蓝圆鲹鱼肉蛋白酶解条件的确定

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酶解鱼蛋白制作工艺

酶解鱼蛋白制作工艺
酶解鱼蛋白制作工艺一般包括以下步骤：
1. 原料挑选：选择质量优良、无污染的新鲜鱼肉或鱼副产品作
为原料。

2. 去头去尾去内脏：将鱼去头去尾去内脏，只留下肉，洗净。

3. 绞肉：将鱼肉绞成碎肉糜。

4. 酶解：将鱼肉糜加入酶解酶溶液中进行酶解，一般的酶解酶
有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。

酶解条件包括酶解时间、酶解温度、酶
解pH值等，需要根据鱼种和酶种进行调整，一般酶解时间为2-6小时，酶解温度为40-60℃，酶解pH值为6.0-8.0。

5. 沉淀：将酶解后的溶液静置后，将蛋白质沉淀下来。

6. 洗涤：将沉淀后的鱼蛋白用水反复洗涤，除去杂质和未酶解
的鱼肉。

7. 干燥：将洗涤后的鱼蛋白在低温下干燥，制成鱼蛋白粉。

以上是酶解鱼蛋白制作的一般流程，具体工艺条件应根据实际情
况进行调整。

鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性评价_郭珊珊

中国食物与营养 2016，22（ 6）： 37-39
第Foo6d 期and Nutrition in China
郭珊珊等：鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性评价
37
鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性评价
郭珊珊1 ，东刚1 ，罗永康2
（ 1 山东滨州万嘉生物科技有限公司，山东滨州 256600： 2 中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083）
sardinelle （ Sardinelle auurification and identification） byproduct proteins ［J］． Food Chemistry，2010，118 （ 3 ）： 559-565. ［11］厉望，靳挺，武玉学 . 带鱼蛋白酶解条件优化及酶解物抗氧化性能［J］. 食品科学，2013，34（ 19）： 234-239. ［12］蔡华振，潘振杰 . 乌鸡酶解液的脱苦脱腥以及冻干粉制作［J］. 食品工业科技，2013，34（ 7）： 223-225. ［13］韩林，等 . 黄鳝肉双酶水解产物的功能特性及其抗氧化活性［J］. 食品与发酵工业，2014，40（ 10）： 151-155. ［14］李雪，等 . 草鱼鱼肉蛋白酶解物抗氧化性及功能特性研究［J］. 中国农业大学学报，2011，16： 94-99. ［15］ Yanishlieva N，Gordon M. Antioxidants in food ［M］. New York： CＲC Press，2001： 7-21. ［16］黄艳青，等 . 鱿鱼头蛋白酶水解物的抗氧化活性［J］. 食品与发酵工业，2014，40（ 2）： 121-126. ［17］王璐莎，陈玉连，黄明，周光宏 . 鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性［J］. 食品科学，2015，36（ 17）： 146-151.

毕业论文——中心组合设计优化酶解蓝圆鲹制备降血压肽

中心组合设计优化酶解蓝圆鲹制备降血压肽摘要高血压是引发心血管疾病，如心力衰竭、中风、冠心病和心肌梗塞等的重要危险因子，在世界范围内已成为严重的社会公共卫生问题。

血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)是目前用于预防治疗高血压的重要药物之一，但化学合成的ACEI易引起恶心、呕吐、腹泻等副作用。

因此，具有安全性高、副作用小、易吸收等优点的食源性ACEI尤其引人注目，已成为生物活性肽研究领域的热点之一。

蛋白酶水解法是一种新兴的水解蛋白质的方法。

它和化学水解法相比，具有很多的优点，如条件温和，易控制，水解效率高，其在营养成分保持方面更是具有其独特的优点。

目前人们利用酶工程技术已经从鸡肉、罗非鱼、玉米蛋白、鸡蛋蛋白等食物原料中制取降血压肽。

蛋白酶的催化能力不但与本身的性质有关，而且还和它所处的环境有较大关系，如催化环境的温度、pH值、底物蛋白的性质等。

本实验以蓝圆鲹鱼肉蛋白为原料，用木瓜蛋白酶酶解制备降压肽。

在单因素实验的基础上，结合三因素五水平的Central Composite模型响应面设计，通过Design-Expert软件处理，建立木瓜蛋白酶酶解蓝圆鲹蛋白制备降血压肽的三元二次回归正交模型。

