猪小肠粘膜中肝素钠提取与精制工艺研究

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肝素钠小规模提取技术

肝素钠小规模提取技术

肝素钠小规模提取技术摘要详细介绍了小规模提取肝素钠的具体技术,并进行了效益核算。

为自主创业提供了一种简捷、方便、快速的发展途径。

关键词肠粘(膜)液;肝素钠;小规模;提取肝素钠是一种生物活性物质,广泛存在于猪、牛的大小肠、肝、胰脏等哺乳动物的组织中,目前主要从猪的肠粘膜和肺中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐,属粘多糖类物质。

肝素钠能够阻止血小板聚集和破坏,妨碍凝血激活酶的形成;阻止凝血酶原变为凝血酶;抑制凝血酶,从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白,达到抗凝血的作用,在治疗血管病方面有独特之处,具有净血脂、防止血栓形成的作用,并对若干肿瘤的癌细胞有抑制和防止转移的作用,有较高的医用价值。

随着我国进入老龄化社会,体外循环手术和冠状动脉介入手术需求将出现快速增长,带动相关生产公司的肝素钠销量逐年显著递增及普通肝素钠制剂全球市场容量持续较快增长,直接带动了近几年全球肝素钠原料药(由肝素钠精品制得的半成品)市场容量持续较快增长。

过去5年中,全球肝素原料药年复合增长率约为9.35%,有机构预测。

2010年至2015年的增长速度更快,年复合增长率预计达到10.32%,到2015年肝素原料药的需求将达50.5万亿单位。

1 仪器及药品准备设备仪器:煮池(圆形池底嵌入铁锅),吸附池,搅拌扁(或棒),绞肉机,波美计(比重表),温度计(量程为100℃),滤布网兜,塑料盆、桶、瓢,慢转速搅拌装置(洗衣机马达改装),压榨机,石棉滤布,涤纶细(120目)白布,冷凝管(80 cm),煤或柴,鼓风机。

药品:D~204肝素钠离子交换专用树脂,食盐,固体烧碱,盐酸,95%的乙醇,精密pH试纸、广范pH试纸等。

2 鲜猪肠粘膜的处理在池底锅内放入新鲜猪肠粘(膜)液,搅拌加热使温度升到30℃,此时按100 kg粘液加入食盐3.5~4.5kg,继续加热到40℃,用40%的烧碱溶液调节pH 值到8.8~9,并使温度升至50~55℃,保温4h,注意搅拌。

然后升温至90~95℃,停止加热,保温15~20min,捞出浮油,用100目的尼龙滤布过滤,将滤液转入吸附池内。

膜分离与沉淀结合法提取猪小肠黏膜中肝素钠的工艺研究

膜分离与沉淀结合法提取猪小肠黏膜中肝素钠的工艺研究

用量减少 85%左右,回收率和效价分别提高 29.03%和 61.84 u/mg;与膜分离法相比较回收率和效价分别提高 0.62%和
15.93 u/mg。结论 膜分离与沉淀结合法工艺设计合理、方法可靠,适宜于中、小企业生产。
关键词:膜分离;沉淀剂;猪小肠黏膜;肝素钠
中图分类号:G424.31
文献标识码:B
血清白蛋白为对照,测定蛋白质含量。
2 条件的选择
2.1 滤膜的选择
肝素 Mr 为 12 000±6 000;对商品肝素的研究提示至少有 21
种分子个体,Mr 为 3 000~37 500[6]。根据文献[7],选用 Mr 为 1 000~
2 000(PAN)1 、3 000~4 000(PAN)2 、5 000~6 000(PAN)3 以上的分离 膜,对猪小肠黏膜中的肝素钠进行截留,结果见表 1。
结合法
100.00 68.23
96.64 97.26
表 3 表明,采用膜分离与沉淀结合法后,回收率比盐解-离
子交换-乙醇沉淀法提高 29.03%,比膜分离法提高 0.62%。
4 讨论
从猪小肠黏膜中提取肝素钠,截留量应保持在 15%左右为
宜。这样,既可使大部分小分子蛋白质、核酸及其他一些杂质被
除掉,又不使肝素钠丢失。应使猪小肠黏膜浓度为 5%左右为
3.5 沉淀
按比例在滤液中加入 1.5 倍 95%乙醇,充分搅拌后,静置过
夜,虹吸上层醇液,沉淀分别用 95%乙醇、丙酮脱水 2 次,真空
干燥,得肝素钠精品。 表 2 3 种方法的比较
投料量 反应液体积 乙醇用量 肝素钠 效价
方法 (kg) (L)
(L) (g) (u/mg)
膜分离与沉淀结合法

