全反式维甲酸诱导HL60细胞分化分子机制探讨

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全反式维甲酸

也叫做维A酸全反式维维甲酸的抗肿瘤作用的证实被誉为九十年代国际抗癌药物的三大发现之一，具有很强的诱导分化肿瘤细胞作用，备受国际国内医药界的关注，是目前国内治疗急性早幼粒细胞白血病、骨髓异常增生（白血病前期）尤其是早幼粒细胞白血病的临床首选药物。

同时临床显示用于治疗痤疮、扁平苔藓、白斑、多发性寻常疣及其它角化性皮肤病也有显著疗效。

（二）作用于肿瘤1、诱导肿瘤细胞分化和凋亡。

2、增加癌细胞对化疗药物的敏感性。

3、促进免疫细胞的增殖。

4、增强免疫细胞对肿瘤细胞杀灭作用。

【注意事项】 1.本品内服可产生头痛、头晕（５０岁以下病人较老人为多）、口干、脱屑等不良反应，控制剂量或同时服用谷维素、维生素Ｂ１、Ｂ６等药物，可使头痛等反应减轻或消失。

现制成酯类供内服用，以减轻毒副反应。

2.可引起肝损害，肝、肾功能不良者慎用。

3.外用应避免使用于皮肤较薄的皱折部位，并注意浓度不宜过高（０．３％以下较为适宜），以免引起红斑、脱皮、灼热感及微痛等局部刺激。

这些反应如果轻微，应坚持继续治疗。

如反应严重，应立即停药。

4.不宜应用于急性皮炎、湿疹类疾病。

5.在治疗严重类型的皮肤病时，可与其他药物如皮质激素、抗生素等合并使用，以增加疗效。

【规格】片剂：每片β－顺维甲酸１０ｍｇ。

维胺脂１０ｍｇ，冷霜或软膏：０．０２５％、０．１％2项目简介：全反式维甲酸（ATRA）主要用于治疗急性早幼粒细胞白血病（APL），ATRA减少了细胞毒化疗细胞破坏而产生的播散性血管内凝血，从而降低了初治APL的早期死亡率，可使大部分患者达到完全缓解。

此外，ATRA也可用于结肠癌、食管癌、胰腺实体瘤等消化系统肿瘤的治疗，尤其对肝癌的治疗具有良好的前景。

但该药的口服生物利用度低，且长期使用易产生耐药性，原因在于血液中的药物浓度急剧下降。

又因为其脂溶性较强，常规手段难以制备成注射给药剂型。

将ATRA制备成脂质体可显著增加药物的治疗指数和降低毒性。

并具有以下优点：（1）提高药物的稳定性，可明显减少光热氧对维甲酸的破坏；（2）具有靶向性，脂质体携带药物主要被单核—巨噬细胞系统的吞噬细胞所摄取，在肝、脾和骨髓等网状内皮细胞较丰富的器官分布较多，可有效作用于靶区；（3）增加缓释性，脂质体能显著增加药物在血液中的滞留时间，发挥长效作用；（4）脂质体包裹脂溶性药物，使维甲酸注射给药成为可能。

全反式维甲酸与紫杉醇、阿霉素联合诱导HL-60细胞凋亡的研究

维普资讯
陕西医学杂志２００７年７月第３卷第７期６
７ｌ９
全反式维甲酸与紫杉醇、阿霉素联合诱导ＨＬ６胞凋亡的研究△ 一０细
南通大学附属医院血液科（南通２６０）尤学芬丁润生谢玉娟姚登福陆德炎２０１摘要目的：讨全反式维甲酸（探ＡＴＲ分别与紫杉醇（ｘ１、Ａ）Ｔａｏ）阿霉素（ＡＤＲ）单独或联合孵育Ｈ６Ｌ一０细胞株能否增强凋亡诱导作用，进一步研究ｂｌ２基因及家族ｂｘ并ｃ一ａ、ｂｌｃｘ基因在此过程中的作用。法：用台盼兰拒染法观察细胞生长活力； — 方 ① ②在光镜和电镜
ｄｗｎｅｕａｅｗｈｌｔｅｘｒｓｉｎｅｅｆａｍＲＮＡｓｎｂｌｘｍＲＮＡｓｒｕｒｇａｅａｔｒｏｒｇｌｔｄｉｅｈｅｐｅｓｏｌｖｌｂｘｏａｄｃ— ｓａｅｐｅｕｔｄｆｅ
ＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｅｔｅＴｏｅｐｏｅｗｈｔｅｊｃｉ：ｘｌｒｅｈｒＡＴＲＡａｎｒａｅｔｅｅｆｃｆａｏｔｓｓｗｈｃｖｃｎｉｃｅｓｈｆｅｔｏｐｐｏｉｉｈ
ＴａａＡＤＲｉｄｕｃｉＨＬ一０ｃｌｌｓｎｄｏｓｕｔｒｅｆｃ一ｇｅａｉｙｎｈｐｏｅｓｘｏｌｎｄｎｅｎ６ｅｌｉａｔｔｄｙｈｅｏｌｏｂｌ２ｅｎｆｍｌｉｔｅｒｃｓ．ｎｅ

全反式维甲酸联合丙戊酸钠诱导白血病细胞分化过程中BRD4表达变化及其作用的研究

全反式维甲酸联合丙戊酸钠诱导白血病细胞分化过程中BRD4表达变化及其作用的研究摘要]目的探讨全反式维甲酸（atra）联合丙戊酸钠（vpa）诱导hl-60细胞分化过程中brd4表达调控的分子机制。

方法建立atra联合vpa诱导白血病细胞株hl-60的分化模型，瑞氏-吉姆萨（wright-gimesa）染色观察hl-60细胞形态，流式细胞术检测细胞表面分化抗原的表达，蛋白质印记从蛋白水平检测hl-60细胞经药物诱导24、48、72 h后brd4表达的变化。

