沙门氏菌诊断血清说明书
2010版沙门氏菌检验资料
沙门氏菌属的生物学特性
培养特性：
沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10～42 ℃都可生长，最适 生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。 营养琼脂平板上：35～37℃培养18~24h，其菌落大小一 般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。 血平板上：中等大小的灰白色菌落。 绝大多数沙门氏菌有规律的发酵葡萄糖产酸产气，但也
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（pH7.2），KCN
生化鉴定 试剂盒 或全自动 微生物 生化鉴定 系统+
A1
A2
甘露醇+、山梨醇+
A3
ONPG-
反应 结果 与左侧 描述 不符
沙门氏菌，血清学试验
报 告
非沙门氏菌
5、血清学鉴定
a）抗原的准备 一般采用 1.2％～1.5％琼脂培养物作为玻片凝集 试验用的抗原。 O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的 （如2 ％～3％） 培养基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮 沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在 0.55％～0.65％半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓 延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过 装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻管1次～2 次, 自远端取菌培养后再检查。 返回
蛋白胨水、靛基质试剂 氰化钾（KCN ） 培养 尿素琼脂 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚 β-D 半乳糖苷 （ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O 和H 诊断血清。 生化鉴定试剂盒
操作步骤
1、前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养 基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间， 样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增 殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制 非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的 识别。 4、生物化学筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门 氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。
0040沙门氏菌生化试验检验操作规程
目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。
依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。
范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。
责任人QC负责人、化验员。
内容1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。
1.1仪器：托盘天平1.2玻璃器皿：150ml锥开瓶、试管、载玻片1.3试液：1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。
1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。
1.4染色剂：1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。
1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。
1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。
1.5培养基：1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。
1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。
1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。
1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。
1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。
沙门氏菌血清型的正确书写格式
一、概述沙门氏菌是一种寄生在动物肠道内的细菌，可以通过食物和水传播给人类，引起食物中毒和胃肠道疾病。
由于沙门氏菌的血清型众多，正确书写其血清型成为临床医学和科研中的重要问题。
本文将介绍沙门氏菌血清型的正确书写格式及相关注意事项。
二、沙门氏菌血清型的基本概念1. 沙门氏菌的分类沙门氏菌属于革兰氏阴性菌，是一类食源性病原菌，可引起沙门氏菌病和肠炎等疾病。
根据O抗原和H抗原的组合形式，沙门氏菌可分为不同血清型。
2. 沙门氏菌血清型的意义沙门氏菌血清型的不同代表了不同的致病菌株，对于流行病学调查、病原菌追踪及疫苗研制等具有重要意义。
正确书写沙门氏菌血清型是保证实验结果准确性的前提。
三、沙门氏菌血清型的正确书写格式1. 沙门氏菌血清型的表示方法沙门氏菌血清型的表示方法通常为“O抗原+H抗原”，其中O抗原代表细菌的外膜抗原，H抗原代表细菌的鞭毛抗原。
如O4:H12表示该沙门氏菌株的O抗原为4型，H抗原为12型。
2. O抗原和H抗原的书写规范（1）O抗原的书写规范O抗原应以大写字母“O”开头，后跟阿拉伯数字表示型号，如O4。
（2）H抗原的书写规范H抗原应以大写字母“H”开头，后跟阿拉伯数字表示型号，如H12。
3. 血清型书写格式示例正确的沙门氏菌血清型书写格式应为“O抗原+H抗原”，如：O4:H12。
在正式文献、研究报告和临床诊断中，应严格遵循这一格式。
四、关于沙门氏菌血清型书写的注意事项1. 注意大小写在书写沙门氏菌血清型时，应注意O抗原和H抗原的大小写格式。
大写的“O”和“H”有助于准确识别并避免歧义。
2. 注意数字和符号在表示O抗原和H抗原的型号时，应使用阿拉伯数字，并用英文冒号“:”分隔，避免使用其他符号或文字造成混淆。
3. 注意全称和缩写在一些场合，为了简洁与准确，人们可能会采用缩写形式表示沙门氏菌血清型，例如“4:12”表示O4:H12。
但在正式书面文献中，应尽量使用全称以确保准确无误。
五、结语正确书写沙门氏菌血清型对于科研工作和临床诊断具有重要意义。
2020年沙门氏菌检测精编版
沙门氏菌检测1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1 冰箱：2℃～5℃。