从猪小肠中提取粗品肝素钠工艺方案

从猪小肠中提取粗品肝素钠工艺方案

所有记录都将进行归档,其资料保存在产品销售的三年之后才能进行销
毁。
四、小结
本工艺方案采用盐解法获得肝素钠粗品,提倡绿色工艺,减少了对周围环境的污染,
有效提高和稳定产品的质量,产品活性损失小,运营生产成本小,原材料可反复使用,为
企业创造经济价值。
五、附件材料
图 2.刮肠机
图 3.码量
图 4.腌渍车间
数量 1 2 300 1 1 1000 2
1000 1 2 2 1000 300
1 1 1
单位 台 个 斤 个 个 根 个
斤 吨 个 台 斤 斤
张 个 台
表 2.WD-1701 肝素钠树脂参数
聚合物类型 均一系数 粒径 稳定性 有效粒径 密度
交联聚丙烯酸胺 max.1.8 >90% 0.5-1.2mm PH 0-14 0.65(+/-0.05) 1.08app.g/ml
清洁设备容器,可用抹布进行擦拭。
处理生产废弃物。
更换现场标识,其内容填写无误。
整理文件记录并归档,放在相应的记录存放柜中并上锁。
5.产品检验结果
产品企业可以自行检验的,可送置相关检验室进行检验,检验结果符合
国家标准。
不能自检的,应找药品检验机构进行检验,才能进行销售。
建立完整的检验记录,确保产品的准确性、真实性、安全性。
从猪小肠中提取粗品肝素钠工艺方案
一、设计背景 肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药物,一般运用于心血管疾病的治疗中,肝素钠的原 料药是肝属钠粗品,目前市面上来源最广的是从健康生猪的小肠黏膜中提取,由于不经生 产加工的猪小肠中含有大量的微生物等杂质,需经人工过提取分离,从而获取人体所能利 用的肝素钠原料药。我国地域广阔,拥有全世界最丰富的生猪资源,中国是肝素钠的生产 大国,也是肝素钠的出口大国,现如今海普瑞公司出品的依诺肝素钠注射液已销往意大利、 奥地利、捷克等许多欧盟国家,其中国产品为-普洛静。国内绝大多数生产线之所以会采 用从猪小肠提取肝素钠粗品,是因为猪小肠中的肝素分子结构和人体自带的肝素分子结构 相似,且价格廉价。 现如今小肠的市场价格大概是在 40 元左右一根,而一台刮肠机一天的工作量,在机 器不出故障的前提下,每天能至少能刮出一千根,因此设想购入 1000 根小肠,可配置一 台刮肠机。一根猪小肠的重量大概在两斤左右,一千根猪小肠则为 2000 斤,两千斤的猪 小肠则换算为一吨,一吨的猪小肠预设所需 1000 斤肠加工专用盐。 因疫情原因本设计采用了抗疫肠衣加工专用盐,氯化钠的含量 98.5%,能维护公共健 康与安全。 本设计采用 WD-1071 肝素钠树脂,它是一种肝素钠专用提取树脂,因其交换能力强, 提取速率快,能有效减少污染,保养周期长,可用于大规模的肝素钠粗品生产。 二、设计依据 肝素粗品提取的传统方法有酶解法、盐解-离子交换法、盐解-季铵盐沉淀法,传统的 酶解提取肝素钠技术,资源消耗高,环境污染大,附加值低,本设计采用盐解法。 盐解法是肝素钠生产者较早采用的提取方法,其操作简单,对环境污染较小。它的主

