BJ-SOP-WJ013-A1菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程

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检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程

一、前言

简要介绍微生物检定的重要性以及制定标准操作规程的目的。二、适用范围

明确本规程适用的微生物种类和使用场景。

三、术语和定义

列出本规程中使用的专业术语及其定义，如菌种、传代、检定等。

四、菌种的检定

4.1 检定目的

确保菌种的纯度和特性

4.2 检定方法

形态学检定

生化特性检定

分子生物学检定

4.3 检定记录

记录检定结果和相关数据

五、菌种的保存

5.1 保存条件

温度控制

湿度控制

光照控制

5.2 保存方法

冷冻干燥保存

低温保存

液体培养基保存

5.3 保存记录

记录保存条件和时间

六、菌种的传代

6.1 传代目的

维持菌种活性和特性6.2 传代方法

液体培养基传代

固体培养基传代

6.3 传代周期

规定传代的时间间隔6.4 传代记录

记录传代过程和结果

七、菌种的使用

7.1 使用前的准备环境消毒

个人防护

7.2 使用方法

接种

培养

观察和记录

7.3 使用记录

记录使用过程和结果

八、菌种的销毁

8.1 销毁条件

菌种不再需要

菌种污染或变异

8.2 销毁方法

高温灭菌

化学消毒

8.3 销毁记录

记录销毁过程和结果

九、安全和生物防护

9.1 安全操作规程

实验室安全

个人防护装备使用

9.2 生物防护级别

根据菌种危险性确定防护级别9.3 应急预案

制定微生物事故应急预案

十、质量控制

10.1 质量控制标准

制定菌种质量控制标准

10.2 质量控制检查

定期进行质量控制检查

10.3 质量控制记录

记录质量控制结果

十一、附录

包括菌种检定记录表、保存记录表、传代记录表、使用记录表、销毁记录表等。

十二、参考文献

列出编写本规程时参考的文献或标准。

菌种传代操作规程(1)

GMP管理文件

一、目标：为使菌种传代操作规范化、制度化，故建立此规程

二、适用范围：菌种传代须按本规程实施。

三、责任者：微生物程度检验化验员，质量检测中心主任。

四、正文：

1、培养基制备

按微生物程度检验用稀释剂、培养基配制操作规程及斜面配制操作规程配制好对应培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、沙门菌、用胰酪大豆胨琼脂斜面培养基，白色念珠球菌、黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，制备好培养基预培养48小时后，确定无菌落生长方可使用。

2.菌种传代

2.1菌种传代前应准备好适于该菌种生长培养基和培养设备，全部操作均应在符合生物安全保护生物安全柜内进行。

2.2点燃酒精灯，在火焰上部操作，将原有菌种斜面（简称菌种管）和待接种新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后，使试管内斜面向上，两支试管口平齐，应斜持试管呈45°角，以免管底凝集水浸湿培养基表面。用右

手在火焰旁转动两支试管胶塞，方便接种时易于拨取。再用右手持接种环柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上灼烧。将接种环烧红约30s，随立即接种棒金属部分在火焰上烧灼，以根本灭菌。用右手小指和手掌之间和无名指和小指之间，在火焰旁分别拔除两支试管胶塞，持住。在将试管口在火焰上经过以杀灭管口细菌，但勿烧过热，将烧灼接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长培养

基上，如有溶印则表明接种环未冷却，待冷后，再从斜面上挑取少许菌苔。取出时接种环不能经过火焰，应在火焰旁快速插入接种管，在斜面上由下而上划“Z”字型曲线，当接种完成，立即将管口经过火焰灭菌，右手到火焰旁塞上胶塞，不要将管口离开火焰旁去迎接右手胶塞。最终将接种环烧灼灭菌放置备用。

检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程

1．目的：

规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。2．依据：ChP2010版（一部）、《中国药品检验标准操作规范》（2010年版）。

