脱细胞猪小肠黏膜下层的组织相容性

合集下载

猪小肠黏膜下层生物补片在盆腔器官脱垂手术中的应用价值

一
２．Ｓｕｒｇｉｓｉｓ诱导再生的原理：与其他生物补片不同，Ｓｕｒｇｉｓｉｓ具有软组织再生功能。很多作者通过体内及体外实验证实，Ｓｕｒｇｉｓｉｓ的细胞外基质中含有许多生物信号如多种
细胞因子和生长因子，主要包括血管上皮生长因子、碱性
、
Ｓｕｒｇｉｓｉｓ的生物学特性
Ｓｕｒｇｉｓｉｓ取材于猪小肠黏膜下层，它在制作过程中去除了细胞成分，但保留有细胞外基质和胶原构成的三维支架，采用无交联制作，且含有一些生物活性物质如黏蛋白、氨基葡聚糖、成纤维细胞生长因子、转化生长因子和血管内
一
猪的脱细胞真皮、牛心包、牛腹膜、猪小肠等补片。每种
补片有其各自的特点。与合成网片相比，生物补片的侵蚀、感染及瘘形成率明显降低¨ ２］。
取材于猪小肠黏膜下层的生物补片（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ
自从２００８年美国食品与药品监督管理局（ＦＤＡ）对
仅起到支架作用，其含有的生物活性成分可以促进新生毛
细血管的生成，同时能够诱导细胞在移植物上增殖、定向分化并形成有新生组织。无交联制作能够最大限度减少免
疫排斥反应［６］。
胞处理去除组织细胞但保留细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａ —
１．Ｓｕｒｇｉｓｉｓ植入体内后的变化过程：Ｓｕｒｇｉｓｉｓ植入体内后会逐渐降解并被吸收，但并非简单的吸收过程，它同时具有组织重塑功能，在植入部位会逐渐诱导 “ 生长”出自体组织。如Ｓｕｒｇｉｓｉｓ放置部位在筋膜处，此处原有的薄弱缺损的筋膜就会逐渐被修复加固。如此边降解吸收边诱导修复，在术后６周左右降解吸收下降的曲线与重新修复的曲线交叉，至术后８～１２周，补片逐渐被自体组织所代

小肠黏膜下层：一种可降解的天然生物支架材料(本刊中文部)

吕玉明，黄华梅，王秋玲，谢德明．应用猪主动脉脱细胞基质制备新型组织工程ｊ管支血Ｌ架：生物相容性及力学性能评价【］Ｊ．中国组织工程研究与临床康复，２１，００１（７：９ —９６４４）２１８２．８【ｔ：ｗｗｗ．ｒｒｒｈｐｆｎｚｌｆｏｈｔ／ｐ／ｃｔ．ｇ￣：ｃ．ｇｃ．ｍ】ｅｏｌｋｃ（ｄｔｄｂ：ｅ／ａｇＹＷａｇＬＥｉｙＣｈｎＨＹｎ／ｎ）ｅＹ
背景：织工程血管构建的关键依赖于理想的组
文章编号：６３８２（００４ —８２ —６１７ — ２５２１）７０９１０
支架猪瓶管作为组织工程血管构建材料已有广泛应用，但其较高的免疫原性及较差的力学强度限制了该材料作为组织工程支架的应用。目的：应用猪主动脉脱细胞基质制各一种新的具有良好机械性能及生物相容性的组织工程
吕玉明 ☆ ，，９８年生，西省吉安市人，男１６江
汉族，副主任医师，在读博士，主要从事骨
与关节损伤和组织工程的研究。
性制备脱细胞血管基质支架，采用苏木精伊红染色及生物力学分析评估其脱细胞效果及
虹管基质的力学性能。将人脐静脉血管内皮细胞接种于脱细胞血管基质支架中进行体外培养，评估其生物相容性。结果与结论：用１％的＂ｉｎＸ１０溶液处理ｒｔ－０ｒｏ
，
应用猪主动脉脱细胞基质制备新型组织工程血管支架：生物相容性及力学性能评价木术木☆
吕玉明 ’ ，黄华梅２９王秋玲３，谢德明。’ （广州医学院附属第三医院骨科，广东省广１市医学工程系，广东省广州市５０３）１６２５０５；暨南大学，医学院形态学实验中心，。１１０生物

猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察

猪小肠黏膜下基质的生物学特性的观察摘要】目的制备脱细胞小肠黏膜下基质（small intestinal Submocosa），探讨其作为组织工程生物膜的可行性。

方法利用物理和化学方法制备猪小肠黏膜下层，利用光镜、图象分析对其进行观察及分析，皮下埋植观察生物相容性。

结果光镜显示，SIS的疏密层度逐渐加深，孔径率在70-90%之间，扫描电镜显示胶原纤维结构规整，网孔丰富，纤维连续。

皮下埋植未见皮下明显的异物反应。

结论经过这种方法制备的SIS，韧性大，结构、层次分明，生物相容性良好，是一种理想的细胞支持架，是组织工程进行组织修复的良好材料。

【关键词】猪小肠黏膜下基质生物学特性观察【中图分类号】R392.12 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）01-0395-021 材料和方法1.1实验材料：猪小肠的回肠段，长度为10厘米（由沈阳医学院动物实验中心提供）1.2实验方法：1.2.1制备脱细胞小肠黏膜下基质：⑴物理方法处理：取经过检疫的健康成年猪的小肠用清水冲洗干净后,挑选管腔粗细均匀、管壁无破损及无淋巴结的部位。