固定化酶解猪小肠黏膜制备肝素的工艺研究

固定化酶解猪小肠黏膜制备肝素的工艺研究

固定化酶解猪小肠黏膜制备肝素的工艺研究于海宁;张鹏;陶艳红;沈生荣;单伟光【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2016(028)002【摘要】本文以肝素效价为指标,探索了固定化胰蛋白酶对小肠黏膜的酶解作用.在单因素试验基础上采用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,以肝素效价为响应值,通过考察pH值、加酶量、酶解温度及料液比,优化了固定化胰蛋白酶酶解制备肝素的工艺,建立了二次回归方程.结果表明,pH值、酶解温度、加酶量、及料液比均对肝素提取具有显著影响.固定化酶制备肝素最佳工艺条件为:pH 为11,加酶质量分数为0.24%,酶解温度为46℃,料液比为1∶3.3(g/mL),酶解时间为5h,在此条件下获得肝素酶解液效价为15.28 U.【总页数】7页(P300-306)【作者】于海宁;张鹏;陶艳红;沈生荣;单伟光【作者单位】浙江工业大学药学院,杭州310014;浙江工业大学药学院,杭州310014;浙江工业大学药学院,杭州310014;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310058;浙江工业大学药学院,杭州310014【正文语种】中文【中图分类】Q931.6【相关文献】1.膜分离与沉淀结合法提取猪小肠黏膜中肝素钠的工艺研究 [J], 夏华;李耀曾2.猪小肠黏膜加工下脚料酶解工艺的研究 [J], 舒夏娃;王春维;赵胜军3.固定化柚皮苷酶解转化制备普鲁宁 [J], 焦超;李婧雅;李利君;杨秋明;翁惠芬;肖安风4.固定化胰蛋白酶整体小柱的制备及其用于微量蛋白质的快速酶解 [J], 郑蒙蒙; 韩颖; 康经武5.固定化酶酶解苦杏仁谷蛋白制备ACE抑制肽 [J], 杨罡;张玥;戴志伟;刘伟;孔令明因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

试谈超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺

试谈超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺

试谈超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺是一种新兴的分离提取技术,它通过应用超声波的物理效应来加速肝素的提取过程。

肝素是一种广泛应用于医药和生物工程领域的重要生物活性分子,其研究和开发具有重要的理论和应用价值。

传统的肝素提取方法通常是通过多次盐析和柱层析的组合使用进行分离。

然而,这种方法繁琐且时间消耗较长,并且容易产生蛋白质交叉污染等问题。

与传统方法相比,超声波辅助盐析提取技术具有操作简便、提取速度快、分离效果好等优点。

超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺主要包括以下几个步骤:首先,将猪小肠样品收集并冷冻保存。

