纤维蛋白、红细胞干扰酶联免疫测定的实验性探讨
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。
1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。
3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。
免疫学检测中的干扰因素
免疫检测技术- 标记物
免疫测定技术均是以标记物示踪作为基 础，同位素、荧光素、酶是经典的三大标记 免疫测定技术。这三大标记技术发展了各种 各样的免疫测定方法，如RIA、ELISA、荧光 免疫测定、免疫化学发光测定等，目前应用 这三大标记技术的检测试剂盒在临床广为应 用。近年来，作为免疫测定发展方向的非同 位素标记技术以其敏感、安全等倍受关注。
免疫学检测方法中的 干扰因素和对策
第二军医大学附属长海医院实验诊断科
沈 茜
随着基础免疫学研究的深入和现代免 疫学理论的建立，使大量免疫学检测技术 被不断地创新、发明；在临床疾病诊治的 应用中也不断地推陈出新。目前应用免疫 学原理检测的检验项目占到三级综合医院 检验科全部检验项目的1／4，医疗收入约 占1／3。这就要求检验人员不断掌握最新 的临床免疫学知识和各种新的检验方法， 了解检验项目的基本原理。
干扰因素和对策- 类风湿因子
收集10份RF31～＞1000IU/L的患者血清， 在美国和欧洲66各临床实验室进行74个项目 的免疫竞争法或免疫夹心法检测，仪器和试 剂均配套。3445个结果中8.7％为假阳性。错 误高值结果中的21％（所有结果的1.8％）引 起了临床的错误诊断，在使用RF吸附剂后再 检测，错误结果得到纠正。39％的假阳性结 果也可在使用RF吸附剂后降低。
干扰因素和对策- 外源性物质
冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩， 分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时 应轻柔，不可强烈振荡。标本的反复冻融所 产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子 产生破坏作用，从而引起假阴性结果。
操作流程不当－造成结果的改变
我们对HBV血清标志物五项指标仅抗HBc总抗体单阳性的血清实行了严格的复检 措施，发现初、复检结果的符合率＜50%。 偏差如此之大是无法用实验人员操作不当解 释的。抗-HBc总抗体采用竞争抑制ELISA法 检测, 日常工作中无论标本多少，必然是先 加完血清标本后再加抗-HBc-HRP。这样， 血清中的抗-HBc与抗-HBc-HRP存在着明显 的‚不公平竞争‛。
论影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法
论影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法[论文关键词] 酶联免疫吸附试验；影响因素；控制方法论文摘要：酶联免疫吸附试验(enayme liked immunosorbent assay，ELISA)是20世纪70年代发展起来的一种检测技术，因其具有敏感性高、特异性强、操作简单等优点，被广泛应用于各种抗原和抗体的测定，为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的推动作用。
但ELISA测定中影响因素较多，操作过程中每个环节都会对试验结果产生影响，出现错误的结果。
现笔者对影响实验结果的常见因素及相应的控制方法分析探讨如下：1 试剂的因素1.1 试剂的选择试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。
虽然国家采用批批检定的形式对ELISA 试剂严格把关，但不同厂家的试剂在使用效果上仍存在在差异。
要选购知名度相对高、具有“三证”的试剂，不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。
更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。
1.2 试剂的准备在临床实验室，对试剂的准备一般不太注意，通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此，在ELISA 测定中试剂的准备最为关键的是，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20～30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。
2 样本的因素2.1 内源性干扰因素包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等[1]。
2.1.1 类风湿因子在类风湿患者及正常人血清中，常含有较高或不同浓度的类风湿因子(RF)，其一般为IgM 型，亦有IgG和IgA型，具有与变性IgG产生非特异结合的特点，因为在ELISA测定中，其可与固相上包被的特异抗体IgG 以及随后加入的酶标的特异抗体IgG结合，从而出现假阳性结果。
影响酶联免疫检测因素的分析
实验室人 员的素质主要包括五个方面 ： 思想素质 、 文化 素质 、
技术 素 质 、 理 素 质 、 体 素 质 。首 先 应 具 备 一 个 良好 的 思 想 素 心 身
量保证体系 ， 在操作过程 中时刻 注意 ， 质控贯 穿到 整个实 验过 将
程， 包括待标本 的采集 、 输 、 运 处理 、 操作 过程 、 检验 结果 的审核 、 结果 的登记 与保存 、 报告单 的发放等 全过程 ， 而为 临床提供 正 从 确可靠的检测结果。
中外 医学 研 究
２１ ０ ０年 １ 第 ８卷 １月
第２ ５期 Ｃ Ｉ Ｅ ＥＡ Ｄ Ｆ Ｒ Ｉ Ｎ ＭＥ ＩＡ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ Ｈ Ｎ Ｓ Ｎ Ｏ ＥＧ Ｄ Ｃ ＬＲ Ｓ Ａ Ｃ
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影 响 酶联 免 疫 检 测 因素 的分 析
黄 培 胜
崇左市人 民医院（ 西 崇左 ５ ２ ０ ） 广 ３２ ０
【 关键词 】 影响 ； 检测 ； 酶联 免疫
酶联免疫 吸附试验 （ ＬＳ 是 目前 临床 上最 为常用 的免 疫 Ｅ ＩＡ） 测定方法之一 ， 由于 Ｅ ＩＡ方法灵敏 ， 异性 强不需要特殊设备 ， ＬＳ 特 所 以被广泛应用于各种 抗原 和抗体 测定 Ｊ 。但在 临床 实验检 测