先翻转小肠,使黏膜面向外,清除小肠黏膜层直至黏膜下层暴露,再次翻转小肠,清除浆膜和肌层组织。

洗净小肠黏膜下层,完全去除小肠黏膜下层上的残留组织，其间持续用4℃水冲洗[1]。

⑵化学方法处理：沿纵轴切开经物理方法处理的小肠，切成每段5c m长，将小肠段在4°C的1升0.2% TritonX- 100(σ化工有限公司、美国圣路易斯）含26.5mmol/ L的氨水中,浸泡7天。

脱细胞后,用去离子水清洗72小时,之后将猪S IS 在-55°C冷冻48小时并使用环氧乙烷消毒(沈阳市中心医院)。

双层PSIS支架纵向切出40×50×0.2 mm3进行植入。

标本在- 80°C[2]贮存。

1.2.2小肠黏膜下基质的形态学观察：⑴HE染色：取猪S I S膜，大小1c m×1c m，10%的甲醛固定24小时，石蜡包埋，常规切片，做HE染色。

猪小肠黏膜下层基质支架材料复合脂肪基质干细胞的生物相容性

t 九J c t
Ku
n m
j n g M e d ic
I In g
U n iv
P
e rs
吼 Ku n
．
c a n c o n s
650 032
ro
Yun
．
n a n a
t a r q e t t is s u e s
、
w
h ic h h a
t h e p o te
n
d in S IS
Iin i c
l t re
．
t
v in
c e
C h }n
．
V 仨： T b p r e p a r e d e c e l l u Ia r l z e d p o 0 露 j E e 丁：
m a
-
t r ix
a n
d te
s
t if y it s b i o
c o m
p a t lb iIit y
，
w
ra
b b it A D S C s
Iy o p h IIiz e d
a
t lO w t e m p e r a t u
，
a n c e
d
Ya n g Ha
An
e n
o
★ Ma s te
．
r
，
d i n g p h y s i c ia
s D it a
n
t e r ifi z e d b y a a
m m a
d ia t io
o
n
．
Pa
．
20 10
Vo | 14
?
．
No 3
．

脱细胞猪小肠粘膜下层材料体内外降解过程对比研究

脱细胞猪小肠粘膜下层材料体内外降解过程对比研究郑晓龙;陈毅;门福民;张扬;李永生;王洪权;张晋辉;刘海蓉;夏磊磊;赵博【期刊名称】《生物过程》【年(卷),期】2017(007)003【摘要】通过对脱细胞猪小肠粘膜下层基质材料进行体内外降解实验,考察了SIS 材料在不同降解环境下的降解行为,为其在临床应用中的有效性提供依据。

体外降解实验采用I型胶原酶,蛋白酶K酶解来模拟体内降解环境;体内降解实验采用大鼠和新西兰兔分别进行皮下以及腹壁植入。

结果显示SIS材料在体内修复组织需要8~12周,相当于体外I型胶原酶降解12 h (降解40.24%),蛋白酶K降解60 min (56.33%);材料在体内完全降解的时间为24周,而体外胶原酶和蛋白酶K完全降解分别需要96 h和120 min,同时SIS材料组织相容性好,无黏连,血肿等症状发生。

结果表明SIS降解与组织修复过程相匹配,排异反应弱,可以为组织修复提供力学强度与生物学模板,表明SIS材料是一种可用于临床修复的生物材料。

【总页数】9页(P31-39)【作者】郑晓龙;陈毅;门福民;张扬;李永生;王洪权;张晋辉;刘海蓉;夏磊磊;赵博【作者单位】[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[2]湖南大学材料科学与工程学院,湖南长沙;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[2]湖南大学材料科学与工程学院,湖南长沙;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京;;[1]北京博辉瑞进生物科技有限公司,北京【正文语种】中文【中图分类】R6【相关文献】1.猪小肠黏膜下层脱细胞基质补片与轻量聚丙烯补片在腹股沟疝Lichtenstein修补术中的对比研究 [J], 戴伟钢;左继东;谭进富;袁玉杰;袁凯涛;冯伟东;赵琼云;谭敏2.猪小肠黏膜下层脱细胞基质材料生物补片在腹腔镜经腹腹膜前疝修补术中的应用[J], 王宝山;申英末;陈富强;陈杰3.猪小肠黏膜下层脱细胞组织基质材料的制备与体内相容性的检验 [J], 王亮;刘梅宝;陈双4.脱细胞猪小肠粘膜下层基质材料中生长因子的定量检测 [J], 张扬;夏磊磊;高建萍;门福民;郑晓龙;张晋辉;陈毅;赵博;5.脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层修复猪创伤性皮肤缺损的比较研究 [J], 范伟杰;杨志明;罗静聪;黄云;李秀群;王珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪小肠黏膜下层支架复合兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜对T淋巴细胞增殖的影响