然后,将小肠样品取出并浸泡在适量的盐水溶液中,使盐分进入小肠中。

接下来,将样品放入超声波水浴中,通过超声波的作用,可以使得溶液中的盐分更好地与肝素结合,促进离子交换的速率和效率。

在超声波作用下,肝素与盐分结合形成肝素-盐络合物,在溶液中以小分子形式稳定存在。

然后,通过离心或滤纸等方法将络合物与残余蛋白质等杂质分离并收集。

最后,对收集到的肝素-盐络合物进行洗涤和干燥处理,得到纯化的肝素产品。

此外,可以根据需要进行进一步的提纯和分析。

超声波辅助盐析提取技术具有许多优点。

首先,由于超声波的作用,提取速度大大加快,通常只需几分钟即可完成。

其次,超声波可以提高提取效率,有助于降低提取过程中的能量消耗和化学品使用量。

此外,该技术操作简单,无需昂贵的设备和复杂的前期处理,适用于规模化生产。

然而,超声波辅助盐析提取技术也存在一些挑战和限制。

首先,超声波处理的条件需要仔细控制,过高的功率和时间可能会导致样品破坏或生成副产物。

其次,由于肝素-盐络合物的性质复杂,提取条件的选择也需要进一步研究和优化。

综上所述,超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺是一种高效、简单且有潜力的技术。

通过进一步的研究和发展,相信该技术可以在肝素提取领域得到广泛应用,并为肝素制备和应用提供更好的解决方案。

猪肠粘膜中肝素钠提取技术的 研究现状和发展趋势

猪肠粘膜中肝素钠提取技术的 研究现状和发展趋势

Asian Case Reports in Veterinary Medicine 亚洲兽医病例研究, 2019, 8(1), 1-8Published Online January 2019 in Hans. /journal/acrpvmhttps:///10.12677/acrpvm.2019.81001Research Status and Development Trendof Extraction Technologyof Crude Heparin SodiumShunshun Shu1, Qian Mi1, Chengrong Han1, Zhang Fengyun1, Shangwen Tang2, Jun Niu1*1C.P. Food (Xiangyang) Co. Ltd., Xiangyang Hubei2Hubei College of Arts and Sciences, Xiangyang HubeiReceived: Apr. 10th, 2019; accepted: Apr. 23rd, 2019; published: Apr. 30th, 2019AbstractHeparin sodium is the sodium salt of heparin, which has great medical and biological value. The clinical application of heparin has gradually expanded, and the population of drug users has gradually increased, which has led to the expansion of the global heparin drug market and the growth of the demand for crude heparin sodium. Based on the development status of crude hepa-rin sodium extraction technology at home and abroad, the extraction process of crude heparin so-dium was comprehensively evaluated, and the development trend of crude heparin sodium at home was prospected.KeywordsCrude Heparin Sodium, Extraction Technology, Anticoagulant Mechanism, Purification of Heparin Sodium, Development Trend猪肠粘膜中肝素钠提取技术的研究现状和发展趋势舒顺顺1,米倩1,韩成荣1,张凤云1,汤尚文2,牛军1*1正大食品(襄阳)有限公司,湖北襄阳2湖北文理学院,湖北襄阳收稿日期:2019年4月10日;录用日期:2019年4月23日;发布日期:2019年4月30日*通讯作者。

