血清中类固醇激素的检测-Cleanert SLE(20161102)
合成类固醇激素的检测技术研究进展与思考
Ｋｅ ｒ ｓ ａ ａ ｏ ｃａ ｄｏｅ ｉ ｓ ｒｉ Ａ Ｓ ；ｄｔｃ ｔ ｈ ｉｕ ； ｒｔ ｍ ｃ ； ｌｃｌｒ ｉｍ ｒｅ ｙｗｏｄ ： ｎｂ ｌ ｎ ｒｇ ｎ ｔ ｏ ｉ ｃ ｅ ｄ（ Ａ ） ｅ ｔ ｅ ｎｑ ｅ ｐｏ ｏ ｉ ｍｏ ｕａ ｏ ａｋ ｒ ｅ ｃ ｅ ｓ ｅ ｂ
兴奋剂检测作为反兴奋剂 的主要手 段在竞技 运动 中 的地 位 变得越来越重要 ， 目前 虽 然 已经 具 有 了一 系 列 较 为 规 范 、 熟 的 成 技术 ， 但仍然不 能满 足 目前 反兴 奋 剂工 作 的需要 ｕ Ｊ 。本文 仅 就 目前 应 用 较 广 ， 害 较 严 重 而 检 测 技 术 改 进 较 快 的 合 成 类 固 危
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（ ｕ ｄ ｍ ｎａ Ｔ ｅｒ ｅａｔ ｎ ， ｈｎ ｏ ｇＩｓｔｔ ｏ ｈ ｓ ａ Ｅ ｕ ａ ｏ ， ｈ ｎ ｏ ｇＪ ａ ５ ０ ３ Ｃ ｉ ） Ｆ ｎ ａ ｅ ｔ ｈ ｏｙＤ ｐ ｒ ｔ Ｓ ａｄ ｎ ｔｕｅ ｆ ｙｉ ｌ ｄ ｃｔ ｎ Ｓ ａ ｄ ｎ ｉ ｎ２ ０ ６ ， ｈｎ ｌ ｍｅ ｎ ｉ Ｐ ｃ ｉ ｎ ａ Ａ ｓ ａｔ Ｔ ｅｄ ｔ ｔ ｎ ｔ ｈ ｉｕ ｓｐｏｒｓ ｏ ｅａ ａｏｉ ａ ｄｏ ｅ ｉ ｓ ｒｉ （ Ａ ）ｗ ｓｆｃｓｄ ｏ ｎ ｏ ｅ ｂ ｔ ｃ ： ｈ ｅｅ ｉ ｃ ｎｑ ｅ ｒｇ ｓ ｆｔ ｎｂ ｌ ｎ ｒｇｎｃ ｔ ｏｄ Ａ Ｓ ａ ｏｕｅ ｎ ａ ｄｓｍ ｒ ｃｏ ｅ ｅ ｈ ｃ ｅ
２１ ００年 ３ 第 ６期 ８卷
广州 化工
・５・ ４
田 合 成 类 固醇 激 素 的 检 测 技 术 研 究 进 展 ， 、考 ＿ ． Ｊ
—
沙继斌
（ 东体 育 学院基础 理 论 系，山东 济 南 ２ ０ ６ ） 山 ５ ０３
血清样品中类固醇的快速LCMSMS测试方法
血清样品中类固醇的快速LC/MS/MS 测试方法本文概述了在AB SCIEX QTRAP ® 5500、Triple Quad™ 5500或API 5000™ LC/MS/MS 系统上，运用iMethod™类固醇类方法包进行检测满足实验要求，即一次进样即可同时分析血清样品中11种类固醇类化合物。
本方法分析以下11种类固醇类化合物：脱氢表雄酮硫酸盐（DHEAS ）、脱氢表雄酮（DHEA ），皮质醇、皮质酮、11-脱氧皮质醇，雄烯二酮、睾酮、17-羟基-黄体酮、黄体酮、雌二醇和25-羟基维生素D3。
同位素内标：雌二醇-d3、皮质醇-d4、睾酮-d3、DHEA-d2、皮质酮-d8、11-脱氧皮质醇-d2、17-羟基-黄体酮-d8、孕酮-d9和25-羟基维生素D3-d6。
将200 µL 人血清样品进行蛋白沉淀后，上清液经稀释后直接进行LC-APCI/MS/MS 分析，色谱柱为：PhenomenexKinetex,2.6 µC18,100×3.00mm ，分析时间为17分钟。
标准曲线利用经活性炭净化的血清空白样本配制成一系列浓度的标准溶液，建立校正工作曲线。
根据临床样本的浓度高低确定标准曲线的范围。
由于分析物存在内源性本底，在实验前需对空白血清样本进行检测。
各个化合物校正曲线浓度见表1。
图1. 人血清基质加标色谱图，浓度为：校正曲线定量上限（见表1）表1. 标准曲线浓度（ng/mL ）Compound 中文名称STD 1STD 2STD 3STD 4STD 5STD 6STD 7Androstenedione雄烯二酮5 2.5 1.250.250.1250.050.025Cortisol 皮质醇10005002505025105Corticosterone皮质脂酮1052.50.50.250.10.05以下为其中四种类固醇的校准曲线，线性范围为：0.1~20 ng/mL 。
一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法[发明专利]
![一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/597bfe2fa200a6c30c22590102020740be1ecd16.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910842912.6(22)申请日 2019.09.06(71)申请人 广州科方生物技术股份有限公司地址 510000 广东省广州市高新技术产业开发区科学城开源大道11号C4栋五层、六层(72)发明人 周剑辉 (74)专利代理机构 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288代理人 贺红星(51)Int.Cl.G01N 33/74(2006.01)G01N 33/532(2006.01)(54)发明名称一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法，由酰胺类化合物、金属螯合剂、防腐剂、表面活性剂、甾体杂环化合物和去离子水组成，本发明制备的通用于血清中类固醇激素的释放剂当做样本预处理液用于类固醇激素项目检测试剂中，根据人血清标本中类固醇激素的特异性和主要的存在形式，将人血清中络合态的睾酮、雌二醇、孕酮和皮质醇从各自的结合蛋白中释放出来后，采用化学发光免疫分析法(CLIA)对游离态的激素进行检测验证，使得样本结果测值准确。
