水稻叶绿体DNA提取和纯化方法优化

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提取植物DNA方法

提取植物DNA方法

提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来,以便进行进一步的研究。

以下是常用的植物DNA提取方法:1. CTAB法:CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种表面活性剂,可以溶解脂质,破坏细胞膜,从而释放DNA。

首先,将植物样品粉碎,加入CTAB缓冲液中并进行润湿,然后加入蛋白酶,破坏细胞膜。

接下来,加入CTAB-蛋白酶混合液,室温静置,使DNA与CTAB结合。

之后,将混合液经过苯酚-氯仿提取,将DNA从其他组分中分离出来。

最后,使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀,洗涤并溶解。

2. 硅胶柱法:硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。

首先,将植物样品粉碎,加入提取缓冲液中,并加入蛋白酶进行细胞壁降解。

接下来,将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上,使用重力流动分离DNA。

然后,使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。

最后,使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱,并收集纯化的DNA。

3. 高盐法:高盐法适用于粗提植物DNA。

首先,将植物样品细碎,加入高盐缓冲液中,其中含有高浓度的盐和蛋白酶。

高盐浓度可以破坏细胞膜,并使DNA 从蛋白质中解离出来。

然后,使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀,洗涤并溶解。

4. 快速提取法:快速提取法是一种高效和便捷的方式,适用于大规模提取植物DNA。

首先,将植物样品经过快速研磨处理,将DNA释放到提取缓冲液中。

然后,使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀,然后洗涤并溶解。

这些方法在植物科学研究中被广泛使用。

在选择提取方法时,需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。

植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整,以获得满意的结果。

需要注意的是,植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。

样品应在低温下保存,以保持DNA的完整性。

此外,处理样品时要避免污染和酶解,以确保提取的DNA质量。

水稻叶绿体基因组的挖掘及其在作物育种中的应用

水稻叶绿体基因组的挖掘及其在作物育种中的应用

水稻叶绿体基因组的挖掘及其在作物育种中的应用水稻是世界上最重要的粮食作物之一,为全球人类提供了丰富的食物资源。

在农业生产中,水稻的育种工作尤为重要。

近年来,随着基因组学等技术的进步,生物学家们对水稻基因组进行了深入的研究,特别是关注了水稻叶绿体基因组的挖掘。

此举有望为水稻育种带来新的思路和很大的突破,为世界粮食生产做出积极的贡献。

1. 水稻叶绿体基因组的构成及特点叶绿体是植物细胞中能够进行光合作用的细胞小器官。

而水稻叶绿体基因组,则是指水稻中叶绿体DNA的全部遗传信息。

水稻叶绿体基因组非常小,只有134万个碱基对,与整个水稻基因组(4亿个碱基对)相比,只占极小的一部分。

此外,水稻叶绿体基因组具有一些独特的特点:首先,其基因组结构相对稳定,很少发生基因变异。

其次,水稻叶绿体基因组的遗传信息是单倍体的,只经过母亲遗传,不会发生杂交等复杂的遗传现象。

这些特点为研究水稻叶绿体基因组提供了很好的基础。

2. 水稻叶绿体基因组的挖掘随着基因组学技术和计算机技术的迅速发展,科学家们能够高效地解析和比较不同物种的基因组信息,探索基因序列间的关系,识别并研究基因功能。

因此,挖掘水稻叶绿体基因组已成为生物学家的研究热点。

目前,研究人员已经开展了大量的水稻叶绿体基因组挖掘工作,通过比较分析,已经鉴定出了水稻叶绿体基因组中的许多基因,包括编码光合作用酶、蛋白质合成等功能的基因。