最终求得模型方程的最大值点为酶解温度52.55℃、pH7.97、E/S 0.03371。

在此条件下，预测的水解度为24.32％，这与验证实验值存在可接受的误差。

结果表明：中心组合设计是优化酶解蓝圆鲹制备降血压肽的有效途径。

关键词：酶解蓝圆鲹血管紧张素转化酶抑制剂中心组合Optimization of prepareing antihypertensive peptides from decapterus maruadsi by central composite design processABSTRACTHypertension is an important risk factor of triggering cardiovascular diseases such as heart failure,stroke,coronary heart diseases,myocardial infarction and so on.It had become a worldwide serious social problem of public health. Angiotensin I-converting enzyme inhibitory (ACEI) is one kind of important drugs for prevention and treatment of hypertension, but chemical synthesis of ACEI is extremely easy to cause queasiness, vomit, diarrhea and other side effects. Therefore, ACEI peptides from food protein are especially noticeable because of its advantages which includeing safty,little side effects, easily absorbed, and so on, and become one of the focuses in the bioactive peptides research fields.Hydrolyzing with proteolytic enzyme is a new method of protein hydrolysis. It has many advantages, compared with chemical hydrolysis , such as mild reactive conditions , fine control, hydrolysis of high efficiency, besides,in terms of nutrients to maintain, it has a unique advantage. At present,preparing of antihypertensive peptides from food-stuff,such as ingredients the chicken, tilapia, corn protein, egg protein and so on, by enzyme engineering technology, has been reported.The capability of catalysis by protease not only depends on the the very nature of itself, but also relates with its environment where the catalytic reaction takes place. It must not be disregarded the temperature of environment for catalytic reaction,pH, nature of the substrate protein etc.Decapterus maruadsi proteins were hydrolyzed by papain to prepare antihypertensive peptides. The effects of four crucial factors on the degree ofhydrolysis (DH) of blue scad proteins were analyzed by single-factor method. Subsequently, a three-factor/five-level Central Composite experimental design combining with response surface methodology (RSM) and quadratic pro-gramming (QP) was employed for maximizing the papain-catalyzed hydrolysis of decapterus maruadsi proteins and a quadratic regression model was obtained using the Design-Expert software.Basing on the maximum point obtained by the model equations, the hydrolysis conditions were determined as follows: temperature 52.55℃, pH 7.97, and E/S 0.03371.Under such conditions, the predicted hydrolytic of degree(HD) was 24.32％, which had acceptable error with the experimental values. These results indicated that the Central Composite Design(CCD) were efficient approaches for optimization of prepareing antihypertensive peptides from decapterus maruadsi.Keyword: Hydrolysis;Decapterus maruadsi;Angiotensin-converting enzyme inhibitor;Central Composite Design目录摘要 (I)ABSTRACT ........................................................................................................... I I 目录 (IV)第一章绪论 (1)1.1 高血压及其危害 (1)1.2 食品源降血压肽的研究与制备 (1)1.3 降血压肽的作用机理 (2)1.4 酶法制备降血压肽 (3)1.5 研究目的、意义及主要内容 (4)第二章实验部分 (5)2.1 实验材料 (5)2.2 仪器设备 (5)2.3 脱脂蓝圆鲹鱼粉的制备 (5)2.4 蛋白质含量的测定 (6)2.5 酶解蓝圆鲹鱼肉蛋白 (8)2.5.1 酶解工艺 (8)2.5.2 水解度的测定 (9)2.6 酶解条件优化 (10)第三章实验结果与分析 (11)3.1 蓝圆鲹鱼粉的蛋白质含量 (11)3.2 响应面实验优化酶解工艺条件 (11)3.2.1 响应面实验分析与回归方程的建立 (11)3.2.2 响应曲面的分析 (13)3.3 验证实验 (16)第四章结论与展望 (17)4.1结论 (17)4.1.1 蓝圆鲹的蛋白质含量 (17)4.1.2 酶解蓝圆鲹鱼肉蛋白 (17)4.1.3 中心组合优化设计 (17)4.2 展望 (17)参考文献 (18)附录（一）英文文献原文 (21)附录（二）英文翻译 (36)致谢 (47)第一章绪论1.1 高血压及其危害高血压病是最常见的心血管疾病，它不仅患病率高，而且是引起冠心病、心肌梗塞、脑卒中、心脏病及肾功能衰竭的最主要的发病因素。

圆鲹蛋白水解液的成分

圆鲹蛋白水解液的成分，功能特性和抗氧化活性1介绍富含蛋白质的海鲜行业的副产品，尤其是深色肉质的鱼类，由于其色暗，容易氧化和产生异味而被有限制使用。

例如，他们将被丢弃或处理成低市场价值的产品，如鱼粉和化肥。

酶技术的应用以恢复以及修改的海鲜蛋白质，其可能会产生能广泛使用的食品成分或工业产品。

在生物技术的最新进展也表明酶的能力能够生产新型食品产品，改良食品和改善废物管理。

风味水解蛋白酶已用于生产可接受的功能特性的水解蛋白。

在受控条件下产生理想功能特性的水解液，具有很高的营养价值以及能够减少苦味。

蛋白酶特异性和浓度，温度，pH值，蛋白质基质的性质和水解度是影响酶促过程的一些变量。

通过控制酶水解的鱼蛋白水解液，具有最好的蛋白水解营养特性：平衡的氨基酸组成，高消化率，但因为其苦味和腥味，主要用于动物营养，许多方法已被用于食品蛋白水解液脱苦，包括选择性分离或提取，掩蔽苦味，苦味肽的酶解和类蛋白反应。

酶解食物中的蛋白质，是一种有效的方式来恢复生物活性肽。

鱼蛋白水解物已被证明是有潜力的营养或有药物应用用途。

圆鲹是在泰国流行的中上层鱼类，估计每年104,000公吨收获每年吨。

然而，人类消费仍然是有限的。

因此，生产新的增值产品，如蛋白质酶解液，有很好的营养价值，以及良好的功能特性。

近日，有抗氧化活性的蓝圆鲹蛋白水解物已被成功生产。

常用的蛋白酶直接影响其抗氧化水解蛋白的活性。

然而，没有圆鲹蛋白的功能和存储稳定水解的信息报告，这个调查是研究用风味蛋白酶水解的蓝圆鲹蛋白水解液的组成，功能性质和抗氧化活性。

2材料和方法2.1圆鲹蛋白水解物的生产蓝圆鲹切末与异丙醇以比率1:2（W / V）混合，在70摄氏度下加热30分钟。

倒掉溶剂，脱脂肉用蒸馏水冲洗2次，之后在3000G用Sorvall型号RC-5B离心机4℃下离心15分钟。

脱脂肉与蒸馏水的以比例1:2（W / V）混合，13000转的速度均匀离心1分钟。

与恒离子浓度缓冲溶液匀浆混合（pH值7.0），比例为1:1（W / V），50摄氏度下孵育10分钟。

蓝圆鲹分离蛋白酶解产物的制备及其抗大米淀粉老化特性

蓝圆鲹分离蛋白酶解产物的制备及其抗大米淀粉老化特性孙乐常;孙小舒;林端权;陈玉磊;翁凌;缪松;曹敏杰【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2024(48)4【摘要】为了进一步拓展海洋鱼类蛋白在食品中的应用,以蓝圆鲹分离蛋白为原料,利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物(BPIH),并研究其对大米淀粉(RS)短期老化的抑制作用。