3．范围：

本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。

4．责任：

4.1.QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发。

4.2.微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

5.相关文件及术语：

5.1．术语

标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即

称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

6.标准：

6.1．检定菌的申购

QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。

6.2．检定菌的接收

菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,

操作规程

传代用菌种采用甘油冷冻管保存法。将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合甘油并分装至冷冻管中，冷冻管标注菌种名称、代数、保存日期等信息，然后放置于-80℃冰箱中保存。每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。

5.3.2.2液体石蜡保存法

对于一些难以保存的菌种，采用液体石蜡保存法。将菌种接种在适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，将菌液混合液体石蜡并分装至玻璃瓶中，瓶口用铝箔密封，标注菌种名称、代数、保存日期等信息，保存温度为-70℃。每年进行一次复苏和传代，保存时间不超过5年。

5.4菌种的传代

传代用菌种每年进行一次复苏和传代。复苏后，将菌种接种至适宜的琼脂培养基上，待菌生长充分后，按照规定的传代代数制备传代用菌种，并及时更新菌种库存记录。

5.5菌种的使用

使用菌种前，应先确认菌种的品质和纯度，并按照规定的传代代数制备工作用菌种。使用后，应及时更新菌种库存记录，并进行相应的消毒处理。

5.6菌种的销毁

菌种在使用过程中，如出现变异或污染等情况，应及时进行应灭活处理，并填写《菌种销毁记录表》，经主管部门审核同意后，进行销毁处理。菌种库存中长期未使用的菌种，应定期进行清理和销毁处理。

菌复苏、复壮；

Sabouraud葡萄糖琼脂培养基：用于白色念珠菌复苏、复壮；

青霉素-链霉素琼脂培养基：用于铜绿假单胞菌复苏、复壮。

5.4.1.1.3复苏步骤：

1.取出保存好的菌种管，用接种针在酒精灯上消毒；

2.将接种针在75%酒精中消毒，再用酒精棉球擦拭消毒；

实验室菌(毒)种、运输、保存、使用与销毁管理制度

实验室菌（毒）种、运输、保存、使用与销毁管理制度

1、实行“双人双锁”管理办法

2、指定管理人员统一登记、保存、发放，按时传代,定期鉴定：

2.1.普通琼脂斜面保存法肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉汤膏,以防干涸（但变形杆菌“OX”及伤寒沙门氏菌“O”菌株的保存，则不加肉汤膏）。经35℃培养18—24小时后，移于4℃冰箱中,一般可保存1个月，每月传代1次。

2。2。血琼脂斜面保存法链球菌、肺炎链球菌应接种于血琼脂斜面上，35℃培养生长后，放4℃冰箱中保存,链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2—4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次. 2.3.脑膜炎奈瑟氏菌宜用巧克力斜面，并在35℃孵箱中保存，一般每2日移种一次，其他特殊细菌,则分别选用各自适宜培养基。

2。4。半固体穿刺保存法将细菌穿刺接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内，经35℃培养18—24小时,再以无菌手续加入灭菌液体石蜡约1cm厚度，移放于4℃冰箱中保存。琼脂半固体适用于肠道杆菌及葡萄球菌等一般细菌的保存，一般可保存3-6个月。血清琼脂半固体适用于链球菌、肺炎链球菌及脑膜炎奈瑟氏菌的保存。

2。5。菌种应由指定的专人负责保管，并由部门负责人经常督促检查，工作调动时，应及时作好全面交接工作。

2.6.菌种应存放于安全的地方,所用冰箱和柜应加锁 2。7.菌种传代时，

必须在无菌室或接种罩内进行，以防污染.

2。8.菌种必须每种设一记录卡,其内容包括：菌种名称、菌种编号、来源、分离日期、鉴定日期、鉴定者、鉴定结果、传代情况及所用培养基、保存方法、温度、使用转移及销毁情况、保存者、部门负责人等。

菌种的复苏传代及保存标准程序

目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。

范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。

职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。

内容：

菌种的复苏与传代操作均应在生物检定室阳性对照间或专用超净工作台内进行。操作中使用过的滴管、吸管及菌种管等均需放入消毒液中浸泡，试验结束后经121℃30分钟高温灭菌处理。

1.菌种的复苏

1.1冻干菌种的复苏

检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。使用前需将其复苏。

1.1.1准备：

①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。

②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。

③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。

1.1.2操作：

1.1.