权利要求书1页 说明书9页CN 110579615 A 2019.12.17C N 110579615A1.一种通用于血清中类固醇激素的释放剂，其特征在于，由以下试剂组成：0.1-0.5wt％的酰胺类化合物、0.01-0.1wt％的金属螯合剂、0.05-0.2wt％的防腐剂、0.05～0.5wt％的表面活性剂和0.005-0.015wt％的甾体杂环化合物，其余为去离子水；其中，酰胺类化合物为N ,N -二甲基甲酰胺和/或N -甲基乙酰胺；甾体杂环化合物包括甲氢睾酮、达那唑和雄诺龙中的一种或几种。
2.如权利要求1所述的通用于血清中类固醇激素的释放剂，其特征在于，所述金属螯合剂为EDTA和/或DTPA。
高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒[发明专利]
![高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/287706eccc17552706220874.png)
专利名称：高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：周亚飞,于嘉屏
申请号：CN201510264575.9
申请日：20150521
公开号：CN104807920A
公开日：
20150729
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的试剂盒，包括洗脱液、标准品母液、混合内标液、稀释液、萃取液和质控品，所述的10种类固醇激素分别为：脱氢表雄酮、睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、雌酮、皮质酮、孕酮、孕烯醇酮、17α-羟孕酮和17-羟孕烯醇酮。
采用本发明试剂盒进行检测，灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程较简单，10min之内可完成多种激素的分离和检测，精密度与加标回收率基本满足要求。
申请人：上海迪安医学检验所有限公司
地址：200433 上海市杨浦区翔殷路128号上海理工大学科技园1号楼C309室
国籍：CN
代理机构：南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：肖明芳
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基于固相萃取法同时检测血清中11种类固醇的检测方法[发明专利]
![基于固相萃取法同时检测血清中11种类固醇的检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/628b09345022aaea988f0f26.png)
专利名称：基于固相萃取法同时检测血清中11种类固醇的检测方法
专利类型：发明专利
发明人：朱娟,彭军,高强
申请号：CN202010207345.X
申请日：20200323
公开号：CN111323507A
公开日：
20200623
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种基于固相萃取法同时检测血清中11种类固醇的检测方法，该检测方法的准确度好、灵敏度高，可以为相关疾病的判断治疗以及健康评估提供条件，同时，同时检测11种类固醇也可提高相关疾病诊断的准确性，比如血清睾酮和脱氢表雄酮硫酸酯的同时检测可提高多卵巢综合征的诊断率，但该方法不用于诊断目的。
申请人：杭州佰辰医学检验所有限公司
地址：310030 浙江省杭州市西湖区三墩镇石祥西路859号紫金启真大厦4号楼101-1室、201室国籍：CN
代理机构：无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙)
代理人：张欢勇
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用于同时检测血液类样本中多种类固醇激素的预处理方法、检测方法
专利名称：用于同时检测血液类样本中多种类固醇激素的预处理方法、检测方法及试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：陈秀如,佘旭辉,赵蓓蓓,韦兰清,沈长宇,潘燕芳
申请号：CN202010181811.1
申请日：20200316
公开号：CN112198265A
公开日：
20210108
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种用于同时检测血液类样本中多种类固醇激素的预处理方法、检测方法及试剂盒。
该预处理的方法包括1)使用甲基叔丁基醚初步萃取所述血清样本中的所述类固醇激素；2)离心，取上清液用碱性溶液充分碱洗；3)碱洗后离心，取上清冷冻吹干，将所得固体组分复溶，得到用于同时检测多种类固醇激素的待测液。