3. 水稻叶绿体基因组在作物育种中的应用挖掘水稻叶绿体基因组,不仅可以帮助我们深入了解水稻的基因组信息,更为重要的是有望促进水稻育种的进步。

具体来说,水稻叶绿体基因组相关基因的挖掘和研究,可以为水稻的光合作用和养分吸收等生理过程提供新的思路和方法。

同时,水稻叶绿体基因组的研究还可以为我们揭示水稻的亲缘关系,寻找有价值的水稻品种资源,促进水稻的遗传改良。

水稻育种工作者可以利用水稻叶绿体基因组挖掘的成果,快速筛选、育成新的优良水稻品种,为农业生产和人类生活带来更多的福利。

一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速DNA提取方法_闫双勇

一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速DNA提取方法_闫双勇

子 DNA 样品 PCR 扩增成功率为 91.0%,3 个不同时期取材的叶片 DNA 样品 PCR 扩增成功率均在 97.0%以上。该方
法提取的 DNA 也可以进行高分辨率熔解曲线分析。
关键词:水稻;DNA 提取;聚合酶链式反应
中图分类号:Q751 文献标识码:A
文章编号:1006-8082(2011)05-0011-03
1:取样
2:细胞破碎
3:加热
4:离心
图 1 DNA 提取过程主要步骤流程图
播种后 117 d 取得的叶片样品。 1.2 DNA 提取
如图 1 所示,该方法主要包括取样、细胞破碎、加 热及离心这几个步骤。
取样:取 1 粒或半粒去壳的水稻种子(半粒种子为 沿种子横向切半粒,选择不包含胚的半粒进行 DNA 提 取)或从叶尖部取约 2 cm 的叶片作为 DNA 提取样品。 可在田间直接将样品放入 2 ml 离心管中。
·11·
闫双勇等:一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速 DNA 提取方法
2011,17(5):11-13
表 1 研究中用到的 PCR 引物
引物名 Sn-5 RM523 RM22 Ehd1 Frg 720_25 920_20_611 860-20 920-27 920-20 920-22 920-20-2
片段大小 304/168
148 186 252 179/181 350 404 187 311 345 532 281
注:片段大小通过引物序列,用 NCBI 工具 Primer-Blas(t /tools/primer-blast)确定
表 2 不同样品纯度及产量比较
注:材料类型说明见材料与方法;经多重比较检验,P=0.05
100bp 250bp

水稻线粒体DNA的提取和纯化1)

水稻线粒体DNA的提取和纯化1)
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植物基因组dna提取和纯化实验的改进

植物基因组dna提取和纯化实验的改进

植物基因组dna提取和纯化实验的改进
植物基因组DNA提取和纯化一直是分子生物学研究中的基础操作,也是分子克隆和重组DNA技术的基础。

随着研究的深入,对植物基因组DNA提取实验的提高和改进变得越来越重要。

为了提高植物基因组DNA提取和纯化的结果,目前采用许多改进措施,其中包括:
1.引入新型DNA提取液,根据实验条件和所选择的植物材料,使用不同种类的溶剂体系。

这样可以增加植物细胞质和DNA之间相对稳定的作用,从而提高DNA提取率。

2.根据植物叶绿体组织的性质,添加重力沉淀、离心沉淀或电泳分离的步骤,使原材料不受外界的干扰,彻底分离出纯正的DNA片段。

3.根据不同的植物材料,运用酶促技术,采用噬菌体表达系统和定量PCR方法,获得更高精细度和效率。

4.使用植物基因组DNA受体法,可以特异性提取极微量的DNA,提高可测量级别的DNA样品。

这些有效的改进措施可以显著提高植物基因组DNA的提取和纯化质量,为进一步的基因组学研究提供稳定的质量保证。

植物中dna的提取方法

植物中dna的提取方法

植物中dna的提取方法
1.取植物样品:从植物中选取新鲜的叶片、花、果实、根等样品,避免使用含有腐烂、干枯或受到污染的样品。

2. 切碎植物组织:用刀片或剪刀将植物材料切成小块,放入细碎的研钵中,加入液氮或干冰,迅速研磨碎成粉末状。

3. 加入提取缓冲液:将粉末状样品转移到离心管中,加入含有CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)的提取缓冲液,并加入蛋白酶K。