结果单独应用atra 或vpa均能够明显抑制白血病细胞生长，诱导细胞分化，倒置显微镜下可观察到hl-60细胞向成熟粒细胞方向分化，细胞表面的分化抗原表达升高，联合诱导分化模型中细胞表面分化抗原表达升高更明显，两者均有统计学意义，在蛋白水平brd4的表达逐渐降低，联合诱导分化模型中降低更明显，两者有统计学意义。

结论 vpa 可以明显的促进atra诱导白血病细胞的分化作用，brd4基因的表达在随着分化程度的加强出现逐渐降低的趋势。

[关键词]白血病；诱导分化；全反式维甲酸；丙戊酸钠；brd4 [中图分类号] r733.7 [文献标识码] a [文章编号] 2095-0616（2013）07-30-04药物，已经证实其在临床剂量范围内有着组蛋白乙酰化酶（hdac）抑制剂的特征性作用，能够提高组蛋白乙酰化水平，使组蛋白与dna结合增强，进而促使靶基因转录，纠正基因表达的调控异常，最终可以诱导肿瘤细胞分化与凋亡[1]。

体外实验证实，其能抑制多种白血病细胞生长。

目前，已有大量实验证明组蛋白乙酰化酶抑制剂（hdaci）代表药物vpa可以明显促进全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，atra）诱导白血病细胞株hl-60的分化作用[2-4]。

brd（a double bromodomain-containing protein）是bromodomain bet家族成员，包含2个溴基结构的蛋白，可优势结合乙酰化染色质，从而改变染色质构象。

全反式维甲酸的药理学特点

医药导报２０年６１２３月第２卷第６１期
・
・３・８Ｊ
药物介绍・
全反式维甲酸的药理学特点
唐跃年，胡松浩，孙朝荣，毛五妹
（上海第二医科大学附属新华医院药剂科，０Ｏ２２０９）
［摘要］概迷奎反式堆甲酸（／）ＡＲＡ的药理作用特点：ＩＡ可诱导细胞分化，导能力与剂量呈依赖性．克隆Ａ＇Ｒ诱与
ＡＲＡＴ诱导恶性克隆分化成熟，已通过对成熟ＡＬ细胞的形态Ｐ学、免疫表型、原位杂交和ＤＡ多态性分析等加以证实。临床Ｎ实践中，使用Ａ＇Ａ治疗多数患者平均在６个月（ —２］Ｋ１４个月）内复发。这些复发患者对ＡＲＴＡ产生耐药。：对ＡＩ￣耐药性：ＪＴ：的Ｌ．在很大程度上限制了ＡＲＴＡ的临床疗效。因此了解ＡＩ＇耐药Ｔ：Ｌ￣
基ＡＲＡ葡聚糖，／总量少于母体的１％，２０经 —６周治疗，．基４酮
ＡＩ，葡聚糖在尿中排泄大太增加：这与血药浓度的下降平行ＴＬ％
性相关，明药物耐药的主要机制是药物代谢的增加。诱导血说
浆ＡＲＴＡ浓度下降的机制可能包括细胞色素酶的催化．细胞维甲酸结合蛋白水平的增加。为克服这一现象，ＴＡ与酮康唑ＡＲ合用，可使Ａ＇ＩＡ血药浓度显著性增加ＩＲ：也有作者报道Ａ＇ＩＡＲ
药物介绍全反式维甲酸的药理学特点唐跃年胡松浩孙朝荣毛五妹上海第二医科大学附属新华医院药剂科摘要概述全反式维甲酸的药理作用特点可诱导细胞分化诱导能力与剂量呈依赖性与克隆刺激因子阿糖胞苷等合用可增加对肿瘤细胞的分化活性作用口服吸收良好血浆半衰期短经肝脏代谢代谢物经尿和粪便排泄

小剂量二烯丙基二硫联合全反式维甲酸对HL-60细胞的生长抑制和诱导分化作用研究

小剂量二烯丙基二硫联合全反式维甲酸对HL-60细胞的生长抑制和诱导分化作用研究程爱兰;武明花;黄卫国;何洁;周建国;苏琦【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2006(22)4【摘要】二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）具有抑制肿瘤细胞增殖，调控细胞周期依赖素激酶、信号转导，诱导肿瘤细胞分化、凋亡及影响癌基因与抑癌基因表达的作用。

小剂量DADS（1．25mg·L-1）可以抑制JAK1／STAT3信号通路，将HL-60细胞阻滞在G0／G1期，诱导HL-60细胞向粒系分化，其作用与全反式维甲酸（ATRA）相当。

本实验将探讨小剂量DADS与ATRA联合应用对HL-60细胞的生长抑制及诱导分化效应。

【总页数】1页(P512)【作者】程爱兰;武明花;黄卫国;何洁;周建国;苏琦【作者单位】南华大学肿瘤研究所,湖南,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,湖南,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,湖南,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,湖南,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,湖南,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所,湖南,衡阳,421001【正文语种】中文【中图分类】R329.4;R329.25;R345.57;R394.2;R733.702;R733.705.3【相关文献】1.褪黑素联合全反式维甲酸对HL-60细胞作用的研究 [J], 刘沁华;夏瑞祥;李嘉嘉2.正常骨髓基质细胞对全反式维甲酸诱导分化HL-60细胞的作用 [J], 陆羡;张智明;方敏;陈广斌3.全反式维甲酸诱导分化的HL-60细胞表面凝集素受体的变化 [J], 冯冰;张积仁;肖明星;王浩4.二烯丙基二硫与全反式维甲酸合用对HL-60细胞的影响 [J], 程爱兰;武明花;宋颖;凌晖;周建国;苏琦5.全反式维甲酸对人白血病细胞母株HL-60及其耐药株的诱导分化作用 [J], 王玮;陈子兴;陈悦书因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