1.2 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。
1.3 均质器。
1.4 振荡器。
1.5 电子天平：感量0.1g。
1.6 无菌锥形瓶:容量500ml，250ml。
1.7 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。
1.8 无菌培养皿：直径90mm。
1.9 无菌试管：3mm× 50mm、10mm× 75mm。
1.10 无菌毛细管。
1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
1.12 全自动微生物生化鉴定系统。
2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录中1。
2.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB ）增菌液：见附录中2。
2.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录中3。
2.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录中4。
2.5 HE琼脂：见附录中5。
2.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD ）琼脂：见附录中6。
2.7 沙门氏菌属显色培养基。
2.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录中7。
2.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中8。
2.10 尿素琼脂（pH7.2）：见附录中9。
2.11 氰化钾（KCN ）培养基：见附录中10。
2.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录中11。
2.13 糖发酵管：见附录中12。
2.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录中13。
2.15 半固体琼脂：见附录中14。
2.16 丙二酸钠培养基：见附录中15。
2.17 沙门氏菌O和H诊断血清。
2.18 生化鉴定试剂盒。
3 操作方法3.1 试验前准备3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀释剂等移至操作室内。
准备好足够用量，避免操作中出入操作间。
3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置30min。
沙门氏菌属诊断血清说明书
xx属诊断血清学试验操作程序1.目的制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。
2.原理用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。
3.试剂及实验设备3.1xx属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙门氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。
4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。
4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用O多价A~F群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范围内，因97%以上的沙门菌都包括在A~F6个O群之内，如果不凝再使用其他O抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。
若与多价O抗血清不凝集，有如下3种可能：①含有Vi抗原；②A~FO群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。
可按下述方法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。
1份不经处理，为活菌液，另1份放100°C水浴中30min，为加热菌液。
取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价O 抗血清分别进行玻片凝集试验。
根据结果作如下分析：①活菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于C群或D 群菌，用O7和O9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~FO群之外的沙门菌或其他菌属细菌，需进行生化试验定属，若符合沙门氏菌属细菌特征，可送CDC鉴定；③加热菌与Vi抗血清凝集，而与A~F多价O抗血清不凝集者，可报告为阴性。
4.4血清型分析菌群确定后，分析被检菌的鞭毛抗原成分。
沙门氏菌检测血清学分型(选做)
《畜产品检测技术》电子教材沙门氏菌检测血清学分型（选做）一、血清学分型操作步骤（一）O 抗原的鉴定用A～F多价O 血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。
在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株，不能分型。
1.被A～F多价O 血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2和O11因子血清做凝集试验。
根据试验结果，判定O 群。
被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E4各亚群，每一个O 抗原成分的最后确定均应根据O 单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O 复合因子血清进行核对。
2.不被A～F多价O 血清凝集者，先用9种多价O 血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O 群血清逐一检查，以确定O 群。
每种多价O 血清所包括的O 因子如下:O 多价1 A，B，C，D，E，F群(并包括6，14群)O 多价2 13，16，17，18，21群O 多价3 28，30，35，38，39群O 多价4 40，41，42，43群O 多价5 44，45，47，48群O 多价6 50，51，52，53群O 多价7 55，56，57，58群O 多价8 59，60，61，62群O 多价9 63，65，66，67群（二）H 抗原的鉴定1.属于A～F各O 群的常见菌型，依次用表1所述H 因子血清检查第1相和第2相的H 抗原。
表1A-F群常见菌型 H抗原表2.不常见的菌型，先用8种多价H 血清检查，如有其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H 因子血清逐一检查，以第1相和第2项的H 抗原。