中 ， 常 出 现不 同 的 检 验 科 ， 同 的 检 测 人 员 所 测 定 的 检 测 结 果 经 不
３ 操作 过程的影响因素 ３ １ 操作前 应 对 实验 的物理 参 数 有充 分 的 了解 ， 环境 温 度 ． 如 （８℃ ～ ５℃ ） 反应孵育温度是否符合实验要求 。 １ ２ 、
酶联免疫吸附试验检测人血浆中纤维蛋白原含量
酶联免疫吸附试验检测人血浆中纤维蛋白原含量【摘要】目的探讨酶联免疫吸附试验在检测人血浆中纤维蛋白原含量中的应用价值。
方法采用竞争抑制ELISA法测定人血浆中纤维蛋白原含量，并探索凝血酶、第二抗体最佳稀释倍数及适宜反应时间。
在最适宜条件下测定人血浆中纤维蛋白原含量。
结果第二抗体稀释1000倍为适宜的稀释倍数，10 IU/ml为最适宜凝血酶作用浓度，室温1.5 h为较理想的作用条件。
FPA标准品稀释至60 ng/ml，20 ng/ml，5 ng/ml，回收率分别为107.2%、98%、110%。
结论用建立起来的竞争抑制性ELISA法测定人血浆蛋白原中，纤维蛋白肽A的含量，回收率高，操作简单方便，值得推广应用。
【关键词】酶联免疫吸附试验；血浆；纤维蛋白原；检测纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)为肝脏合成的一种重要的血浆糖蛋白，是由健康人血浆分离，经提纯冻干制成。
可提高血中纤维蛋白原浓度，促进血液凝固进而止血，缺乏、消耗过多或纤维蛋白酶亢进易导致凝血障碍。
临床多用于妊娠中毒、死胎、产后出血、胎盘早期剥离、大手术、严重大出血等所引起的纤维蛋白原缺乏导致的凝血障碍。
血浆中纤维蛋白原检测方法按原理可分为热/盐沉淀法，可凝固蛋白法和免疫法［1］。
纤维蛋白原释放纤维蛋白肽A(FPA)的能力可反映纤维蛋白原分子结构、生物学功能完整性。
本研究采用竞争抑制ELISA法测定FPA浓度，为检测纤维蛋白原生物学活性唯一方法。
1 资料与方法1.1 一般资料(1)0.05 mol/L PH9.6碳酸盐缓冲液包被液(2)0.01 mol/L PH7.4PBS-Tween 20稀释液(3)洗涤液，同稀释液(4)10%BSA封闭液(5)TMB工作液(6)FPA(SIGMA)(7)羊抗人FPA抗体(8)辣根过氧化物酶标记的驴抗羊抗体(9)Superblock溶液。
1.2 方法1.2.1 原理其原理是标本与凝血酶作用释放出FPA抗原，加入过量的FPA 抗体(一抗)，FPA与部分抗体结合。
干扰艾滋病毒抗体酶联免疫法测定的实验性分析
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论 著 ・
成都医学院学报 ２１年 第 ７ 第 １期 Ｊｕｎｌｆ ｈｎｄ ｏｅｅ２１．ｏ ７Ｎ ．ｚ ０２ 卷 ｚ ｏｒａｏＣｅｇｕ ｌｇ， ２Ｖ １ ，ｏ１ Ｃｌ ０ ．
干 扰 艾滋 病 毒 抗 体 酶联 免 疫 法 测 定 的 实验 性 分 析
戚子惠 刘发 河 朱华 忠 张达衡 陈瑞林 周华胜 （ 东省 茂 名 市人 民 医 院检 验 科 广 东 茂 名 ５ ５ ０ ） 广 ２ ０ ０
０ ７ ８ ０ ３ ２ ｎ ｐ ａ ｍａ ｓ ｍｐ ｅ ｆｓ ｕ ｙ ｇ ｏ ｐ ， ． ７ ． ８ 士 ． ３ ｉ ｌ ｓ ａ ｌｓ ｏ ｔ ｄ ｒ ｕ ０ ９ ４±０ ５ ２ ａ ｄ ０ ７ ４士 ０ ３ ５ ｉ ｅ ｕ ｍｉ ｅ ｔ Ｃ ｔ ｄ ｒ ｕ ， ． ７ ± ０ ３ ４ ｎ ． １ 士 ０ ３ ３ ｉ ． ３ ｎ ． ２ ． １ ｎ ｓ ｒ ｍ ｘ ｄ ｗｉ ＲＢ ｓ ｕ ｙ ｇ ｏ ｐ ０ ７ ７ ｈ ． ２ ａ ｄ０ ７ ５ ． １ ｎ ｎ ｎ— ｆｂ ｉ ｅ ｕ ｓ ｍｐ ｅ ｆｓ ｕ ｙ ｇ ｏ ｐ ， ． ４ ｏ ｉ ｒ ｓ ｒ ｍ ａ ｌ ｓｏ ｔ ｄ ｒ ｕ ０ ６ ６土 ０ ３ ２ ａ ｄ ０ ６ ３ ０ ３ ２ ｎ ｓ ｒ ｍ ａ ｌ ｓｏ ｅ ｌｈ ｏ ｔ ｏ ｒ ｕ ｎ ． １ ｎ ． １ ± ． ０ ｉ ｅ ｕ ｓ ｍｐ ｅ ｆ ａｔ ｙ ｃ ｎ ｒ ｌ ｏ ｐ．Ｓ ａ ｉ ｔ ａ ｎ ｌ ｓｓｏ ｒ ｄ ｔ ｎ ｌ ｈ ｇ ｔ ｔｓｉ ｌ ａ ｙ ｉ ｆ ａ ｉ ｏ ａ ｃ ａ ｔ ｉ ＥＬＩ Ａ Ｓ ＨＩ ＶＡｂ ｒ ｓ ｌｓｓ ｏ ｄ ｔ ｅ ｅ ｗａ ｉｎ ｆ ａ ｔｄ ｆｅ ｅ ｃ ｅ ｗｅ ｎ ｈｅ ｌｈ ｏ ｔｏ ｒ ｕ ｎ ｔ ｅ ｒ ｕ ｓ（ ｘ ｅ ｔｎ ｎ— ｆ ｒｎ ｓ ｒ ｍ ｆｓ ｕ ｙ ｇ ｏ ｐ ．Ｔｈ ｒ ｓ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｈ ｒ ｓｓｇ ｉ ｃ ｎ ｉ ｒ ｎ ｅ ｂ ｔ ｅ ａｔ ｙ ｃ ｎ ｒ １ｇ ｏ ｐ ａ ｄ ｏ ｈ ｒｇ ｏ ｐ ｅ ｃ ｐ ｏ ｉ ｆ ｉ ｉ ｅｕ ｏ ｔｄ ｒ ｕ ） ｂ ｅ ｅ ｗａ ｎ ｉ ｎ ｆ ａ ｔｄｆｅ ｅ ｃ ｎ ｍｏ ｉｉｄ ＥＬＩ ｏ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｉｆ ｒ ｎ ｅ ｉ ｄｆｅ ｉ ＳＡ ＶＡｂ ｒ ｓ ｌｓｂ ｔ ｅ ｅ ｌｈ ｏ ｔｏ ｒ ｕ ｎ ｔ ｅ ｒ ｕ ｓ ＨＩ ｅ ｕ ｔ ｅ ｗｅ ｎ ｈ ａｔ ｙ ｃ ｎ ｒ ｌｇ ｏ ｐ ａ ｄ ｏ ｈ ｒｇ ｏ ｐ ．Ｃｏ ｅｕｓ ｎ Ｔｈ ｅ ｕ ｗｉｈ Ｆ ｂ ａ ｄ ＲＢＣ ｉ ｔ ｒｅ ｅ ｎ ｌ ｉ ｅ ｓ ｒ ｍ ｔ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ ｆ ｒ ｗｉ Ｉ Ａ Ｉ ｔ ＥＬ Ｓ Ｈ ＶＡｂ ．ａ ｄ ｉ ｉ ｎ ｃ ｓ ａ ｙ ｔ ｌ ｎ ｔ ｈ ｉ ｔ ｒ ａ ｃ ． ｈ ｎ ｔ ｓ ｅ ｅ ｓ ｒ ｏ ｅｉ ａ ｅ ｔ ｅ ｄｓ ｕ ｂ ｎ ｅ ｍｉ
酶联免疫吸附试验一步法检测HBsAg有关问题探讨
酶联免疫吸附试验一步法检测ＨＢｓＡｇ有关问题探讨1 试剂按说明书保存试剂盒，操作时从冰箱取出，放置于37℃环境恒温15分钟，使试剂温度恢复至37℃后再进行，因一步法反应时间为30分钟，试剂从冰箱取出恢复到反应温度需要时间，如果按常规放置至室温，反应时间达不到要求，抗原抗体反应不完全而可能出现假阴性。
2 血液中某些成分的影响红细胞：当血清中混有一定浓度的红细胞时，由于红细胞表面有大量的活性物质，容易与反应孔发生非特异性吸附，黏附于孔壁不易被洗脱，加入底物显色后出现假阳性。