缓冲液的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。

4. 热处理样品:将离心管放入水浴中,用80°C的温度加热30分钟,使细胞壁破裂,释放DNA。

5. 加入有机溶剂:将等体积的氯仿:异戊醇(24:1)加入样品中,充分混合后离心,分离出上清液。

6. 沉淀DNA:将上清液转移到装有冰冷乙醇的离心管中,缓慢倒入样品,轻轻摇晃后静置10分钟,将离心管放入高速离心机中离心10分钟,沉淀出DNA。

7. 溶解DNA:将沉淀的DNA用70%的乙醇洗涤,再用TE缓冲液(10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)将DNA溶解。

以上是一种常用的植物中DNA提取方法,可以根据实验需要进行调整和改进。

- 1 -。

一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法

一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法

中国水稻科学(ChineseJRiceSci),2005,19(6):561~563http:f?www.rieescience.org一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法561陈文岳1,2包劲松1周祥胜3舒庆尧1一(1浙江大学原子核农业科学研究所,浙江杭州310029;2浙江省杭州市农业科学研究院,浙江杭州310024;3浙江省种子管理站,浙江杭州310020;+通讯联系人:E-mail:qyshu@ziu.edu.cn)ASimplifiedRiceDNAExtractionProtocolforPCRAnalysisCHENWen-yuel一,BAOJin-son91,ZHOUXiang-shen93,SHUQing—ya01’”(1InstituteofNuclearAgriculturalSciences,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029,China;2HangzhouAcademyofAgriculturalSci—ences,Hangzhou310024,China;3ZhejiangSeedAdministrationStation,Hangzhou310020,China;‘Correspondingauthor,E-mail:qyshu@zju.edu.cn)Abstract:AsimpleprotocolwasestablishedforDNAextractionbyusingriceetiolatedseedlings.Byusingthismethod,riceDNAwasdirectlyextractedin0.5mol/LNaOHsolutionineppendorftube.ResuhsofcomparativePCRanalysesandelectrophoresisshowedthatDNAextractedbyusingthismethodwasgoodandusefulthatisolatedbyusingstandardCTABmethod.Keywords:DNAextraction;rice;polymerasechainreaction;molecularmarker;simplesequencerepeats;transgene摘要:以水稻黄化苗为材料,用NaOH溶液抽提DNA,对其用于基于PCR技术的DNA标记中的效果进行了分析。

水稻基因组DNA提取方法的研究

水稻基因组DNA提取方法的研究
摘要: 为探 索分 子 标 记 辅 助 选择 育 种 中快 速 有 效 的 D NA 提 取 方 法 , 以水稻 新鲜叶 片、 衰老叶 片、 水稻 种子 为
材料 , 以C TAB法 和 S DS法 为提 取 方 法 , 利 用 紫 外 分 光 光 度 计 和 琼 脂 糖 凝 胶 电泳 进 行 DNA 纯 度检 测 , 对 水 稻
溶液 中 ; ( 1 0 ) 向 D NA 原 液 中 加 人 3 L R n a s e A( 1 0 mg ・ mL 。 ) , 置于 3 7 ℃ 恒 温 培 养 箱 中 消 化 1 ~2 h ; ( 1 1 ) 一2 O ℃保存 待用 。 1 . 2 . 2 S DS法提 取 水 稻 基 因 组 D NA ( 1 ) 分 别
黑龙 江 农 业 科 学 2 0 1 4 ( 1 ) : 7 ~1 O
He i l o n i a ng Agr i c u l t ur a l S c i e nc e s
水 稻 基 因 组 DNA 提 取 方 法 的 研 究
马 文 东
( 黑龙 江省农 业科 学院 佳 木斯 水稻 研 究所 , 黑龙 江 佳木 斯 1 5 4 0 2 6 )
基因组 D NA 提 取 方 法和 实验 体 系进 行 了优 化 和 摸 索 。结 果 表 明 : 新 鲜叶片提取 效果最好 , 其 次是 种 子 , 再 次 是衰老叶片 ; C T AB法 和 S D S法 差 别 不 大 ; 为 避 免 酚 类 物质 氧化 污 染 , 可在 提 取 液 中添 加 p _ 巯基 乙醇 。
报 道 1 ] 。
以水稻 的种 子 、 新 鲜 叶 片 和 衰 老 叶 片 为 供 试
材 料 。将水 稻种 子 催 芽 后 放 于 培养 箱 中 , 2 5 9月 中 旬 采摘 , 保存 于 一8 0 ℃ 的 冰箱 中 。种 子 为 成 熟 种 子, 室 温保 存 , 水 分含 量为 l 4 。