通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH,并分别按RS的3%、6%、9%(质量百分比)进行添加。

通过测定RS的凝沉性、动态黏弹性、热学特性以及微观结构分析评价BPIH的抗淀粉老化活性。

结果显示,响应面法确定的最佳条件:酶底比5000;1(U/g)、酶解时间3 h、料液比1.00;3.81、酶解温度46.36℃、酶解pH 6.30,氮溶指数(NSI)实际值为85.41%±0.82%,与预测值86.37%接近。

该酶解条件下BPIH水解度达到21.62%。

BPIH中小于1000 u的肽占79.94%,主要为小分子低聚寡肽。

加入BPIH可以减弱RS的凝沉现象,降低RS在4℃保存过程中的储能模量(G'),显著降低老化后RS的峰值温度(T_(p))和焓值(ΔHr);加入BPIH的大米淀粉,老化后微观结构有较大孔洞,提升了淀粉糊化后保留内部水分的能力。

研究表明,BPIH能够抑制RS在4℃保存期间凝胶网络和微晶结构的形成,同时可能限制了淀粉分子间的聚集,抑制或延缓RS的短期老化。

本研究为蓝圆鲹分离蛋白酶解物在食品蛋白配料中的应用提供理论参考。

【总页数】15页(P366-380)【作者】孙乐常;孙小舒;林端权;陈玉磊;翁凌;缪松;曹敏杰【作者单位】集美大学海洋食品与生物工程学院;集美大学;大连工业大学;爱尔兰农业部农业与食品发展局Teagasc食品研究中心【正文语种】中文【中图分类】S986.1【相关文献】1.蓝圆鲹蛋白酶解物的螯合矿物离子活性研究2.花生分离蛋白与蓝园鲹酶解物TGase交联产物的乳化特性3.蓝圆鲹酸/碱等电点沉淀法分离蛋白凝胶特性与消化特性4.碱性蛋白酶限制性酶解对蓝圆鲹分离蛋白功能特性的影响5.蓝圆鲹加工副产物酶促水解制备抗氧化肽的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

21 814-818 j783 工艺技术 5-10 不同种类低值鱼酶解效果的比较及优化

不同种类低值鱼酶解效果的比较及优化范蕴莹（佛山市海天调味食品股份有限公司，广东佛山 528000）摘要：本文对比了不同海洋低值鱼的蛋白质含量和酶解效果，并对青鳞鱼和斑鰶的酶解方案进行优化。

结果表明：蓝园鲹和青鳞鱼的蛋白质含量较高，为17%以上；斑鰶、黄鲫、刺鲳、鲻鱼、鳓鱼的蛋白质含量为15~16%。

但蓝园鲹、黄鲫、刺鲳、鲻鱼的酶解效果较好，青鳞鱼、斑鰶和鳓鱼的酶解效果较差。

青鳞鱼的最佳酶解方案为：木瓜蛋白酶0.05%，风味蛋白酶0.1%，水解蛋白酶0.05%，胰蛋白酶0.15%，可提高蛋白质利用率为86.07%，氨基酸转化率为49.24%，酶解清液出品量为11.30 mL。

斑鰶的最佳酶解方案为：木瓜蛋白酶0.15%，风味蛋白酶0.1%，水解蛋白酶0.05%，胰蛋白酶0.15%，可提高蛋白质利用率为83.22%，氨基酸转化率为49.14%，酶解清液出品量为10.91 mL。

关键词：低值鱼；种类；酶解文章篇号：1673-9078(2012)7-814-818Comparison of Enzymatic Hydrolysis Effect on Different Kinds of T rash Fish and the Optimization of Hydrolysis ConditionsFAN Yun-ying(Foshan Haitian Flavoring and Food Co., Ltd, Foshan 528000, Guangdong, China) Abstract:The content of proteins and the enzymatic hydrolysis effects on different kinds of trash fishes were comp ared. And the enzymatic hydrolysis effects of Hanergula zunasi and Clupanodon punctatus were be modified. The results showed that the protein contents of Decapterus maruadsi and Hanergula zunasi are more than 17%, and for Clupanodon punctatus, Setighnna taty，Hanergula zunasi，Mugil cephalus and Llisha elongata，the protein contents were ranged in 15-16%. The enzymatic hydrolysis effects of Decapterus maruadsi, Setighnna taty, Hanergula zunasi and Mugil cephalus were better than those of Hanergula zunasi, Clupanodon punctatus and Llisha elongate. The best enzymes for Hanergula zunasi hydrolysis are the mixture of 0.05% papain, 0.1% Flavourzyme, 0.05% Alcalase and 0.15% trypsin, with which 86.07% of protein recovery, 49.24% of degree ofhydrolysis and 11.30 ml of the production quantity were achieved. The best enzymes for Clupanodon punctatus were the mixute of 0.15% papain, 0.1% Flavourzyme, 0.05% Alcalase and 0.15% trypsin, with which 83.22% of protein recovery, 49.14% of degree ofhydrolysis and 10.91 ml of the production quantity were achieved.Key words: trash fish; different kinds; enzymatic hydrolysis我国海洋渔业资源丰富，是世界上水产品产量最大的国家之一。

