pGEX vector - 360文档中心

DNA测序样品的要求

DNA测序样品的要求未纯化PCR产物的要求1. 片段大于200bp；2.请提供50ml PCR扩增产物(总量1ug-2ug)；3.取3ml样品，应该能够清晰的分辨出目的条带；自带引物，引物浓度为5-10uM,并请注明。

备注纯化后PCR产物的要求1.PCR产物溶于蒸馏水中(请勿溶解在TE溶液中)；2.浓度大于20ng/ml，体积大于10ml，长片段需适当增加量；3.电泳检测条带专一；自带引物。

所有模板均应提供相应的引物信息自带质粒的要求1.质粒溶于30~50ml ddH2O中(请勿溶解在TE溶液中)，电泳检测浓度大50~100ng/ml；2. 建议用相关试剂盒提取质粒；3. 如有可能，同时提供1ml含有相应质粒的菌液备用；4. 需注明载体和插入目的片段长度、以及测序要求。

菌液模板的要求1.说明载体抗性类型，我们提供A mp, Kan, Tet及Chl四种抗生素；2. 其余类型抗生素需自备；应为高拷贝质粒，对于低拷贝质粒，请直接提供约1mg纯化质粒；3. 提供1ml左右过夜培养（12h）的菌液，加15%灭菌甘油，于E ppendorf 管中封口保存，防止交叉污染或渗漏；4. 大量样品测序，建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养；5. 建议尽量提供穿刺培养或斜面培养的菌种（装在EP管中）。

自带引物的要求1.浓度不低于5pmol/ml(或5umol/L)，溶液体积15-50ml；2. 随机引物（RA PD引物）和简并引物以及引物长度不足15bp不能用于本公司提供如下通用测序引物：M13+，M13-，T7, SP6, T7 ter，BGH rev, pGL3+, pGL3-，pGEX5’，pGEX3’，5’AOX1，3’A OX1 ，a-factor。

其他引物请自带或提供序列由我们合成。

常用载体特征PCR类型测序模板注意事项∙总反应体积建议为50uL或100uL，扩增结束后取3ul用1%左右的琼脂糖电泳检测，应为单一的条带。

c++vector类型的函数

C++的`std::vector`是一种动态数组，它提供了许多有用的函数来操作和访问其中的元素。

以下是一些常用的`std::vector`函数：1. `push_back()`: 向vector的末尾添加一个元素。

```cppvoid push_back (const value_type& val);```2. `pop_back()`: 从vector的末尾移除一个元素。

```cppvoid pop_back (void);```3. `insert()`: 在vector的特定位置插入一个或多个元素。

```cppiterator insert (const_iterator position, const value_type& val);iterator insert (const_iterator position, std::initializer_list<value_type> init);```4. `erase()`: 删除vector中的一个或多个元素。

```cppiterator erase (const_iterator position);iterator erase (const_iterator first, const_iterator last);```5. `begin()`, `end()`, `rbegin()`, `rend()`: 返回指向vector的开始或结束的迭代器。

6. `empty()`: 检查vector是否为空。

7. `size()`: 返回vector中的元素数量。

8. `max_size()`: 返回vector可能持有的最大元素数量。

9. `capacity()`: 返回vector当前可以容纳的元素数量。

10. `clear()`: 移除vector中的所有元素。

11. `resize()`: 改变vector的大小。

postgre vector 原理

postgre vector 原理
PostgreSQL Vector（也被称为PostgreSQL的Cube扩展或Vector 扩展）是一种在PostgreSQL数据库中用于存储和搜索向量数据的插件。

向量数据通常表示图像、音频文件、文本等抽象实体的数学表示。

PostgreSQL Vector利用向量之间的相似度度量来实现高效、准确的数据搜索和分析。

以下是PostgreSQL Vector的基本原理：
1.数据表示：首先，数据（如图像、文本等）需要被转换为向量形式。

这个过程通常涉及到特征提取和编码技术，将原始数据转换为数学向量。

2.存储：转换后的向量数据被存储在PostgreSQL数据库的特定列中。

这些列可以是专门用于向量数据的扩展数据类型。

3.相似度搜索：一旦向量数据被存储在数据库中，就可以使用向量相似度度量来执行搜索查询。

常见的向量相似度度量包括余弦相似度、欧几里得距离等。

用户可以通过指定相似度阈值来过滤和检索与查询向量相似的数据。

4.索引优化：为了提高搜索性能，PostgreSQL Vector通常会使用索引来加速相似度查询。

这些索引结构允许数据库系统快速找到与查询向量相似的数据。

5.扩展性：PostgreSQL Vector通常设计为可扩展的，可以支持不同类型的向量数据和相似度度量。

这使得它可以适应不同的应用场景和数据类型。

需要注意的是，具体的实现细节可能会因不同的向量扩展和PostgreSQL版本而有所差异。

因此，在实际使用时，建议查阅相关文档和资料以获取更详细和准确的信息。

原核表达技术及其在相关领域的应用

基因工程一般流程人的细胞提取目的基因与运载体DNA拼接导入细菌(含目的基因) 生产重组蛋白
Your company slogan
基因工程的操作工具
一. 核酸分子剪刀----限制性核酸内切酶识别回文序列，产生粘性或平性末端，具有相同粘性或平性末端的不同DNA片段可连接起来形成重组DNA分子，故 DNA限制性内切酶是分子生物学实验中重要的工具酶。识别双链DNA内部特异位点并裂解磷酸二酯键分类：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型命名：EcoRⅠ(E：属名；co：种名；R：株；Ⅰ：发现次序)
原核表达技术及其在相关领域的应用
谨以此与朋友们交流学习
主要内容
1
基因工程及其应用原核表达载体的构建蛋白质的诱导与表达常见问题以及解决办法
2
3
4
Your company slogan
基因工程
基因工程：是用分离纯化或人工合成的DNA在体外与载体DNA 结合，成为重组DNA，用以转化宿主（细菌或其它细胞），筛选出能表达重组DNA的活细胞，加以纯化、传代、扩增，成为克隆，产生出人类所需要的基因产物或改造、创造新的生物类型。
双酶切
Your company slogan
连接反应
Your company slogan
重组体的转化 1. 重组体导入大肠杆菌（1）氯化钙法（2）电击法（3）体外包装法 2. 重组体导入哺乳动物细胞（1）磷酸钙共沉淀法（2）脂质体介导法（3）病毒感染法（4）显微注射法
Your company slogan
Your company slogan
酶切反应
大多数限制酶贮存在50％甘油溶液中，以避免在-20℃条件下结冰。当最终反应液中甘油浓度大于12％时，某些限制酶的识别特异性降低，从而抑制酶活性。因此加入反应的酶体积不超过反应总体积的10%。反应混合物中基因组DNA底物的浓度不宜太大，小体积中过高浓度的基因组DNA 会形成粘性 DNA溶液,从而抑制酶的扩散，并降低酶活性。建议酶切反应的基因组DNA浓度为0.1-0.4ug/ul。同时RNA应该尽量消化去除。当要用两种或两种以上限制酶切割 DNA时，必须选择好通用缓冲液，则两种酶才可同时切割。反应混合液中加入浓度为0.1mg/ml的BSA，可维持酶的稳定性。酶切底物DNA应具备一定的纯度，如果溶液中含有迹量酚、氯仿、乙醇，大于10mM的EDTA，SDS以及过量的盐离子浓度，都会不同程度影响限制酶的活性。