8种多价H 血清所包括的H 因子如下:H 多价1 a，b，c，d，iH 多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H 多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40H 多价4 1，2；1，5；1，6；1，7；z6H 多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H 多价6 z39，z41，z42，z44H 多价7 z52，z53，z54，z55H 多价8 z56，z57，z60，z61，z62每一个H 抗原成分的最后确定均应根据H 单因子血清的检查结果，没有H 单因子血清的要用两个H 复合因子血清进行核对。
沙门菌血清学检测标准操作规程
沙门菌血清学检测标准操作规程
1．目的
规范沙门菌的血清学检测标准操作规程。
2．原理
用已知的沙门菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为沙门菌。
3．试剂
沙门菌诊断血清，生理盐水。
4．质控
伤寒沙门菌ATCC50096阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。
5.操作步骤
5.1 首先用可疑菌与沙门菌O多价血清(A-F)进行凝集，若呈明显凝集，提示被检菌株可能属于A-F6个O群范围之内，再用H因子血清第一相（特异相）定型，最后用H因子第二相（非特异相）辅助定型。
5.2 若生化反应符合沙门菌，但A-F多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断O抗原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。
应将细菌制成菌悬液，放入沸水中加热15～30分钟，冷却后再次做凝集试验。
若去除Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A-F
以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。
6.结果判断
阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。
阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。
自凝：试验一侧及对照一侧凝集。
7.注意事项
伤寒沙门菌菌体表面常有一层Vi抗原。
它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。
此时应将菌悬液于100℃中煮沸1小时，以破坏Vi抗原，然后再做试验。
8.临床意义
主要用于沙门菌属的鉴定。
沙门氏菌检验详细流程
沙门氏菌属各生化群的鉴别
必要时按此表进行沙门菌生化群鉴定
项目
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
卫矛醇 ＋
＋
－
－
＋
－
山梨醇 ＋
＋
＋
＋
＋
－
水杨苷 －
－
－
＋
－
－
ONPG －
－
＋
－
＋
－
丙二酸 －
＋
＋
－
－
－
盐
KCN
－
－
－
＋
＋
－
注：＋表示阳性; －表示阴性。
沙门菌的其他鉴定
• API 20E • VITEK32 GNI＋ 卡片
沙门菌的血清学鉴定
无菌均质袋
选择性增菌与分离
• 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种 于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。 同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。
• 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼 脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色 培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生 长的菌落。
生化试验
• 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型 或可疑菌落，分别接种三糖铁（TSI）琼脂、 赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板； 取菌落一部分于斜面划线后穿刺底层。
• 接种针在接种TSI后不要灭菌，直接接种赖 氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板， 于36 ℃培养18 ～24 h，必要时可延长至 48 h。
沙门氏菌血清学分型
沙门氏菌血清学分型沙门氏菌是一类常见的致病菌，它可以引起人体多种疾病，如食物中毒、肠道感染等。
沙门氏菌血清学分型是对沙门氏菌进行分类的一种方法，通过对不同血清型别的沙门氏菌进行研究，可以帮助我们了解其流行病学特征和病原学特性，为疾病的防治提供重要依据。
沙门氏菌血清学分型基于沙门氏菌的抗原性质，主要通过凝集反应和补体结合反应来进行分类。
目前常用的分型方法主要有Kauffmann-White方案和Ewing方案，其中Kauffmann-White 方案广泛应用于临床和疫情监测中。
Kauffmann-White方案根据沙门氏菌的鞭毛抗原（H抗原）、鞭毛相联抗原（Hd抗原）和表面抗原（O抗原）的不同组合来进行分类。
其中，鞭毛抗原主要分为H1-H56型，鞭毛相联抗原主要分为Hd1-Hd30型，表面抗原主要分为O1-O181型。
根据不同的抗原组合，可以将沙门氏菌分为不同的血清型别，如O1:H1、O1:H2等。
Ewing方案则是根据沙门氏菌的鞭毛抗原和相联抗原进行分类。
它将鞭毛抗原分为a、b、c等不同的抗原型别，将相联抗原分为z1、z2等不同的抗原型别。
通过对不同的抗原型别进行组合，可以得到不同的血清型别，如a:z1、b:z2等。
沙门氏菌血清学分型的意义在于帮助我们了解不同沙门氏菌的流行情况和传播途径，为疾病的防控提供科学依据。
例如，在食物中毒事件中，通过对沙门氏菌的血清学分型，可以追溯病原菌的来源和传播途径，及时采取措施遏制疫情的扩散。
此外，沙门氏菌血清学分型还可以用于监测菌株的变异和流行趋势，为疫苗研发和疾病防治提供参考。
需要注意的是，沙门氏菌血清学分型虽然在临床和疫情监测中有重要意义，但并不是唯一的分类方法。
近年来，随着分子生物学和基因测序技术的发展，越来越多的研究采用基因分型方法对沙门氏菌进行分类。
这些基因分型方法不依赖于抗原性质，而是通过分析沙门氏菌的遗传信息来进行分类，具有更高的分辨率和准确性。
沙门氏菌血清学分型是对沙门氏菌进行分类的一种方法，通过对不同血清型别的沙门氏菌进行研究，可以了解其流行病学特征和病原学特性，为疾病的防治提供重要依据。
沙门氏菌检测试剂盒说明书
TMB底物(TMB Substrate).................................... 1×12mL
本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，请将阴性对照、阳性对照、二抗保存于-20°C。
4. 检测限：105细胞/ml
5.交叉反应：本试剂盒可检测沙门氏菌A、B、C、D、E血清型。
6．其他需要而本试剂盒未提的设备或材料
ü
酶标仪（450nm）
ü
恒温培养箱
ü
漩涡振ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ器
ü