碱性蛋白酶水解蓝圆[鱼参]条件的优化

中心组合试验方法优化酶的添加量和蛋白质浓度。结果表明：性蛋白酶水解蓝圆够的最佳条件为每克蛋白加酶量碱４３０Ｕ蛋白质浓度１７％、解温度５２、．５水５℃、应体系ｐ反Ｈ值７５酶解时间６，此条件下，．、在ｈ水解体系的氨基酸态氮含量达１ＯＬ水解度为５．８总氮回收率为９．％，发性盐基氮含量为０００ｇＬ氨基酸态氮、解度和总．，３１％，８７７挥Ｏ．，３／水
ｈｄｏｙｉｐｙｒｌｓｓＨｖｌｗａ７５ｈｄｏｙｉｔｍｅａｕｅｓ．，ｙｒｌｓｓｉｗａ６ｏｒ；ｕｄｒｔｅｏｄｔｎ，ａｎａｉｎｔｏｅｓｈｕｓｎｅｈｃｎｉｉｓｍｉｏｃｄｉｇｎｏｒ
ａｄｔｔｌｏａｉｅｂｓｃｎｉｏｅｅｃｅ．０ｇＬ．Ｄａｕｅｏｍｉｏａｉｉｏｅｏｃｎｒｔｎｈｄｏｙｉｎｏａｌｔｌａｉｔｇｎｒａｈｄ００３／ＲＳｖｌｆａｎｃｄｎｔｇｎｃｎｅｔａｉ．ｙｒｌｓｓｖｒｒｏｄｇｅｎｅｏｅｙｏｅｔｔｌｎｔｏｅｓｌｗｅａ％．ｅｒｅａｄｒｃｖｒｆｔｏａｉｒｇｎｗａｈｏｒｔｎ２ｈＫｅｒｓＤｅａｅｕｒａｓ；ｌａｉｅｐｏｅｓ；ｙｒｌｓｓｏｔｚｔｎｙｗｏｄ：ｃｐｔｒｓｍａｕｄｉａｋｌｒｔａｅｈｄｏｙｉ；ｐｉａｉｎｍｉｏ

蓝圆碜蛋白水解条件的优化

正交试验确定了双酶复合酶解的最佳水解条件。结果表明：木瓜蛋白酶和中性蛋白酶同时加入酶解蓝圆碜蛋白的效果最好，最佳的水解条件下的酶解液中氨基酸态氮含量可达２８ｇ、．ｌ氮回收率为９．４ｅ１７％。２关键词：蓝圆碜；蛋白酶；酶解
Ｉ ’ ＹＯＥＺＹＭＡ’ ＣＨＹＤＲＵＬＹＩＯＵＤＩ＇ＩＳＳＴＰＲＯＴＮＦＥｌＲＯＭ上ＹＡＮＧｉｇＨＯＮＧｅｇｚｉＨＵＡＮＧｉＰｎ，Ｐｎ — ｈ，Ｋａ
得到充分的利用，因而附加值很低。近些年来，利用蛋
ｕｅｏｓｎｅｓ［ＪｕｎｆｐｌｄＢｃｅｉｌｙ１９，：ｓｄｉｆｄｄｆｄＪｏｒａｏｐｉａｔｒｏ，９１０ｎｏａｅ］ｌＡｅｏｇ７
１１９１８－１
作者简介：杨萍（９４）女（）副教授，１６一，汉，硕士，主要从事水产品深
ａｎｃｄｎｔｏｅｓ２４，ｄｏｙｉｏｕｉｎｔｅｏｅｙｒｔｆｔｏｅｓ９．７％．ｍｉｏａｉｉｇｎｗａ．８ｇＬｉｈｙｒｌｓｓｓｌｔｏ，ｈｅｒｃｖｒａｅｏｒｇｎｗａ１２ｒｎｎｉＫｅｒｓ：ｃｐｔｒｓｍａａｉｐｏｅｓ；ｍｚｍｏｙｉｙｗｏｄＤｅａｅｕｍ＆；ｒｔａｅｅｙｌｓｓ
加工及综合利用的研究。
件下，响应面法预测微波萃取的最佳条件为：萃取时问
４４ｎ萃取功率５３２Ｗ，．ｍｉ，５６．液料比２５９：，时虾０１．１此０

鱼蛋白酶解工艺流程

鱼蛋白酶解工艺流程
稿子一
嘿，亲爱的小伙伴们！今天来和你们聊聊超有趣的鱼蛋白酶解工艺流程哟！
选好鱼之后呢，就得把它们清洗干净，把鱼鳞、内脏啥的都处理掉，这一步就像是给鱼做个彻底的“大扫除”。

在酶解的过程中，温度和时间可得控制好，就像炒菜掌握火候一样，不能马虎。

温度太高或时间太长，酶可能就“累坏”啦，效果就不好了。

等酶解完成，还要进行过滤，把那些没用的杂质都去掉，留下纯净的酶解液。

对酶解液进行浓缩、干燥，这样我们就能得到有用的鱼蛋白酶解产物啦！
怎么样，是不是觉得这个过程挺有意思的？
稿子二
嗨呀，朋友们！今天咱们来唠唠鱼蛋白酶解工艺流程的那些事儿！
一开始呀，得去找那些活蹦乱跳的鱼，这就好比找一群充满活力的小伙伴。

然后把它们带回家，好好给洗个澡。

洗完澡，就得给鱼来个“大变身”，把不要的部分都去掉，只留下精华。

切成小块后，准备让酶来大显身手。

放酶的时候可得小心，就像给宝贝鱼加点神奇的魔法药水，不能多也不能少。

然后就让它们在合适的环境里待着，温度要舒服，时间也要刚刚好。

等着的过程中，心里就盼着能有个好结果。

时间一到，就像开奖一样，期待满满。

经过浓缩、干燥这些步骤，鱼蛋白酶解的宝贝就出来啦！是不是很神奇？
整个过程就像是一场精心策划的冒险，每一步都充满了惊喜和期待呢！。

鱼类蛋白提纯实验报告(3篇)