GE Healthcare GST Expression Vector pGEX-4T-3 说明书

GE HealthcarepGEX-4T-3GST Expression VectorProduct Specification SheetCode: 28-9545-52WarningFor research use only.Not recommended or intended for diagnosis of disease in humans or animals.Do not use internally or externally in humans or animals. HandlingThe vector should be removed from the dri-ice packaging and stored at -20°C. After thawing, centrifuge briefly to recover contents.ExpiryVector is stable for a minimum of 8 weeks from date of receipt when stored under recommended storage conditions.Safety warnings and precautionsAll chemicals should be considered as potentially hazardous. We therefore recommend that this product is handled only by those persons who have been trained in laboratory techniques and that it is used in accordance with the principles of good laboratory practice. Wear suitable protective clothing such as laboratory overalls, safety glasses and gloves. Care should be taken to avoid contact with skin or eyes. In the case of contact with skin or eyes wash immediately with water. See material safety data sheet(s) and/or safety statement(s) for specific advice. Components25 µg vector supplied in 10 mM Tris, 1 mM EDTA pH 8.0. Quality controlPurified plasmid will contain predominantly supercoiled format typically greater than 90% by agarose gel electrophoresis. Chromasomal DNA from the host is not observed. Plasmid is assayed to demonstrate presence of B am H1; Eco R I; Not I restriction endonuclease sites.ProtocolsPrepare fusion construct by inserting gene of interest into the multiple cloning site of pGEX-4T-3 using any one, or combination of unique restriction sites and transform into a host of choice such as E. coli BL21 (27-1542-01).Growth and Induction:1.Dilute an overnight culture transformed with pGEX fusionconstruct, 1:10 in fresh complex medium containing 100 µg/ml ampicillin. Grow the cells at 37°C to mid-log phase(A600 = 0.6–1.0). 2.Induce expression of fusion proteins by adding isopropyl-βD-thiogalactoside (IPTG) to 0.1 mM final concentration and allow the cells to grow for an additional 3–5 hours at 37°C.3.Expression of GST fusion proteins can be monitored using theAnti-GST Antibody (27-4577-01), GST Detection Modules(27-4590-01, 27-4592-01) or ECL GST Western Blotting Detection Kit (RPN1237).Preparation of cell extracts:1.Sediment the cells by centrifugation and resuspend in 1/20volume of PBS (PBS: 140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4,1.8 mM KH2PO4, pH 7.3).2.Lyse the cells by mild sonication or chemical lysis.3.Add Triton X-100 to a final concentration of 1% and mix gently atroom temperature (25°C) for 30 minutes to solubilize proteins. 4.Centrifuge the crude extract at 10 000 × g for 5 minutes at 4°C. PurificationThere are a range of Gluthatione Sepharose™ prepacked column and bulk media products available to purify GST Fusion proteins. For manual purification of sample volumes up to 600 µl use GST SpinTrap™ microspin columns or GST MultiTrap™ 4B 96-well plates. For sample volumes between 600 µl and 10 ml use GST GraviTrap™ gravity flow column. Where sample volumes are above 10 ml,use LabMate™ reservoir together with GST GraviTrap. All formats described can be used for preparation of samples in parallel. In addition GST HiTrap™ 1 and 5 ml columns and GST HiPrep™ FF16/10 column are available for purification in a chromatography system such as the ÄKTA™ design system. Alternatively, Gluthatione Sepharose bulk media are available from 10 ml up to 500 ml. A GST Bulk Kit is also available combining 10 ml Gluthatione Sepharose4B bulk medium and 5 empty columns with required buffers. For simplified buffer preparation use the GST Buffer Kit. Ordering information for all associated products is listed below.Site-specific proteolysis of fusion proteins:Separation of the recombinant protein from the glutathioneS-transferase moiety may be accomplished by site specific proteolysis using bovine thrombin (27-0846-01). Exact reaction conditions will vary with the nature of the fusion protein. The following conditions may be used as a guideline and should be optimized for each fusion protein: thrombin concentration, 0.2% (w/w) of fusion protein; reaction buffer, PBS; incubation temperature, 25°C; incubation time, 2–16 hours (1, 2).Multiple Cloning region and protease cleavage siteFor more information on the use of pGEX vectors, see GST Gene Fusion System Handbook.Intracellular expression of some eukaryotic proteins in Escherichia coli can lead to the formation of inclusion bodies (2). Increased solubilities can be obtained by lowering the growth temperature from 37°C to 28–30°C (3). Shortening the induction period may also improve results. Exact conditions must be established for each protein.imagination at workThe following primers for double-stranded sequencing of pGEX vectors are available: 5’ pGEX Sequencing Primer (bases 869–891)and 3’ pGEX Sequencing Primer (bases 1020-998).Further information relating to DNA sequence, restriction maps and control regions can be found at: References1. Smith, D. B. and Johnson, K. S., Gene 67, 31 (1988).2. Eaton, D., et al., Biochemistry 25, 505 (1986).3. Schein, C. H. and Noteborn, M. H. M., Bio/Technology 6, 291 (1988).4. Smith, D. B. and Corcoran, L. M., Current Protocols , pg. 16.7.1 (1990).Related productsGST vector products Code No. pGEX-4T-2 (25 µg) 28-9545-50pGEX-5X-1 (25 µg) 28-9545-53 pGEX-5X-2 (25 µg) 28-9545-54 pGEX-5X-3 (25 µg) 28-9545-55 pGEX-2TK (25 µg) 28-9546-46 pGEX-6P-1 (25 µg) 28-9546-48 pGEX-6P-2 (25 µg) 28-9546-50 pGEX-6P-3 (25 µg) 28-9546-51 pGEX-2T (25 µg)28-9546-53 pGEX-1λT EcoR/BAP (5 µg)28-9546-56pGEX 5’ Sequencing Primer5’-d[GGG-CTGGCAAGCCACGTTTGGTG]-3´ 27-1410-01 pGEX 3’ Sequencing Primer 5’-d[CCG-GGAGCTGCATGTGTCAGAGG]-3’ 27-1411-01 E. coli BL21 1 vial27-1542-01 GST purification products Code No. GST GraviTrap (10 columns) 28-9523-60 LabMate PD-10 Buffer Reservoir (50) 18-3216-03 GST Buffer Kit 28-9523-61 GST Bulk Kit27-4570-01 GST SpinTrap (50 columns)28-9523-59 GST MultiTrap 4B (4 × 96-well plates) 28-4055-00 GST MultiTrap 4 FF (4 × 96-well plates) 28-4055-01 GSTrap 4B (5 × 1 ml) 28-4017-45GSTrap 4B (100 × 1 ml)1 28-4017-46GSTrap 4B (1 × 5 ml ) 28-4017-47GSTrap 4B (5 × 5 ml) 28-4017-48GSTrap 4B (100 × 5 ml)1 28-4017-49Glutathione Sepharose 4B (10 ml) 17-0756-01Glutathione Sepharose 4B (100 ml) 17-0756-05Glutathione Sepharose 4B (300 ml)17-0756-041 Pack size available by specific customer order.GST detection product Code No. GST Detection Module 27-4590-01GST Detection Module (96-well format) 27-4592-01 Anti-GST Antibody27-4577-01 ECL GST Western Blotting Detection Kit RPN1237 Site-specific ProteasesCode No. PreScission Protease (500 units) 27-0843-01Thrombin (500 units) 27-0846-01Factor Xa (400 units)27-0849-01Lysis kitCode No.Yeast Protein Extraction Buffer Kit 28-9440-45Mammalian Protein Extraction Buffer 28-9412-79LiteratureCode No.GST Gene Fusion System Handbook 18-1157-58Recombinant Protein Purification Handbook 18-1142-75Affinity Chromatography Handbook18-1022-29LegalGE, imagination at work and GE Monogram are trademarks of General Electric Company.ÄKTA, ECL, GraviTrap, HiTrap, HiPrep, LabMate, MultiTrap, Sepharose and SpinTrap are trademarks of GE Healthcare companies. pGEX vectors: pGEX vectors are to be used for scientificinvestigation and research and for no other purpose whatsoever and a license for commercial use of the licensed products and processes claimed in US patent 5,654,176 and equivalent patents and patent applications in other countries must be negotiated directly with Millipore Corp (formely Chemicon International Inc) by the purchaser prior to use.All third party trademarks are the property of their respective owners.© 2009 General Electric Company – All rights reserved. First published June 2009All goods and services are sold subject to the terms and conditions of sale of the company within GE Healthcare which supplies them. A copy of these terms and conditions is available on request. Contact your local GE Healthcare representative for the most current information.For your local office contact information, visit /contact GE Healthcare UK Limited Amersham PlaceLittle Chalfont, Buckinghamshire, HP7 9NA, UK GE Healthcare offices:GE Healthcare Bio-Sciences AB Björkgatan 30, 751 84 Uppsala, SwedenGE Healthcare Europe GmbHMunzinger Strasse 5, D-79111 Freiburg, GermanyGE Healthcare Bio-Sciences Corp.800 Centennial Avenue, P.O. Box 1327, Piscataway, NJ 08855-1327, USAGE Healthcare Bio-Sciences KK Sanken Bldg. 3-25-1, Hyakunincho, Shinjuku-ku, Tokyo 169-0073, Japan2895958628-9545-52PS AA 06/2009。