纤维蛋白抽血后如果检测过早，由于血清中的纤维蛋白没有完全沉淀，血清中过多的纤维蛋白有类同于红细胞与反应孔相吸附的作用而出现假阳性结果。
避免血清中这些成分的影响，抽血后让血清自然析出，再离心分离血清。
脂血或乳糜血：脂血或乳糜血可能造成血清黏度加大或屏蔽抗原抗体之间的相互作用，从而降低抗原抗体的结合，使结果出现假阴性。
此外，血清中如果含有类风湿因子、自身抗体等非特异性物质，会对ELISA一步法产生干扰，造成假阳性结果，不同时期多次采血有助于减少假阳性。
3 后带现象即是钩状效应：当标本中待测抗原浓度过高时，过量的抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，抗原抗体反应比例不当而不形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量而出现假阴性。
由于后带现象是血清中肝炎病毒浓度过高引起，体内病毒复制活跃，常常伴有HBeAg阳性，传染性极强，如果临床上只作单项HBsAg 检测，可能造成少数HBsAg阳性者漏检。
因此，临床上应普及HBsAg 和HBeAg 双项检查，如果HBsAg阴性而HBeAg单项呈阳性，应按梯度稀释标本后再检测HBsAg，减少漏检。
4 标本溶血在实际工作中常见引起溶血的原因有：抽血时混入酒精、标本放置不当发生溶血、抽血器质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量太差导致溶血、由于病人严重脱水、低血容量休克等原因引起穿剌困难造成的溶血、分离血清时用竹签搅拌不当引起溶血等。
【doc】免疫学检测方法中的干扰因素和对策
免疫学检测方法中的干扰因素和对策现代中西医结合杂志ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2009Jul,18(21)量蛋白从尿中漏出使有效血容量减少,血液浓缩,而血脂蛋白代谢异常,高血脂症,导致血液黏稠度增加.蛋白质的丢失,肝脏代偿性合成蛋白增加,引起机体凝血,抗凝和纤溶系统失衡,导致高凝状态.肾病综合征患者血小板功能亢进及应用激素治疗等均可加重高凝状态.血液黏稠度增加,高凝状态对肾病的进展,恶化起重要作用,因此.肾小球疾病的治疗中,抗凝治疗尤为重要.丹参有活血化瘀,理气通络,除烦安神的功能.丹参注射液由中药丹参精制而成,具有改善微循环,抗凝,促进纤溶,抑制血小板聚集,抑制血栓形成的作用.临床药理显示其有效成分丹参酮具有抗凝,去纤,溶栓和降脂作用,促进肾组织病理改变的恢复.黄芪为补气要药,具有补中益气,补气生血,补气行滞,益卫固表的功能.黄芪注射液由黄芪精制而成,含有黄芪皂甙,黄酮类,多糖类等多种有效成分,能提高血浆组织中cAMP的含量,增强免疫功能,利尿,降压,能消除实验性肾炎蛋白尿L2J.有研究证明,黄芪能使肾病综合征患者蛋白质合成增加_3_3.此外,黄芪尚能减少激素,细胞毒药物不良反应,这是由于黄芪具有增强免疫功能和双向免疫调节作用.因此,两药合用,能起到协同作用,提高机体免疫力,改善病理状态,提高疗效,降低复发率,减轻西药的毒副作用.通过临床加用黄芪注射液和复方丹参注射液的疗效观察,20d内治愈率62%,总有效率100%,2个月后随访,全部病例达治愈标准,取得了较为理想的临床疗效,值得进一步在临床推广应用和不断完善治疗方案.[参考文献][1]叶任高.内科学[M].6版.北京:人民卫生出版社,2004:508[2]雷载权.中药学[M].上海:上海科学技术出版社,1995:205; 280—281[3]李丽英,于宏,潘缉圣,等.黄芪与当归对肾病综合征患者总蛋白质代谢的影响[J].中华内科杂志,1995,34(10):670—672 [收稿日期]2009—02—15免疫学检测方法中的干扰因素和对策陈金超,刘涤瑕,王丽,董风珍,徐立风(解放军第532医院,安徽黄山245041)[关键词]免疫学检测;干扰因素;对策[中图分类号]R446.61[文献标识码]B随着基础免疫学研究的深入和现代免疫学理论的建立,使大量免疫学检测技术被不断地创新,发明,在临床疾病诊治中的应用也不断推陈出新.这就要求检验人员不断掌握最新的临床免疫学知识和各种新的检验方法.为保证实验结果的正确性和可靠性,必须对实验整个过程中各个环节中的干扰因素有比较清楚的掌握和了解.笔者分析了标本内在因素以及人为因素等外在因素对免疫检测结果造成的影响…,探讨了如何在临床工作中注意和解决这些干扰,以保证结果的准确性的对策,现报道如下.1免疫学检测干扰因素和对策在临床检测过程中,标本自身及前处理所造成的干扰因素有类风湿因子(RF),嗜异性抗体,自身抗体,补体,纤维蛋白,溶血或黄疸,交叉反应物质,外源性物质,交叉污染等_2J.如何排除这些因素干扰,对免疫检测结果将起到重要作用. 1.1RF患者体内存在的RF能显着干扰许多免疫学检测方法,其中IgM,IgG型RF可以与免疫检测系统中的捕获抗体及标记二抗的Fc段直接结合,从而导致检测结果假阳性或假阴性升高.RF对不同检测系统的干扰程度有所差异,影响程度并不与RF的浓度成正比.在使用RF吸附剂后再检测, 可有效纠正错误结果.捕获抗体检测用F(ab')2替代完整的IgG,标本用连有热变性(63℃,10rain)IgG的固相吸附剂(Euroimmune公司)处理(将热变性IgG加入到标本稀释液或血清中同样有效),4℃过夜离心后再检测;检测抗原时,可以[文章编号]1008—8849(2009)21—2575—02用终浓度0.1mol/L2一巯基乙醇(2一ME)等加入到标本稀释液或标本中,使RF(IgM型)降解.1.2嗜异性抗体嗜异性抗体通常是指与其他种类动物的免疫球蛋白产生反应的人类抗体,具有广泛的种特异性.免疫检测系统中大量使用单克隆抗体,嗜异性抗体可与啮齿类动物IgG的Fc段结合,这样嗜异性抗体既可与检测系统中的捕获抗体结合,又可和标记抗体结合,造成检测结果假阳性或假阴性升高.嗜异性抗体干扰的程度,频率与患者的疾病状态,年龄,性别等无关,可在标本稀释液或待检标本中加入过量的动物Ig(s)处理,但加入量不足或亚型不同时无效(要与捕获抗体和标记抗体的Ig亚型相同).捕获抗体使用F(ab') 2.切除Fc段.1.3自身抗体嗜靶抗原的自身抗体,如抗甲状腺球蛋白,抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体,能与靶抗原结合形成复合物,在免疫检测系统中均可对靶抗原的测定结果造成负性干扰L3].判断嗜靶抗原的自身抗体对检测的负干扰,应紧密结合患者的疾病诊断,病史,其他实验室检查结果综合分析.为避免以上情况出现,解决的办法是:测定前标本需用理化方法将免疫复合物解离后再测定.