移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
ü
多道移液枪：50-300ul（可选择）
ü
mGN培养基：包含10ug/ml新生霉素的GN培养基，可从市场上购买或按以下配方自制：
12×8 孔
1×阴性对照（1×Salmonella Negative Control）............. 1×1ml
1×阳性对照（1×Salmonella Positive Control）······· 1×1ml
50×HRP- 二抗(HRP-Conjugated Antibody #2)········· 3×50ml
ü
水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
ü
加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。
ü
孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。
ü
从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。
二抗稀释液(Antibody #2 Diluent)........................... 1×20ml
实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验
实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验1 目的1.1 理解沙门氏菌属生化反应及其原理1.2 掌握沙门氏菌属血清因子使用方法1.3 掌握沙门氏菌属的系统检验方法2 原理沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。
种类繁多，少数只对人致病。
其他对动物致病，偶尔可传染给人。
主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。
在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。
食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。
目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。
本实验以蛋品为检测样品，以已知的沙门氏菌和大肠埃希氏菌为对照。
3 材料3.1 菌种沙门氏菌（Salmonella sp.）大肠埃希氏菌（E.col.）3.2 检样冻肉、蛋品、乳品等。
3.3 培养基缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿（MM）增菌液、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、SS琼脂、EMB 琼脂、亚硫酸铋琼脂（B S）、三糖铁琼脂（TSI）、蛋白胨水、尿素培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、鸟氨酸脱羧酶试验培养基、丙二酸钠培养基、氰化钾（KCN）培养基、ONPG培养基、缓冲葡萄糖蛋白胨水、DHL琼脂、HE琼脂。
3.4 试剂吲哚试剂、V-P试剂、甲基红试剂、氧化酶试剂，沙门菌A—F多价诊断血清，革兰氏染色液等。
3.5 器具天平（称取检样用）、均质器或乳钵、显微镜、广口瓶、三角烧瓶、吸管、平皿、金属匙或玻璃棒、接种棒、试管架。
4 流程5 步骤5.1 前增菌和增菌沙门氏菌在食品加工过程中，常常受到损伤而处于濒死状态，因此经过加工的食品检验沙门氏菌时应进行前增菌，即用不加任何抑菌剂的培养基缓冲蛋白胨水（BP），进行增菌，使濒死状态的沙门氏菌恢复活力。
沙门氏菌属诊断血清说明书
沙门氏菌属诊断血清学试验操作程序1.目的制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。
2.原理用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。
3.试剂及实验设备3.1沙门氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙门氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。
4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。
4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用O多价A~F群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范围内，因97%以上的沙门菌都包括在A~F6个O群之内，如果不凝再使用其他O抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。
若与多价O抗血清不凝集，有如下3种可能：①含有Vi抗原；②A~FO群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。
可按下述方法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。
1份不经处理，为活菌液，另1份放100°C水浴中30min，为加热菌液。
取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价O抗血清分别进行玻片凝集试验。
根据结果作如下分析：①活菌与Vi 抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于C群或D群菌，用O7和O9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~FO群之外的沙门菌或其他菌属细菌，需进行生化试验定属，若符合沙门氏菌属细菌特征，可送CDC鉴定；③加热菌与Vi抗血清凝集，而与A~F多价O抗血清不凝集者，可报告为阴性。
4.4血清型分析菌群确定后，分析被检菌的鞭毛抗原成分。
沙门氏菌血清学鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除沙门氏菌血清学鉴定篇一：沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。
因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。
2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生h2s。
4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生h2s。
3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生h2s，多数产气。
赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的ph。
2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。
阴性试验管则始终呈黄色。
氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。