pET-39b(+)大肠杆菌表达载体说明

pET-39b(+)编号载体名称北京华越洋生物VECT5020 pET-‐39b(+)pET39b载体基本信息别名: pET39b, p et 39b质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达表达水平: 高克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 6106 b p5' 测序引物: T75' 测序引物序列: T7: 5'-‐TAATACGACTCACTATAGGG-‐3'载体标签: His (中间和C端), N-‐DsbA, N-‐S, N-‐EK, N-‐Thrombin载体抗性: Kanamycin备注: Encodes D sb t ag f or e xport a nd p eriplasmic f olding o f t arget p roteins. 稳定性: 瞬时表达 Transient组成型: 组成型 Constitutive病毒/非病毒: 非病毒pET39b载体质粒图谱和多克隆位点信息Feature N ame Start EndT7_terminator 120 1T7_Terminal_primer 69 87EK 266 252S15 326 2826xHIS 386 369T7_transl_en_RBS 1056 1040lacO 1101 1074T7_promoter 1119 1101tet (300 -‐ 563) 1155 1418pBRrevBam_primer 1226 1207lacI 1501 2592tet (576 -‐ 851) 2651 2926ROP 3401 3592pGEX_3_primer 3608 3586pBR322_origin 4626 4007KanR2 4732 5547ORF Start EndORF f rame 3 1031 147ORF Start EndORF f rame 3 1032 1760ORF f rame 1 1633 2592ORF f rame 1 4732 5547Enzyme N ame CutXhoI 174NotI 182EagI 182HindIII 189SalI 195SacI 206EcoRI 208BamHI 214NcoI 227KpnI 271BstBI 301SacII 365SpeI 396AflII 418PstI 552AscI 917AgeI 928NdeI 1030XbaI 1068BclI 1874ApaI 2071FspI 2942NruI 4820pET39b载体简介The pET-‐39b(+) vector (Cat. No. 70090-‐3) is designed for expression of DsbA fusion proteins. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by t he p BR322 c onvention, s o t he T7 e xpression r egion i s r eversed o n t he c ircle m ap. T he cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single s tranded s equencing s hould b e p erformed u sing t he T7 t erminator p rimer (Cat. N o. 69337-‐3).pET39b载体序列ORIGIN1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTTAGCAG CCTAGGTATT AATCAATTAG TGGTGGTGGT GGTGGTGGTG GTGCTCGAGT181 GCGGCCGCAA GCTTGTCGAC GGAGCTCGAA TTCGGATCCG ATATCGCCAT GGTTGAGGAG 241 AAGCCCGGGC TCTTGTCGTC GTCATCGGTA CCCAGATCTG GGCTGTCCAT GTGCTGGCGT 301 TCGAATTTAG CAGCAGCGGT TTCTTTCATA CCAATTGCAG TACTACCGCG TGGCACCAGA 361 CCCGCGGAGT GATGGTGATG GTGATGACCA GAACCACTAG TTGATCCTTT TTTCTCGCTT 421 AAGTATTTCA CTGTATCAGC ATACTGCTGA ACAAAAACAT CCATATTGCT GGTATCCATA 481 CCCTGCGGAT TCAGCTGATA TTTACCGTTA ACAAACATCG CCGGAACGCC ACGCAATTGC 541 ACGTCAGCTG CAGCTTTTTC CTGCTGAGCG ACCAGAGATT TCACCACGAA GCTGTTCCAC 601 GCCGCGTCGT ACTCTTCACC TTTAATACCT GCGTTGATAA ATACATCGCG GATATCAGAA 661 GCAGAACGAA TGGTCTGGGT TTTCTGTACG CCTTCAAACA GCGGAACAGT CACTTTGTCT 721 TCCACGCCCA GCGCCATCGC CACAGCCCAT GCCTGAGTCA GATCTTTGCC CAGGTCACCA 781 CCCATGAAGT TGACGTGGTA TTTAGTCATC TTCACGCCTT CCGGCAGTTT TTTCTTCACA 841 TTATCAGAAA TATGCAGAAC TTCTTCAAAC TGATAGCAGT GCGGGCAGAA GAAAGAGAAA 901 AACTCCAGCA CTTGCGGCGC GCCAGCTACC GGTTTTTCCA GGGTAGTGTA CTGTTTACCA 961 TCTTCATACT GCGCCGCCGA TGCGCTAAAC GCTAAAACTA AACCAGCCAG CGCCAGCCAA 1021 ATCTTTTTCA TATGTATATC TCCTTCTTAA AGTTAAACAA AATTATTTCT AGAGGGGAAT 1081 TGTTATCCGC TCACAATTCC CCTATAGTGA GTCGTATTAA TTTCGCGGGA TCGAGATCGA 1141 TCTCGATCCT CTACGCCGGA CGCATCGTGG CCGGCATCAC CGGCGCCACA GGTGCGGTTG 1201 CTGGCGCCTA TATCGCCGAC ATCACCGATG GGGAAGATCG GGCTCGCCAC TTCGGGCTCA 1261 TGAGCGCTTG TTTCGGCGTG GGTATGGTGG CAGGCCCCGT GGCCGGGGGA CTGTTGGGCG 1321 CCATCTCCTT GCATGCACCA TTCCTTGCGG CGGCGGTGCT CAACGGCCTC AACCTACTAC 1381 TGGGCTGCTT CCTAATGCAG GAGTCGCATA AGGGAGAGCG TCGAGATCCC GGACACCATC 1441 GAATGGCGCA AAACCTTTCG CGGTATGGCA TGATAGCGCC CGGAAGAGAG TCAATTCAGG 1501 GTGGTGAATG TGAAACCAGT AACGTTATAC GATGTCGCAG AGTATGCCGG TGTCTCTTAT 1561 CAGACCGTTT CCCGCGTGGT GAACCAGGCC AGCCACGTTT CTGCGAAAAC GCGGGAAAAA 1621 GTGGAAGCGG CGATGGCGGA GCTGAATTAC ATTCCCAACC GCGTGGCACA ACAACTGGCG 1681 GGCAAACAGT CGTTGCTGAT TGGCGTTGCC ACCTCCAGTC TGGCCCTGCA CGCGCCGTCG 1741 CAAATTGTCG CGGCGATTAA ATCTCGCGCC GATCAACTGG GTGCCAGCGT GGTGGTGTCG 1801 ATGGTAGAAC GAAGCGGCGT CGAAGCCTGT AAAGCGGCGG TGCACAATCT TCTCGCGCAA 1861 CGCGTCAGTG GGCTGATCAT TAACTATCCG CTGGATGACC AGGATGCCAT TGCTGTGGAA 1921 GCTGCCTGCA CTAATGTTCC GGCGTTATTT CTTGATGTCT CTGACCAGAC ACCCATCAAC 1981 AGTATTATTT TCTCCCATGA AGACGGTACG CGACTGGGCG TGGAGCATCT GGTCGCATTG 2041 GGTCACCAGC AAATCGCGCT GTTAGCGGGC CCATTAAGTT CTGTCTCGGC GCGTCTGCGT 2101 CTGGCTGGCT GGCATAAATA TCTCACTCGC AATCAAATTC AGCCGATAGC GGAACGGGAA 2161 GGCGACTGGA GTGCCATGTC CGGTTTTCAA CAAACCATGC AAATGCTGAA TGAGGGCATC 2221 GTTCCCACTG CGATGCTGGT TGCCAACGAT CAGATGGCGC TGGGCGCAAT GCGCGCCATT 2281 ACCGAGTCCG GGCTGCGCGT TGGTGCGGAC ATCTCGGTAG TGGGATACGA CGATACCGAA 2341 GACAGCTCAT GTTATATCCC GCCGTTAACC ACCATCAAAC AGGATTTTCG CCTGCTGGGG 2401 CAAACCAGCG TGGACCGCTT GCTGCAACTC TCTCAGGGCC AGGCGGTGAA GGGCAATCAG 2461 CTGTTGCCCG TCTCACTGGT GAAAAGAAAA ACCACCCTGG CGCCCAATAC GCAAACCGCC 2521 TCTCCCCGCG CGTTGGCCGA TTCATTAATG CAGCTGGCAC GACAGGTTTC CCGACTGGAA 2581 AGCGGGCAGT GAGCGCAACG CAATTAATGT AAGTTAGCTC ACTCATTAGG CACCGGGATC 2641 TCGACCGATG CCCTTGAGAG CCTTCAACCC AGTCAGCTCC TTCCGGTGGG CGCGGGGCAT 2701 GACTATCGTC GCCGCACTTA TGACTGTCTT CTTTATCATG CAACTCGTAG GACAGGTGCC 2761 GGCAGCGCTC TGGGTCATTT TCGGCGAGGA CCGCTTTCGC TGGAGCGCGA CGATGATCGG2821 CCTGTCGCTT GCGGTATTCG GAATCTTGCA CGCCCTCGCT CAAGCCTTCG TCACTGGTCC 2881 CGCCACCAAA CGTTTCGGCG AGAAGCAGGC CATTATCGCC GGCATGGCGG CCCCACGGGT 2941 GCGCATGATC GTGCTCCTGT CGTTGAGGAC CCGGCTAGGC TGGCGGGGTT GCCTTACTGG 3001 TTAGCAGAAT GAATCACCGA TACGCGAGCG AACGTGAAGC GACTGCTGCT GCAAAACGTC 3061 TGCGACCTGA GCAACAACAT GAATGGTCTT CGGTTTCCGT GTTTCGTAAA GTCTGGAAAC 3121 GCGGAAGTCA GCGCCCTGCA CCATTATGTT CCGGATCTGC ATCGCAGGAT GCTGCTGGCT 3181 ACCCTGTGGA ACACCTACAT CTGTATTAAC GAAGCGCTGG CATTGACCCT GAGTGATTTT 3241 TCTCTGGTCC CGCCGCATCC ATACCGCCAG TTGTTTACCC TCACAACGTT CCAGTAACCG 3301 GGCATGTTCA TCATCAGTAA CCCGTATCGT GAGCATCCTC TCTCGTTTCA TCGGTATCAT 3361 TACCCCCATG AACAGAAATC CCCCTTACAC GGAGGCATCA GTGACCAAAC AGGAAAAAAC 3421 