解离液组成:0.3%TritonX一100,1.5%CHAPS,15%SDS;100L标本,50L解离液混匀,56℃30min处理.1.4补体免疫检测系统中捕获抗体在向固相包被中和标记抗体的标记过程中,抗体分子发生变构,其Fc段的补体现代中西医结合杂志ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2009Jul,18(21) Clq分子结合位点被暴露出来,使Clq可以将二者连接起来,从而造成假阳性.一些公司为了增加检测的敏感性,使用链霉亲和素包被固相,将捕获抗体用亲和素标记,此过程也可引起捕获抗体的构象发生改变,造成假阳性或假阴性升高.可用终浓度10～40mmol/LEDTA处理标本,灭活补体,用53℃,10min或56℃,30rain加热血清使Clq灭活.1.5纤维蛋白在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下,正常血液采集后30min开始凝固,2h后完全凝固.临床检验工作中,有时为了争取时间快速检测,常在血液还未开始凝固时或未完全凝固时即强行离心分离血清,此时血清中仍残留部分纤维蛋白原,在免疫检测过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果,尤其是在大批量标本使用ELISA检测时,操作人员不注意,最易造成错误结果.为避免这种情况出现,解决的办法最好是血液标本采集后必须使其充分凝固再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂.怀疑检测结果存在纤维蛋白干扰的标本,最好将标本4～10℃放置过夜,离心后再检测.1.6溶血或黄疸各种人为原因引起的标本溶血,导致红细胞破坏,血红蛋白以及细胞碎片和蛋白质等释放出来.溶血对免疫检测的作用不仅是游离血红蛋白的影响,更多的是细胞碎片和蛋白质等其他溶血产物;血红蛋白具有过氧化物酶活性,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色.溶血因测定方法的不同可导致对免疫学检测的正向或负向干扰,且影响大小也有所差异.一项针对溶血对电化学发光法影响的研究发现,cTnT测定浓度的负偏倚与血清中血红蛋白浓度相关,血红蛋白浓度每增1gilL,cTnT>0.1Mg/L的可能性下降2.5%_4J.标本中结合胆红素和未结合胆红素任一或两者含量的增高都会对采用免疫学原理的检测系统产生负干扰.因此应特别注意人为因素导致上述物质干扰.1.7交叉反应物质待检标本中存在类地高辛,类AFP样物质等,是一些与检测的靶抗原有交叉反应的物质.这类交叉反应物质在用多克隆抗体测定抗原时对测定结果影响不大,但在用单克隆抗体测定抗原时,如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时,会出现假阳性结果[.1.8外源性物质外源性物质常常是由于用于免疫测定的血标本处理及保存不当,添抗凝剂等不当所致L6J.标本受细菌污染:因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶,被细菌污染的标本在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,可产生非特异性显色而干扰测定结果.标本管中添加物质的影响:抗凝剂,酶抑制剂(如NaN可抑制ELISA系统中HRP活性)及分离血清的分离胶等均对免疫检测有一定干扰作用.标本保存不当:在冰箱中保存过久的标本,血清中IgG可聚合成多聚体,AFP可形成二聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底过深,甚至造成假阳性;有时抗原或抗体免疫活性减弱,亦可出现假阴性.为克服上述干扰,ELIsA测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存.冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定, 但混匀时应轻柔,不可强烈振荡.标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果.1.9操作不当一交叉污染定性免疫测定已广泛用于感染性病原体抗原和抗体检测,目前国内应用最广泛的是ELISA 等.由于测定操作和/或全自动加样系统吸头重复使用,常有标本间的交叉污染所致"拖带"现象,致假阳性结果的出现.标本交叉污染不光是导致假阳性,亦会因为乙肝疫苗的普遍免疫,标本中存在的抗HBs可使受污染标本中可能存在的HBsAg检测受抑,而致假阴性.目前的全自动加样系统,不管是一次性加样针还是永久性加样针,均难以避免样本的污染问题.特别是当遇到高浓度的抗原或抗体,沿加样方向被污染的甚至可能不只1个孔.为了排除这种污染造成的假阳性,建议当同一行/歹0上(沿加样方向)出现连续阳性,并经复查仍为阳性时,应同时采取新鲜标本进行检测来加以证实.2免疫检测中值得注意的问题2.1钩状效应由于待检标本中抗原浓度的显着升高,而致捕获抗体不足所造成的检测结果假阴性或假低测定值,这种现象可以出现在任何免疫学检测中,一步法检测更易见.在临床检测中应密切关注容易出现钩状效应的几个项目:甲胎蛋白(AFP),HBsAg,HBeAg,免疫球蛋白,大便隐血(OB),CA125等.预防和处理:关注患者的其他实验室检查结果和患者的临床诊断;不放过任何异常的测定值或模式;使用免疫渗透层析法快速验证;尽可能使用二步法进行检测.处理:用正常人血清系列10倍稀释再检测.2.2复检特殊项目出现阳性/阴性时应及时复检,复检必须使用另一种试剂盒,最好方法学也不一样.HBsAg,抗一HBs,HBeAg,抗一abe的检测最后可以使用"中和法"来鉴定. 抗一HCV的检测目前国内外的试剂盒单独使用均有可能出现假阴性或假阳性,联合使用可以减少错误结果,并可用RT—PCR鉴定.[参考文献][1]程艳杰,范存琳,王旭,等.ELISA方法检测HbsAg假阳性一例[J].中华检验医学杂志,2009,32(1):102—103[2]叶千红,张丽霞.关于标本因素对ELISA检测结果影响的分析[J].中国实验诊断学,2003,7(5):440—441[3]郭彤丽.ELISA检测的影响因素的分析[J].实用医技杂志, 2007,14(21):3748[4]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006:580[5]许斌,朱虎定.ELISA检测HbsAg影响因素的探讨[J].临床检验杂志,2000,18(4):232[6]武国威,李桂芹.标本污染致乙肝表面抗原假阳性1例[J].中国社区医师,2007,23(9):85【收稿日期]2009—02—25。