第1篇实验名称：鱼类蛋白提纯实验实验目的：1. 熟悉鱼类蛋白提取的基本原理和方法。

2. 掌握鱼类蛋白粗提、纯化和鉴定等实验技术。

3. 了解蛋白质在不同溶剂中的溶解性差异，以及盐析、透析等纯化方法的原理和应用。

实验原理：蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有多种生物学功能。

鱼类蛋白提取是研究蛋白质结构和功能的重要步骤。

本实验通过使用不同的提取方法和纯化技术，从鱼类组织中提取蛋白质，并对提取的蛋白质进行鉴定。

实验材料：1. 鱼肉样本2. 丙酮、甲醇、盐酸、硫酸铵、SDS、考马斯亮蓝G-250等试剂3. 离心机、紫外分光光度计、透析袋、凝胶电泳装置等仪器实验步骤：一、样品处理1. 将鱼肉样本切碎，用丙酮或甲醇进行初步提取，去除脂肪和杂质。

2. 将提取液离心，取上清液作为粗提蛋白溶液。

二、粗提蛋白的纯化1. 盐析法：将粗提蛋白溶液用硫酸铵进行盐析，调节pH值至7.0，离心分离蛋白沉淀。

2. 透析法：将蛋白沉淀用透析袋进行透析，去除小分子杂质。

三、蛋白鉴定1. 紫外分光光度法：测定蛋白溶液的紫外吸收光谱，确定蛋白质的浓度。

2. 凝胶电泳法：将蛋白溶液进行SDS-PAGE电泳，分析蛋白质的纯度和分子量。

3. 考马斯亮蓝G-250染色法：观察电泳后的蛋白质条带，判断蛋白质的纯度。

实验结果：一、粗提蛋白的盐析通过硫酸铵盐析，得到白色蛋白沉淀，表明蛋白质成功从鱼肉组织中提取。

二、粗提蛋白的透析通过透析，去除小分子杂质，得到较纯的蛋白溶液。

三、蛋白鉴定1. 紫外分光光度法：蛋白溶液在280nm处有较强的吸收峰，表明存在蛋白质。

2. 凝胶电泳法：电泳结果显示，蛋白溶液在特定位置出现单一条带，表明蛋白质纯度较高。

3. 考马斯亮蓝G-250染色法：电泳后的蛋白质条带颜色均匀，表明蛋白质纯度较高。

实验结论：本实验成功从鱼肉组织中提取了蛋白质，并通过盐析、透析等纯化方法得到了较纯的蛋白溶液。

实验结果表明，紫外分光光度法、凝胶电泳法和考马斯亮蓝G-250染色法均可用于蛋白质的鉴定。

蓝圆鲹黄嘌呤氧化酶抑制肽的制备及其活性分析

( g) ,电位滴定法测定酶解液中氨态氮质量 m2 ( g) ,
水解度的计算如公式(1) 所示:
水解度 / % =
m2
× 100
m1
(1)
浴恒温振荡器,金坛市精达仪器制造厂;自动电位滴定
1. 3. 4 酶解物体外 XOD 抑制活性测定
公司;紫外可见分光光度计、红外光谱仪、高效液相色
仪检测板中分别加入 50 μL 待测样品(15 g / L) 或 50
机,德国 Christ 公司;凯氏定氮仪,丹麦 FOSS 公司;水
0. 3% 、0. 4% 、0. 5% ) 对该指标的影响。固定条件:
分数) 、料液比 1 ∶ 2 ( g∶ mL) ,酶解时每次改变其中 1
个因素,其他因素不变。
1. 3. 3 水解度的测定
采用凯氏定氮法测定蓝圆鲹肉中总氮质量 m1
(xanthine oxidase,XOD) 抑制肽是一种能够在体内或
红外及紫外光谱对其结合位点进行分析。旨在为蓝圆
性肽。 XOD 抑制肽可降低尿酸的生成,对治疗高尿
肽的开发及其降尿酸活性研究提供重要参考。
体外抑制 XOD 活性,从而减少尿酸生成量的生物活
鲹的高值化利用提供新的思路,并为蓝圆鲹 XOD 抑制
研业务费专项(2021SD06)
收稿日期:2020-11-16,改回日期:2020-12-09
146
2021Vol. 47 No. 13 ( Total 433)
生产与科研应用
骨和内脏,取鱼肉,洗净沥干,绞成肉糜,于 - 20 ℃ 冻
藏备用。
胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白
酶、复合蛋白酶, 酷尔化学科技有限公司; 黄嘌呤、

响应面法优化酶促水解蓝圆鲹蛋白制备抗凝血肽的研究

响应面法优化酶促水解蓝圆鲹蛋白制备抗凝血肽的研究周浩纯;顾晗可;单丹婷;宋璐瑶;俞舜杰;黄光荣【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2017(000)003【摘要】以蓝圆鲹加工副产物为原料,探究酶促水解制备抗凝血肽的工艺条件.研究结果表明,碱性蛋白酶对蓝圆鲹蛋白质的水解效果最好,经单因素试验和响应面试验优化后得到碱性蛋白酶酶促水解的最佳条件为:水解pH 7.5,水解温度44℃,碱性蛋白酶添加量9 500 U/g,水解时间4.2h,响应面模型预测水解液的相对抗凝血活性值为100 AT-U/mL,3次验证试验表明,实际相对抗凝血活性为101 AT-U/mL,水解度为19.55％,与预测值接近.【总页数】5页(P52-56)【作者】周浩纯;顾晗可;单丹婷;宋璐瑶;俞舜杰;黄光荣【作者单位】中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310018;中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310018;中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310018;中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310018;中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310018;中国计量大学生命科学学院,浙江杭州310018【正文语种】中文【中图分类】TS254.4【相关文献】1.酶解蓝圆鲹鱼肉蛋白制备小分子肽的工艺研究 [J], 张静;刘书成;郝记明;章超桦2.酶解蓝圆鲹蛋白制备降血压肽的工艺研究 [J], 舒冰;孙建华;伍善广;赵钟兴;廖丹葵3.中性蛋白酶催化水解蓝圆鲹提取粗鱼油的工艺条件优化 [J], 黄茂坤;汪泳4.风味蛋白酶与中性蛋白酶混合水解蓝圆鲹条件优化 [J], 黄茂坤;林志杰5.蓝圆鲹加工副产物酶促水解制备抗氧化肽的研究 [J], 董铮;刘婷婷;徐新月;周文飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蓝圆鲹鱼肉蛋白酶解条件的确定