CGCCCTTAAC ATGGCCCGCT TTATCAGAAG CCAGACATTA ACGCTTCTGG AGAAACTCAA 3481 CGAGCTGGAC GCGGATGAAC AGGCAGACAT CTGTGAATCG CTTCACGACC ACGCTGATGA 3541 GCTTTACCGC AGCTGCCTCG CGCGTTTCGG TGATGACGGT GAAAACCTCT GACACATGCA 3601 GCTCCCGGAG ACGGTCACAG CTTGTCTGTA AGCGGATGCC GGGAGCAGAC AAGCCCGTCA 3661 GGGCGCGTCA GCGGGTGTTG GCGGGTGTCG GGGCGCAGCC ATGACCCAGT CACGTAGCGA 3721 TAGCGGAGTG TATACTGGCT TAACTATGCG GCATCAGAGC AGATTGTACT GAGAGTGCAC 3781 CATATATGCG GTGTGAAATA CCGCACAGAT GCGTAAGGAG AAAATACCGC ATCAGGCGCT 3841 CTTCCGCTTC CTCGCTCACT GACTCGCTGC GCTCGGTCGT TCGGCTGCGG CGAGCGGTAT 3901 CAGCTCACTC AAAGGCGGTA ATACGGTTAT CCACAGAATC AGGGGATAAC GCAGGAAAGA 3961 ACATGTGAGC AAAAGGCCAG CAAAAGGCCA GGAACCGTAA AAAGGCCGCG TTGCTGGCGT 4021 TTTTCCATAG GCTCCGCCCC CCTGACGAGC ATCACAAAAA TCGACGCTCA AGTCAGAGGT 4081 GGCGAAACCC GACAGGACTA TAAAGATACC AGGCGTTTCC CCCTGGAAGC TCCCTCGTGC 4141 GCTCTCCTGT TCCGACCCTG CCGCTTACCG GATACCTGTC CGCCTTTCTC CCTTCGGGAA 4201 GCGTGGCGCT TTCTCATAGC TCACGCTGTA GGTATCTCAG TTCGGTGTAG GTCGTTCGCT 4261 CCAAGCTGGG CTGTGTGCAC GAACCCCCCG TTCAGCCCGA CCGCTGCGCC TTATCCGGTA 4321 ACTATCGTCT TGAGTCCAAC CCGGTAAGAC ACGACTTATC GCCACTGGCA GCAGCCACTG 4381 GTAACAGGAT TAGCAGAGCG AGGTATGTAG GCGGTGCTAC AGAGTTCTTG AAGTGGTGGC 4441 CTAACTACGG CTACACTAGA AGGACAGTAT TTGGTATCTG CGCTCTGCTG AAGCCAGTTA 4501 CCTTCGGAAA AAGAGTTGGT AGCTCTTGAT CCGGCAAACA AACCACCGCT GGTAGCGGTG 4561 GTTTTTTTGT TTGCAAGCAG CAGATTACGC GCAGAAAAAA AGGATCTCAA GAAGATCCTT 4621 TGATCTTTTC TACGGGGTCT GACGCTCAGT GGAACGAAAA CTCACGTTAA GGGATTTTGG 4681 TCATGAACAA TAAAACTGTC TGCTTACATA AACAGTAATA CAAGGGGTGT TATGAGCCAT 4741 ATTCAACGGG AAACGTCTTG CTCTAGGCCG CGATTAAATT CCAACATGGA TGCTGATTTA 4801 TATGGGTATA AATGGGCTCG CGATAATGTC GGGCAATCAG GTGCGACAAT CTATCGATTG 4861 TATGGGAAGC CCGATGCGCC AGAGTTGTTT CTGAAACATG GCAAAGGTAG CGTTGCCAAT 4921 GATGTTACAG ATGAGATGGT CAGACTAAAC TGGCTGACGG AATTTATGCC TCTTCCGACC 4981 ATCAAGCATT TTATCCGTAC TCCTGATGAT GCATGGTTAC TCACCACTGC GATCCCCGGG 5041 AAAACAGCAT TCCAGGTATT AGAAGAATAT CCTGATTCAG GTGAAAATAT TGTTGATGCG 5101 CTGGCAGTGT TCCTGCGCCG GTTGCATTCG ATTCCTGTTT GTAATTGTCC TTTTAACAGC 5161 GATCGCGTAT TTCGTCTCGC TCAGGCGCAA TCACGAATGA ATAACGGTTT GGTTGATGCG 5221 AGTGATTTTG ATGACGAGCG TAATGGCTGG CCTGTTGAAC AAGTCTGGAA AGAAATGCAT 5281 AAACTTTTGC CATTCTCACC GGATTCAGTC GTCACTCATG GTGATTTCTC ACTTGATAAC 5341 CTTATTTTTG ACGAGGGGAA ATTAATAGGT TGTATTGATG TTGGACGAGT CGGAATCGCA 5401 GACCGATACC AGGATCTTGC CATCCTATGG AACTGCCTCG GTGAGTTTTC TCCTTCATTA5461 CAGAAACGGC TTTTTCAAAA ATATGGTATT GATAATCCTG ATATGAATAA ATTGCAGTTT 5521 CATTTGATGC TCGATGAGTT TTTCTAAGAA TTAATTCATG AGCGGATACA TATTTGAATG 5581 TATTTAGAAA AATAAACAAA TAGGGGTTCC GCGCACATTT CCCCGAAAAG TGCCACCTGA 5641 AATTGTAAAC GTTAATATTT TGTTAAAATT CGCGTTAAAT TTTTGTTAAA TCAGCTCATT 5701 TTTTAACCAA TAGGCCGAAA TCGGCAAAAT CCCTTATAAA TCAAAAGAAT AGACCGAGAT 5761 AGGGTTGAGT GTTGTTCCAG TTTGGAACAA GAGTCCACTA TTAAAGAACG TGGACTCCAA 5821 CGTCAAAGGG CGAAAAACCG TCTATCAGGG CGATGGCCCA CTACGTGAAC CATCACCCTA 5881 ATCAAGTTTT TTGGGGTCGA GGTGCCGTAA AGCACTAAAT CGGAACCCTA AAGGGAGCCC 5941 CCGATTTAGA GCTTGACGGG GAAAGCCGGC GAACGTGGCG AGAAAGGAAG GGAAGAAAGC 6001 GAAAGGAGCG GGCGCTAGGG CGCTGGCAAG TGTAGCGGTC ACGCTGCGCG TAACCACCAC 6061 ACCCGCCGCG CTTAATGCGC CGCTACAGGG CGCGTCCCAT TCGCCA//其他大肠杆菌表达载体：pBV221 ptdTomato pET-52b(+) pAmCyanpDsRed-Express2 pBV220 pCold-GST pColdS-SUMOpCold TF pCold IV pCold III pCold IIpCold I pE-SUMO pCold-ProS2 pBAD102/D-TOPOpBAD202/D-TOPO pACYC184 pBAD/Thio-TOPO pBad/Myc-His CpBad/Myc-His B pBad/Myc-His A pBad/His C pBad/His BpBad/His A pBAD-TOPO pET-23b(+) pET-23a(+)pET-23c(+) pET-23(+) pET-12b(+) pET-12c(+)pET-12a(+) pET-11b(+) pET-11a(+) pET-11c(+)pBad24 pQE-82L pQE-81L pQE-80LpQE-32 pQE-9 pQE-16 pQE-31pQE-60 pQE-70 pQE-40 pET-51b(+)pET-50b(+) pET-49b(+) pET-48b(+) pET-47b(+)pET-26b(+) pET-32a(+) pET-21b(+) pET-22b(+)pET-14b pET-16b pET-15b pET-19bpET-20b(+) pET-21d(+) pET-21c(+) pET-21b(+)pET-21a(+) pET-24a(+) pET-24d(+) pET-25b(+)pET-27b(+) pET-28a(+) pET-30a(+) pET-42a(+)pET-43.1c(+) pET-43.1b(+) pET-43.1a(+) pET-44a(+)pET-44c(+) pET-46 EK/LIC pET-37b(+) pTrcHis2 CpTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-His pET302/NT-His pRSET-CFP pRSET-EmGFP pRSET-BFP pGFPuvpET300/NT-DEST pET301/CT-DEST pGEM-T pBad43pGEX-4T-3 pGEX-5X-2 pBlueScript SK(+) pG-Tf2pG-KJE8 pGro7 pET-SUMO pSE380pET-17b pET102/D-TOPO pCDFDuet-1 pMAL-p5xpTf16 pET-28c(+) pBluescript II SK(+) pET-30b(+)pSUMO pProEX HTc pProEX HTb pProEX HTapKD3 pKD13 pKD46 pTYB1pTYB2 pTWIN2 pBluescript II KS(-) pTYB12pMAL-p5e pACYCDuet-1 pEGM-11ZF(+) pEGM-7ZF(+) PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-2 PinPoint Xa-1 pSP73pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1pET-5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII A pET-5a(+) pMal-p4X pMal-p2G pkk223-3pkk232-8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18pMAL-c5x pMal-p2E pMal-p2X pET-44 EK/LIC pET-43.1 EK/LIC pET-41 EK/LIC pMal-c4X pTrcHis BpET-31b(+) pET-3b(+) pET-41a(+) pGEX-3XpGEX-4T-2 pETDuet-1 pGEX-4T-1 pTrc99apET-28b(+) pET-His pALEX a,b,c pACYC177pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10pEcoli-6xHN-GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-KGpGEX-2T pRSFDuet-1 pCOLADuet-1 pTrcHis C pTrcHis A pET-41b(+) pET-42b(+) pET-3a(+) pGEX-6P-3 pGEX-6P-2 pGEX-6P-1 pGEX-5X-3 pGEX-5X-1 pGEX-2TK pRSET A pMal-c2GpMal-c2E pMal-c2X pRSET C pQE-30pET-45b(+) pET-44b(+) pET-42c(+) pET-41c(+) pET-40b(+) pET-33b(+) pET-39b(+) pET-32 EK/LIC pET-32 Xa/LIC pET-32c(+) pET-32b(+) pET-30 Xa/LIC pET-30 EK/LIC pET-30c(+) pET-29c(+) pET-29b(+) pET-29a(+) pET-24c(+) pET-24b(+) pET-24(+)pET-23d(+) pET-11d(+) pBad33。