酶联免疫吸附试验的干扰因素和对策
性。
１ ＬＳ Ｅ ＩＡ检测干扰 因素和对策
１１ 标本 因素 ．
１１ 内源性干扰物质 ．． １
１１ ． 类 风湿 因子 （ Ｆ ： ． １１ ． Ｒ ）患者体 内的 Ｒ Ｆ能显著干扰 Ｅ ＩＡ ＬＳ
检测 ，其 中 ＩＭ、ｇ ｇ ＩＧ型 Ｒ Ｆ可 以与 Ｅ ＩＡ检 测中的捕获抗体 ＬＳ 及标记二抗的 Ｆ 段直接结合 ， 而导致假 阳性或假 阴性检测 ｃ 从
１１ 外 源 性 干 扰 物质 ．． ２
为有用。急性感染 时 ， Ｍ抗体滴度通常很高 ， Ｆ滴度相对要 Ｉ ｇ Ｒ
低得多。因此 ， 在测定前对 标本进行稀释 ， 特异的 ＩＭ 因高滴 ｇ 度存在仍可检 出 ，而非 特异的 Ｒ Ｆ则会 因稀 释变成非 常低 的 滴度 ， 而能够减少 Ｒ 从 Ｆ的干扰 。 １ ．． 补体 ： ＬＳ ．１ １ ２ Ｅ ＩＡ试 验 固相 抗体 和酶标二 抗可 因其在 固 相吸附及标记 过程 中，抗体 分子发生变构 ，其 Ｆ 段 的补 体 ｃ
医技杂志 ２ １ 年 １ ０１ ２月第 １ ８卷第 １ 期 ２
Ｊｕｎ ｌ ｆ ｒｃ ｃｌ ｄｃｌ ｈ ｓ ｏ ｒａ ｏ Ｐａｔ ａ Ｍｅｉａ Ｔ ｃ ｇ ｅ ， ｉ
堕 堕 ２ ！ ！ ！ ： Ｑ ： ！ １
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实验室管理 ・
酶联免疫吸附试验 的干扰因素和对策
１１１ 异 嗜性抗体 ： ．．． ３ 人血清 中含 有抗 啮齿 类动物（ 鼠、 、 如 马
羊等 ） 免疫球蛋 白（ｇ 的抗体 ， Ｉ） 即天然 的异 嗜性抗体 。其 主要 通过非竞争机制干扰 Ｅ ＩＡ检测 ， ＬＳ 异嗜性抗 体可与啮齿类 动
酶联免疫检测技术(ELISA)与核酸检测技术(NAT)在血液筛检中的应用效果
酶联免疫检测技术 (ELISA)与核酸检测技术 (NAT)在血液筛检中的应用效果【摘要】目的分析酶联免疫检测技术(ELISA)与核酸检测技术(NAT)在血液筛检的应用效果。
方法选取本院2018年12月-2020年12月收集的500份血液标本开展本次研究，制作成三管标本，500份血液标本均在4h内进行离心处理，展开ELISA检测和NAT检测，分析两种方法的检测效果。
结果 500份血液标本的NAT检测结果为有12份为NAT(+)，有488例为NAT(-)，ELISA检测结果为有10份为ELISA(+)，有490份为ELISA(-)，ELISA(-)NAT(+)有3份，均进行HBV DNA 定量检测，结果多数为＜3.0×10拷贝/ml，NAT再次检测结果仍为阳性。
结论在血液筛检中应用核酸检测技术(NAT)能够获取到更高的诊断效果，有助于提升HBV DNA检测的灵敏度，具有推广价值。
【关键词】酶联免疫检测技术；核酸检测技术；血液筛检[Abstract] Objective To analyze the application effect of ELISA and NAT in blood screening. Methods 500 blood samples collected in our hospital from December 2018 to December 2020 were selected to carry out this study, and made into three tube samples. 500 blood samples were centrifuged within 4h, and ELISA and NAT detection were carried out to analyze the detection effect of the two methods. Results among 500 blood samples, 12 samples were nat (+), 488 samples were nat (-), 10 samples were ELISA (+), 490 samples were ELISA (-), 3 samples were ELISA (-) nat (+), all of them were HBV DNA quantitative detection, most of the results were less than 3.0 × 10 copies / ml, NAT re detection results were still positive. Conclusion the application of nucleic acid detection technology (NAT) in blood screening can obtainhigher diagnostic effect, which is helpful to improve the sensitivity of HBV DNA detection and has promotion value.[Key words] enzyme linked immunosorbent assay; nucleic acid detection; blood screening血液传染病是临床上的常见病，同时也是采血机构中非常重要的一项监测技术，在保障患者血液安全中发挥着至关重要的作用【1】。
纤维蛋白、红细胞干扰酶联免疫测定的实验性探讨
１ 照组 ： 机采集 体格检查 正 常， ｓ ｇ 随 ＨＢＡ （一） 心 、 ，
肺、 、 、 肝 肾 止凝 血 无 异常 及无 其他 合并 症 者 １０例 ， ５ ０ 男 Ｏ 例， ５ 例 ， 女 Ｏ 年龄 １ ５～６ ０岁。研究 组 ： 机采 集我 院 ２ ０ 随 ０４ 年 １月 ～２ ０ ０５年 ９月 院 校 进 行 健 康 查 体 已 确诊 Ｈ ｓ ｇ ＢＡ
Ｌ ｅ ｙ ＩＺｈ ｎ ｕ，Ｃ ＨＥＮ ｉ ｎ，ＣＨＥＮ ｒ ｎ ｘａ Ｚｉｏ ｇ
【 摘
要 】 目的
探讨血清 中混有纤维蛋 白、 红细胞对酶联免疫吸 附试验测定的影响。方法 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ常
规法 （ 下称常规法） Ｅ ＩＡ改 良法（ 和 ＬＳ 下称改 良法） 分别对照组 １０例 ＨＢＡ （一） ０ ｓｂ 的血 清、 究组 ６０例预 先 研 ０