2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。

1.1.

2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。

1.1.

2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。

1.1.

2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。

1.1.

2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将

冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。

菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程

v1.0 可编辑可修改

菌种管理制度

1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。

3、定义

标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

4、职责

部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。

微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

5、规程

菌种的申购

部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。

菌种的接收

菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。

菌种的保存

工作用菌种的保存

工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而

检定菌保存传代使用销毁标准操作规程

一、引言

检定菌是指用于验证实验室检测方法准确性和可靠性的微生物菌种。为确保检

定菌的质量和有效性，需要制定一套标准操作规程，明确保存、传代使用和销毁的要求和流程。本文将详细介绍检定菌保存传代使用销毁的标准操作规程。

二、保存要求

1. 菌种的保存容器应为无菌、密封、耐高温高压的玻璃瓶或者塑料瓶，并在保

存容器上标明菌种名称、保存日期和保存人员的姓名。

2. 菌种保存容器应储存在恒温冰箱或者液氮罐中，温度应控制在-70℃至-80℃

之间。

3. 菌种保存容器应存放在避光和湿度适宜的环境中，避免受到阳光直射和湿气

侵入。

三、传代使用要求

1. 传代前应进行菌种活性检测，确保菌种仍然具有活性和稳定性。

2. 传代使用菌种的工作台、培养皿、试管等实验器材应经过高温高压灭菌处理，确保无菌状态。

3. 传代使用菌种时，应使用无菌技术操作，避免交叉污染。

4. 传代使用菌种的培养基应符合菌种的生长要求，避免影响菌种的生长和繁殖。

5. 传代使用菌种的培养条件应符合菌种的生长要求，包括温度、湿度、氧气浓

度等。

四、销毁要求

1. 菌种销毁应在生物安全柜中进行，避免菌种的扩散和污染。

2. 销毁菌种的容器应经过高温高压灭菌处理，确保菌种彻底死亡。

3. 销毁后的菌种容器应进行特殊处理，如破碎、焚烧或者化学处理，以防止菌种的再生和传播。

五、安全注意事项

1. 在保存、传代使用和销毁菌种的过程中，操作人员应佩戴实验室必需的个人防护装备，如实验手套、实验眼镜等。

2. 操作人员应具备相关的微生物实验室操作技能和安全意识，遵守实验室安全规范和操作流程。

菌种传代、使用、保存操作规程

1.目的

本文件规定了微生物检验用菌、无菌检验用菌及抗生素检验用菌的接种、保存，传代方法及要求，适用于中心化验室进行检验用菌的接种和传代操作。

2. 适用范围

适用于中心化验室菌种管理人员进行检验用菌的接种、保存和传代操作。

3.职责

菌种管理人员应按本程序的规定操作。

4.参考文件及相关程序

B08(02)005 微生物实验室标准管理程序

B08(02)019 微生物检验用菌标准管理程序

B08(02)020 检验用培养基标准管理程序

5. 程序

5.1.对照菌株名称

·金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26 003〕

·铜绿假单胞菌〔CMCC(B) 10 104〕

·生孢梭菌〔CMCC(B) 64 941〕

·枯草芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 501〕

·大肠埃希菌〔CMCC(B) 44 102〕

·白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕

·黑曲霉〔CMCC(F) 98 003〕

·短小芽孢杆菌〔CMCC(B) 63 202〕

·藤黄微球菌〔CMCC(B) 28 001〕

·乙型副伤寒沙门菌〔CMCC(B) 50 094〕

5.2.菌种来源

中国药品生物制品检定所提供的冷冻干燥菌种（即安瓿）。