L-Asp诱导急性髓细胞白血病细胞株HL-60凋亡

L-Asp诱导急性髓细胞白血病细胞株HL-60凋亡研究生：刘元军导师：李晓明教授摘要自从1967年Oetten等首次发现左旋门冬酰胺酶（L-Asparaginase，L-Asp）的抗肿瘤作用以来[1]，它已被广泛应用于临床上许多肿瘤疾病的治疗，并且显著提高了患者的完全缓解率（CR）和长期无病生存率（DFS）。

左旋门冬酰胺酶（L-Asparaginase，L-Asp）是临床上治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的主要药物，尤其对儿童患者疗效显著。

以前研究者们普遍认为L-Asp抗肿瘤药理机制是：L-Asp能特异性催化门冬酰胺（Asn）分解成氨和门冬氨酸（Aspa）从而耗竭血浆中Asn。

由于正常细胞内部存在充足门冬酰胺合成酶（Asparaginase synthetase，AsnS）及活性，能够催化门冬氨酸再合成门冬酰胺，从而保证了正常细胞内的蛋白生物合成不受影响。

但在肿瘤细胞中，特别是急性淋巴细胞白血病细胞和非霍奇金淋巴瘤细胞，这些肿瘤细胞内的AsnS表达量和活性都远远低于正常细胞，所以不能为肿瘤细胞合成足够的Asn,而必须依赖细胞外Asn的供应，当细胞外Asn被L-Asp耗竭后，肿瘤细胞蛋白生物合成严重受阻，导致其DNA和RNA合成严重受抑制，最终导致细胞功能受损，肿瘤细胞死亡，此为L-Asp抗肿瘤公认的原理。

但是临床治疗中发现不同类型疾病以及相同疾病的不同患者对L-Asp敏感性和疗效都不尽相同，而且这些患者血液中的Asn都已被耗竭。

这提示细胞对L-Asp的敏感性存在于细胞内部对这种氨基酸耗竭的反应性不尽相同，从而表明不能将血浆中Asn是否已被完全耗竭作为L-Asp是否发挥作用的标准。

以往临床上主要是将L-Asp用于治疗ALL和NHL，一般不用于治疗髄系白血病。

但是最近国内外研究表明用甲基硫氮二烯五环四唑分析法（MTT法）体外测定L-Asp对急性髄系白血病（AML）FAB分型（French-American-British subtype of acute myeloid leukemia）中M4,M5型细胞的毒性等同于对ALL细胞的毒性[2],并且此现象可用于预测临床上用L-Asp初始化疗的疗效反应。

胞内维甲酸结合蛋白的研究进展

胞内维甲酸结合蛋白的研究进展摘要：维甲酸是一种重要的信号分子，与细胞的生长、分化、凋亡密切相关，它在体内通过激活细胞核内的维甲酸受体（retinoic acid receptor，RAR)调节多种靶基因的转录表达。

在肿瘤的治疗方面，维甲酸还具有重要的功能，它能抑制多种癌细胞的发生、发展，是一种非常好的抗肿瘤药物。

但是，维甲酸生物功能的发挥主要由维甲酸结合蛋白决定，本文根据最新的研究进展，对维甲酸结合蛋白进行了综述。

Retinoic acid is an important signal molecular and associate with the cell proliferation, differentiation,and apoptosis, which activate the nuclear receptors, retinoic acid receptor(RAR), in turn, regulate transcription and expression of multiple target genes in vivo. In tumor treatment, retinoic acid plays an important role, it inhibit the development and progression of the carcinoma cell and is a good drug in tumor-inhibition. But, the biological role of the retinoic acid mainly depends on the cellular retinoic acid-binding protein. In this paper, we cite the latest research development reviewed the cellular retinoicacid-binding protein.关键词：维甲酸结合蛋白；信号转导；抗肿瘤；研究进展胞内维甲酸结合蛋白(cellular retinoic acid binding protein，CRABP)首先是在老鼠组织[1]和鸡胚胎跖骨皮肤[2]中发现的，它的功能被认为是保护维甲酸（retinoic acid,RA）免受氧化，使维甲酸可溶，帮助转运，还有协助维甲酸降解的功能。

肿瘤诱导分化治疗原理及临床应用

三、诱导肿瘤分化的研究
1.体外分化诱导模型 (1)白血病细胞分化诱导模型
急性髓性白血病细胞株HL-60：形态:分化为中、晚幼粒、杆状核细胞和分叶核细胞；
生化:出现硝基蓝四氮唑还原性（NBT）；
功能:出现吞噬活性及趋化性；
生物学:丧失了在软琼脂培养基上形成集落及裸鼠体内移植成活的能力。
(2)实体瘤分化诱导模型
1，发热，呼吸窘迫，心包与胸腔积液，低血压和肾功能衰竭。
2，发生率：23-50% 3，死亡率：30%以上 4，治疗方法：1）立即停药
2）地塞米松 10mg iv，bid。应用5天以上。
3、ATRA的副作用
1、高颅压综合症：1）停药 2）对症治疗
2、高组织胺综合症：1）停药 2）组织胺拮抗剂
4、砷剂及ATRA协同作用(体外)
人白血病细胞一般采用小鼠腹腔扩散法及裸鼠皮下移植法;
人实体瘤采用小鼠肾包膜下移植和裸鼠移植建立分化诱导模型。
疗效评价：根据肿瘤生长抑制和荷瘤鼠生命延长，细胞标记酶、抗原以及形态的变化来判断。
四、诱导肿瘤细胞分化的调控机制
维甲酸包括多种同分异构体，其中最重 1.核内受体途径要的是13-顺式维甲酸（13-cis-RA）、
（2）巩固治疗： ① As2O3 0.15mg/kg/d D1-5,连续5周,共2周期
后续 ATRA 45mg/m2 D1-7 + DNR 50mg/m2 D1-3,共2周期 ② DNR 60mg/m2 D1-3 + Ara-c 200mg/m2 D1-7，共1周期
后续 Ara-c 1.5-2g/m2/q12h，D1-5，+ DNR45mg/m2 D1-3 ，共1周期+IT 共5次 ③ ATRA 45mg/m2 D1-15，+Ara-c 200mg/m2 D1-4，共1周期，后续 ATRA 15天，+MIT 10mg/m2/d，共5天，共1周期，后续 ATRA 15天，+IDA 12mg/m2/d，共1周期， +Ara-c 150mg/m2/8h D1-4，共1周期