水稻基因组DNA提取方法

水稻基因组DNA提取方法

1.TPS DNA提取buffer成分使用浓1L体系添加量度100mM 12.114gTris-HCl(pH8.0)NaCl 1M 58.44gEDTA 10 mM 3.7224gTPS法抽DNA (96孔板大量提取)1.取4cm长的水稻叶片放在96孔取样板,加入两颗5mm钢珠,加400ulTPS,用力将皮盖盖紧(否则会交叉污染),组织破碎仪(70HZ ,60s~150s【根据叶片老嫩程度调节】),短暂离心后放65℃烘箱20min~40min,期间震荡混匀三次。

2.配平后,4000rpm,30min;3.准备96孔浅孔板,并标号,加入200ul异丙醇.将离心后的上清取200ul转移到板中;4.-20℃沉淀3min(或4℃沉淀15min),4000rpm,30min(注意配平);5.倒掉异丙醇,加400ul(或者500ul)75%乙醇,4000rpm,15min;6.倒掉70%乙醇,倒扣离心,最好不要超过500rpm。

通风橱晾干2小时,加100-300ul水溶解。

PCR反应时取2~4ul做模板即可;CTAB DNA提取buffer成分使用浓度4L体系添加量CTAB 2% 80gTris-HCl(pH 8.0) 100mM 48.456gNaCl 1M 233.76gEDTA二钠盐20 mM 29.7792gCTAB 法抽DNA (单管少量提取)1.取5cm长的水稻叶片放在2ml的tube中, 放入液氮中用筷子捣碎后(或者放入1颗6mm钢珠,用组织破碎仪打碎),加750ulCTAB,放65℃烘箱30min~1h,期间震荡混匀三次。

2.用连续加样器加500ul氯仿,震荡混匀后,12,000rpm,10min3.准备新的2ml的Tube,加入500ul异丙醇,并编号,将离心后的上清吸取500ul转移到新的EP管中,检查盖子是否盖严,上下颠倒混匀;4.-20℃沉淀3min(或4℃沉淀15min),12,000rpm,10min;5.倒掉异丙醇,加750ul(或者1ml)75%乙醇,上下颠倒混匀,12,000rpm,5min;6.倒掉70%乙醇,通风橱晾干2小时,加200-500ul水溶解。

植物提取dna的方法

植物提取dna的方法

植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法通常包括以下步骤:
1. 样品收集:选择新鲜的植物组织(如叶片、根部、种子等),避免使用死亡或腐烂的组织。