5.3. 微生物检验用菌菌悬液的制备

5.3.1.菌种的复苏与传代

5.3.1.1. 取备妥的冷冻菌种安瓿，灭菌的毛细滴管、双碟、镊子、注射器、灭菌水及复苏菌

种所需的培养基等物品，移入超净工作台。

5.3.1.2. 用75%酒精棉球擦净冷冻菌种安瓿外壁，放在灭菌双碟内，待干。

5.3.1.3. 点燃酒精灯，将安瓿的封口一端在火焰上烧灼，用灭菌毛细管吸取灭菌水或胰酪大

菌株的保存使用_及销毁

菌株的保存使用及销毁

1、新引进的菌种经形态、染色、培养性状、生化特性等的鉴别确定后作记录，并进行保存。

2、自主分离筛选的菌株经试验确定为优良菌株，并进行形态、染色、培养性状、生化特性、毒性等的鉴别确定（必要时进行分子鉴定）后作记录，并进行保存。

3、应用菌株采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌株生长充分以后，转移至 4～8℃冰箱中保存。此法仅用于应用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。

4、半储存菌株以甘油冷冻管保存法或液体石腊封存的半固体琼脂为主。甘油浓度为10%～20%，保存温度为-20～-30℃，每隔1～2年转种一代。此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏

5长期保存的储存菌株以冷冻干燥保藏为主，特殊要求的菌种可用其它方法进行保存，保存期可长达几年至几十年。

6菌种的传代不可超过6次。视菌种的特性及使用情况，一般储存菌株每5年传代一次，每隔1～2年从储存菌株转接至半储存菌株，半储存菌株每1～2年传代一次，每1～3个月从半储存菌株转接接至应用菌株。

7、菌种的确认：用无菌接种环取上述培养物接种到营养琼脂培养基（细菌）或玫瑰红钠培养基（真菌和酵母菌）平板上，或相应的宜于该菌生长的鉴别培养基平板上，然后在 30～35℃下培养3天（细菌）；20～25℃下培养 5 天（真菌和酵母菌）。培养后，首先观察其是否具有典型的菌落形态，然后挑取生长旺盛的单一的纯菌落，划线于平皿培养基，每种菌划 4 个平皿，以便收集较多的生长旺盛的典型单菌落，进行保存和鉴定。鉴定时作革兰氏染色、镜检，观察其染色特性及形态特征。必要时再做生化实验以进一步鉴定该菌种。

菌种的复苏传代及保存标准程序

目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。

范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。

职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。

内容：

检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。使用前需将其复苏。

.1准备：

①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。

②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基〔营养肉汤培养基或改进马丁培养基〕、营养琼脂〔或改进马丁琼脂〕斜面数支。

③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。

操作：

.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。

.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。

.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将

冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。

.6将已接种的液体培养基及琼脂斜面培养基置规定温度下〔一般细菌在30~35℃，真菌在23~28℃〕培养24h。

菌种传代操作规程

文件 3 页

附件 0 页

版本 A 版

生效日期年月日菌种传代操作规程

制订/修订者：

日期：签名：

周培培

日期：签名：

复核者：

陆莉萍

日期：签名：

核准者：

陈锋铭

分发部门：

质量保证部 2份

文件更换记录

版本更改记录更改单编号批准人批准日期生效日期

1 目的

为了提高对实验用菌种的使用、管理，通过对菌种的传代、保存，从而确保其在实验中的有效性和准确性。

2 范围：

无菌检验、微生物限度检查检验用菌株。

3 内容

3.1传代前将购进菌种及灭菌后的营养琼脂小斜面置于室温放置30分钟，待温度平衡后再移入阳性操作室内。

3.2 换好衣服，戴好口罩、手套，用消毒水将手清洗干净。

3.3第二、三代工作菌种的制备：

从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于35～40℃的水浴中进行解冻1分钟。解冻后，放入生物安全柜内，用冷却后的灭菌接种环从冷冻管中取一环菌液接种于10ml灭菌营养肉汤培养基中，置于30～35℃的培养箱内18～24小时，进行增菌培养。〔第二

