19
C N 112522442
A
1.一种甲型流感病毒核酸检测用引物，其特征在于，该引物的核苷酸序列为：
上游引物：SEQ ID NO:1 ；
下游引物：SEQ ID NO:2。

2.一种与权利要求1所述的引物配合使用的探针，其特征在于，该探针的核苷酸序列为：SEQ ID NO:3。

3.一种乙型流感病毒核酸检测用引物，其特征在于，该引物的核苷酸序列为：
上游引物：SEQ ID NO:4；
下游引物： SEQ ID NO:5。

4.一种与权利要求3所述的引物配合使用的探针，其特征在于，该探针的核苷酸序列为：SEQ ID NO:6。

权　利　要　求　书1/1页CN 112522442 A
甲型流感以及乙型流感病毒核酸检测用引物、探针
技术领域
[0001]本申请涉及一种生物检测技术领域，更具体地说，尤其涉及甲型流感以及乙型流感病毒核酸检测用引物、探针。

背景技术
[0002]呼吸道感染是临床上常见的疾病，明确呼吸道感染的病原体，对临床治疗药物的选择意义重大。

呼吸道病原体包括各种细菌、病毒、寄生虫、真菌、支原体、衣原体、螺旋体等。

呼吸道病毒感染与支原体感染出现的症状和体征有一定的类似性，而治疗药物的选择却有很大的不同。

临床上依靠症状和体征进行鉴别诊断的难度较大，而实验室病原体检测可帮助明确诊断，有助于流行病学研究，治疗药物的选择，病毒疫苗接种的选择和预防效果预判。

[0003]病原体的感染检测分传统的检测方式和新的分子生物学检测方式两大类。

传统的检验方式就是细菌或病毒培养,筛查,分离,生化检测和鉴定。

现在新型的分子生物学的技术发展得非常快。

新型技术包括病原体的抗原和IgM抗体检测, 基因芯片，荧光定量PCR，还有现在已经用到临床的高通量基因测序的方法。

这种方法筛查的效果非常好，能够在迅速、短期的而且特异性、敏感度都非常好的情况下，能为临床提供有效的指标，能够给临床的医生用药提供有效的指导。

[0004]实时荧光RT‑PCR检测和病毒基因测序是目前临床常用的新型冠状病毒,流行性感冒病毒和合胞病毒的病原学检测法。

血清学检测测定新型冠状病毒, 流行性感冒病毒和合胞病毒特异性IgM抗体和IgG抗体。

由于实时荧光RT‑PCR检测比病毒基因测序快速、灵敏、准确和便宜，实时荧光RT‑PCR检测为目前临床常规应用的检测新型冠状病毒, 流行性感冒病毒和合胞病毒病原学检测法。

[0005]然而，实时荧光RT‑PCR方法的主要缺点在于需要根据不同的序列，合成不同的引物和探针。

而为了获得低限的检测、高灵敏度和特异性，设计的引物和探针应该只结合到目标序列，引物,探针和模板之间不容许形成任何二聚体。

尤其是从事二重或多重RT‑PCR检测时设计的引物,探针和模板之间更不许可形成任何二聚体。

设计的引物和探针需要经过大量的实验测试和选择才可应用。

发明内容
[0006]本申请的目的在于针对上述现有技术的不足，提供甲型流感以及乙型流感病毒核酸检测用引物、探针。

[0007]本申请的技术方案是：
一种甲型流感病毒(FLU A)核酸检测用引物，该引物的核苷酸序列为：
上游引物： ggartggcta aagacaagac caatc；
下游引物： ggcattytgg acaaagcgtc tac。

[0008]一种与甲型流感病毒(FLU A)核酸检测用引物配合使用的探针，该探针的核苷酸
序列为：agtcctcgctcactgggcacggt。

[0009]一种乙型流感病毒(FLU B)核酸检测用引物，该引物的核苷酸序列为：上游引物：tgtcgctgtttggagacacaa；
下游引物：tgctttgccttctccatcttc。

[0010]一种与乙型流感病毒(FLU B)核酸检测用引物配合使用的探针，该探针的核苷酸序列为：tgcctacctgctttcattga。

[0011]本申请的有益效果在于：本申请根据甲型流感病毒、乙型流感病毒设计了引物以及探针，该引物的特异性好，用于荧光检测的灵敏度搞。

本申请检测的方法准确性好，灵敏度搞，对于相关疾病的诊断能够快递的提供科学依据。

附图说明
[0012]下面结合附图中的实施例对本申请作进一步的详细说明，但并不构成对本申请的任何限制。

[0013]图1是本申请的2种人呼吸道病毒的引物、探针序列表。

具体实施方式
[0014]下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。

[0015]发明人团队经过研究发现，FLU A病毒的：M1M2 GENE基因团具有较好的特异性，因此引物是基于FLU A病毒的：M1M2 GENE序列进行设计，能够检测多种甲型流感病毒（对乙型、丙型病毒无特异性）。

因此，针对上述序列设计了引物与探针。

[0016]而对于FluB病毒而言， NB/NA segment 6具有较好的特异性，因此引物是基于FLUB病毒的：NB/NA segment 6序列进行设计，能够检测多种乙型流感病毒（对甲型、丙型病毒无特异性）。

因此，针对上述序列设计了引物与探针。

[0017]本申请的引物、探针的应用方式如下：
S1, 核酸提取：人类拭子和唾液可由以下任何方法预处理：（1），在TE缓冲液中加热95oC 30分钟，用含有洗涤剂的1x裂解缓冲液裂解；（2）, 直接裂解, 含有Na2Citrate和RNase抑制剂的1x裂解缓冲液；（3）, 利用核酸提取方法提取RNA；（4）, 使用琼脂糖塞树脂去除RT‑PCR抑制剂。

[0018]S2, 恒温扩增： S1得到的核酸样本混入恒温扩增缓冲液+恒温扩增酶溶液，然后上述反应液与装有本申请的引物、探针的扩增反应器皿中进行扩增反应；
S3, 待S2步骤结束后，根据各反应腔中样本的扩增曲线确定所述待测样本液中是否含有相应的流感病毒的基因组；若所述待测样品产生S型扩增曲线，则所述待测样本中含有甲型流感病毒的基因组；反之，则所述待测样本中不含有相应流感病毒的基因组。

[0019]S3检测时采用PCR荧光检测，具体而言，采用迅睿MA‑688 实时荧光定量基因扩增仪进行测试。

[0020]以上所举实施例为本申请的较佳实施方式，仅用来方便说明本申请，并非对本申请作任何形式上的限制，任何所属技术领域中具有通常知识者，若在不脱离本申请所提技
术特征的范围内，利用本申请所揭示技术内容所作出局部更动或修饰的等效实施例，并且未脱离本申请的技术特征内容，均仍属于本申请技术特征的范围内。

序列表
<110> 江苏迅睿生物技术有限公司
<120> 甲型流感以及乙型流感病毒核酸检测用引物、探针<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggartggcta aagacaagac caatc 25
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggcattytgg acaaagcgtc tac 23
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
agtcctcgct cactgggcac ggt 23
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tgtcgctgtt tggagacaca a 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tgctttgcct tctccatctt c 21
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence) <400> 6
tgcctacctg ctttcattga 20
说　明　书　附　图1/1页CN 112522442 A
图1。