2. 组织破碎:将植物组织切碎或研磨,以释放DNA。

可以使用刀片、搅拌器、搅拌器研磨器等工具。

3. 细胞破裂:将组织样品置于研磨缓冲液中,并使用低温(如液氮)或高温(如加热至95C)进行热处理,破坏细胞壁以释放DNA。

4. 清理组织混合物:将组织破碎液通过滤纸等过滤,除掉固体残渣,获得纯净的液体样品。

5. 提取DNA:使用DNA提取试剂盒或自制的DNA提取缓冲液,根据试剂盒说明书或简单的化学反应步骤,将DNA从提取液中分离出来。

6. 纯化DNA:通过酒精沉淀、洗涤和干燥等步骤,去除可能存在的杂质和污染物,提高DNA的纯度和浓度。

7. DNA定量和质量检测:使用紫外吸收光度计或荧光探针等方法,测量提取得
到的DNA的浓度和纯度,确保其适合后续实验应用。

需要注意的是,不同植物物种的DNA提取方法可能存在差异,具体步骤和试剂使用可以根据研究目的和样品特点进行调整和优化。

同样,商业化的DNA提取试剂盒也提供了一种方便和快速的方法,避免了自制试剂的繁琐操作和优化步骤。

水稻基因组DNA提取方法的研究进展

水稻基因组DNA提取方法的研究进展

水稻基因组DNA提取方法的研究进展摘要:水稻基因组DNA的提取方法主要有SDS法和CTAB法。

在此基础上又提出了快速制备法、简易提取法、无需液氮研磨提取法、微量提取法等多种方法。

从试验提取材料、方法等方面对以上各种方法的优缺点及应用范围进行了综述。

关键词:水稻;基因组DNA;提取方法水稻是世界上最主要的三大粮食作物之一,已被列为模式作物,有着丰富和深入的基因组研究基础。

其DNA的制备是深入进行分子生物学研究的前提。

为使所得DNA纯度高,断裂降解程度小、量足,在提取时应根据不同研究需要,保证其结构的相对完整性;尽量排除其他大分子成分如蛋白质、多糖等的污染。

前人已就植物基因组DNA的提取总结了一系列的方法,如SDS法、CTAB法。

但在DNA提取过程中,有机试剂处理次数过多,所得DNA分子片段偏小,纯度不高,得率也低。

且CTAB等试剂价格昂贵,增加了成本。

目前,针对不同的研究目的和试验需要,提取水稻基因组DNA的材料和方法的侧重点不尽相同,各有其优缺点。

1材料目前提取水稻基因组DNA所用的材料主要有:水稻干种子、幼嫩茎段、叶片、幼穗老叶、发芽幼苗等。

不同材料对提取的DNA纯度和浓度以及所适用的范围也不同。

研究表明,植物组织中的多糖及其他一些次生代谢产物,如脂、萜等。

会对DNA的提取造成很大的困难,而且这些物质的含量随植物组织器官的生长而增加,如果不能有效地去除,植物组织中的酚类物质会氧化成醌,溶解在抽提液中与蛋白质、DNA结合。

影响DNA的解链或降低Taq酶的活性。

而使提取出来的DNA限制性内切酶无法酶切。

所以,在DNA的提取过程中必须将酚类、多糖和蛋白质等化合物除去。

为了避免上述物质的影响。

在选取材料时,应尽可能挑取处于生长旺盛期的幼嫩组织。

所以在以往的研究中大多数学者都以水稻新鲜叶片或幼苗或水稻幼嫩茎段作为提取材料。

但在进行品种鉴定和纯度分析时,用新鲜幼叶或幼苗提取DNA,不仅费时费成本,而且需要液氮。

植物DNA提取实验方案

植物DNA提取实验方案

植物DNA提取实验方案目的:1、了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。

2、掌握DNA提取的方法和步骤。

原理:提取DNA的一般原理,是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚:异戊醇提取的方法去除蛋白质,得到的DNA经过乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。

用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品提取液中的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)能螯合金属离子以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质从而减少了蛋白质对DNA的污染。

然后用CTAB处理在特定的盐浓度下CTAB使基因组DNA处于溶解状态而蛋白质仍为沉淀。

经细胞破碎液获得的DNA粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理其中酚是高效的蛋白变性剂可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉然后用氯仿、异戊醇处理一方面可达到去蛋白的目的另一方面还可去除残留的酚。

一、材料植物的根、茎、叶。

最好选择叶子部分做实验。

二、设备移液管,冷冻高速离心机,台式高速离心机,陶瓷研钵,1.5mL 离心管。

三、试剂1、CTAB或Nacl溶液 4.1克NaCl溶解于80ml水缓慢加入10克CTAB加水至100ml。

2、其它试剂 氯仿、异戊醇24 1酚 氯仿 异戊醇25 24 1异丙醇TE10%SDS蛋白酶K20mg/ml5mol/LNaCl。

四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干用蒸馏水洗两次然后用超纯水洗一遍吸干剪碎称0.5-0.25克。