ｓ吐ｍｕｌ吣孕ｏｕｐｓ，蚴ｅＩｙｃｅＵｓｉｎｍｉｘｅｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ眦６∞ｓ，柚ｄｎｌ∞ｃｌｌＩｍ佗ｄｗｉ血也ｌ＿ｅｅ
ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃｉｎｄｕｃｔｉ加ｇｒｏｕｐ（ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆ
ｐ酣ｏｓｔ咖ｇｒｏｕｐ（ｉｎｄｌｌｃ妇ｏｆⅡ地ｓｅｎｃｈｙｌＴｌａｌｓ呦ｃｅｌｌｓｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ
１材料和方法
设计：对比观察的体外细胞学实验。时间及地点：实验于２００５一０９／２００７－０３在兰州大学附属第二医院骨科研究所完成。材料：健康家猪小肠由兰州肉联厂提供。出生２０ｄ的新西兰纯种兔４只，雌雄不限，由兰州生物制品研究所提供（许可证号：医动字第１４．００５号）。
主要试剂和仪器
来源
ＤＭＥＭ培养基、ＲＰＭ【１６４０培养基、地塞米松、维生素Ｃ、Ｂ一甘油磷酸钠
嚣舢３姗１州’
５２３９
万方数据
塾焦！釜壤小弱稻膜下甚ｉ桨复龟丝毽堕枣鐾于缎魄翰建组织Ｉ程壁遂壁！遵鳖塑墼增链鸭彰喃
０引言
骨髓间充质干细胞可以分化为各种中胚层组织及内外胚层组织【ｌ。２】，具有修复组织的治疗潜能和免疫调节功能ｐ刊。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨细胞外基质的合成分泌和矿化。兔骨髓间充质干细胞体外向成骨诱导表现出较强的碱性磷酸酶活性和钙离子染色强阳性，具有成骨细胞相似的形态、生长特点与功能，具有明显的成骨能力【７。９１。间充质干细胞成骨诱导后的细胞仍然具有免疫调控能力，体外表现为对Ｔ细胞增殖的抑制，随着细胞量增多，其抑制能力也增吲乳１２１。ｋＢｌ肌ｃ等【ｌｌ】观察间充质干细胞体外向成骨细胞分化后依然表达ＭＨＣ．Ｉ类分子，不表达ＭＨＣ．ＩＩ类分子，不表达共刺激分子Ｂ７．１，Ｂ７．２，ＣＤ４０，ＣＤ４０Ｌ逃脱免疫识别【１３０６】。另外通过分泌细胞因子调节制造免疫抑制的微环境【１７１。

两种方法制备猪小肠黏膜下层重建SD大鼠前交叉韧带力学对比研究

中国社区医师2019年第35卷第17期实验研究小肠黏膜下层(SIS)是天然不含细胞的细胞外基质类材料，在组织工程的支架材料领域有较多成功应用经验[1-2]。

它是从猪小肠中提取出来的一种生物活性膜，具有多功能、多分化而且容易分离等特点，厚度仅0.1mm，主要成分为细胞外基质，主要由胶原和水构成[3-4]。

其作为生物工程材料已广泛应用，但其力学强度仍存在一定差异。

本实验通过两种不同方法制作猪SIS(编织和轴卷)，并测试两者力学性能，以寻找一种增加其强度的制作方法。

资料与方法材料与分组：取新鲜猪小肠若干，通过以下方法制取SIS，并对其进行分组，A 组为编织组，B 组为轴卷组。

每组选取20个标本进行力学性能检测。

方法：①SIS 制备：取新鲜猪小肠，自十二指肠远端10cm 起取100cm 长，按每段10cm 进行横行切断，纵向剖开小肠，使浆膜层置于0.9%氯化钠溶液浸湿的纱布上，黏膜层朝上。

用纱布包裹手术刀柄，刮除小肠表面黏膜层，边刮除边用0.9%氯化钠溶液进行冲洗，见该面为乳白色半透明基膜样组织时将小肠翻转；同样方法刮除小肠肌层和浆膜层，同样边刮除边冲洗，全部刮除干净后将SIS 放置于0.9%氯化钠溶液中清洗后以化学方法处理其残留的其他细胞组织。

将以上已用物理方法处理后的SIS 用Abraham 法进行化学处理[5]，将SIS 置于含EDTA 100mmol/L 和NaOH 10mmol/L 的混合溶液，pH=11，浸泡16h。