由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。
(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。
0040沙门氏菌生化试验检验操作规程
贵州明湖药业股份有限公司GMP文件目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。
依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。
范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。
责任人QC负责人、化验员。
内容1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。
1.1仪器：托盘天平1.2玻璃器皿：150ml锥开瓶、试管、载玻片1.3试液：1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。
1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。
1.4染色剂：1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。
1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。
1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。
1.5培养基：1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。
1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。
1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。
1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。
沙门氏菌血清学鉴定方法
沙门氏菌血清学鉴定方法沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性杆菌，它们可引起人类和动物发生沙门氏菌病，严重时甚至可导致死亡。
对沙门氏菌的血清学鉴定方法至关重要。
血清学鉴定方法是通过对沙门氏菌的抗原与抗体反应，从而进行菌株鉴定，可用于分类和识别不同类型的沙门氏菌。
血清学鉴定方法广泛应用于实验室诊断、食品安全监测以及流行病学调查等领域。
本文将详细介绍沙门氏菌血清学鉴定方法的步骤、原理和应用。
一、血清学鉴定方法的步骤沙门氏菌血清学鉴定方法的步骤一般包括菌种的培养、抗原制备、血清学试验和结果解读。
具体步骤如下：1. 菌种的培养：首先从患者或食品样品中分离到疑似沙门氏菌的菌落，然后进行单菌纯化培养，以获取纯种菌株。
2. 抗原制备：将分离到的沙门氏菌菌株进行培养、培养基发酵，制备成可供血清学试验使用的抗原。
3. 血清学试验：将不同血清反应的抗原与抗体混合，观察凝集、沉淀、变色等反应，并根据反应结果进行鉴定定性和定量。
4. 结果解读：根据血清学试验的结果，结合相关数据库或文献资料，对沙门氏菌进行分类和鉴定。
二、血清学鉴定方法的原理沙门氏菌血清学鉴定方法的原理主要是利用抗原与抗体之间的特异性反应，常用的血清学试验包括凝集试验、沉淀试验、中和试验、血凝素试验等。
这些试验通过观察抗原-抗体复合物的形成与粒子聚集、沉淀等反应来进一步鉴定沙门氏菌的类型和亚型。
三、血清学鉴定方法的应用沙门氏菌血清学鉴定方法在临床诊断、食品安全监测以及疫情调查中有着广泛的应用。
在临床诊断中，可通过血清学鉴定方法迅速鉴定患者感染的沙门氏菌类型，指导临床治疗。
在食品安全监测中，可用于检测食品样品中的沙门氏菌，保障食品安全。
在疫情调查中，可通过血清学鉴定方法对疫情源头进行溯源，帮助制定预防控制措施。
沙门氏菌血清学鉴定方法也为科学研究和学术交流提供了重要的实验手段。
沙门氏菌血清学鉴定方法是一种重要的实验室手段，对于疾病诊断、病原学研究和食品安全监测都具有重要意义。
沙门氏菌血清学监定的检验流程
沙门氏菌血清学监定的检验流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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有效期24个月。
参考文献
1.《中国生物制品检定规程》
2.Ewing.W.H. Edwards & Ewing’s Identification ofEnterobacteriaceae.
3.Carpenter K.P. (1968) Association of Clinical Pathologists Broadsheet 60.
2.本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。
3.本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。
4.本产品含有0.3%叠氮化钠作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。
5.若待检菌株与本产品均无明显凝集现象，应将可疑菌落经2YT固体斜面培养基培养12-16小时，用1ml生理盐水洗下培养物，于121℃高压15分钟或水浴煮沸30分钟，再进行血清凝集反应。
沙门氏菌属（3种）诊断血清学试验
注册证编号：国械注准20163401706
目的
制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。
原理
用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。
试剂及实验设备
生产企业天津生物芯片技术有限责任公司
1，沙门氏菌属诊断血清：天津生物芯片技术有限责任公司生产的规格为13种的沙门氏菌属诊断血清
2，试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
实验步骤
1，产品在使用前最好恢复温度到室温。
2，由患者粪便或其他材料分离的革兰氏阴性杆菌，经初步生化检查，疑似沙门氏菌时，应先分别用各种多价血清做玻片凝集试验，阳性反应时，再与相应的单价血清做玻片凝集试验，作出诊断。在洁净玻片上用接种环滴加两滴彼此分离的生理盐水。
8，凝集结果判断标准如下：
反应强度
判别依据
4+
反应澄清透明，凝集颗粒较多、较大
3+
反应澄清透明，凝集颗粒较多、较小
2+
反应有些混浊，但仍可见较多颗粒状凝集
1+
反应非常混浊，只有少许颗粒状凝集
-
反应完全混浊，未出现任何凝集
注意事项
1.本产品只能作为沙门氏菌O抗原血清型判定的辅助方法，最终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。
3，从营养琼脂平板上挑取分纯的菌落，分别与玻片上的生理盐水混匀。
4，用接种环滴加1～2滴血清（10-15ul）于玻片上一个菌落与生理盐水的混合液中，另一个菌落与生理盐水的
5，混合液中加入一滴生理盐水作为对照。
6，用接种环分别混匀玻片上的两种混合液。
7，轻轻摇动玻片1分钟，观察。于1分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。