该方法至少能够同时分离17‑羟基孕酮、雄烯二酮、皮质醇、21‑脱氧皮质醇以及11‑脱氧皮质醇五种类固醇激素，分离效果好，操作简便。
申请人：广州金域医学检验中心有限公司
地址：510300 广东省广州市海珠区新港东路2429号三楼
国籍：CN
代理机构：广州华进联合专利商标代理有限公司
代理人：林青中
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分析血清中7种类固醇激素的临床研究-Waters
分析血清中7种类固醇激素的临床研究Dominic Foley 和Lisa Calton 沃特世公司(英国威姆斯洛)图1. Waters™ ACQUITY UPLC I-Class 系统和Xevo TQ-S micro 。
类固醇激素是一大类小分子，在代谢过程中发挥着非常重要的作用，例如性别特征调节、血压调节和炎症反应调节等。
参与类固醇生物合成的某些酶类在这些代谢过程中非常关键。
通过测定合成途径中的类固醇激素，可以监测这些酶是否出现功能异常。
若使用免疫分析法测定这些类固醇激素，由于抗体试剂会与结构相似的类固醇激素以及合成途径的衍生物发生交叉反应，因此分析极易受到干扰。
而使用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定这些类固醇激素可以获得极高的灵敏度、准确度和精密度。
本应用纪要介绍了一种分析睾酮、雄烯二酮、17-羟基孕酮(17-OHP)、脱氢表雄酮硫酸盐(DHEAS)、皮质醇、11-脱氧皮质醇和21-脱氧皮质醇的临床研究方法，该方法使用Oasis PRiME HLB µElution 板从血清中富集纯化目标分析物(工作流程已采用Tecan Freedom EVO 100/4液体处理器实现了自动化)，然后使用配备ACQUITY UPLC HSS T3 VanGuard 保护柱和ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱的ACQUITY UPLC I-Class 系统进行色谱分离，最后在Xevo TQ-S micro 质谱仪(图1)上进行检测。
此外，本研究还通过分析睾酮、雄烯二酮、17-OHP 、DHEAS 和皮质醇的室间质量评估(EQA)样品评估了该方法的偏差，以此判断该方法是否适合在临床研究中用于类固醇分析。
简介类固醇激素的同分异构体(11-脱氧皮质醇、皮质酮和21-脱氧皮质醇；17-OHP和21-OHP；睾酮和表睾酮)实现了基线分离，证明色谱柱具有良好的色谱选择性(图2)。
本研究单独分析了睾酮、雄烯二酮、17-OHP、DHEAS、皮质醇、11-脱氧皮质醇、21-脱氧皮质醇与其它10种结构相似化合物(21-羟基孕酮、皮质酮、DHEA、表睾酮、二氢睾酮、醛固酮、可的松、18-羟基皮质酮、17-羟基孕烯醇酮和强的松)，在这些分析物的保留时间处未观察到干扰。
血清中类固醇激素的检测-CleanertSLE（20161102）
血清中类固醇激素的检测-CleanertSLE（20161102）血清中类固醇激素的检测-Cleanert SLE一背景类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。
它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。
类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。
本实验采用Cleanert SLE 对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，可为临床研究提供参考。
二目标物信息表1 目标物结构信息三材料Cleanert SLE (200mg/3mL)；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓缩仪；V enusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）；API 4000+。
四样品处理方法（1）移取200μL血清样品至样品管中，并加入一定体积的甲醇，使溶液中甲醇的含量为5%，摇匀待净化。
（2）将经过预处理的血清样品上样至Cleanert SLE中，可开启负压装置(真空度＜-0.04MPa)将样品抽过上筛板或使用Cleanert M96生物样品前处理仪将样品压下筛板，待样品全部流至填料中后，静止10min。
（3）在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目标物的洗脱，控制洗脱速度为1~2mL/min，在第一次洗脱完成之后，间隔1min再进行第二次洗脱，合并洗脱液。
（4）将合并的洗脱液用96位氮吹仪进行氮吹浓缩，温度设定为40℃，氮吹至近干。
（5）使用200μL乙腈/水（3/7，v/v）将样品进行重溶，摇匀，进样检测。