全反式维甲酸ATRA

CD11b表面抗原检测
* Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用与p53无关。？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用机制是什么？
研究结果及结论4
Real Time PCR法
JC1、Rhodamine123外排实验
MTT法
Western Blotting法
* ATRA能够在HL60及NB4细胞中诱导p-gp的高表达，但不能在
p53野生型或p53缺失的U937细胞中诱导p-gp的高表达。
？ATRA诱导p-gp高表达的现象是否与Nutlin-1增强ATRA分化诱导能 Nhomakorabea的作用相关？
研究结果及结论5
p-gp ATPase 活性检测
Nutlin-1a
Nutlin-1b
Western Blotting法
Real Time PCR法
* Nutlin-1与ATRA均为p-gp的底物，Nutlin-1与ATRA共同作用时
能够抑制ATRA的外排，增强ATRA的分化诱导作用。
研究结论
ATRA
p-gp
ATRA Nutlin-1
ATRA
HL60/NB4 cells
Nutlin-1增强分化能力的作用仅在经ATRA诱导高表达p-gp的细胞株中发挥，而与p53通路无关。
* Nutlin-1仅对p53野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋亡
诱导作用，对p53突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。
？Nutlin-1是否与ATRA具有协同诱导白血病细胞分化的作用？若有，
则其分子机制是否与p53相关？
研究结果及结论2
Counts
CD11b% CD11b表面抗原检测
CD11b表面抗原检测

体外诱导人羊膜上皮细胞分化为神经样细胞

ｌ，４ｈＲｓｌ９％０ｈｅｓｔｒｅｎｏｂｐｌｒｍｕｔｏａｎａｅｅｒｎ — ｋｅｓａｄｅｒｓｄｔｅｉｅｔｃｔｎ２ｈ２．ｅｕｔｓ２ｆｔｅｃｌｕｎｄｉｔｉｏａ，ｌｐｌａｄｔｐｒｎｕｏｓｌｅｃｌ￣ｅｓｈｄｎｉａｉｌｉｒｉｌｎｅｉｆｏ
成瘤的困扰，而骨髓基质细胞要跨胚层分化且取材
Байду номын сангаас
时对机体损伤大，对神经系统疾病的临床治疗也不尽人意。近年来研究证明人羊膜上皮细胞（ｕａｈｍｎ
ａｎｏｃｅｉｅａｃｌ，ＡＣ）有部分胚胎干细胞ｍｉｉｐｔｌｌｅｓｈＥｓ具ｔｈｉｌ特性ｌ１可分化为３个胚层不同类型的细胞Ｌｊ卜２，０，
刘红敏，陈旭东，华新宇
（漯河医学高等专科学校组织胚胎学教研室，河南漯河４２０）５（２３摘要：目的探讨人羊膜上皮细胞体外向神经样细胞诱导分化的条件。方法碱性成纤维细胞生长因子预诱导
剂（ＦＦ，ｂＧ）化学诱导剂全反式维甲酸（ＴＡ）丁酸羟基茴香醚（Ｈ作为诱导剂，以不含诱导剂的无血清的ＭＥＡＲ、Ｂａ）并Ｍ培养基作为对照，密切观察分化过程中细胞形态的变化，诱导至６ｈ１、４ｈ，用免疫细胞化学方法检测神经元、２ｈ２时利特异性标志物的表达情况。结果诱导分化１后的ＡＲ２ｈＴＡ组大部分细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经元细胞ｈＥｓＡＣ可以在体外诱导分化为神经元样细胞，全反式维甲（ＴＡＡＲ）诱导效的形态，免疫细胞化学显示这些细胞表现为ＮＥ染色阳性，Ｓ而丁酸羟基茴香醚（Ｈ）细胞形态没明显变化，ＢＡ组两组都不表达神经胶质细胞标记物ＧＡ。结论ＦＰ

HL_60分化细胞表面标志_活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化

收稿日期：2012-06-20；修回日期：2012-08-08基金项目：国家科技支撑计划2008BAI66B01《细菌多糖蛋白结合关键技术及其应用研究》作者简介：王浩（1972－），男，硕士，医学生物学工程师，主要从事疫苗研制工作。

通信作者：谢贵林，glxie@vacmic．com；赵志强，matinzhao@sina．com ·论著·HL-60分化细胞表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化王浩1，乔瑞洁1，史晓玲1，林纪胜2，谢贵林1，赵志强1（1．兰州生物制品研究所有限责任公司，兰州730046；2．阿拉巴马大学伯明翰分校，病理系，伯明翰亚拉巴马美国35294）摘要：目的分析HL-60分化细胞的表面标志、活性及其对肺炎球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化。

方法以流式细胞仪连续监测分化1 7d的HL-60细胞表面标志CD11b、CD35和CD71的表达以及活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例，同时用09CS、QC2、B、C和F5份质控血清以调理吞噬杀菌试验检测肺炎链球菌血清型6B、7F、14和23F的杀菌滴度。