取出后用去离子水冲洗干净，置于含HCl 和NaCl 的混合溶液(pH=0.5)中，浓度均为1mmol/L，浸泡6～8h。

取出后同样采用去离子水冲洗干净，置于含NaCl 1mmol/L 的PBS 中浸泡16h。

取出后以去离子水冲洗干净，在PBS(pH=7.4)中浸泡2h。

取出后用去离子水冲洗。

杀菌：SIS 在含1%过氧乙酸的体积分数20%乙醇溶液中浸泡8h，用含0.05%叠氮化钠的PBS 清洗2h。

猪小肠黏膜下层生物补片在盆腔器官脱垂手术治疗中应用的初步观察

临床上需要有新的移植替代物来进行ＰＯＰ患者的
盆底重建手术。北京大学人民医院妇科从２０１２年３月开始对部分ＰＯＰ患者施行了应用猪小肠黏膜下层生物补片［ｓｕ呼ｓｉｓ，库克（中国）医疗贸易有限公司］的盆底重建手术，现将手术及随访情况报告
如下。
ｘ２０
ｃｍ）裁
剪成两片，分别用于前后壁的修复。将前壁网片剪资料与方法成底边带有两翼的似梯形．翼长２ｃｍ，将翼的顶端同定在双侧子宫骶骨韧带上，两翼中点以２４）可吸收缝线缝合同定在宫颈前唇，远端缝合在膀胱颈位置，两侧间断缝合同定在盆筋膜腱弓，适当修剪阴道壁，２－０可吸收缝线连续锁边缝合阴道前壁切口。见网ｌ。后盆腔修复：ｌ：２０万肾上腺素生理盐水注射在阴道后壁直肠间隙，纵行切开阴道后壁上达后穹隆（或阴道断端），下至处女膜缘，钝、锐性向两侧分离阴道直肠间隙及直肠侧间隙，至可触及双侧坐骨棘及骶棘韧带。“Ｕ”字缝合直肠前筋膜。后壁网片裁成形状与前壁网片相似但翼长３ｃｍ，将两翼中点缝合同定在宫颈后壁（或阴道后壁顶端）上，两翼底部缝合在双侧子宫骶骨韧带。两翼顶端缝合同定在双侧骶棘韧带上，远端缝合在会阴体附近的肛提肌上。展平网片，适当修剪阴道后壁，２－０可吸收缝线连续锁边缝合阴道后壁切口。见图１。安尔碘纱布两块填塞在阴道内２４—４８ｈ取出，留置
ＳＵＮ
Ｘｉａ－ｌｉ，］ｆＡＮＧ加．ＧＥ酗Ｇ如培。ＷＡＮＧ肺＊ｆｋ胁血Ⅲ毋，０ｑ如’ｓｎｏ，ｒｏｔ，Ｂｅ＃ｉｎｇ１０００４４。Ｃｈｉｎａ
ｏ啷ｎ
ｐｒｏｌａｐｓｅ
ｔｒｅａｔｅｄ
Ｄｅｔｍｒｔｍｅｎｔ
ｂｙｌｌｓｉ赡ｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｏ，Ｏｂａｅｔｒｉｅｓ
ｓｕｂｒａｍ
ｍｅｓｈ
ａｎｄ研∞她ｙ＋ｈｈ昭

干细胞, 组织工程与再生医学

・述　评・干细胞、组织工程与再生医学杨志明中图分类号:R318 文献标识码:C 在上世纪80年代提出的组织工程概念、90年代发现成体干细胞的可塑性之后,在研究中逐渐认识到细胞、支架材料、生物活性因子、干细胞在促进组织、器官愈合与再生治疗中的重要作用。

因此,Suh等[1]认为组织修复、组织工程与再生医学有不可分割的相关性。

Go ldfarb[2]认为组织工程、干细胞和克隆技术是再生医学发展的良机;H i pp等[3]提出组织工程、干细胞、克隆技术和单性生殖是一种新的治疗模式。

本期集中刊出了22篇干细胞和组织工程相关研究的论文,以一个侧面反映了我国干细胞、组织工程研究在发展再生医学中所作出的贡献。

1　细胞治疗从胚胎或成人组织(器官)分离培养功能细胞在技术上已经十分成熟,制约临床应用的主要因素是大规模扩增技术,现已基本得到解决。

如从患者活检得到的皮肤或从包皮切除术中得到的皮肤分离培养成纤维细胞和表皮细胞,均可达到相当大的扩增量,已经可在体外培养成为单层表皮层用于皮肤的修复。

Grande (1989)首先用兔的自体关节软骨细胞移植修复关节软骨缺损,组织学观察证明有82%的软骨修复。

1997年美国FDA批准用于临床。

通过关节镜技术操作,创伤小,并发症少。

随访观察发现74%为透明软骨,组织学显示了接近正常的关节软骨结构,可用于15c m2全层软骨缺损的修复。

成体干细胞的研究近几年发展很快,已有不少临床应用的报道。

从脐带血中分离造血干细胞治疗血液病已取得成功。

从脑组织、脊髓组织中分离出的神经干细胞在动物实验中已证实具有促进神经再生能力。

从嗅鞘中分离出的嗅鞘细胞能生长出触突,穿过瘢痕组织生长,具有良好的促进中枢神经再生并重新建立传导功能的能力。

肌肉干细胞局部注射治疗肌营养不良作者单位:四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室・干细胞与组织工程研究室通讯作者:杨志明,教授,博士导师,研究方向:组织工程,E2m ail: o rthop@ 症;心肌缺血已有临床应用报道;自体骨髓间充质干细胞(m arrow m esenchym al stem cells,M SC s)通过局部心肌内注射、冠状动脉注射促进心肌再生与血管化已有大量研究及部分临床应用。