五仪器检测条件5.1 正模式方法（针对黄体酮、睾酮、勃地酮）5.1.1 HPLC条件色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）流速：200μL/min柱温：30℃进样量：5μL流动相：水/乙腈（45/55，v/v）5.1.2 质谱条件扫描模式：电喷雾电离正模式采集模式：多反应监测（MRM）5.2 负模式方法（针对可的松）5.2.1 HPLC条件色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）流速：200μL/min柱温：30℃进样量：5μL流动相：水/乙腈（70/30，v/v）5.2.2 质谱条件扫描模式：电喷雾电离负模式采集模式：多反应监测（MRM）表3 质谱参数六结果表4 数据结果图1 可的松标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）图2 勃地酮、睾酮与黄体酮标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）图3 血清样品色谱图（负模式）图4 血清样品色谱图（正模式）图6 血清加标样色谱图（正模式-加标浓度为5ng/mL ）七订货信息表。
类固醇类激素水平测定在老年性瘙痒症中的诊断与治疗引导价值研究
类固醇类激素水平测定在老年性瘙痒症中的诊断与治疗引导价值研究李伯培;蓝淑婷【摘要】目的探讨类固醇类激素水平测定在老年性瘙痒症中的诊断与治疗引导价值.方法选取40例老年性瘙痒症患者作为研究组,同期40例健康体检者作为对照组.其中研究组中男性老年性瘙痒症患者20例作为研究组1,女性老年性瘙痒症患者20例作为研究组2;对照组中男性健康体检者20例作为对照组1,女性健康体检者20例作为对照组2.抽取所有研究对象外周血,采用化学发光免疫分析法测定血清促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇和睾酮的含量.比较研究组和对照组血清激素水平,并比较男性与女性血清激素水平.结果研究组促卵泡刺激素(10.69±3.25)IU/L、黄体生成素(5.36±1.25)IU/L、雌二醇(55.98±1.25)pmol/L均显著高于对照组的(7.26±2.54)IU/L、(3.98±1.25)IU/L、(29.69±4.25)pmol/L,睾酮(3.20±1.25)nmol/L低于对照组的(4.24±1.65)nmol/L,差异具有统计学意义(P＜0.05).研究组2患者促卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇水平均显著高于研究组1,睾酮水平低于研究组1,差异具有统计学意义(P＜0.05);对照组2促卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇水平均显著高于对照组1,睾酮水平低于对照组1,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论老年性瘙痒症患者类固醇类激素水平存在异常,有利于提高诊断效果,同时也为治疗提供新思路,女性患者可用己烯雌酚或黄体酮,可稳定胶原蛋白.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2018(012)014【总页数】2页(P94-95)【关键词】类固醇类激素水平测定;老年性瘙痒症;诊断;治疗价值【作者】李伯培;蓝淑婷【作者单位】511600 广东省清远市佛冈县人民医院;511600 广东省清远市佛冈县慢性病防治医院【正文语种】中文老年性瘙痒症多与皮肤腺功能减退,皮肤干燥,性激素水平下降有关,现状本病具体发病机制尚未明确,而且对老年性瘙痒症的发生、发展和转归的规律了解不多,且没有特效的治疗药物和方法［1］。
液相色谱串联质谱法测定人体血清中的类固醇激素
液相色谱串联质谱法测定人体血清中的类固醇激素黄和飞;谷叶;李佳兴;夏跃莲;何水兰;代秋琼;吕小波【期刊名称】《药学与临床研究》【年(卷),期】2022(30)4【摘要】目的:建立一种能同时测定血清中6种类固醇激素[包括孕酮(P)、17-羟基孕酮(17-OHP)、皮质醇(COL)、去氢表雄酮(DHEA)、双氢睾酮(DHT)、硫酸去氢表雄酮(DHEAS)]的快速、灵敏的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)方法。
方法:血清样本经甲基叔丁基醚液液萃取,高速离心后上清液氮气吹干,加入复溶液后上机检测。
采用安捷伦C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,水相A为纯水,有机相B为纯甲醇,质谱采用电喷雾电离(ESI)模式进行离子化,多反应监测模式(MRM)扫描,同位素稀释法进行定量分析。
结果:血清中6个类固醇激素检测限(LOD,以信噪比(S/N)≥3为标准)为0.03~1.25 ng·mL^(-1);定量限(LOQ,以信噪比(S/N)≥10为标准)为0.05~2.50 ng·mL^(-1);在0.05~4000 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数(r)≥0.9950;低浓度样本日内精密度为2.4%~6.2%;中浓度样本日内精密度为2.3%~5.7%;高浓度样本日内精密度为1.3%~5.4%。