结果分化3 6d的HL-60细胞表面标志、活细胞比例可达到实验室要求，5份质控血清的调理吞噬杀菌滴度稳定而且在质控范围之内。

结论分化3 6d的HL-60细胞可以用于评价肺炎链球菌疫苗免疫血清的调理吞噬杀菌试验，为调理吞噬杀菌试验的建立和标准化提供了依据。

关键词：HL-60细胞；分化；细胞表面标志；肺炎链球菌；调理吞噬杀菌试验中图分类号：R563．1文献标志码：A文章编号：1005-5673（2012）05-0010-05Dynamic changes of surface markers，cell viability and opsonophagocytic killing capacity of differentiated HL-60cellsagainst Streptococcus pneumoniaWANG Hao*，QIAO Rui-jie，SHI Xiao-ling，LIN Ji-sheng，XIE Gui-lin，ZHAO Zhi-qiang（*Lanzhou Institute of Biological Products Co．，Ltd．，Lanzhou730046，China）Abstract：Objective After HL-60cells differentiated for1 7days，it was to analyze the expression of surface markers，cell viability and the opsonophagocytic killing capacity of these cells against Streptococcus pneumonia．Methods The sur-face markers CD11b，CD35，CD71and cell viability of differentiated HL-60cells were continuously monitored for1 7 days after induction with DMF（N，N-Dimethyl formamide）by using a flow cytometer．Opsonophagocytic killing assay（OP-KA）were simultaneously performed against pneumococcal serotypes6B，7F，14and23F to determine the killing capacity with5quality control sera09CS，QC2，B，C and F，respectively．Results During3 6days after differentiation，the ex-pression of CD11b，CD35，CD71and cell viability of differentiated HL60cells were in conformity with the essential criteria cited by international laboratories，and the opsonic index（OI）was stable and fell within the ranges well established for quality controls．Conclusions HL60cells differentiated on3 6days can be used in OPKA for evaluation of pneumococ-cal vaccine，which provide the basis for establishment and standardization of OPKA．Key words：HL-60cell；Differentiation；Cell surface markers；Streptococcus pneumonia；Opsonophagocytic killing assay （OPKA）肺炎链球菌（Streptococcus pneumonia，Sp）主要引起人类常见的肺炎、脑膜炎、中耳炎和败血症等疾病。

老药全反式维甲酸的免疫调节作用在多种自身免疫性疾病中有应用前景

老药全反式维甲酸的免疫调节作用在多种自身免疫性疾病中有应用前景发表于 2018-04-11 10:58:10作者：山西医科大学第二医院李小峰一、维甲酸概述维甲酸（retinoic acid，RA）又称视黄酸、全反式维甲酸( all-trans-retinoic acid，ATRA)、维生素甲酸及维A酸等，具有广泛的生物学功能，其不仅在生物个体发育及维持正常生理状态中有重要作用，而且有介导细胞分化、增殖、凋亡及免疫等功能。

维甲酸是维生素A的活性代谢产物或衍生物，在生物体内维生素A以醇的形成代谢转变为维A醛，再进一步转成维A酸。

在维甲酸生成过程中，需要多种酶的参与，如视黄醛脱氢酶(RALDHs)、维甲酸合成酶等。

研究发现，肠道中的树突细胞（Dendritic Cells,DCs）能将维生素A代谢为维甲酸，但并不是肠道中所有的树突细胞都有这种功能。

维甲酸是人体可合成的天然小分子物质，它可以直接进入细胞核发挥基因表达的调节作用。

维甲酸的生物学效应是通过其位于细胞核内的受体来实现的。

根据维甲酸分子中的极性基团及侧链不同，分为多种同分异构体，不同类型的维甲酸药物与不同受体结合，可产生不同的生物学效应。

维甲酸类药物包括多种同分异构体，如ATRA、13-顺式维甲酸和9-顺式维甲酸等，大多是ATRA。

维甲酸在临床上最早首先应用于皮肤科，主要用于治疗寻常痤疮、银屑病、鱼鳞病、扁平苔癣等疾病，后来用于治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）等。