小肠黏膜下层与脱细胞羊膜促进大鼠损伤皮肤修复及血管形成的作用

・
２３２・
现代中西医结合杂志ＭｏｄｅｒｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１５Ｊａｎ，２４（３）来自［文献标识码］Ａ
［文章编号］１００８— ８８４９（２０１５）０３— ０２３２— ０３
Ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｕｂｍｕｃｏｓａａｎｄａｃｅｌｌｕｌａｒａｍｎｉｏｔｉｃｉｎｐｒｏｍｏｔｉｏｎｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄ
Ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｎｊｕｒｅｄｓｋｉｎｉｎｒａｔ
ＷＡＮＧＦｅｉ，ＷＥＩＨｏｎｇｆａｎｇ，ＨＵＣｈｅｎｇｄｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＥｎｌｕ，ＧＡＯＡｉｑｉｎ，ＷＡＮＧＲｕｉ，ＬＩＤｏｎｇｆｅｎｇ
（ＴｈｅＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨａｎｄａｎＣｉｔｙ，Ｈａｎｄａｎ０５６００１，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＩｔｉｓｔｏａｐｐｒｏａｃｈｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｕｂｍｕｃｏｓａａｎｄａｃｅｌｌｕｌａｒａｍｎｉｏｔｉｃｉｎｐｒｏｍｏｔｉｏｎｒｅｐ — ａｒａｔｉｏｎａｎｄｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｎｊｕｒｅｄｓｋｉｎｉｎｒａｔ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｗｏｆｕｌｌ — ｔｈｉｃｋｎｅｓｓｓｋｉｎｄｅｆｅｃｔｓｔｈａｔａｂｏｕｔ１．５ｃｍ ×１．５ｃｍｗｅｒｅ

猪小肠黏膜下层海绵的构建与细胞黏附性观察

猪小肠黏膜下层海绵的构建与细胞黏附性观察孙慧哲;田伟;曾亮;裘锦云;张茜【摘要】背景:虽然小肠黏膜下层的结构与皮肤非常类似,但它的孔径大小与孔径率不如皮肤那样有利于种子细胞的长入.目的:利用EDC对于猪小肠黏膜下层进行化学改性,观察其改性后形态学结构及细胞相容性.方法:将小肠黏膜下层支架材料放入含0.2%胃蛋白酶的3%乙酸水溶液中,使小肠黏膜下层的质量浓度分别为1%、2%、3%、4%,磁力搅拌与冷冻干燥后获得小肠黏膜下层海绵,分别应用50,100,150 mmol/L的EDC进行交联改性,通过孔径及吸水率结果选取最佳质量浓度的小肠黏膜下层与EDC交联浓度,进行细胞培养.将第2代骨髓基质干细胞与小肠黏膜下层海绵共培养,1,2,3周后进行扫描电镜观察.结果与结论:①当小肠黏膜下层海绵质量浓度为1%时,在100 mmol/L EDC交联下的空间结构弹性好,结构规整,无空洞现象,孔径为100-150 μm;②在100 mmol/L EDC交联下,质量浓度1%小肠黏膜下层海绵的吸水能力比2%高出0.35倍,质量浓度3%与4%小肠黏膜下层海绵的吸水能力相差不明显,质量浓度1%小肠黏膜下层海绵的结构更利于水分的流动与变化;③质量浓度1%的小肠黏膜下层海绵经100 mmol/L EDC交联后的结构、孔径及吸水率最好,可进行细胞实验.培养3周时,细胞变形相对完整且快,细胞形态在孔隙位置相对较大,外形接近长梭形,数目较多,在孔隙周围细胞形态较小,似圆盘形,数目相对较少,产生铺路石样改变,覆盖于大部分支架表面,并有大量颗粒样物质在周围出现,尤其在细胞集中位置更多见;④结果表明,EDC交联改性的小肠黏膜下层海绵具有良好细胞相容性.%BACKGROUND: Although the porcine small intestinal submucosa is very similar to the skin in the structure, its pore size and porosity are not beneficial to the growth of seed cells as the skin does. OBJECTIVE: To observe the morphological and cytocompatibility of porcinesmall intestinal submucosa after chemical modification using 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbod imide (EDC). METHODS: A porcine small intestinal submucosa sample was immersed in 3% acetic acid solution containing 0.2% pepsin to make 1%, 2%, 3%, 4% small intestine submucosa solutions. After magnetic stirring and freeze-drying, small intestinal submucosa sponge was obtained and modified by cross-linking with 50, 100, 150 mmol/L EDC. Based on the detection of pore size and water absorption, we selected the best concentrations of small intestinal submucosa and EDC, which were further used for cell culture. Passage 2 bone marrow mesenchymal stem cells were cocultured with the small intestinal submucosa sponge, and observed under scanning electron microscope at 1, 2, 3 weeks after co-culture. RESULTS AND CONCLUSION: When cross-linked with 100 mmol/L EDC, the small intestinal submucosa sponge at a mass concentration of 1% showed a reasonable structure and good elasticity with no appearance of voids, and the pore size ranged 100-150 μm. Moreover, the small intestinal submucosa sponge at a mass concentration of 1% showed a 0.35-fold increase in the compared with that at a mass concentration of 2%, and its structure was more conducive to water flows and changes. The small intestinal submucosa sponges at a mass concentration of 3% and 4% showed no difference in the water absorbing capacity. After cross-linked with 100 mmol/L EDC, the small intestinal submucosa sponge at a mass concentration of 1% showed the best structure, pore size and water absorption, which were used for cell culture. At 3 weeks after cell culture, cell deformation was relatively intactand fast; there were many cells in the pores that were relatively large and approximately spindle-shaped, while there were less cells around the pores that were relatively small and disk-shaped. A paving stone-like alteration was observed in cells that covered the most of the scaffold surface with a large number of particle-like substances, especially in the site of cell concentration. All these findings indicate that EDC-modified small intestinal submucosa sponge has good cytocompatibility.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)034【总页数】6页(P5487-5492)【关键词】生物材料;材料相容性;小肠黏膜下层;海绵;三维重建;细胞黏附;体外观察【作者】孙慧哲;田伟;曾亮;裘锦云;张茜【作者单位】沈阳医学院医学教育研究中心,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室,辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院,辽宁省沈阳市 110034【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 Introduction组织工程研究的重要内容主要为细胞与材料的相互作用，细胞外基质的存在影响着种子细胞的功能，最近发现，无细胞的天然细胞外基质可通过物理或化学方法处理小肠黏膜下层来获取[1-4]。