浆、 带红细胞血清 、 纤 维蛋 白血 清、 无 临床 试 验 组病 人 血 清及 正 常对 照 组血 清的 测 定值 分 别 为 （ ． ７ ０８ ９± ０ ５２ ，０８ ４． ．７ ） （． ３ ０ ３ ２ ，０ ８３± ． ６ ） （ ． １ ０ ３ ５ ， ． １ ） （． ５ ４ ４９ ，０６ ５± ． １ ） （ ．２ ０ ４ ９ ，０ ６ ５± ． ０ ） 经统计 学分析 ， － ０ 正常对 照组 血 清与研 究组的血浆 、 带红 细胞血 清及 临床试验 组病人血 清存在差异 （ ０ ０ ） 与研 究组 的无 纤维蛋 白血 清 Ｐ＜ ．５ ， 差异 不大（ ＞００ ） 改 良法测定研 究组 的血浆 、 ｐ ．５ ； 带红 细胞 血清 、 无纤 维蛋 白血 清、 临床试 验组病人 血清及 正 常对照组 血清的测定值分别为（ ．２ ± ．３ ） （ ． ９ ０ ３ ４ ，０ ６ ５±０３ ５ ， ０ ６５±０ ３４ ，０ ６ ０ ０７ １ ０ ３ ２ ，０ ６ ４± ．２ ） （． ２ ．１ ）（．８ ．２ ） （ ． １ ± ．０ ） 经统计学分析， ０３１ ， 正常对照组血 清与研 究组的血 浆、 带红 细胞血 清及 临床试验 组病人 血清无差 异 （ Ｐ
血站实验室酶联免疫检测性能验证方法的探讨
１ ． ３ ． １ 检 出限 用康 彻思 坦 提供 的人 阴性 血 清将 质 控血 清稀 释 ５个 浓度 进 行 检 测 ， 检测结果的 Ｓ ／ Ｃ Ｏ值 趋 近于 １的标 本 浓 度 即为 最 低 检 出限 浓 度 。判 断 标 准： 可进 行检 出 限验 证 ， 用 康 彻 思 坦 提 供 的人 阴性 血 清将 质控 血 清 稀 释 到 最低 检 出限 浓 度 ， 同时 检 测 ２ ０
１ 材 料 与方法
孔 。２ ０孔 中有 超过 １ 孔 Ａ值 小 于 ｃ ｕ ｔ —ｏ ｆ值 ， 即为 检 出限判 定失 败 。 １ ． ３ ． ２ 符合 率 对 卫生部 临床 检验 中心 室 问质 评 标 本 检测 结果 进行 统计 分 析 。判 断标 准 ： 检 测 室 问质 评 的标本 结果 与靶 值结 果 比较 ， 正确 率应 Ｉ ＞８ ０ ％。 １ ． ３ ． ３ 灵 敏度 及 特 异性 在 １ ｄ之 内完 成 对商 品血 清 盘 的检测 ， 计 算 灵 敏 度 和 特 异 性 。判 断 标 准 ： 达 到 实 验室 制定 标准 ， 本 实验 室标 准 为 ＞ ９ ５ ％。 １ ． ３ ． ４ 精 密度 批 内精 密度 ： 在１ ｄ内连 续不 间 断检 测 质控 血清 ２ ０次 ； 批 间精 密 度 ： 每天检测质控血清 １ 次， 连续 检测 ２ ０ ｄ 。判 断 标 准 ： 批 内不 精 密 度 变 异 系 数 应 ＜１ ５ ％， 批 间不精 密度 变 异系数 应 ＜２ ０ ％。
２ ． １ 检 出限
８种 检 测 方 法 的 最 低 检 出 限 结 果 见
表１ 。检 出限验 证结 果显 示 ８种检 测 方法 的最 低检 出 限浓 度均 判定 正 确 。
表 １ 检 出限 结 果
酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析
酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析发表时间：2014-05-13T09:24:22.107Z 来源：《中外健康文摘》2013年第41期供稿作者：钱瑞[导读] 因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。
钱瑞（山丹县人民医院 734100) 【摘要】目的通过对酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析，探讨各因素对结果的影响，以便寻找解决的方法和加强质量控制，从而保证检测结果的准确性和精确性。
【关键词】酶联免疫吸附试验影响因素分析【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）41-0059-02 酶联免疫吸附试验(ELISA)是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测生物标本中微量的特异性抗体或抗原的临床检验方法，而且其反应中各组分的成本较为底廉，特别是对肝炎病毒的检测，最基层的医院也能开展。
因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。
为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的推动作用。
在从事检验工作多年中深知ELISA测定中影响因素较多，由于其操作步骤复杂，操作过程中每个环节都会对试验结果产生影响，甚至出现错误的结果，因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。
现将影响因素做以分析。
1 材料1.1试剂的准备目各种ELISA试验均有商品化的专用试剂盒。
应选择质量优良、有批准文号且在有效期内的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作。
从冰箱中取出的试剂应放在室温下或37℃平衡30分钟再进行测试。
保存试剂盒的冰箱应经常检查储存温度并做好记录，冰箱应避免频繁开关,试剂使用前应摇匀。
1.2标本的准备酶联免疫吸附实验中标本的质量也是影响结果的关键因素之一，标本的干扰物质容易引起假阳性或假阴性的结果。
1.2.1严格执行样本的查对制度，接受标本应将标本上的标签与申请单逐一核对，验收签字。
免疫检测中的干扰
免疫检测中的干扰选译自《The Immunoassay Handbook (Fourth Edition)》翻译：武汉原谷生物科技有限责任公司免疫检测试验是现代临床实验室中一种重要的高敏检测技术, 但它们的致命弱点是它们易受干扰。
在病人的样本中存在干扰物质会导致错误的测试结果, 无论是假阳性或假阴性。
这个测试错误可能在临床上很重要, 并会导致对病人的误诊和灾难性后果。
对免疫检测试验中的干扰问题早已有大量综述性文章(Boscato et al., 1989; Boscato and Stuart, 1986, 1988; Braunstein, 2002; Diamandis, 2004; Ismail and Barth, 2001; Ismail et al., 2002b; Itoh and Yamaguchi, 1995; Jones, 2002; Kohse and Wisser, 1990; Kricka, 1999, 2000; Kricka et al., 1990; Kroll and Elin, 1994; Levinson, 1992; Tate and Ward, 2004; Van Kroonenburgh and Pauwels, 1988; Weber et al., 1990)。