近年来有学者发现维甲酸对改善自身免疫性疾病也有一定的作用，如在类风湿关节炎、SLE和多发性硬化等免疫相关疾病均有报道。

二、维甲酸具有调节多种类型免疫细胞的功能，在免疫调节网络中发挥重要作用正常情况下机体免疫处于平衡状态，如Th17和Treg细胞平衡是机体维持正常免疫的基础。

当Th17细胞异常增高或Treg细胞异常减少就会造成免疫功能失衡，引起SLE的发生和发展。

1、维甲酸对Treg具有调节作用近年来认为，Treg在维持免疫稳态、以及对共肠微生物群和食物蛋白质在肠道中的耐受性起至关重要的作用。

王振义：一生只看一种病

白血病，这种造血系统的恶性肿瘤，人人谈之色变。

中国工程院院士王振义，开创的白血病和肿瘤诱导分化疗法，给患者痊愈带来更大希望。

让细胞“改邪归正”急性早幼粒细胞白血病是急性髓细胞白血病（AML ）的一种特殊类型，被权威机构定为急性髓细胞白血病M3型。

这是最为凶险、病情恶化最快、致死率最高的一种白血病，若不及时治疗，90%的病人将在半年内失去生命。

1978年，王振义开始从事该种白血病的研究，当时国际上治疗该种白血病的主流方法是化疗，但是患者化疗后5年的存活率才10%-15%。

王振义通过资料查阅到，白血病在一定条件下可以发生逆转，分化成熟为正常细胞。

他由此提出大胆的想法——用诱导分化的理论让癌细胞“改邪归正”！经过8年的钻研，王振义发现全反式维甲酸可以在体外将M3细胞诱导分化为正常细胞。

冰山，终于被阳光融化了一角。

1986年，五岁的小静生命垂危，她被医院确诊为身患急性早幼粒细胞白血病。

病情迅速恶化，高烧不/本刊记者鲁瑾王振义：一生只看一种病退，出血严重，死神正悄然向小静逼近。

王振义教授仔细研究了小静的病情，大胆提出了自己首创的全反式维甲酸诱导分化疗法。

但当时这种方法尚处于试验阶段，很多人劝他说，您已经功成名就，用新药来治疗万一有啥可就名誉扫地，还是别冒险了。

一边是苦苦哀求的病患父母，一边是自己职业生涯的名誉，王振义承受着极大的压力，思前想后，他决定相信自己的判断。

“我有勇气，我尊重科学。

”这是王振义当时说得最多的话，是给病患父母的信心，也是给自己的鼓励。

奇迹出现了，小静服用了一个星期左右的全反式维甲酸，病情就出现了转机，几个月后，病情完全得到了缓解。

如今，30多年过去了，小静依然健康地生活着。

此后，这种疗法开始在临床上推广。

首批治疗的24例病人中，完全缓解率达到九成多。

从上海到全国，再到全世界，奇迹一个个发生，生命一个个得救。

而小静的成功治疗成为世界公认的诱导分化理论让癌细胞“改邪归正”的第一个成功案例，王振义由此被誉为“癌症诱导分化之父”。

《ATRA介导组蛋白修饰调控PIM-1抑制HL-60细胞增殖及诱导分化机制研究》范文

《ATRA介导组蛋白修饰调控PIM-1抑制HL-60细胞增殖及诱导分化机制研究》篇一一、引言近年来，癌症治疗领域的研究焦点逐渐转向了细胞增殖与分化的调控机制。

其中，全反式维甲酸（ATRA）作为一种重要的生物活性分子，在多种肿瘤细胞中展现出显著的抗增殖和诱导分化作用。

尤其是在急性髓系白血病（AML）的HL-60细胞中，ATRA能够有效地诱导其分化并抑制其增殖。

而组蛋白修饰作为一种重要的表观遗传学机制，与细胞的增殖和分化密切相关。

本研究旨在探讨ATRA介导的组蛋白修饰如何调控PIM-1（Pim-1原癌基因）表达，进而影响HL-60细胞的增殖和分化机制。

二、研究背景及意义ATRA是一种维生素A的衍生物，能够通过激活维甲酸受体（RAR）来调控多种靶基因的表达，具有广泛的药理作用。

组蛋白修饰作为真核生物表观遗传调控的关键手段，主要包括甲基化、乙酰化等过程，对基因的表达具有重要影响。

PIM-1作为一种原癌基因，其表达与细胞的增殖和分化密切相关。

因此，研究ATRA介导的组蛋白修饰如何调控PIM-1的表达，对于理解HL-60细胞的增殖和分化机制具有重要意义。

三、研究方法本研究采用细胞生物学、分子生物学及生物信息学等方法，具体步骤如下：1. 细胞培养与处理：使用HL-60细胞进行实验，通过不同浓度的ATRA处理细胞，观察其对细胞增殖和分化的影响。

2. 基因表达分析：利用RT-PCR、Western Blot等技术检测PIM-1基因的mRNA和蛋白表达水平。

3. 组蛋白修饰分析：采用ChIP技术检测组蛋白的甲基化、乙酰化等修饰水平，并分析其与PIM-1基因表达的关系。

4. 生物信息学分析：结合公开数据库资源，分析PIM-1基因及相关信号通路的生物学功能。

四、实验结果1. ATRA抑制HL-60细胞的增殖并诱导其分化：随着ATRA 浓度的增加，HL-60细胞的增殖速度逐渐降低，同时出现明显的分化现象。

2. ATRA介导的组蛋白修饰调控PIM-1表达：在ATRA处理后，组蛋白的甲基化、乙酰化等修饰水平发生变化，这些变化与PIM-1基因的表达水平呈正相关。

《ATRA介导组蛋白修饰调控PIM-1抑制HL-60细胞增殖及诱导分化机制研究》范文

《ATRA介导组蛋白修饰调控PIM-1抑制HL-60细胞增殖及诱导分化机制研究》篇一一、引言近年来，全反式维甲酸（ATRA）在肿瘤治疗领域的应用日益受到关注。

特别是在急性髓系白血病（AML）的治疗中，ATRA通过调控细胞内特定基因的表达，在抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞分化方面发挥着重要作用。

本篇论文旨在研究ATRA介导的组蛋白修饰如何调控PIM-1基因表达，进而影响HL-60细胞的增殖与分化机制。

二、研究背景及意义HL-60细胞是一种常见的AML细胞系，其增殖和分化过程受到多种信号通路的调控。

PIM-1作为一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在细胞增殖和存活中发挥着重要作用。

ATRA通过与细胞内维甲酸受体结合，能够调控基因的表达和组蛋白的修饰，从而影响细胞的生长和分化。

因此，研究ATRA介导的组蛋白修饰对PIM-1的调控机制，对于深入了解AML的发病机制以及寻找新的治疗策略具有重要意义。

三、研究方法1. 细胞培养与处理：采用HL-60细胞进行实验，以ATRA作为处理因素，观察其对细胞的影响。

2. Western blot检测：通过Western blot实验检测ATRA处理后PIM-1蛋白表达的变化。

3. 组蛋白修饰检测：利用染色质免疫共沉淀（ChIP）技术检测ATRA处理后组蛋白的修饰情况。

4. 基因表达分析：通过实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术分析ATRA处理后相关基因的表达变化。