载体介绍

分类：酵母人工染色体载体（YAC）细菌人工染色体载体（BAC） P1人工染色体载体（PAC）
20
酵母人工染色体载体（yeast artificial chromosome, YAC）
YAC的特点： 1.只能在酵母细胞中扩增 2.克隆容量大，一般为200kb-500kb 3.构建原理，按染色体结构构建
21
染色体复制和遗传的三个基本组件：
1.自主复制序列（ARS）（autonomous replicating sequence） DNA复制起始点（ori）
2.着丝粒（centromere，cen）
3.端粒（telomeres，tel）
TEL ORI
CEN
TEL
YAC的组成结构
23
YAC的缺点：
抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+， Kan+
多克隆位点MCS：克隆携带外源基因片段 P/E：启动子/增强子 Terms：终止信号加poly（A）信号：可以起到稳定mRNA作用
35
如何阅读质粒图谱
第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核 /真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
4.高容量的克隆能力：
45kb （最少不能低于30kb）。
15
噬菌粒载体（phagemid vector)
由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型载体系列，称为噬菌粒（phagemid或phasmid）
16
几种常用的噬菌粒载体的一般特征
17
pUC118 (MCS)
pUC119 (MCS)
puC118和 pUC119噬菌粒载体的分子结构
（稍后以大肠杆菌质粒载体详细介绍）

质粒载体分类及阅读

质粒载体分类及阅读一.九种表达载体Pllp-OmpA, pllp-STII, pMBP-P, pMBP-C,pET-GST, pET-Trx, pET-His, pET-CKS, pET-DsbA二.克隆载体pTZ19R DNApUC57 DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSET-ApRSET-BpVAX1PBR322pbv220pBluescript II KS (+)L4440pCAMBIA-1301pMAL-p2XpGD926三.PET系列表达载体Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Dsb Fusion Systems 39b and 40bProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression System 33b Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Expression Systems plus Competent CellsProtein Expression » Prokaryotic Expression » pET GST Fusion Systems 41 and 42Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET NusA Fusion Sy stems 43.1 and 44Protein Expression » Prokaryotic Expression » pET Vector DNAProtein Purification » Purification Systems » Strep•Tactin Resins and Purification Kits四.PGEX系列表达载体T EcoR pGEX-1 I/BAPpGEX-2TpGEX-2TKpGEX-3XpGEX-4T-1pGEX-4T-2pGEX-4T-3pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-6P-1pGEX-6P-2pGEX-6P-3五.PTYB systemPTYB1PTYB2PTYB11PTYB12六.真核表达载体pCDNA3.1(-)pCDNA3.1(+)pPICZ alpha ApGAPZαAPYES2.0pBI121pEGFP-N1pEGFP-C1pPIC9KpPIC3.5K如何阅读分析质粒图谱载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。