2、将所取材料放入预冷的研钵研钵提前要灭菌研成粉末后置于7ml离心管内可以换为将样品放置到7ml离心管中800ul后用玻棒捣碎。

3、加入2.4ml65℃预热的CTAB充分混合后65℃水浴90min以上冷却到室温加入等体积氯仿异戊醇24 1轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀-20℃度放置20min4℃离心5000g×5min去上清。

完整叶绿体提取方法的优化探讨

完整叶绿体提取方法的优化探讨
2.2.3 纯化 将最终所获悬浮液小心地移入底部放有 100μl 1M 葡萄糖溶液的 离心管中,使其处于上层,两层不混,再于 1000r/min 下离心 30 秒,弃上 液。 把叶绿体分离过程中第一次分离得到的完整叶绿体和第二次分离 得到的完整叶绿体的纯度进行比较,结果表明,第二次离心后得到的完 整叶绿体的纯度较高。这主要是因为第二次离心时破碎而密度较小的 叶绿体不容易沉入密度大的葡萄糖溶液中,从而使沉淀中破碎叶绿体 的比例减小。 另外,也可以把第一次分离得到的叶绿体,再用等渗溶液洗涤,并 以 3000r/min 再次离心,则可起“浮选”效果,使得完整叶绿体的纯度提 高。 2.2.4 两种离心方法之间的比较 由于密度梯度离心方法需要较高的离心速度而且密度梯度溶液的 配制常出现问题,因此实验结果不理想。 对比看来,差速离心的方法比较简单易行,且效果较好。 3.讨论 这次试验结果表明,通过不同转速条件下叶绿体提取效果的比较, 3000r/min 条件下,叶绿体的提取效果较佳。氯化钠、山梨醇做等渗介质 的条件下,叶绿体的提取效果相对较好。 叶绿体提取中,缓冲液发挥着极其重要的作用。试验中曾尝试不加 缓冲液 Tris、EDTA,用 0.35mol/L 氯化钠溶液做等渗溶液,结果很不理想。 其他条件相同的情况下,加入 Tris、EDTA 缓冲液,叶绿体得率较高。 叶绿体提取中,植物材料的选择也是十分重要的。菠菜和豌豆是分 离完整质体的极好材料,期细胞中含有质体较小而且它们都能在不积 累淀粉和酚类物质的条件下生长。菠菜的叶绿体湿重比率高,而豌豆容 易生长。 因此,叶绿体提取的优化方案应是:3000r/min 的条件下离心,加缓 冲液,选择好的实验材料,加保护剂,等渗溶液, (下转第 762 页)
参考文献许大全沈允钢具有高碳活力的完整叶绿体的分离沈阳农学院学报叶济宁赵海英完整叶绿体的快速制备及其完整率的测定植物生理学通讯唐新科周平兰谭爱武菠菜叶绿体蛋白质的提取与分离湘潭师范学院学报自然科学版上接第页出库调库借出归还盘点等多项货物操作流程提供完备的账务系统可以随时查询打印月记账日记账收发汇总账存货明细账顺利实现物资材料管理工作的延伸与细化做到供销公司矿级单位生产区队的物资供应流程的有效衔接改变了原先的粗放式管理模式形成从上到下自始至终的精细化管理
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4 3 0 r ri~ .T ec lrpat A oae rm ea o ec lmpat n uie s g R aea d p en s 0 - n a h hoo ls DN i i ltd f ss o t b v ho lssa d p r d u i n s n mtiaeK h i f n w ihc udb sd a e lt fP R. hc o l eu e stmpae o C
操作 . 本方法要点为 : 液 230 ・ i 匀浆 0 mn r 离心去核 , 上清液 430 ・ i 0 rn ra 离心 , 淀用 于 D A提取 , 后 的叶绿 沉 N 提取
体 D A用 R ae N N s 和蛋白酶 K纯化 .
关键词
水稻 ; 叶绿体 D A 提取 N;
ml oL山梨醇 , .5m l E E .O 0 0 m l C , .1m F . / 0 0 oLH P S H, .1 o LK 10 0 o L口 / K / 巯基 乙醇 , m l D A, m o L 2m o LE T 1 m l / / M C , m o LM C ,.8 n l 2 P 4p .) gl l m l n I 00  ̄/ K H O ,H76 充分悬 浮后 4 0 . i 2 / 2 m L 0rmn 3 离心 2 i, 0mn沉淀重悬浮于 l 0
) 2 (6 8 文献标识码 A 文章 编号 10-57 20 )1 020 0o2 3 (0 6O— 9 -3 0
中图分 类号
Th mpo e n fa Meh d t xrc n ry Rie Choo ls A e I rv me to to o E ta ta d Pui c lrpa tDN f
O i ,H A G G U L- ,  ̄ U N  ̄ -e ,W N i -n w t A G J gj g,C E in-i t n i H N Lagb
( o eeo i c neH nnN r a U i rt, l C lg f f Si c , ua oml n esy C1 l Le e v i 础
2 3 0 r ri~ .tesdme tr u li r e vd . h ho pat aec l ce y cnru a n es p maa ta 0 ・ n a h e i nay n ce aermo e T ec lr ls r ol td b e t fgf g t u e tn t o s e i i h
取的方法主要有 D a 法…、 Ns I e 蔗糖密度梯度离心法 、e_l Pw i o 梯度法 、 无水法 、 高盐低 p H法 等 . 。 这些 方法虽 已在许多农作物研究中应用 , 由于受制于较高档的仪器设备限制 , 但 因此还没有较满意的提取水稻叶
绿体 D A的方法 . N 本文对提取水稻叶绿体 D A的适宜方法进行了研究 . N
AI r e A meh d t xrc n m at to o eta ta d p
40 8 , h a 10 1C i ) n
r hoo ls DN i rv d T e et ce ou o sc ndu ae t lrpat A si o e . h xr td slt n i e t fgtd a c mp a i
2m oL抗坏血酸 , m l n I 0 0 m l 2 P 4p .)高速匀浆 , 层纱布过滤 , ml / 1 oLM C2 .8 o LKH O ,H 6 1, m / , m / 8 滤液于 4℃( 以 下除说明外 , 皆为 4℃) 0rmn 2 0 - i 3 离心 5 i, n上清液 430r i m mn 0 ・ 离心 5 i, n沉淀用 1 L m 0 缓冲液 B0 3 m (.
第 2卷 第 1 9 期
水 稻 叶绿 体 D A提 取 和 纯 化 方 法 优 化 N
欧立军 , 光文 , 黄 王京京 , 良碧 陈
( 湖南师范大学生命科 学学院 , 中国 长沙 4 08 ) 10 1