5. 细胞增殖与分化检测：采用MTT法和流式细胞术检测ATRA对HL-60细胞增殖和分化的影响。

四、实验结果1. ATRA处理后，PIM-1蛋白表达水平显著降低。

2. ChIP实验结果显示，ATRA处理后，组蛋白H3K9的乙酰化程度增加，而甲基化程度降低。

3. RT-PCR结果显示，ATRA处理后，与PIM-1相关的上游信号通路基因表达发生改变。

4. MTT法检测显示，ATRA处理后HL-60细胞的增殖受到抑制。

5. 流式细胞术检测显示，ATRA处理能够诱导HL-60细胞的分化。

全反式维甲酸联合粒细胞集落刺激因子对骨髓瘤细胞生长、分化及RARα2表达的影响

全反式维甲酸联合粒细胞集落刺激因子对骨髓瘤细胞生长、分化及RARα2表达的影响蒋端凤;贺艳娟;李林;林文远;董敏【期刊名称】《浙江大学学报（医学版）》【年(卷),期】2014(043)003【摘要】目的:观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与全反式维甲酸(ATRA)对骨髓瘤细胞生长、分化及RARα2表达的影响,探讨两药联合用于临床治疗骨髓瘤的可能性.方法:以人骨髓瘤细胞RARα2阳性细胞株(OPM2)和RARα2阴性细胞株(U266)为研究对象,设对照组、G-CSF单药组(1000、2000 U/ml)、ATRA单药组(1.0μmol/L)及两药联合组共6个平行组.采用MTT法检测细胞活力,倒置显微镜动态观察细胞凋亡过程,Annexin-V/PI双染法检测早期凋亡;瑞氏-姬母萨染色观察细胞形态学,流式细胞术分析CD49e表达;逆转录PCR检测RARα2 mRNA表达.结果:ATRA可抑制OPM2细胞的生长(P＜0.05),联合用药组生长抑制率均大于单药组(P＜0.05);而在U266细胞这种作用不明显(P＞0.05).瑞氏-姬母萨染色显示在含ATRA的处理组中,OPM2细胞有细胞核缩小、染色质聚集浓缩、核仁数量减少、胞浆量增加并呈深蓝色改变;此类改变在U226细胞不明显.U266、OPM2细胞均弱表达CD49e.在OPM2细胞中,联合用药组较对照组、ATRA单药组RARα2表达均增加(P＜0.05),对照组与G-CSF单药组RARα2表达无明显差别(均P＞0.05).U226细胞的对照组、G-CSF单药组不表达RARα2,ATRA单药组及G-CSF+ ATRA联合组弱表达RARα2.结论:ATRA对RARα2阳性骨髓瘤细胞有抑制细胞增殖作用;ATRA对RARα2阳性骨髓瘤细胞的分化也有一定促进作用.【总页数】8页(P305-312)【作者】蒋端凤;贺艳娟;李林;林文远;董敏【作者单位】中南大学湘雅医院血液科,湖南长沙410008;桂林医学院附属医院血液科,广西桂林541001;中南大学湘雅医院血液科,湖南长沙410008;中南大学湘雅医院血液科,湖南长沙410008;桂林医学院附属医院血液科,广西桂林541001;桂林医学院附属医院血液科,广西桂林541001【正文语种】中文【中图分类】R96;R733.3【相关文献】1.全反式维甲酸联合干扰素-γ对Tca8113细胞维甲酸受体基因表达的影响 [J], 陈万涛;何荣根;刘兴坤;周晓健;林李嵩2.小剂量二烯丙基二硫联合全反式维甲酸对HL-60细胞的生长抑制和诱导分化作用研究 [J], 程爱兰;武明花;黄卫国;何洁;周建国;苏琦3.组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化 [J], 陈思宇;马立恒;董颖;贾培敏;陈丽娟;郑磊贞;王振义4.辛伐他汀联合全反式维甲酸诱导NB4细胞分化凋亡过程中apo M基因表达的变化 [J], 邱国强;江庭秀;顾伟英;魏江;罗光华;贺白5.全反式维甲酸联合丙戊酸钠诱导白血病细胞分化过程中BRD4表达变化及其作用的研究 [J], 韦若颍;潘素飞;史露露;毕可红;姜国胜;宋冠华;张之勇;张文;郭燕;王岩;邱效东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ATRA诱导HL-60细胞产生多药耐药相关基因的筛选和克隆