载体介绍ppt课件

circular DNA cccDNA）
环形双链的质粒DNA分子具有三种不同构型
29
质粒的命名
用小写字母p代表质粒（plasmid），在p字母后用两个大写字母代表发现这一质粒的作者或实验室名称，再加上质粒编号。
如：pBR322：p表示一种质粒，而“BR”则是分别取自该质粒的两位主要构建者F. Bolivar和R. L. Rodriguez，322为编号。
载体介绍
1
什么是载体？
简单说，载体就是将外源DNA或基因携带入宿主细胞的工具。
2
载体应具备的特征
1.在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）
2.具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点，供外源DNA片断插入，同时不影响复制
3.有一定的选择标记，用于筛选 4.具有较高的拷贝数，便于载体的制备
许多实用的质粒载体都是在pBR322的基础上改建而成。可见其原型质粒在使用上有优点。
39
克隆载体
1.pBR322
它由三部分组成：来自pSCl01的四环素抗性基因Tetr 来自ColEl的衍生物pMBl的松弛复制起点ori 来自RSF2124的氨苄青霉素抗性基因Ampr。
组成:
40
特点
具有更小的分子量（2686bp）和更高的拷贝数（500700）。具有多克隆位点
适于组织化学方法检测重组体
46
MCS
lacZ`
Ampr Ori
含四个部分：
1.来自pBR322的质粒复制起点（ori）；
2.ampr ;
3.大肠杆菌β半乳糖苷酶基因（lacZ）的启动子及其编码 α-肽链的DNA序列；
F+ 又叫雄性决定因子，所以F+细胞又叫雄性细胞，相应的 F– 又叫雌性细胞。

pGEX序列载体的区别

PlasmidpGEX-3XNameSource/Vendor AmershamPlasmid Size 4952Notes thrombin or factor Xa protease sites to cleave protein from fusion.pGEX-1lambdaT, pGEX-4T-1, pGEX-5X-1 accept cDNA from lambdagt11 libs. Hosts: E.coli. Related vectors: p4.5, pS, pGEX-1, pGEX-2T.(Information source: VectorDB.)Link /vectordb/vector_descrip/PGEX3X.html View SequencePlasmidSequencepGEX-6P-1Vendor:AmershamVector Type: BacterialViral/Non-viral: NonviralStable/Transient: TransientConstitutive/Inducible: ConstitutivePromoter: tacExpression Level: High (activate with IPTG)Backbone size: 4900Sequencing Primer: pGEX FwdSequencing Primer Sequence: 5'd[GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG]3'Tag: GST (Nterm)Bacteria Resistance: AmpicillinMammalian Selection: N/aCatalog Number: 27-4597-01Comments:PreScissionï¿½ cleavage site allows cleavage at low temps; can directly insert cDNA from lambda gt11 libraries1 多克隆位点(MCS)酶切点不同;2 GST和MCS之间均含有凝血酶或者Xa因子的切割位点.选择GE的表达载体原因很简单，爱屋及乌，使用他们的载体可以方便下一步的纯化。

pGEX_vector_map-表达载体

GE HealthcarepGEX vectors, GST Gene Fusion Systemimagination at workMap of the glutathione S-transferase fusion vectors showing reading frames and main features. Even though stop codons in all three frames are not depicted in this map, all thirteen vectors have stop codons in all three frames downstream from the multiple cloning site.Ordering informationProductQuantityCode no.pGEX-1λT EcoRI/BAP 5 µg 28-9546-56pGEX-2T 25 µg 28-9546-53pGEX-2TK 25 µg 28-9546-46pGEX-3X 25 µg 28-9546-54pGEX-4T-1 25 µg 28-9545-49pGEX-4T-2 25 µg 28-9545-50pGEX-4T-3 25 µg 28-9545-52pGEX-5X-1 25 µg 28-9545-53pGEX-5X-2 25 µg 28-9545-54pGEX-5X-3 25 µg 28-9545-55pGEX-6P-1 25 µg 28-9546-48pGEX-6P-2 25 µg 28-9546-50pGEX-6P-325 µg28-9546-51Do you want to learn more? Read the GST Gene Fusion System Handbook (18-1142-75). Pleasecontact your local GE Healthcare representative for a printed copy.pGEX-1λTpGEX-6P-1EcoRISmaISalIXhoINotIBamHI PreScission ™ ProteaseLeu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Leu Gly Ser Pro Glu Phe Pro Gly Arg Leu Glu Arg Pro HisCTG GAA GTT CTG TTC CAG GGG CCC CTG GGA TCC CCG GAA TTC CCG GGT CGA CTC GAG CGG CCG CAT↓pGEX-6P-2BamHI PreScission ProteaseLeu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Leu Gly Ser Pro Gly Ile Pro Gly Ser Thr Arg Ala Ala Ala SerCTG GAA GTT CTG TTC CAG GGG CCC CTG GGA TCC CCA GGA ATT CCC GGG TCG ACT CGA GCG GCC GCA TCG↓EcoRISmaISalIXhoINotIpGEX-6P-3BamHI PreScission ProteaseLeu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Leu Gly Ser Pro Asn Ser Arg Val Asp Ser Ser Gly ArgCTG GAA GTT CTG TTC CAG GGG CCC CTG GGA TCC CCG AAT TCC CGG GTC GAC TCG AGC GGC CGC↓EcoRI SmaI SalI XhoINotI BamHIEcoRI SmaI SalI XhoI NotI BamHI EcoRI SmaI SalI XhoINotI BamHI EcoRI SmaI SalI XhoINotI BamHI EcoRI SmaISalI XhoI NotI BamHI EcoRI SmaISalI XhoI NotI BamHI EcoRI SmaI SalI XhoI NotIEcoRI CTG GTT CCG CGT GGA TCC CCG GAA TTC ATC GTG ACT GAC TGA CGABamHILeu Val Pro Arg Gly Ser Pro Glu Phe Ile Val Thr AspThrombinStop codons ↓pGEX~4900 bppBR322oriBalI BspMIPtac c a IqNarI EcoRVBssHIIBstEIIMluIApaITth111IAatIIPstIp4.5AlwNIpSj10 Bam7Stop7∆pGEX-4T-2pGEX-5X-1pGEX-5X-2pGEX-5X-3pGEX-4T-1pGEX-4T-3pGEX-3XpGEX-2TKLeu Val Pro Arg Gly Ser Pro Gly Ile Pro Gly Ser Thr Arg Ala Ala Ala SerCTG GTT CCG CGT GGA TCC CCA GGA ATT CCC GGG TCG ACT CGA GCG GCC GCA TCG TGAStop codon Ile Glu Gly Arg Gly Ile Pro Glu Phe Pro Gly Arg Leu Glu Arg Pro His Arg AspATC GAA GGT CGT GGG ATC CCC GAA TTC CCG GGT CGA CTC GAG CGG CCG CAT CGT GAC TGAStop codons Ile Glu Gly Arg Gly Ile Pro Gly Ile Pro Gly Ser Thr Arg Ala Ala Ala SerATC GAA GGT CGT GGG ATC CCC GGA ATT CCC GGG TCG ACT CGA GCG GCC GCA TCG TGAStop codon Ile Glu Gly Arg Gly Ile Pro Arg Asn Ser Arg Val Asp Ser Ser Gly Arg Ile Val Thr AspATC GAA GGT CGT GGG ATC CCC AGG AAT TCC CGG GTC GAC TCG AGC GGC CGC ATC GTG ACT GAC TGAStop codons Leu Val Pro Arg Gly Ser Pro Glu Phe Pro Gly Arg Leu Glu Arg Pro His Arg AspCTG GTT CCG CGT GGA TCC CCG GAA TTC CCG GGT CGA CTC GAG CGG CCG CAT CGT GAC TGAStop codons Leu Val Pro Arg Gly Ser Pro Asn Ser Arg Val Asp Ser Ser Gly Arg Ile Val Thr AspCTG GTT CCG CGT GGA TCC CCG AAT TCC CGG GTC GAC TCG AGC GGC CGC ATC GTG ACT GAC TGAStop codons ATC GAA GGT CGT GGG ATC CCC GGG AAT TCA TCG TGA CTG ACT GACIle Glu Gly Arg Gly Ile Pro Gly Asn Ser SerStop codons Leu Val Pro Arg Gly Ser Arg Arg Ala Ser ValKinaseCTG GTT CCG CGT GGA TCT CGT CGT GCA TCT GTT GGA TCC CCG GGA ATT CAT CGT GAC TGAStop codons Thrombin ↓Thrombin↓Thrombin↓Thrombin↓Factor Xa↓Factor Xa↓Factor Xa↓Factor Xa↓EcoRIBamHI SmaI EcoRIBamHI SmaI pGEX-2TCTG GTT CCG CGT GGA TCC CCG GGA ATT CAT CGT GAC TGA CTG ACGLeu Val Pro Arg Gly Ser Pro Gly Ile His Arg AspStop codons EcoRIThrombin↓BamHI SmaI g u ta th i on e S -t r a n s f e r a s e A mp rimagination at work GE, imagination at work, and GE monogram are trademarks of General Electric Company.pGEX vectors are to be used for scientific investigation and research and for no other purpose whatsoever and a license for commercial use of the licensed products and the processes claimed in US patent 5,654,176 and equivalent patents and patent applications in other countries must be negotiated directly with Millipore Corp (formerly Chemicon International Inc) by the purchaser prior to such use.© 1993–2009 General Electric Company – All rights reserved.First published June 1993.All goods and services are sold subject to the terms and conditions of sale of the company within GE Healthcare which supplies them. A copy of these terms and conditions is available on request. Contact your local GE Healthcare representative for the most current information.GE Healthcare UK Limited Amersham PlaceLittle Chalfont, Buckinghamshire, HP7 9NAUKGE Healthcare Europe, GmbHMunzinger Strasse 5, D-79111 FreiburgGermanyGE Healthcare Bio-Sciences Corp.800 Centennial Avenue, P.O. Box 1327, Piscataway, NJ 08855-1327USAGE Healthcare Bio-Sciences KKSanken Bldg., 3-25-1, Hyakunincho, Shinjuku-ku, Tokyo 169-0073JapanFor local office contact information, visit/contact/pgexGE Healthcare Bio-Sciences ABBjörkgatan 30751 84 UppsalaSweden28-9191-62 AC 07/2009。