猪小肠生产肝素钠粗品技术的创新及应用

猪小肠生产肝素钠粗品技术的创新及应用

肠皮处理等工序中加以改进。结果 产量提高, 辅料节省, 质量稳定, 劳动量降低。结论 新工艺简便、 实用, 具有高 收益, 低消耗等特点。 关键词: 肝素钠;肠黏膜;肠衣;肠皮;生产 中图分类号: &#’( 文献标识码: ) 文章编号: (,%%$) $%%#*$"+( %’*%$#%*%,
!"# $%%&’($)’*+ *, +#- )#("+*&*./ ,*0 %0*12(’+. (021# "#%$0’+ 3*1’24 ,0*4 %*0(’+# ’+)#3)’+$& 42(*3$
时间过长, 不易过 "%> 时间不超过 $?。温度过高, 滤。二次洗脱液使用五次后, 再作一次洗脱液使用。 乙醇沉淀浓度视季节变化与时间长短而定。夏季浓 度高, 冬季浓度低, 时间短浓度高, 时间长浓度低。 吸附液的盐浓度 )79@A ’ < #, 不宜高也不宜低, 否则 会影响树脂的吸附能力。 ! 结 论
中国生化药物杂志 PSK40T0 U6*V437 6W /K61S0,K137 MS3V,310*XK1T "$$! 年第 "" 卷第 & 期
!#!
多年的生产实践表明, 新工艺具有下述特点。 (!) 提高了产量 原生产工艺着眼点只在肠黏 膜上, 对肠黏膜也只是一次提取, 因此, 一般 " #$$ % 才能生产出 ! 亿单位肝素钠, 有的 & $$$ 根猪小肠, 厂家需 & $$$ 根以上。新工艺对肠黏膜两次提取, 加之将肠皮、 肠衣中含的肝素也提取出来。这样, 在 水质正常的情况下, 就能生 ! "#$ % ! #$$ 根猪小肠, 产出 ! 亿单位肝素钠, 产量比传统工艺提高 !$$’ 。 (") 节省了辅料 传统生产工艺是生产一次, 洗 脱液沉淀一次, 由于生产上的需要, 沉淀时间短, 乙 醇浓度高, 而新工艺洗脱液循环使用, 生产五次, 才 沉淀一次, 沉淀时间长, 乙醇浓度低。这样, 乙醇用 量比原工艺节省 ($’ , 氯化钠的用量节省 )$’ , 大 大降低了生产成本。 (&) 稳定了质量 传统生产方法, 每生产一次,
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技术责任有限公司) , D- 254 树脂 ( 杭州争光化工集团 公司) 等。
精品生产过程中各个步骤的 pH 值和温度值均要 严格控制。精品生产工艺参数如表 2 所示。粗品与精品 的收率比较见表 3。
GIL- 16A 高速台式离心机( 江南南达生物技术开 发公司) , WH- 3 微型漩涡混合仪 ( 上海卢西分析仪器
作者简介: 任红媛( 1981- ) , 女( 汉) , 研究生, 研究方向: 生物化学及应用微生物。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
[2] 卢 新 建,吕 美 琴.甘 薯 茎 叶 菜 用 及 栽 培 技 术[J].杂 粮 作 物,2000,20 (4):44~45.
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收稿日期: 2006- 10- 27
科学研究
食品研究与开发
2007.Vol.28.NO.01 79
猪小肠购自咸阳市肉联厂。猪小肠用流水冲洗干 净, 剪开铺平, 用刀片将肠粘膜刮下收集, 分装于样品 袋中, 冰箱保存备用。
表 1 粗品生产工艺参数 Table 1 Pr oducing technological par ameter of cr ude Her par in
条件 Condition
肝素钠是一种由动物结缔组织的肥大细胞产生的 1.3.2 精品生产工艺
粘多糖, 是一种天然抗凝血物质, 它在抗凝血, 促进脂
蛋白酶释放和补体溶细胞体系等方面具有活性, 被广
泛 用 于 治 疗 血 栓 塞 、暴 发 性 流 脑 、败 血 症 、肾 炎 、急 性 心
肌梗塞、动脉硬化等疾病, 还具有澄清血浆脂质, 降低
高, 导致生产水平的低下, 产品质量难以保证, 这给精 度值。
品的生产带来了困难, 同时也使产品在国际市场上难 以 得 到 较 好 的 价 位[7]。所 以 本 实 验 主 要 是 采 用 离 子 交 换 的方法来提取肝素, 并在其工艺参数上做一些研究, 为 实际生产提供参照。
1 材料与方法 1.1 材料
1989:135 ̄137. [13] 熊 大 胜,郭 春 秋,曾 文 虎,等.木 梨 幼 叶 提 取 物 抑 菌 作 用 研 究[J].中
国 野 生 植 物 资 源,2003,22(2):37~38. [14] 胡瑛,杜予民,刘慧.壳聚糖- 百里香酚复 合 物 的 抑 菌 活 性 研 究[J].
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例交替联结[5 ̄6]。在机体内它与蛋白质结合成复合物存 的量反应平行线测定法计算[8]。
在于肥大细胞中, 可被蛋白酶解离出来, 它在溶液中呈 1.3.4 实验前称取收集到的猪小肠粘膜重量, 然后将
强电荷的聚阴离子状态, 与强碱性 D254 阴离子树脂 实验得到的粗品和精品量分别与之比较, 计算收率。
78 2007.Vol.28.NO.01
食品研究与开发
科学研究
猪小肠粘膜中肝素钠提取与精制工艺研究
任红媛, 何泼, 李红心 ( 陕西科技大学生命科学与工程学院, 陕西 咸阳 712081)
摘 要: 以猪小肠粘膜为原料, 进行肝素钠的提取与纯化, 采用两种方法: 一种是乙醇沉淀法, 另一种是大孔阴离 子 树 脂 交 换 法 。主 要 是 通 过 树 脂 交 换 法 提 取 肝 素 钠 粗 品 , 然 后 采 用 高 锰 酸 钾 和 过 氧 化 氢 两 步 氧 化 法 对 粗 品 肝 素 进 行 除 杂 、提 纯 和 精 制 , 最 后 低 温 离 心 得 到 精 品 肝 素 钠 。对 传 统 的 提 取 工 艺 条 件 进 行 了 改 进 , 并 测 得 粗 品 平 均 收 率 为 2.257 %, 精 品 平 均 收 率 为 0.741 %, 其 中 粗品效价值为 73.19 U/mg, 精品效价值为 146.38 U/mg。 关键词: 肝素钠; 提取; 纯化