1 材料与方法
111 实验材料
蓝圆鲹购于湛江霞山步行街肉菜市场 ,去内脏清洗后 ,捣碎分装 ,冷冻备用 ;木瓜蛋白酶 (酶活力 80 IU / g) 、碱性蛋白酶 (酶活力 20 IU / g) 、中性蛋白酶 (酶活力 20 IU / g) 、动物蛋白水解复合酶 (酶活力 10 IU / g) 购于广西南宁庞博生物工程有限公司。
实验 ,结果如表 3 。
表 3 中性蛋白酶正交实验结果表
实验号 A
1 1 (1000)
2
1
3
1
4 2 (1300)
因素
B
1 (1∶1) 2 (1∶2) 3 (1∶3)
1
C
1 (4) 2 (5) 3 (6)
2
D
1 (55) 2 (50) 3 (45)
3
α-氨基酸态氮含量 ( g /100mL )
018217 018596 019450 017639
A b s tra c t: The p ro te in in c o rn g e rm w a s hyd ro lyz is e d b y the a lka line p ro te a s e 27091 The influe nc ing fa c to rs w e re tem p e ra tu re, p H, p ro te a s e d os a g e, s ub s tra te c onc e n tra tion a nd hyd ro lys is tim e 1 The e va lua ting va lue w a s e x tra c tion ra te of p ro te in in c o rn g e rm 1 The re s u lts s how e d tha t the e x tra c tion ra te of p ro te in w a s up to a b ou t 85% w he n hyd ro lys is tim e 4h, tem p e ra tu re 40℃, p H 910, p ro te a s e d os a g e 900U / g a nd s ub s tra te c onc e n tra tion 410% 1 Ke y wo rd s: c o rn g e rm ; e x tra c tion ra te; e nzym e hyd ro lys is; influe nc ing fa c to rs 中图分类号 : TS20112+ 1 文献标识码 : B 文章编号 : 1002- 0306 ( 2008) 01- 0178- 03