猪小肠黏膜下基质在组织重建中的研究进展

猪小肠黏膜下基质在组织重建中的研究进展金娟;田伟【摘要】@@ 小肠黏膜下基质(small intestine submucosa,SIS)是一种不含细胞的天然细胞外基质材料.它有良好的细胞相容性,可促进多种细胞在材料上的黏附、生长和分化[1-2].在超过1 000次的跨种交叉移植实验中,均表现为无免疫原性,而且直接免疫激惹实验无应答反应.体内降解速度也较快.与合成材料相比,所提供的环境和纤维结构更有利于细胞的生存、扩展及新陈代谢[3].如将SIS植人宿主体内,可迅速诱导细胞浸润,刺激血管生成和宿主细胞生长分化,产生的再生组织在结构和功能上均与原有组织相似.研究表明SIS基本符合组织工程理想支架材料的条件,极有可能在组织体内完全再生.已用于包括血管在内的多种组织的重建[4-10].本文就近年来诸多学者对SIS作为组织工程学中支架材料的研究报道加以综述.【期刊名称】《沈阳医学院学报》【年(卷),期】2011(013)002【总页数】3页(P119-121)【关键词】小肠黏膜下基质;组织工程;支架材料【作者】金娟;田伟【作者单位】沈阳医学院基础医学院2008级临床医学4班,辽宁沈阳110034;沈阳医学院基础医学院解剖学教研室【正文语种】中文【中图分类】R318小肠黏膜下基质 (small intestine submucosa，SIS)是一种不含细胞的天然细胞外基质材料。

它有良好的细胞相容性，可促进多种细胞在材料上的黏附、生长和分化［1－2］。

在超过1 000次的跨种交叉移植实验中，均表现为无免疫原性，而且直接免疫激惹实验无应答反应。

体内降解速度也较快。

与合成材料相比，所提供的环境和纤维结构更有利于细胞的生存、扩展及新陈代谢［3］。

如将SIS植入宿主体内，可迅速诱导细胞浸润，刺激血管生成和宿主细胞生长分化，产生的再生组织在结构和功能上均与原有组织相似。

研究表明SIS基本符合组织工程理想支架材料的条件，极有可能在组织体内完全再生。

【CN110051884A】一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵及制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910307806.8(22)申请日 2019.04.17(71)申请人上海仁康科技有限公司地址 201900 上海市宝山区真陈路1000号1幢6楼K座211室(72)发明人董亚兵　朱宁文　朱婷　朱迎春　(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人李冉(51)Int.Cl.A61L 27/60(2006.01)A61L 27/50(2006.01)A61L 27/36(2006.01)(54)发明名称一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵及制备方法(57)摘要本发明公开了一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵及制备方法，包括制备脱细胞猪小肠黏膜下层、胃蛋白酶酶解、清洗、冻干、粉碎和交联步骤。

本发明通过公开了一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵及制备方法，以猪小肠黏膜下层为来源，其经脱细胞处理后，其免疫免疫排斥反应极小。

同时利用无毒的交联剂进行交联处理，保证了获得的产品的生物安全性。

该产品不仅能够用于创面修复，也是优良的组织工程皮肤支架材料，不仅来源充分，安全可靠，价廉易得，而且其成分组成和结构与人类似，同时不存在伦理学问题，便于进行规模化、产业化制备。

权利要求书1页说明书6页附图3页CN 110051884 A 2019.07.26C N 110051884A权　利　要　求　书1/1页CN 110051884 A1.一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵，其特征在于，所述生物海绵以小肠黏膜下层SIS为原材料，通过交联改性方法并利用fa-PEG进行交联，制备出了具有三维空间结构、富含生长因子的新型组织工程支架材料。

2.根据权利要求1所述的一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵在制备用于组织重建、创面修复及注射填充的材料中的应用。