c++ vector的常用方法

c++ vector的常用方法摘要：C++ vector 常用方法概述一、vector 简介1.概述2.特点二、vector 常用方法1.构造与析构2.访问与修改元素3.添加与删除元素4.查找元素5.排序与搜索6.容量与增长7.迭代器三、实例演示1.简单示例2.应用场景正文：C++ vector 常用方法概述一、vector 简介1.概述C++ 中的vector（向量）是一种动态数组，它可以在运行时自动调整大小。

vector 容器用于存储任意类型的数据，包括整数、浮点数、对象等。

相较于传统的数组，vector 具有以下优势：- 自动扩容：当vector 容器中的元素数量达到容量上限时，它会自动扩大容量。

- 随机访问：vector 提供了随机访问元素的能力，时间复杂度为O(1)。

- 插入与删除：vector 插入和删除元素的时间复杂度为O(log n)。

- 迭代器：vector 提供了双向迭代器，方便遍历容器中的元素。

2.特点- 双向迭代器：vector 提供了双向迭代器，便于遍历容器中的元素。

- 容量限制：vector 的容量是有限的，当达到容量上限时，需要重新分配内存。

- 内存占用：vector 容器内部使用连续的内存空间，相邻元素共享内存。

- 元素类型限制：vector 容器中的元素类型必须相同。

二、vector 常用方法1.构造与析构- 构造函数：vector 提供了多种构造函数，如默认构造函数、拷贝构造函数等。

- 析构函数：当vector 对象被销毁时，它会自动释放内存。

2.访问与修改元素- 访问元素：使用[] 运算符或at() 方法访问vector 中的元素。

- 修改元素：使用[] 运算符或at() 方法修改vector 中的元素。

3.添加与删除元素- 添加元素：使用push_back() 方法在vector 末尾添加元素，使用emplace_back() 方法在vector 末尾添加一个对象。

质粒图谱查询方法

0036--pET22b(+)--Novagene-原核表达--令令冲
0037--pQE9--Qiagen--原核表达--jpsgf
0038--pCANTAB5E--Phamcia--噬菌体抗库--yanBaggio
0039--pET-24a--Novagene--原核表达--yanBaggio
0006--pQEx--Qiagen--原核表达--wangjun2002274
0007--pIVEX2.3--Roche--体外转录翻译--wangjun2002274
0008--pIRES-EGFP--/--/--luoqingli2003
0009--pET-28a（+）--Novagen--原核表达--wangjun2002274
0014--pcDNA3--invitrogen--真核表达--kras
0015--pfastbac1--invitrogene--昆虫表达--cox2wj
0016--pEGFP-C3--clontech--真核表达--smilely
0017--pSecTag2--invitrogen--真核表达--kenmed
0018--PYX212--/--真核表达--Gmail
0019--pET20b--Novagen--原核表达--Gmail
0020--pEGFP-1--BD BIO--转录调控--wyh
0021--pEGFP/U6 --/--siRNA--songbinn
0022--pThioHisA--invitrogen--原核表达--xuezhishui
0081--pcDNA5/FRT/CAT—INVITROGEN--真核表达--renke3333

vector的函数

vector的函数一、什么是vector在计算机科学中，vector是一种动态数组的数据结构，也被称为可变长度数组或动态数组。

vector的函数指的是在vector类中定义的成员函数，用于对vector 对象进行操作和处理。

二、vector的基本操作1. 声明和初始化vector对象可以通过以下方式声明和初始化一个vector对象：vector<int> vec; // 声明一个空的int类型的vectorvector<int> vec(10); // 声明一个含有10个元素的int类型的vector，并将每个元素初始化为0vector<int> vec = {1, 2, 3}; // 声明一个含有3个元素的int类型的vector，并分别初始化为1, 2, 32. 向vector中插入元素可以使用push_back()函数向vector的末尾插入一个元素，也可以使用insert()函数在指定位置插入一个或多个元素。

vector<int> vec;vec.push_back(1); // 向vector的末尾插入1vec.insert(vec.begin() + 1, 2); // 在第2个位置插入2vec.insert(vec.begin() + 2, 3, 4); // 在第3个位置插入4个元素，每个元素初始化为33. 访问和修改vector中的元素可以使用下标运算符[]或at()函数访问和修改vector中的元素。

下标从0开始。

vector<int> vec = {1, 2, 3};int firstElement = vec[0]; // 访问第一个元素，值为1int secondElement = vec.at(1); // 访问第二个元素，值为2vec[2] = 5; // 修改第三个元素的值为54. 获取vector的大小和容量可以使用size()函数获取vector中元素的个数，使用capacity()函数获取vector容器的实际大小。

vector的插入函数

vector的插入函数一、vector容器简介vector是C++标准库中的一个容器，它可以存储一组类型相同的元素，并且可以动态调整容器的大小。

vector容器内部是一个动态数组，可以在运行时根据需要自动扩展或收缩，因此非常适合用来存储需要频繁插入和删除元素的数据。

在C++中，vector提供了多种插入函数，用于向容器中插入元素。

下面将介绍常用的几种插入函数及其使用方法。

1. push_back函数push_back函数用于在vector的末尾插入一个元素。

它的语法如下：```void push_back(const T& value);```其中，T代表vector存储的元素类型，value代表要插入的元素。

下面是一个示例代码：```cpp#include <iostream>#include <vector>int main() {std::vector<int> vec;vec.push_back(1);vec.push_back(2);vec.push_back(3);for (int i : vec) {std::cout << i << " ";}return 0;}```输出结果为：1 2 32. insert函数insert函数用于向vector的任意位置插入一个或多个元素。