改 进了水稻叶绿体 D A的提取 和纯化方法 , N 获得 的高纯度 的水 稻叶绿体 D A适于 P R扩增等分子 N C
1 材料 与方 法
11 植 物材料 .
水稻两用不育系培矮 6 s 4 的叶片 .
12 叶绿体的分离 .
取新鲜叶片 5g4℃暗处理 1d 冲洗干净 , , , 吸干水 分 , 去中脉 , 剪碎后加入 5 L预冷缓冲液 A 0 3 0m ( .
m l 山梨醇 ,. o LM SK H, .1 o LK 1 00 o L3 oL / 00 m l E- O 00 l C, .1 l 巯基乙醇 , m l D A 1 m l g1 5 / m / m /l 一 5 oL T , m o L C , m /E /M 2
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2O 年 3月 O6
湖南师范大学 自然科学学报
Junlo o ra fNaua ce c fHu a oma nvri t lS ineo r n nN r lU iesy t
V0.9 No 1 12 . Ma .2 O r ,O 6
Ke r s r e Ho l A;et cin y wo d i ;c mp ̄t c DN xr t a体基因组 和核基 因组之 间相互作用 的结果 , 属于半 自主系统…. 叶绿体 D A已广泛用于分子标记 等研究 . N 目前用于高等植物叶绿体 D A提 N
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