3.根据权利要求1所述的一种基于脱细胞小肠黏膜下层的生物海绵的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备脱细胞猪小肠黏膜下层将新鲜猪小肠内容物挤出，清除小肠肌层、黏膜层及附带脂肪成分；并用自来水反复冲洗后，再利用蒸馏水漂洗，后用2％的碘伏清洗消毒及利用75％的酒精脱碘；进一步利用低渗溶液浸泡清洗；再利用高渗盐溶液处理12-24h；弃去高渗盐溶液后，将猪小肠黏膜下层用浓度为1-5％的去污剂振荡处理30min-2h；最后用生理盐水清洗，即可得到SIS；(2)胃蛋白酶酶解向所述SIS中加入1％-5％的胃蛋白酶溶液，4℃搅拌酶解12-15h；(3)清洗将步骤(2)酶解后的所述SIS，过滤取沉淀，将SIS沉淀利用蒸馏水清洗；(4)冻干将步骤(3)得到的所述SIS沉淀在冻干机中冻干12-15h；(5)粉碎将冻干后的所述SIS沉淀在超微粉碎机粉碎3-5min，即可得到脱细胞SIS粉末；(6)交联在步骤(5)得到的所述脱细胞SIS粉末中加入蒸馏水，形成浓度为0.01g/ml-0.5g/ml的溶液，随后加入与所述脱细胞SIS粉末等质量的fa-PEG粉末，充分混合；并将溶液置于-20℃冰箱中冷冻6h；(7)冻干将步骤(6)得到交联后的SIS在冻干机中冻干12-15h。

脱细胞猪小肠黏膜下层的组织相容性

脱细胞猪小肠黏膜下层的组织相容性王付燕;杜立群【摘要】目的:制备脱细胞猪小肠黏膜下层(SIS),研究其用作组织工程支架材料的组织相容性.方法:0.1％十二烷基磺酸钠(SDS)处理新鲜猪SIS 30 min制备脱细胞SIS,H-E、4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及天狼星红染色观察脱细胞前后SIS的生物学特性,将其植入SD大鼠背部皮下,检测其组织相容性,对照组SD大鼠植入未脱细胞的正常SIS作为阳性对照.结果:脱细胞SIS呈白色、半透明的膜状物,具有良好的弹性及柔韧性;H-E、DAPI及天狼星红染色光学显微镜观察结果显示脱细胞SIS 无细胞及DNA残留,组织结构保留完整,胶原纤维间孔隙率增加;皮下埋植术后全部动物存活,各时间段脱细胞SIS植入组大鼠创口周围皮肤愈合良好,无红肿、渗出等炎症反应.组织学观察脱细胞SIS植入早期结构完整;随着植入时间的延长,脱细胞SIS逐渐降解,结构松散.脱细胞SIS植片周围炎症细胞数明显少于正常SIS植入组.结论:脱细胞猪SIS植入SD大鼠体内具有良好的组织相容性,未引起明显的炎症反应,是一种理想的组织工程支架材料.【期刊名称】《解剖学杂志》【年(卷),期】2018(041)006【总页数】5页(P636-639,封2)【关键词】脱细胞;小肠黏膜下层;组织相容性;组织工程;支架材料【作者】王付燕;杜立群【作者单位】山东大学齐鲁医院眼科,济南 250012;山东大学齐鲁医院眼科,济南250012【正文语种】中文组织工程技术的发展为再生医学及组织器官的修复重建提供了新的研究思路，理想的支架材料是组织工程研究及临床应用的基础，来源于天然组织或器官的细胞外基质能为细胞的黏附、生长、增殖和分化提供最为接近自然的微环境，其用做组织工程支架材料越来越受到研究者的重视[1-3]。

取自猪空肠的小肠黏膜下层(small intestinal submucosa，SIS)本质为不含细胞的天然细胞外基质材料，具有良好的生物相容性、一定的机械强度以及低免疫原性等优点，现已被广泛用于组织工程腹壁、膀胱和角膜上皮等组织器官的修复重建[4-6]。

猪小肠黏膜下层作为盖髓剂的初步研究

猪小肠黏膜下层作为盖髓剂的初步研究曹春花;邹德荣;华丽;陆家瑜;唐凤勤【期刊名称】《口腔医学》【年(卷),期】2010(030)006【摘要】目的探讨猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)的生物相容性及作为盖髓材料的可行性.方法用Abraham法制备的猪小肠黏膜下层,与人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)在体外复合培养并进行矿化诱导,观察细胞生长情况,并分别在复合培养第7、14、21天检测牙髓细胞的碱性磷酸酶活性水平,无材料的牙髓细胞矿化诱导组作为对照组.结果牙髓细胞在猪小肠黏膜下层上生长良好,细胞表面有矿化晶体形成,说明其具有良好的生物相容性,其碱性磷酸酶活性水平在第7、14、21天均高于对照组.结论 Abraham方法制备的猪小肠黏膜下层有良好的生物相容性,在体外能促进牙髓细胞矿化,有望成为一种新型的盖髓剂.【总页数】4页(P343-346)【作者】曹春花;邹德荣;华丽;陆家瑜;唐凤勤【作者单位】上海交通大学附属第六人民医院口腔科,上海,200233;上海交通大学附属第六人民医院口腔科,上海,200233;上海交通大学附属第六人民医院口腔科,上海,200233;上海交通大学附属第六人民医院口腔科,上海,200233;上海交通大学附属第六人民医院口腔科,上海,200233【正文语种】中文【中图分类】R781.05【相关文献】1.猪小肠黏膜下层脱细胞基质补片与轻量聚丙烯补片在腹股沟疝Lichtenstein修补术中的对比研究 [J], 戴伟钢;左继东;谭进富;袁玉杰;袁凯涛;冯伟东;赵琼云;谭敏2.猪小肠黏膜下层作为组织修复材料的研究进展 [J], 粟香;葛良鹏;李前勇3.两种方法制备猪小肠黏膜下层重建SD大鼠前交叉韧带力学对比研究 [J], 陈飚4.猪小肠黏膜下层脱细胞基质中I、Ⅲ型胶原检测方法研究 [J], 张扬;陈毅;高建萍;夏磊磊;李勇超;王清石;张贵锋;赵博5.脱细胞猪小肠黏膜下层粉末用于大鼠脾部分切除创面止血的研究 [J], 王文平;张文红;杜茂涛;张弘沛;龚慧;朱宇轩;李世荣;田怡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪小肠黏膜下基质海绵的制备