巴浪鱼的酶解工艺研究

巴浪鱼的酶解工艺研究周燕芳;黄俊盛;林燕如【摘要】选用木瓜蛋白酶对低值巴浪鱼蛋白进行水解，分析各因素对鱼蛋白水解的影响，以水解度为特征性指标，通过L9(34)正交试验确定水解的最佳条件．实验结果表明：酶浓度为1600 U/g，底物浓度3.5%，酶解时间5 h，酶解温度60℃．在此条件下鱼蛋白的水解度为54.51%．%Papain is adopted to hydrolyze the protein of blue scad and study the process condition of en-zymatic hydrolysis. Experimental results show that the optimal technological conditions are as follows. The en-zyme concentration is 1 600 U/g, the time of hydrolysis is 5 h , the concentration of substrate is 3.5%, the tem-perature of enzymolysis is 60℃, in which the degree of hydrolysis will be 54.51%.【期刊名称】《韩山师范学院学报》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】4页(P52-55)【关键词】巴浪鱼蛋白;木瓜蛋白酶;酶解;水解度【作者】周燕芳;黄俊盛;林燕如【作者单位】韩山师范学院化学系，广东潮州 521041;韩山师范学院化学系，广东潮州 521041;韩山师范学院化学系，广东潮州 521041【正文语种】中文【中图分类】S661.6巴浪鱼，学名蓝圆鲹（Decapterus maruadsi），属于暖水性鱼类，主要分布于中国海南省到日本南部.在东海主要分布于中国福建沿岸，南海密集区在中国台湾浅滩南部、粤东碣石湾外近海、珠江口、海陵岛及海南省东北部近海.巴浪鱼的生命周期短，生长快，为南海经济鱼类之一.由于巴浪鱼捕捞期集中在夏季，大量渔获物短期内集体上市，因而除少量做鲜销外，大部分加工成咸、干制品[1]，巴浪鱼市场价格低于高档名贵经济鱼类，但营养价值并不逊色，蛋白质含量达到20%以上，不饱和脂肪酸含量高，且富含必需氨基酸.然而，巴浪鱼是否被拿来食用，受各地的饮食传统所影响，像广西等地方的人们认为巴浪鱼有湿毒而不食用.在这些地方巴浪鱼被用来做海产养殖的鱼饲料.低值鱼虽然加工难度大，但其营养价值较高，如果只是被用于饲料生产或直接丢弃，不仅浪费了蛋白质，同时也污染了环境[2].如何更有效地利用这些资源，是目前亟待解决的问题，而鱼蛋白水解液的开发就是水产品资源利用的一种新尝试.鱼蛋白经过酶解，分解成氨基酸和小肽，人体小肠能够直接吸收[3].因此本文对巴浪鱼蛋白的酶解进行研究，以期为巴浪鱼的进一步开发利用和提高附加值提供参考依据.1 材料和设备1.1 材料新鲜巴浪鱼：购于潮州市桥东市场；木瓜蛋白酶（BR，江西锐阳生物科技有限公司，酶活力80万U/g）；其它试剂均为分析纯.1.2 仪器与设备SHP501超级恒温槽（上海恒平科学仪器有限公司）；KDN型调温电热套（常州国华仪器有限公司）；电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；半微量凯氏定氮仪.2 方法2.1 工艺流程低值海鱼→蒸熟→研细→鱼泥→称量→加入一定量的酶搅匀→水解一定时间→灭酶（沸水浴10 min）→冷却至室温→离心10 min收集所有上清液定容至50 mL→取10 mL测定游离氨基态氮.2.2 测定方法总氮的测定：凯氏定氮法[4]；氨基态氮的测定：双指示剂甲醛滴定法[5]；蛋白质水解度（DH）的测定：DH=游离氨基氮量/总氮量×100%[6].2.3 水解单因子研究2.3.1 酶添加量对水解效果的影响配制4%的鱼蛋白溶液6份，分装于1～6号锥形瓶中，添加木瓜蛋白酶使其浓度分别为1 000、1 200、1 400、1 600、1 800、2 000 U/g，在50℃及pH值为7.0，进行4 h的水解.测定酶解液中游离氨基酸含量，再根据总氮计算蛋白质水解度.2.3.2 底物浓度对水解效果的影响配制浓度为3%、3.5%、4%、4.5%、5%的鱼蛋白溶液6份，均按1 400 U/g的酶浓度添加木瓜蛋白酶，在50℃，pH 7.0，水解4 h.测定酶解液中游离氨基酸含量，再根据总氮计算蛋白质水解度.2.3.3 时间对水解效果的影响配制浓度为3.5%的鱼蛋白溶液6份，添加木瓜蛋白酶使其酶浓度为1 400 U/g，分别在50℃水解1、2、3、4、5、6 h.测定酶解液中游离氨基酸含量，再根据总氮计算蛋白质水解度.2.3.4 反应温度对水解效果的影响配制浓度为3.5%的鱼蛋白溶液6份，添加木瓜蛋白酶使其酶浓度为1 400 U/g，分别在35、40、45、50、55、60℃水解5 h.测定酶解液中游离氨基酸含量，再根据总氮计算蛋白质水解度.2.4 正交优化设计最佳水解条件为了进一步优化巴浪鱼蛋白的酶水解工艺条件，在pH7.0下，酶浓度1 200～1 600 U/g，底物浓度3.0%～4.0%，酶解时间4～6 h，酶解温度50～60℃，进行4因素3水平的正交实验来优化各个因素的组合.3 结果与分析3.1 单因素对水解效果的影响3.1.1 酶添加量对水解效果的影响由图1可知，在酶浓度为1 000～1 400 U/g之间变化时，水解度呈上升趋势，在1 400 U/g时达到最大值，之后随着酶的浓度不断增大，水解度反而有所下降，这可能是在底物浓度一定的情况下，随着酶用量的增加，底物的量成了制约水解度的主要因素，虽然在2 000 U/g时水解度有所增长，但涨幅很小，且蛋白水解度也低于酶浓度为1 400 U/g时的水解度.因此，综合考虑，鱼粉加酶水解最佳酶用量为1 400 U/g比较合适.3.1.2 底物浓度对水解效果的影响由图2可知，在加酶量一定的情况下，随着底物浓度的增加，水解度出现先增加后下降的趋势，在底物浓度为3.5%时，鱼粉的水解度达到较大值，之后随着底物浓度的增加，水解度不断下降，这主要是酶的用量的一定的情况下，过多的底物会造成对酶的竞争作用，所以，酶用量一定的情况下，底物浓度为3.5%时，水解效果最好.3.1.3 时间对水解效果的影响从图3可看出，在水解过程中，随着时间的增加，水解度不断增大，在5 h时达到较高的水解度，之后水解度上升趋势较缓慢，因此从经济角度考虑，水解时间设定为5 h较为合适.3.1.4 反应温度对水解效果的影响由图4可知，酶解温度在35～55℃之间，水解度总体呈上升趋势，并在55℃时达到最大值，这主要是由于木瓜蛋白酶的适宜温度在55℃左右，在该温度下酶的活性最大.如果温度过高，会导致酶失活，从而影响水解效果.图1 酶浓度对水解度的影响图2 底物浓度对水解度的影响图3 水解时间对水解度的影响图4 温度对水解度的影响3.2 最佳水解条件的确定在单因素实验研究的基础上，采用自然pH为7.0下，酶浓度1 200～1 600 U/g，底物浓度3.0%～4.0%，水解时间4～6 h，水解温度50～60℃，进行4因素3水平的正交实验，对各个因素的组合进行优化，并测定不同组合条件下的蛋白水解度，结果见表1.由正交实验的极差分析得出，4个因素对酶水解液水解度的影响大小为：B＞A＞D ＞C，最佳实验条件为A3B3C2D2，由于A3B3C2D2这个组合没有出现在正交表里，因此必须进行验证性实验，在A3B3C2D2条件下进行鱼蛋白的水解实验，测到蛋白水解度为54.51%，高于正交实验设计中最优组合的52.324%，所以该正交实验是成功的.因此，鱼蛋白水解的最佳工艺条件为A3B3C2D2，即木瓜蛋白酶水解巴浪鱼蛋白的最佳条件是酶浓度为1 600 U/g，底物浓度3.5%，酶水解时间5 h，酶水解温度60℃.4 结论本实验选用木瓜蛋白酶对低值海鱼进行酶解制备复合氨基酸，在pH 7.0的情况下，通过L9（43）正交实验确定该鱼蛋白最佳酶解组合为A3B3C2D2，即木瓜蛋白酶水解鱼蛋白最佳条件为酶浓度为1 600 U/g，底物浓度3.5%，60℃下水解5 h.在此条件下鱼蛋白的水解效果较好，水解度达到54.51%.通过以上实验研究，为低值海鱼的开发利用，提高附加值提供了参考，同时也对海洋资源的开发利用提供思路.表1 正交实验表因素实验号蛋白水解度DH（%）A：酶用量(U·g-1)B：酶解温度（℃）C：酶解时间（h）D：底物浓度（%）1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R 1 200 1 200 1 200 1 400 1 400 1 400 1 600 1 600 1 600 0.416 0.431 0.479 0.063 50 55 60 50 55 60 50 55 60 0.434 0.412 0.479 0.067 4 5 6 5 6 4 6 4 5 3.0 3.5 4.0 4.0 3.0 3.5 3.5 4.0 3.0 0.439 0.464 0.422 0.042 40.195 41.933 42.601 41.281 39.204 48.672 48.644 42.612 52.324最优水平0.438 0.452 0.435 0.017 A3B3C2D2【相关文献】[1]陈君，霍健聪.低值蓝圆鲹休闲鱼片的试制[J].科学养鱼，2011（11）：68-69.[2]李琳，沈志华，李伟明.低值鱼的深度酶解及海鲜复合调味料的生产[J].中国调味品，2014，39（2）：67-71.[3]付石军，郭时金，王坤坤.氨基酸络合锌及其在动物生产中的应用[J].饲料研究，2012（5）：38-41.[4]张意静.食品分析[M].北京：中国轻工业出版社，1999：190-192.[5]涂宗财，陈剑兵，刘伟，等.酶解鱼鳞胶制备小分子多肽的研究[J].食品科学，2005，26（8）：210-212.[6]陈晶，熊善柏，李洁，等.白鲢鱼骨蛋白酶水解工艺研究[J].食品科学，2006，27（11）：326-330.。

