淀粉酶活力的测定
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
5 min时刻吸光值 0 min时刻吸光值
5 min时刻还原糖mg数 0 min时刻还原糖mg数
二者相减，计算酶活力。 1 U=1 mg 还原糖/min·mL 酶*稀释倍数
本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?
2
在测定酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？
1
七.思考题
01
三种酶活力大小顺序是怎样，为什么是这样？
实验七 淀粉酶活力的测定
单击此处添加副标题
202X/XX/XX
汇报人姓名
一、实验目的
掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法
202X/XX/XX
汇报人姓名
二、实验原理
酶是一种具有高度专一性的催化剂。其催化能力的大小用酶的活力来表示。酶活力也称酶活性，是以酶在最适温度、最适pH等条件下，催化一定的化学反应的初速度来表示。
02
酶液的稀释倍数是否要改变。
03
计算酶液的总活力、回收率。
八、分析
试管排列顺序
装约20 mL淀粉溶液，标记，转至37℃水浴锅中
因淀粉中含有少量还原糖，某些溶液有色素、杂质，需查看酶不水解淀粉的情况
37 ℃
室温
实验编号 操作
0号管
粗酶液 (1)
盐析液 (2)
脱盐液 (3)
0时刻
5min时刻
0时刻
5min时刻
0时刻
5min时刻
B1
B1’
F1
F1’
B2
本实验是以一定量的α-淀粉酶液，于37 ℃ 、pH6.8的条件下，在一定的初始作用时间内将淀粉转化为还原糖，然后通过与DNS试剂作用，比色测定求得还原糖的生成量，从而计算出酶反应的初速度，即酶的活力
01
U=1 mg 还原糖/min·mL 酶
03
这里规定，一个淀粉酶活力单位为在37 ℃ 、pH6.8的条件下，每分钟水解淀粉生成1 mg还原糖所需要的酶量。
B2’
F2
F2’
B3
B3’
F3
F3’
淀粉酶液 (ml)
0.3 0.2
0.5
H2O (ml)
3.5
pH 6.8缓冲液
各 1 ml
0.3 ％ NaCl
各 1 ml
预热
摇匀， 37 ℃ 水浴 2 min
NaOH (ml)
1
1
1
1
1
1
预热的淀粉
各 1 ml，迅速摇匀
淀粉溶液（0.5%） 称取5 g可溶性淀粉，溶于1000 mL热水中。
3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
磷酸缓冲液（ 0.1 mol/L，pH6.8 ），含0.3% NaCl
NaOH溶液（2.5mol/L）
四、试剂的配制
淀粉酶的制备
五.步骤
0 时刻 5 min时刻
酶促反应
37 ℃ 水浴 5 min (准确计时)
NaOH (ml)
1
1
1
1
1
1
DNS试剂
各 2 ml，摇匀
显色反应
沸水浴 5 min，冷却，各用水定容至25ml，摇匀
比色
以0号管为空白参比，测定λ=540nm处的吸光值
记录A540ຫໍສະໝຸດ 六. 结果处理1、分别计算0时刻、5 min时刻的A540nm平均值。 2、根据图表中的实验结果，并利用实验 “3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准曲线，计算淀粉酶的活力。 需要详细过程。
02
三.材料及设备
1、材料 淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液） 2、仪器 分光光度计 恒温水浴 沸水浴 3、器材 刻度试管： 25 mL×17 移 液 管： 1 mL×3（取稀释后的酶液） 烧 杯： 250 mL×1 滴 管： 2 洗 耳 球： 2 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1 移 液 器：专取NaOH 注 射 器：专取蛋白样品
5 min时刻还原糖mg数 0 min时刻还原糖mg数
二者相减，计算酶活力。 1 U=1 mg 还原糖/min·mL 酶*稀释倍数
本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?
2
在测定酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？
1
七.思考题
01
三种酶活力大小顺序是怎样，为什么是这样？
实验七 淀粉酶活力的测定
单击此处添加副标题
202X/XX/XX
汇报人姓名
一、实验目的
掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法
202X/XX/XX
汇报人姓名
二、实验原理
酶是一种具有高度专一性的催化剂。其催化能力的大小用酶的活力来表示。酶活力也称酶活性，是以酶在最适温度、最适pH等条件下，催化一定的化学反应的初速度来表示。
02
酶液的稀释倍数是否要改变。
03
计算酶液的总活力、回收率。
八、分析
试管排列顺序
装约20 mL淀粉溶液，标记，转至37℃水浴锅中
因淀粉中含有少量还原糖，某些溶液有色素、杂质，需查看酶不水解淀粉的情况
37 ℃
室温
实验编号 操作
0号管
粗酶液 (1)
盐析液 (2)
脱盐液 (3)
0时刻
5min时刻
0时刻
5min时刻
0时刻
5min时刻
B1
B1’
F1
F1’
B2
本实验是以一定量的α-淀粉酶液，于37 ℃ 、pH6.8的条件下，在一定的初始作用时间内将淀粉转化为还原糖，然后通过与DNS试剂作用，比色测定求得还原糖的生成量，从而计算出酶反应的初速度，即酶的活力
01
U=1 mg 还原糖/min·mL 酶
03
这里规定，一个淀粉酶活力单位为在37 ℃ 、pH6.8的条件下，每分钟水解淀粉生成1 mg还原糖所需要的酶量。
B2’
F2
F2’
B3
B3’
F3
F3’
淀粉酶液 (ml)
0.3 0.2
0.5
H2O (ml)
3.5
pH 6.8缓冲液
各 1 ml
0.3 ％ NaCl
各 1 ml
预热
摇匀， 37 ℃ 水浴 2 min
NaOH (ml)
1
1
1
1
1
1
预热的淀粉
各 1 ml，迅速摇匀
淀粉溶液（0.5%） 称取5 g可溶性淀粉，溶于1000 mL热水中。
3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
磷酸缓冲液（ 0.1 mol/L，pH6.8 ），含0.3% NaCl
NaOH溶液（2.5mol/L）
四、试剂的配制
淀粉酶的制备
五.步骤
0 时刻 5 min时刻
酶促反应
37 ℃ 水浴 5 min (准确计时)
NaOH (ml)
1
1
1
1
1
1
DNS试剂
各 2 ml，摇匀
显色反应
沸水浴 5 min，冷却，各用水定容至25ml，摇匀
比色
以0号管为空白参比，测定λ=540nm处的吸光值
记录A540ຫໍສະໝຸດ 六. 结果处理1、分别计算0时刻、5 min时刻的A540nm平均值。 2、根据图表中的实验结果，并利用实验 “3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准曲线，计算淀粉酶的活力。 需要详细过程。
02
三.材料及设备
1、材料 淀粉酶液（粗酶液、盐析液、脱盐液） 2、仪器 分光光度计 恒温水浴 沸水浴 3、器材 刻度试管： 25 mL×17 移 液 管： 1 mL×3（取稀释后的酶液） 烧 杯： 250 mL×1 滴 管： 2 洗 耳 球： 2 洗瓶、试管架、移液管架、玻棒：各1 移 液 器：专取NaOH 注 射 器：专取蛋白样品