低浓度样本日间精密度为0.4%~2.6%;中浓度样本日间精密度为0.3%~3.9%;高浓度样本日间精密度为0.2%~4.7%。
加标回收率为86%~106%。
结论:建立一种能同时测定血清中6个类固醇激素的HPLC-MS/MS方法。
该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强,可在6.5 min之内完成分离和检测,适用于人体血清中多种类固醇激素含量的定量分析。
【总页数】5页(P300-304)【作者】黄和飞;谷叶;李佳兴;夏跃莲;何水兰;代秋琼;吕小波【作者单位】昆明和合医学检验所有限公司实验室【正文语种】中文【中图分类】R927.1【相关文献】1.固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱及气相色谱-质谱法测定人血清中的3种溴系阻燃剂2.通过式固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉和牛肉中9种类固醇激素3.通过式固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳和乳粉中4种类固醇激素4.固相萃取-超高效液相色谱/串联质谱法测定人体血清中7种全氟化合物5.超声波提取-固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定沉积物中24种皮质类固醇激素因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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血清中类固醇激素的检测-Cleanert SLE
一背景
类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。
它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。
类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。
本实验采用Cleanert SLE 对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，可为临床研究提供参考。
二目标物信息
表1 目标物结构信息
三材料
Cleanert SLE (200mg/3mL)；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓缩仪；V enusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 Å）；API 4000+。
四样品处理方法
（1）移取200μL血清样品至样品管中，并加入一定体积的甲醇，使溶液中甲醇的含量为5%，摇匀待净化。
（2）将经过预处理的血清样品上样至Cleanert SLE中，可开启负压装置(真空度＜-0.04MPa)将样品抽过上筛板或使用Cleanert M96生物样品前处理仪将样品压下筛板，待样品全部流至填料中后，静止10min。
（3）在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目标物的洗脱，控制洗脱速度为1~2mL/min，在第一次洗脱完成之后，间隔1min再进行第二次洗脱，合并洗脱液。
（4）将合并的洗脱液用96位氮吹仪进行氮吹浓缩，温度设定为40℃，氮吹至近干。
（5）使用200μL乙腈/水（3/7，v/v）将样品进行重溶，摇匀，进样检测。
五仪器检测条件
5.1 正模式方法（针对黄体酮、睾酮、勃地酮）
5.1.1 HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 Å）
流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：水/乙腈（45/55，v/v）
5.1.2 质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式
采集模式：多反应监测（MRM）
5.2 负模式方法（针对可的松）
5.2.1 HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 Å）
流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：水/乙腈（70/30，v/v）
5.2.2 质谱条件
扫描模式：电喷雾电离负模式
采集模式：多反应监测（MRM）
表3 质谱参数
六结果
表4 数据结果
图1 可的松标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）
图2 勃地酮、睾酮与黄体酮标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）
图3 血清样品色谱图（负模式）
图4 血清样品色谱图（正模式）
图6 血清加标样色谱图（正模式-加标浓度为5ng/mL ）
七 订货信息表。