代〕培养后，用冷却的灭菌接种环从增菌液中沾取一环接种于相应的培养基斜面上贴上菌种标签，置于30～35℃的培养箱内18～24小时，进行培养。确认符合后置于5℃的冰箱内保存。使用时将培养出的斜面用5ml的灭菌生理盐水将斜面上的菌落洗下制成菌悬液使用。〔第三代〕在第三代菌种有效期内进行第四代的接种传代。

3.4 第四、五代工作菌种的制备：

从5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取1个菌落接种于相应的琼脂斜面培养基中，置于30～35℃的培养箱内培养18～24小时后，确认符合后置于5℃的冰箱内作为第四代工作菌种保存，备用。

菌种的复苏传代及保存标准程序

目的：建立菌种的复苏、传代及保存标准程序。

范围：适用于检定用菌种的复苏、传代及保存的操作。

职责：质管部生物测定人员对本规程的实施负责。

内容：

1.菌种的复苏

1.1冻干菌种的复苏

检定用标准菌种，由中国药品生物制品检定所提供，为冷冻干燥菌种(0代)。使用前需将其复苏。

1.1.1准备：

①用具：灭菌1ml滴管、灭菌双碟、灭菌镊子、砂轮、酒精灯、接种环。

②培养基：根据菌种的性质选择合适的液体培养基（营养肉汤培养基或改良马丁培养基）、营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面数支。

③消毒液：75%酒精、碘酒、0.1%新洁尔灭或84消毒液等。

1.1.2操作：

1.1.

2.1将准备妥的冷冻菌种管、灭菌滴管、灭菌双碟及镊子、培养基移入工作台。

1.1.

2.2用砂轮将冻干菌种管颈部挫出刻痕，再75%酒精棉擦净菌种管外壁，放在灭菌双碟内待干。

1.1.

2.3点燃酒精灯，将菌种安瓿的封口一端在火焰上灼烧红热，用灭菌滴管吸取液体培养基少许，滴在灼热的菌种安瓿封口一端，使其骤冷而炸裂。

1.1.

2.4取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开后，把菌种安瓿放入灭菌双碟内。

1.1.

2.5另取一支灭菌滴管，在火焰旁吸取适用液体培养基少许，加至菌种管底部，将

冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至液体培养基内。用接种环取菌液划线接种于琼脂斜面培养基上。

菌种传代标准操作规程

文件制修订记录

1.1原则

1.1.1检定用标准菌种，按照规定选购辽宁省药品检验所提供的菌种。

1.1.2应按照现行版中国药典附录传代和制备。

1.2标准菌种的制备

1.2.1菌种的复苏

1.2.1.1准备适宜各种菌种生长的液体培养基和培养设备及操作器具。

1.2.1.2把购入的冻干粉菌种管，灭菌后的器具、1ml吸管、双碟、营养肉汤，改良马丁培养基等移入阳性对照室中的生物安全柜中。

1.2.1.3先用砂轮将冻干粉菌种安瓶颈部上三分之一处挫出刻痕，再将冻干粉菌种管外壁用75%酒精棉擦洗消毒、稍干，放在灭菌双碟内，点燃酒精灯，用干燥的无菌纱布包裹安瓶，在火焰旁将其掰开。放入灭菌双碟内，取一支1ml吸管，在火焰旁吸取营养肉汤（或改良马丁培养基）0.5-0.8ml，加至菌种管底部并吹打，将冻干粉菌搅动，促使溶解，制成菌悬液，随即吸出管内菌液，接种至营养肉汤（或改良马丁培养基）试管内。并将吸管及菌种瓶，投入消毒液内。将已接种的营养肉汤（或改良马丁培养基）试管置于30-35℃或23-28℃培养22-24h。（为第一代）