它的语法如下：```iterator insert(iterator position, const T& value);iterator insert(iterator position, size_type n, const T& value); iterator insert(iterator position, InputIterator first, InputIterator last);```其中，position代表插入的位置，value代表要插入的元素，n代表要插入的元素个数，first和last代表要插入的元素范围。

酶切鉴定-BamHI and EcoRI

DNA鉴定的三种荧光染料及与DNA的相互作用
（二）聚丙烯酰胺凝胶电泳
以聚丙烯酰胺作支持物。常用垂直板电泳。单体丙烯酰胺在加入交联剂后，就成聚丙烯酰胺。由于这种凝胶的孔径比琼脂糖凝胶的要小，所以可用于分析分子量小于1000 bp的DNA分析。但仍要留心缓冲液及其他器皿中所带的RNase。
限制性内切酶切割DNA
A: Strategy of construction
B: The product of PCR
123
f1 ori
Ampr pGEX Vector
(4900 bp)
BamH I EcoR I
X-gene cDNA
Primer1
740 bp
Primer2
BamHI+EcoRI
废物丢弃要在固定位置。不接触凝胶时不需戴手套！ 5. EB是极强致癌物！小心！
聚丙烯酰胺凝胶上的核酸样品，经啡啶溴红染色，在紫外光照射下，发出的荧光很弱，所以浓度很低的核酸样品不能用此法检测出
注意事项
1. 直接在抽提的质粒DNA管中加入酶切体系。 2. 为使微量操作更精确，可以4个人（8 tubes）一起做9
份酶切体系混合液，然后再分装10ul于各质粒管中。 3. 上样时要小心操作，防止样品溢出。 4. 接触凝胶时，因其中含有EB或荧光染料，要戴手套，
实验原理
限制性内切酶是DNA操作过程中所使用的基本工具。其特异性地结合于一段特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上，并在此切割双链DNA。分子克隆中常用的为II类限制酶，其识别位点长度为4、5或6个核苷酸的反向重复序列。限制酶的切割点因酶而异，有些产生带平端的DNA片段，而另一些产生带有粘性末端的DNA。
20~25 ul上样，在一个泳道中加入10 ul DNA Marker。

vector 函数指针

vector 函数指针什么是vector 函数指针？在C++ 中，vector 函数指针是指向一个向量（vector）中存储的函数的指针。

向量是一种动态数组，而函数指针是指向函数的指针。

通过使用vector 函数指针，可以灵活地存储和使用函数的地址，并且可以方便地传递给其他函数或在程序运行时动态地调用其中的函数。

步骤一：包含必要的头文件和命名空间在使用vector 函数指针之前，要确保包含了所需的头文件和使用了相应的命名空间。

为了使用向量，需要包含<vector> 头文件，为了使用函数指针，需要包含<functional> 头文件。

#include <vector>#include <functional>using namespace std;步骤二：定义函数指针类型接下来，需要定义一个函数指针类型，以便于在向量中存储和使用函数指针。

可以使用typedef 关键字来定义函数指针类型。

typedef void (*functionPointer)(int);在这个例子中，我们定义了一个名为functionPointer 的函数指针类型，它可以指向任何返回类型为void，参数类型为int 的函数。

步骤三：创建和使用vector 函数指针现在，可以使用定义的函数指针类型来创建vector 函数指针。

vector<functionPointer> funcVector;这个语句创建了一个名为funcVector 的向量，它可以存储functionPointer 类型的函数指针。

接下来，可以使用push_back 函数向向量中添加函数指针。

void function1(int param) {实现函数1的代码}void function2(int param) {实现函数2的代码}funcVector.push_back(function1);funcVector.push_back(function2);在这个例子中，我们定义了函数function1 和function2，并将它们的地址分别添加到了funcVector 中。

vector函数

vector函数vector函数是C++语言中用来操作序列数据的一类常用数据结构。

它是将一组数据按顺序存放在一个动态数组中，这种数组可以在处理大量数据时提供较好的性能。

它可以方便地处理序列数据，而且它拥有许多有用的成员函数，能进行高效的容器操作，例如插入、删除、搜索、排序等。

另外，vector函数还支持迭代器，使得每次代码编写变得非常容易。

vector函数的实现非常简单，它只要定义一个指针变量来保存元素的地址，并且可以把元素加入进来。

vector函数的定义有多种，其中最常用的是模板定义，如：vector<int> v;是一个定义了整型的vector，在使用之前还要调用reserve函数来分配空间。

vector数的优点非常明显，首先，它的使用几乎不需要进行内存管理，因为在容器的动态改变的时候，只需要改变指针的指向就可以了，省去了用户在调用malloc函数时费时费力；其次，它拥有更多的有用的函数，比如插入和删除元素，搜索和排序，可以大大提高容器的操作性能；最后，vector函数还可以处理任意类型的数据，包括基本类型和自定义对象，使其能够更加灵活地处理各种数据类型。

由于vector函数的优点，它在许多软件开发中被广泛应用，例如数据结构的存储和管理，游戏开发，图像处理，机器学习等，都有着vector函数的应用。

vector函数在实现上也是有一定的问题的，比如它的实现可能占用大量的运行时间，而且它的安全性也不高，也就是要注意它的越界访问。

在使用vector函数之前，需要先了解它的特点，否则可能会出现意外的状况。

总之，vector函数是一种非常有用的数据结构，它强大的特性和优秀的性能使其在许多领域得到了广泛应用，但也有一定的局限性，所以在使用的时候要合理对待，以免出现风险。

vector 函数指针

vector 函数指针vector 函数指针是C++ 编程中一种重要的技术，它将函数与vector 容器相结合，使得程序员可以在运行时动态地调用函数。

在这篇文章中，我们将详细介绍vector 函数指针的概念、用途、实例演示以及实用技巧。

1.vector 函数指针概述vector 函数指针是一种特殊的指针，它指向一个函数，这个函数的参数列表和返回值类型必须与vector 容器中的数据类型相匹配。

通过使用vector 函数指针，我们可以轻松地在程序运行时动态地调用函数，从而实现更加灵活和高效的编程。

2.函数指针的概念与用途函数指针是一种特殊的指针，它存储了一个函数的地址。

在C++ 中，函数指针的定义方式如下：```cpptypedef void (*FunType)（参数类型）；```其中，`FunType` 是一个指向函数的指针类型，它可以指向任何具有指定参数类型的函数。

函数指针的用途主要包括以下几点：- 动态地调用函数：通过函数指针，我们可以在程序运行时根据需要调用不同的函数，提高了代码的灵活性。

- 事件处理：在GUI 编程中，函数指针常用于处理用户输入事件，例如按钮点击、键盘输入等。

- 回调函数：在某些场景下，我们需要在某个操作完成后执行一个函数，此时可以使用函数指针来实现回调功能。

3.vector 容器与函数指针的结合将函数指针与vector 容器相结合，可以实现以下优势：- 动态地调用vector 容器中的函数：通过vector 函数指针，我们可以在运行时动态地选择并调用vector 中的函数。

- 方便地扩展功能：当需要添加或删除vector 中的函数时，只需修改vector 容器即可，无需修改代码。

下面是一个简单的实例演示：```cpp#include <iostream>#include <vector>using namespace std;void func1() {cout << "Function 1" << endl;}void func2() {cout << "Function 2" << endl;}int main() {vector<void(*)()> vec;vec.push_back(func1);vec.push_back(func2);for (auto it = vec.begin(); it != vec.end(); it++) {(*it)();}return 0;}```在这个例子中，我们定义了一个vector 容器，它存储了两个函数指针。