猪小肠黏膜下基质海绵的制备孙慧哲;田伟;曾亮;王效杰;王正东;任玥;匡宝平【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2016(020)021【摘要】背景：研究发现将小肠黏膜下基质直接应用于损伤部位，对体内外细胞的生长、分化还不是非常有效，而且其孔径很小，通透性不良，治疗效果不够理想。

目的：构建小肠黏膜下基质海绵，了解其形态学特征。

方法：采用物理及顺序化学浸泡脱细胞法制备猪小肠黏膜下基质。

以不同质量分数的小肠黏膜下基质(1%、2%、3%、4%)，不同浓度的交联剂EDC(50，100，150mmol/L)制备小肠黏膜下基质海绵，光学显微镜及扫描电镜观察海绵结构。

将小肠黏膜下基质海绵(实验组)与小肠黏膜下基质(对照组)分别置入大鼠背部肌肉中，置入1，2，3周后组织学观察组织反应及材料降解。

结果与结论：①以质量分数1%小肠黏膜下基质、100 mmol/L EDC交联制得的小肠黏膜下基质海绵，空间结构弹性好，结构规整，孔径均匀一致，无空洞现象，所以肌肉置入实验选择此组材料；②置入1周后，实验组海绵网孔状结构保持完整，在材料周围可见轻微炎细胞浸润，少量嗜中性粒细胞、淋巴细胞浸润和巨细胞反应，支架边缘可见周围软组织增殖移行；对照组炎细胞浸润明显，其下创面有粘连，周围软组织增殖移行较少。

置入3周后，实验组置入部位炎症基本消退，可见成纤维样细胞及血管成分，胶原纤维束较细小，平行排列，海绵处呈结缔组织样结构；对照组仍然存在炎性细胞浸润，胶原纤维含量较少；③结果表明：小肠黏膜下基质海绵结构合理，具备作为组织工程皮肤支架的潜能。

%BACKGROUND:Studies have found that smal intestinal submucosa that is directly implanted into the lesioncannoteffectively promote celgrowth and differentiationin vivoandin vitro, because of its smal pore size and poor permeability. OBJECTIVE:To establish the smal intestinal submucosa sponge and to explore its morphological characteristics. METHODS:Porcinesmall intestinal submucosa was prepared by physiochemical method. Thenthe small intestinal submucosa with the mass fraction of 1%, 2%, 3% and 4% was cross-linked by 50, 100 and150 mmol/L 1-ehyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodimide hydrochloride, respectively, so as to obtain smal intestinal submucosa sponge, whose morphology was detected by lighting and scanning electron microscope. In the meanwhile, smal intestinal submucosa as control group, and smal intestinal submucosa sponge astest groupwere intramuscularly implanted into the back of rats,respectively. At 1, 2 and 3 weeks after implantation, histological changes andimplantdegradation were observed by hematoxylin-eosin staining. RESULTS AND CONCLUSION:The smal intestinal submucosa sponge, which was prepared by the smal intestinal submucosa with the mass fraction of 1% and 100 mmol/L cross-linking agent, had elastic and close space structure, uniform pore size and regular structure, so it was selected as the implant into themuscle.At 1 week after implantation, in the test group,the mesh sponge had the complete structure withfew neutrophils, lymphocytes and giant cel reaction, andsoft tissue hyperplasia and migration surroundingthe implant appeared;in the control group,there were numerous inflammatory cels, and wound adhesion and little migration of surrounding tissues could be found.At 3 weeks, inflammatory cels mostlydisappeared, and fibroblast-like cels and vascular components appeared, with thinner and regular colagen fiber bundles, and connective tissue-like structures could be found. In contrast, the control group stil had numerous inflammatory cels and few colagen fibers. In conclusion, smal intestinal submucosa sponge isapotential material used asthe tissue-engineered skinscaffold.【总页数】7页(P3110-3116)【作者】孙慧哲;田伟;曾亮;王效杰;王正东;任玥;匡宝平【作者单位】沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院解剖教研室，辽宁省沈阳市 110034【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.猪小肠黏膜下层脱细胞组织基质材料的制备与体内相容性的检验 [J], 王亮;刘梅宝;陈双2.猪小肠黏膜下基质海绵的制备 [J], 孙慧哲;田伟;曾亮;王效杰;王正东;任玥;匡宝平;3.猪小肠黏膜下层基质支架材料复合脂肪基质干细胞的生物相容性 [J], 杨浩;吴迪;李世和;朱晓松4.猪髋动脉内皮细胞与猪小肠黏膜下基质的联合培养 [J], 冷晔;高艳琴;丁祖泉5.猪小肠黏膜下层海绵的制备及促成骨作用 [J], 王梅;李博文;王思雯;刘玉华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。