104.1
3.145 1
3.021



272.1
5.244 5
1.927
1.887 5
0.694

241
5.012 4
2.080
1.743 9
0.724

330.1
6.284 1
1.904
2.261 9
0.685

440
10.351 6
2.353
3.785 6
0.860
平均值( %) Average(%)
效 果 研 究 [J].黑 龙 江 畜 牧 兽 医,2004(10):61 ̄62. [10] 赵 骏,钟 蓉,王 洪 章.桑 叶 多 糖 提 取 工 艺 优 选[J].中 草 药,2000, 31
(5):347 ̄348. [11] 沈爱英,谷文英. 姬松茸子实体水溶性多糖提取工艺的研究[J]. 中
国食用菌, 2002, 21(1):15 ̄17. [12] 范 秀 容,李 广 武,沈 萍.微 生 物 学 实 验[M].北 京:高 等 教 育 出 版 社,


2.257

0.741
注: 1.第一次粗品用于鉴定实验。2.粗品收率为所得粗品肝素纳与肠粘膜的质量比, 精品收率为所得肝素精品与肠粘膜的质量比。
2.2 效价测量结果
表 4 粗品效价结果 Table 4 Potency of cr ude Her par in
P(T U/mg) 74.65 70.07 74.86
胆固醇等作用 。 [1 ̄4] 从生物学角度来讲, 肝素钠是一种
含硫酸脂的氨基葡萄糖、艾杜糖醛酸和葡萄糖酸的生
物 活 性 物 质 。三 硫 酸 双 糖 单 位 是 肝 素 的 主 要 双 糖 单 位 ,
L- 艾杜糖醛酸是双糖的糖醛酸。二硫酸双糖的糖醛酸
是 D- 葡萄糖醛酸。三硫双糖和二硫双糖以约 3: 1 的比 1.3.3 根据《 中国药典》生 物 检 定 统 计 法(附 录 XIV)中
STUDY ON TECHNOLOGY OF HERPARIN EXTRACTION AND PURIFICATION FROM SWINE INTESTINAL MUCOSA
REN Hong- yuan, HE Po, LI Hong- xin ( College of Life Science and Engineering, Shaanxi University of Science and Technology,
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Xianyang 712081, Shaanxi, China) Abstr act: Herparin was extracted and purified from swine intestinal mucosa by two methods, precipitated by al- cohol and exchanged by macropore anion- resin. The main experiment task was extracting crude Herparin from swine intestinal mucosa by the second method (resin - exchange) and purifying it by two- step oxidated with potassium permanganate and hydrogen peroxide, then centrifuged at low temperature and gained purified Her- parin. Among the article,we got a set of best craft condition and measure the thick Herparin equally accepts the rate as 2.257 %(73.19 U/mg), and the rarefied Herparin equally accepts the rate as 0.741 %(146.38 U/mg). Key wor ds: Herparin; extraction; purification
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