两次消减杂交及ＰＣＲ的产物经过Ａ—Ｔ克隆连接到ＰＵＣ５７／Ｔ载体后，经过Ａｍｐ抗性和
ＬａｃＺ基因特异性的蓝白斑筛选，挑选出菌落，用第二次ＰＣＲ的引物扩增，经过琼脂糖凝胶电泳
鉴定，发现有特异性扩增条带，切所扩增片段分子量在２５０—７００ｂｐ的克隆共有４３３个，阳性率高达８４．８％。
３．基因芯片技术检测结果：
子克隆的方法获得一条含完整编码框的长约１８０４ｂｐ的片段，在个序列为已知序列。
一甜一
国际小儿肿瘤研讨会暨第四届全国小儿肿瘤学术会
２００３．中国．重庆
讨论
在此研究中，我们利用抑制消减杂交结合基因芯片技术成功构建了包含表达的与细胞耐药可能有关的基因，其中包含一个新基因，充分说明抑制消减杂交结合基因芯片技术在筛选细胞差异表达基因中的有效性。
一６９—
度，共制作４张芯片以利于信号综合分析。
５．差异表达基因克隆序列的测定：
选取在ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ中呈高强度差异较大且在ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ中表达丰度各不相同的１２个克隆进行首批序列测定。由大连宝生物公司协助完成。所用测序引物为克隆载体
ｐＵＣ５７／Ｔ多克隆位点上游通用引物序列Ｍ１３—４７即ＣＧＣＣＡＧＧＧＴＹＴｒｃｃｃＡＧＴＣＡＣＧＡＣ，由
Ｐｓｙｓ５５００芯片点样仪以针点（ｐｉｎｐｒｉｎｔｉｎｇ）的形式将每个克隆有序地点在氨基化修饰的载波片
上。然后分别与ｃｙ３及ｃｙ５荧光信号标记的ＨＬ一６０及ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ的ｃＤＮＡ探针进行杂交，经过不同严谨度的洗片，激光共聚焦扫描仪读取荧光信号，利用ＩｍａＧｅｎｅ软件包进行扫描信号
分析，进而确定各个克隆所代表的基因在ＨＬ一６０及ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ两种细胞中的相对表达强
材料与方法
一、材料１．细胞：人急性髓性细胞白血病细胞系ＨＬ一６０购自中国科学院上海细胞研究所，常规传代培养于含１０％小牛血清的ＲＰＭｌｌ６４０完全培养基中，３７０ｃ，５％Ｃ０２条件下每２—３天传代一次。ＡＴＲＡ用乙醇溶解后配制成ｌｍｍｏＬ／Ｌ的浓度，一２０。Ｃ保存备用。二、方法１．ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ的诱导；采用我们所建立的小量、多次、渐进化疗药物诱导耐药细胞系的方法用ＡＴＲＡ诱导野生型ＨＬ一６０细胞建立多药耐药细胞系，对数生长期细胞１×１０４／ｍｌ加人Ｏ．１斗ｇ／ＬＡＴＲＡ的中ＲＰＭｌｌ６４０完全培养基（经过预实验此浓度ＡＴＲＡ对ＨＬ一６０不产生影响），培养７２ｈ后用ＲＰＭｌｌ６４０洗净后，用不含ＡＴＲＡ的ＲＰＭｌｌ６４０完全培养基培养２—３代后提高ＡＴＲＡ的浓度１倍，如此反复，经过６个月终于建立一株在０．３ｍｇ／ＬＡＴＲＡ仍然维持原有增殖及死亡不变的细胞系，命名为ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ。２．ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ的药物敏感性实验：采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ法）检测ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ及ＨＬ一６０对ＡＴＲＡ、ＭＭＣ、ＶＣＲ、ＶＰ一１６、ＡＤＭ５种药物的药物敏感性，重复１２孑Ｌ，所获Ｉｃ５０值行统计学分析。并计算耐药倍数（ｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｆａｃｔｏｒ，ＲＦ）＝ＩＣ５０（ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ）／ＩＣ５０（ＨＬ一６０），其中Ｉｃ∞为半数抑制浓度分别利用ＣＬＯＮ— ＴＥＣＨ公司的ＯｌｉｇｏｔｅｘｍＲＮＡ（ｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡ）Ｋｉｔ及ＰＣＲ—ＳｅｌｅｃｔＴＭｃＤＮＡｓｕｂｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔｓ分离ｍＲＮＡ，然后进行抑制消减杂交，以ＨＬ一６０细胞作为“驱动方（ｄｒｉｖｅｒ）”，ＨＬ一６０／ＡＴＲＡ作为 “实验方（ｔｅｓｔｅｒ）”进行抑制消减杂交，将两次消减杂交的产物经过两轮ＰＣＲ反应扩增后，利用ＦｅｒｍｅｎｔａｓｌｉｎｓＴ／ＡｅｌｏｎｅＴＭＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔＫｉｔ将其克隆到ＰＵＣ５７／Ｔ载体，经过蓝白斑筛选，挑选白色菌落（阳性克隆讨会暨第四届全国小儿肿瘤学术会

实体瘤细胞的诱导分化

实体瘤细胞的诱导分化用实体瘤研究诱导分化比白血病少，实体瘤细胞种类多，其特性不一，诱导分化判定标准各不相同，分化指标一般包括形态和功能的变化，增殖能力下降，致瘤性消失。

具体实例有以下几种。

（一）人黏液表皮样癌MEC-1细胞分化诱导实验：MEC-1细胞是一种低分化黏液表皮样癌细胞系，为上皮样细胞，体外增殖迅速，异型性明显，裸鼠体内致瘤性强，在体外培养中经0.8%～1.6% DMSO诱导3天后出现一些分化表型，主要表现为生长抑制，异型性降低，表面微绒毛减少，粗面内质网明显增加，胞浆中出现特征性成熟分泌颗粒，DNA含量减少，核型趋向二倍体，细胞表面抗原含量增加。

此外用1mmol/l的六亚甲基二乙酸胺（HMBA），体外诱导MEC-1细胞也表现出类似的分化表型。

（二）人肝癌细胞分化诱导试验：BEL-7402肝癌细胞系，甲胎蛋白（AFP）阳性，酪氨酸转氨酶活力低，6-磷酸葡萄糖脱氢酶活力升高，裸鼠体内能形成肿瘤。

诱导分化后可通过AFP分泌能力消失，y-谷氨酰转肽酶（y-GT）活力降低，酪氨酸转氨酶（TAT）活力升高等指标判断。

目前常用于肝癌细胞诱导分化的药物及其作用简述如下。

1、全反式维甲酸（ATRA）：ATRA除对白血病具有很好的诱导分化治疗作用外，对肝癌细胞SMMC-7721细胞系也有显著诱导分化作用，用10umol/L的ATRA处理后，可使SMMC-7721细胞生长受到抑制，S期细胞减少，细胞形态向正常细胞方向逆转，核变小，胞浆增多，二倍体细胞数由原先的4%上升至15%，可降低AFP分泌量和y-GT活性，可升高碱性磷酸酶（ALP）和TAT活性，增加白蛋白（ALB）的分泌量，使SMMC-7721细胞的恶性表型明显逆转。

在用二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌模型中，使用ATRA，则可延缓y-GT,谷胱甘肽S-转移酶降低，以阻断肝癌的发展。

此外，ATRA还可使SMMC-7721细胞膜表面的异常糖链结构发生改变，这很可能与接触抑制的恢复有关。