在这里, 我们概述了免疫检测分析中干扰的范围, 消除因其存在于生物体液中的分析问题的方法, 和临床重要的例子。
免疫分析干扰是一个长期存在的问题, 可追溯到1900s 早期的血清学测试(Page and Heimoff, 1946; Seelman, 1918)。
正如一位作者在书信中所述, Wassermann 检测梅毒 (Seelman, 1918):" 在死亡和税收之外, 只有一件事我比这两者更确信的是，如果通过所描述的方法对我的血液进行测试，得到了一个阳性结果，我不会接受这是最终的诊断结果, 而是继续用另一种更准确和更可靠的方法进行测试。
酶联免疫吸附试验影响因素探讨
酶联免疫吸附试验影响因素探讨【摘要】ELISA法具有灵敏高、特异性强、重复性好的特点。
被广泛用于临床上多种疾病的检查、诊断，但在标本的采集、试剂的质量、操作的程序、结果的判断等方面受人为的因素影响较多，为了确保ELISA的准确度和精密度，保证临床安全用血，笔者就实际工作中常见的试验影响因素进行了总结探讨。
1 标本的采集1.1 防止污染血液标本的采集做到一人一针一管，吸样时，必需使用一次性移液嘴，以防污染。
1.2 及时测定血样采集后应及时检测，久置后细胞代谢，细菌繁殖，增加了许多异性物质，易产生溶血。
如不能及时测定，应将标本血清分离后放置在4℃冰箱中保存，但不超过3 d。
1.3 避免稀释标本在留取时，不能采用被保养液(抗凝剂)稀释后的抗凝血进行测定，否则被检测物的浓度降低，结果出现假阴性。
2 试剂的影响2.1 目前卫生部国家药品生物制品研究所对国内应用甚广的ELISA试剂，按照国家标准实行“批批检”，凡合格者，贴上国家防伪标签才能使用。
如HBsAg、抗,HCV、抗,HIV抗体等。
2.2 不同批号、不同厂家的试剂，由于酶标记物中酶的浓度不尽相同，与固相载体上的相应抗原或抗体发生特异性反应的程度不同，故不能混合使用。
对于超过有效期的试剂则严禁使用。
2.3 试剂的运输、贮存要在低温(2～8℃)条件下进行。
因酶类物质是一种特殊的蛋白质，久置、反复冻融或受热后，酶易失去活性，合格试纸条如果一次用不完时，应进行密封保存防止受潮。
3 操作的要求3.1 不同厂家生产的试剂其样品加入量、水浴时间、阴阳对照等各不相同，应严格按照说明书中要求进行，吸样要准确，试剂加入的顺序不能颠倒，每一步加样后均需在振荡器上充分混匀。
3.2 洗涤的效果直接影响实验结果的准确性。
每次洗板之前要配制新鲜的洗涤液，室温较低时，洗涤液要在水浴箱中先预温30 min。
用洗板机进行洗板时，每次都要吸净孔内洗液且不能留有气泡，倾去洗液时，必需用吸水纸吸尽洗液。
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。
1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。
3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。
能影响酶免疫测定结果的标本内源性干扰因素
能影响酶免疫测定结果的标本内源性干扰因素可能影响酶免疫测定ELISA结果的标本内源性干扰因素内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反应物质等。
在日常的临床血清(浆)标本中，有相当比例不同程度的含有上述各种干扰物质，从而导致测定结果的假阳性。
1．类风湿因子(rheumatoid factors，RF) 在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有较高或不同浓度的RF，RF一般为IgM型，亦有IgG和IgA型，RF具有与变性IgG产生非特异结合的特点，因为在ELISA测定中，其可与固相上包被的特异抗体IgG以及随后加入的酶标的特异抗体IgG结合，从而出现假阳性结果。
尤其是在捕获法IgM型特异抗体的测定中表现最为明显，因为此时固相包被的抗体为抗人弘链抗体，IgM型RF的存在可使其大量结合于固相。
为避免RF对ELISA测定的干扰，通常可以采取下述措施：(1)稀释标本：这在判断急性病原体感染的特异IgM抗体如抗HAVIgM，抗HBclgM，TORCH的IgM抗体检验等尤为有用。
因为急性感染时，血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高，而RF滴度通常相对要低得多。
因此，在测定前对标本进行稀释，特异的IgM因高滴度存在仍可检出，而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度，从而对测定几乎不产生干扰。
现在，有些特异IgM检测ELISA试剂盒不要求稀释标本，直接检测，这样虽然方便了实验室技术人员的操作，但容易出现假阳性结果，并且由于某些慢性感染，如HBV的感染，血循环中抗HBelgM可持续以一定的滴度存在，标本不做稀释即进行检测，即可出现阳性结果，从而失去抗HBclgM用于HBV急性感染的诊断价值。
因此，在临床实验室，一定要使用要求对标本做1∶1 000稀释的试剂盒进行检测，从而保证相应检验项目结果的可靠性及临床应用价值。
免疫分析中的干扰物及其排除_黄飚
・综 述・收稿日期:2003-09-05;修回日期:2003-11-06免疫分析中的干扰物及其排除黄 飚1,唐 炜2,金 坚1(1.江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214063;2.上海交通大学生物化学与分子生物学室)中图分类号:R392.33 文献标识码:A 文章编号:1006-1703(2004)03-0177-03 近十几年,国内外报道了免疫分析中的假阳性、假阴性或其他的特异性干扰,尤其对双抗体夹心法测定干扰明显。
干扰物有:血浆、血清蛋白(类风湿性因子、结合蛋白)、嗜异性抗体(Id )、人抗动物抗体(HAAA )和药物及其导致的代谢物等,尤其是后两种抗体干扰最多[1-4]。
随着鼠源性单克隆抗体(鼠McAb )应用于免疫显像及免疫治疗,使患者产生人抗鼠抗体(HAMA )。
而人在与宠物的接触中也易产生HAAA 。
注射疫苗及患腹腔疾病时,食物抗原也会产生HAAA 。
HAAA 和HAMA 的存在使免疫分析容易产生假阴阳性。
一旦假阳性或假阴性的结果没有被发现,患者将要承受不必要的治疗及身体和精神上的痛苦。