1.2.2菌种的纯度和特性确认

1.2.2.1取出培养物，肉眼观察试管变浑浊。确认有菌种生长繁殖。

1.2.2.2将上述增菌液，再进行第二次移种。接种至3支营养琼脂（或改良马丁琼脂）斜面上，置30-35℃（或23-28℃）培养22-24h。（为第二代）

1.2.2.3取出斜面培养物，每个品种各用一支进行纯度和特性确认，仔细观察菌落形态，有无杂菌，涂片，革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，可制成甘油冷冻管（第二代）或移种（第三代）即可应用。如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。

BJ-SOP-WJ001-A1灭菌物品的使用与效期

灭菌物品的使用与效期

文件编号：BJ-SOP-WJ001-A1

第1页，共1页

版本：A1

生效日期：2015-**-** 1、目的为防止发生交叉污染，为保证实验数据检验数据准确性、可靠性及科学性。

2、适用范围所有用于微生物实验的灭菌物品

3、职责操作人员对本规程的实施负责。

4、灭菌物品的使用

4.1用于微生物试验的物品必须经过灭菌，使用时必须在有效期内。

4.2灭菌物品必须在洁净区或相应的使用地点打开、使用，在非洁净区和非使用地点打开内包装的灭菌物品不得用于微生物检验。

4.3已打开内包装的灭菌物品需一次性使用完毕，不得重复使用，剩余的应丢弃或重新灭菌后使用。

5、灭菌物品的有效期见表1。

表1

名称有效期

培养基30天

洁净服5天

试验器具7天

起草人：审核人：批准人：

菌种的保存和传代方法

1.0目的

使檢測所用菌種得到有效控制，确保質量符合需求。

2.0范围

适用于本公司所用的化妆品常规5种致病菌菌种（大肠杆菌﹑绿脓杆菌﹑金黄色葡萄球菌﹑黑曲霉﹑白色念株菌）的保存和传代。

3.0职责和權限

3.1 品管部：负责按本方法進行操作。

4.0操作方法

4.1仪器和设备

接种环﹔量筒﹔高压消毒锅﹔酒精灯﹔恒温培养箱﹔大试管﹔冰箱

4.2培养基和试剂

菌种﹕金黄色葡萄球菌﹑大肠杆菌﹑绿脓杆菌﹑黑曲霉﹑白色念珠菌。

4.3 菌种传代﹕

用無菌操作用接种环迅速在纯菌种表面取菌种1环﹐划線于TSA/MLA斜面上﹐在37℃培養24H。大肠杆菌﹑金黄色葡萄球菌﹑黑曲霉﹑白色念株菌4种菌种每3个月传代一次﹐绿脓杆菌每月传代一次。每个菌种每次传代最少5支﹐1支作为保留菌种用于下次传代﹐而其它3支用于日常实验用﹐每支菌种都应贴好标签﹐标签内容包括菌种名称﹐接种时间﹐失效期和接种人姓名。

4.4菌种保存﹕采用冷藏法保存﹐菌种用斜面保存﹐将菌种在培养24H﹐用保鲜膜包好保存于冰箱。

5.0相關文件

5.1 GB 7918.1-87 化妝品微生物標准檢驗方法

6.0記錄及表格

6.1《菌種傳代登記表》QR-QC-31

BJ-SOP-WJ013-A1菌种保存、传代、使 用、销毁标准操作规程

检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程

菌种传代操作规程(1)

检定菌保存、传代、使用、销毁标准操作规程

菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程

实验室菌(毒)种、运输、保存、使用与销毁管理制度

菌种的复苏传代及保存标准程序

菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程

检定菌保存传代使用销毁标准操作规程

菌种传代、使用、保存操作规程

菌株的保存使用_及销毁

菌种的复苏传代及保存标准程序

菌种传代操作规程

菌种的复苏传代及保存标准程序

菌种传代标准操作规程

BJ-SOP-WJ001-A1灭菌物品的使用与效期

菌种的保存和传代方法

BJ-SOP-WJ013-A1菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程