因而,鉴定和排除这些干扰物成为当务之急。
1 嗜异性抗体的干扰嗜异性抗体(Id )是由低纯度抗原引起的,又称之为对非特异性抗原产生的抗体应答。
1980年发现了Id 对AFP 的干扰。
它是一类结合力弱的抗体,分为天然抗体和自身免疫抗体。
前者又分为天然多特异性抗体、独特型抗体和类风湿性因子(RF )。
天然Id 是干扰物的主要来源[5]。
天然抗体结合力弱,具有多特异性,普遍存在于人体中,多为Ig G 。
它识别多种化学结构和自身抗原。
推测它是由体细胞突变导致抗体高变区的多样化而产生的[6]。
一旦抗原侵入免疫系统,则诱导体细胞突变,产生各种非特异性的抗体。
随着抗原促进细胞分化,体细胞突变以高频率进行,产生高特异性的抗体。
像RF 一类的抗体比天然抗体更多的体细胞突变。
天然抗体中的独特型抗体能和抗原结合又能和抗体结合的高变区,因此,它能和一些多特异抗体结合。
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（ ， 、 、 、 止凝血无异常 及无其 他合并症 者 １０例 ， 一） 心 肺 肝 肾、 ０ 其 组间资料 比较 采用 ｔ 检验 ， 内资料 比较 采用 因素配伍组方 差分 组 院 ２０ ０ ４年 １月至 ２ ０ ０ ５年 ９月院校 进行 健康 查体 已确诊 Ｈ ｓ ｇ ２ 结 果 ＢＡ （一） Ｈ ｓ ｂ 、 Ｂ Ａ （＋） 的志 愿者 ６０例 ， 中男性 ４ ０例 ， 性 １０ ０ 其 １ 女 ９
服抗凝 剂病人 １０例 ， ０ 年龄 １ ４～６ ， ２岁 疑有凝 血功能障碍 。 １２ 样本采集与分离 ．
红细胞血 清及 临床 试验组血 清 的改 良 检测 Ｈ ｓｇ的 ＳＣ 法 ＢＡ ／ Ｏ值
吸 附 法 测 定 ， 除其 干扰 是 必要 的 。 排
纤维蛋 白、 红细胞干扰 酶胞
酶联免疫吸 附试验
０ｍｉ， 每次浸 泡时 间 ３ ） 反应 板 ０ｓ ， 酶 联 免 疫 吸 附试 验 （ ｎｙ ｅ～ｌ ｋ ｄ ｉｍ ｎｓｒｅｔａｓｙ 温育 ３ ｎ 然后洗板机洗板 ５次 （ ｅｚｍ ｉ ｅ ｍ ｕ ｏｏ ｎ ｓ ， ｎ ｂ ａ
研 究组血 浆 、 细胞血 清及 临床试 验组 血清 的常 规法 检测 红
例， 年龄 （９± ） ， 、 、 、 止 凝血 功能 正常 。临床试 验 ＨＢＡ １ ２ 岁 心 肺 肝 肾、 ｓ ｇ的 Ｓ Ｃ ／ Ｏ值 与正常对照 比较 ， 统计学分 析存 在差 异 （ ＜ Ｐ
组： 随机抽样 Ｈ ｓｇ 一 病人 ２０例， 中肾透析 １０例， ＢＡ （ ） ０ 其 ０ 术后 口 ０ ０ ） 而研究组 分离胶 血清则无差异 （ ＞０ ０ ） 研究 组血浆 、 ．５ ， Ｐ ．５ ；
（、５ ± ．７ ）（ 、３ ± ．１ ） （．２ ± ．６ ） （． １ ± ．０ ） 经统计 学分 析 ， 常对照 组血 清与研 究组 的血 ０８４ ０４９ ，０６５ ０３２ ， ８３ ０４９ ，０ ６５ ０ ３５ ， ０ 正
浆、 带红细胞血 清及 临床 试验 组病 人血清存在的差异 （ ＜ ．５ ， Ｐ ０ ０ ） 与研 究组的无纤维蛋 白血清差异 不大（Ｐ ＞ ．５ ； ０ ０ ） 改 良法测定研 究组的血浆 、 带红细胞 血清、 纤维蛋 白血 清、 无 临床 试验 组病人 血清及 正 常对 照组血 清的 测定值 分别为 （ ． ０ ７ １± ．３ ） （ ．９ ０ ３ ４ ，０ ６ ５± ．１ ） （ ．８ ０ ３ ４ ，０６ ０±０３ １ ， 统计 学分析 ， 常对照组血 清与 ２ ０ ３ ２ ，０ ６ ４± ．２ ） （ ．２ ０ ３ ５ ，０ ６ ５± ．２ ） （ ． １ ．０ ） 经 正 研 究组的血浆 、 带红细胞 血清及 临床 试验组病人血清无显 著差异 （ ＞ ． ５ 。结 论 Ｐ ００ ）
肖永贵（ 东莞市谢 岗人民医院检验科 广 东 东莞 ５ ３９ ） ２ ５０
【 摘要 】 目的 探 讨血清 中混有纤维蛋 白、 红细胞对酶联免疫吸 附试验 （ Ｌ Ａ 测定的影 响。方法 Ｅ Ｉ ＥＩ ） Ｓ ＬＳ Ａ常规 法（ 下
称常规法 ） Ｅ ＩＡ改良法（ 和 ＬＳ 下称改 良法 ） 别对 正常对 照组 １０例 乙肝 病毒 表 面抗原 （ ｓ ｇ （一） 分 ０ ＨＢＡ ） 的血 清， 究组 研 ６０例预先确诊 Ｈ ｓ Ｓ ０ Ｂ Ａ （一） 乙肝病毒表 面抗体 （ ｂＡ ） Ｈ ｓ ｂ （＋） 的血浆 、 带红 细胞血 清、 无纤 维蛋 白及 ２ ０例 ＨＢＡ （一） ０ ｓｇ 临床 试验 组病人血清进行配对 ＨＢＡ —Ｅ ＩＡ检测 。结果 ｓ ｇ ＬＳ Ｈ ｓ ｇ—Ｅ ＩＡ结果以 Ｓ Ｃ ±ｓ 表 示， ＢＡ ＬＳ ／ Ｏ（ ） 常规 法测 定研 究组的血浆、 带红细胞血 清、 无纤 维蛋 白血 清、 临床试验组 病人血 清及 正常对 照组血 清测定值 分别 为（ ．７ ０ ８ ９±０ ５ ２ ， ． １ ）
免疫 检测也起 借鉴作用 。
１ 资 料 与 方 法
法， 所不 同的是洗板 。洗板 时先甩 去混合液 ， 双蒸水 快速洗 板 用 二次 ， 拍干 ， 然后洗板 机洗板 ３次 （ 每次浸泡时间 同上 ） 。 计 量资料 以均数 ±标 准差 （ ±ｓ） ｘ 表示 ，
１ １ 对 象 正常 对 照组 ： 机采 用集体 体格 检 查正 常 ， Ｂ Ａ １ ４３ 统计 学方法 ． 随 Ｈ ｓｇ ．、
维普资讯
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１４ ・ ０
ＪｕｎｌｆＣｉｉ ｌ ｎ ｘｅｍｅｔｌ ｄ ｉ ｏ． Ｎ ．５ Ｍａ ．０ ７ ｏｒａ ｌ ｃ ｄＥ ｐｒ ｎ ｉｎ Ｖ１６， ｏ ｏ ｎａａ ｉ ａ Ｍｅ ｃ ｅ ｙ２ ０
纤维 蛋 白 、 细 胞 干 扰 酶 联 免 疫 测 定 的 实验 性探 讨 红
每孔加 Ａ、 物液 各 １滴 ， Ｂ底 混匀 ， ３ ℃温育 １ ｉ， 置 ７ ５ｒｎ 每孔 ａ Ｅ ＩＡ） ＬＳ 测定 常见 的随机因素 ， 严重 影响测定结 果 ， 除有一 定 困 拍干 ， 排 ０ 滴 Ｍ Ｈ Ｓ 即进 行酶标 仪读板 。 难， 较少报道 。本研究 以乙肝有面抗原 （ ｓ ｇ ＨＢＡ ）一Ｅ ＩＡ进 行干 加终止液 ５ 或 １ ２ ：Ｏ ， ＬＳ 扰性 因素探讨 ， 然后将其 排除 简易化 、 文件 化 、 方便基层 医 院、 社 １４２ Ｅ ＩＡ改 良法检测 （ ． ． ＬＳ 下称改 良法 ） 试 剂平衡 、 洗液稀 释、 区应 用 ， 进行 乙肝病毒抗原体普查 ， 为预防 乙肝服务 ， 对其他酶联 加样 、 酶标液 、 育温 度 时间 、 加 温 加底 物、 终止 、 板都 同常 规 加 读