酶解蓝圆鲹蛋白制备降血压肽的工艺研究

酶解蓝圆鲹蛋白制备降血压肽的工艺研究舒冰;孙建华;伍善广;赵钟兴;廖丹葵【期刊名称】《海洋科学》【年(卷),期】2013(000)003【摘要】以蓝圆(Decapterus maruadsi)鱼肉蛋白为原料,选用6种蛋白酶在各自适宜的条件下酶解制备鲹降血压肽,通过检测酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的体外抑制活性,筛选出木瓜蛋白酶为制备蓝圆降血压肽的最佳用酶。

考察了不同水解度的酶解产物对ACE抑制效果,当水解度为13.7%时,产物对ACE的最高抑制活性可达67.4％。

在此基础上,分别了考察酶解时间、初始酶用量、初始底物浓度、酶解温度和pH 值对酶解工艺的影响,鲹得到制备蓝圆降血压肽的适宜酶解工艺为：初始酶用量鲹为7000 U/g,初始底物浓度为25 g/L,酶解温度为45℃, pH为7.0,酶解240 min。

采用超滤技术对酶解产物活性组分进行分离富集,发现产物中高活性部分均可富集于10 kDa和5kDa渗透液中,且高活性组分分子量主要集中在5 kDa以下,该组分对ACE的活性抑制率为88.47%。

% The protein from Decapterus maruadsi was hydrolyzed by six different proteolytic enzymesin their op-tional conditions. The inhibition percent (IP) of Angiotensin I-converting enzyme (ACE) by the hydrolysates was examined with high performance liquid chromatography. Results showed the papain was the best enzyme for pro-ducing ACEI. When the degree of hydrolysis (DH) was 13.7%, the inhibition of ACE by the hydrolysate reached as high as 67.4%. Further on, the influence of hydrolysis time, initial enzyme concentrations ([E]), initial substrate concentrations ([S]), hydrolysis temperatures and pHvalues was investigated. Results showed that the optimal con-dition for producing ACEI was as follows:[E] at 7000 U/g·Pro, [S] at 25 g/L, hydrolysis temperature at 45℃, pH at 7.0 and hydrolysis time in 240 minutes. Then ultrafiltration technology was used to separate and enrich the active partof hydrolysates. Results showed that the higher active part of the hydrolysates can be enriched in the penetrat-ing fluid of both 10 and 5 KDa. It was also found that the higher active hydrolysates were mainly lower than 5 KDa with an ACE inhibition rate of 88.47%.【总页数】5页(P45-49)【作者】舒冰;孙建华;伍善广;赵钟兴;廖丹葵【作者单位】广西大学化学化工学院，广西南宁 530004;广西大学化学化工学院，广西南宁 530004;广西大学化学化工学院，广西南宁 530004;广西大学化学化工学院，广西南宁 530004;广西大学化学化工学院，广西南宁 530004【正文语种】中文【中图分类】S98【相关文献】1.响应面法优化酶促水解蓝圆鲹蛋白制备抗凝血肽的研究 [J], 周浩纯;顾晗可;单丹婷;宋璐瑶;俞舜杰;黄光荣2.酶解蓝圆鲹鱼肉蛋白制备小分子肽的工艺研究 [J], 张静;刘书成;郝记明;章超桦3.脱脂蓝圆鲹鱼粉与酶解蛋白粉成分分析及营养评价 [J], 涂晓玲;史梦佳;张卿;陈丽娇;程文健;梁鹏4.风味蛋白酶水解蓝圆鲹工艺及酶解液抗氧化活性初探 [J], 黄茂坤; 林志杰5.碱性蛋白酶限制性酶解对蓝圆鲹分离蛋白功能特性的影响 [J], 孙乐常;刘伟峰;林怡晨;赵阿云;张凌晶;翁凌;曹敏杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蓝圆鲹蛋白的酶解过程动力学研究

蓝圆鲹蛋白的酶解过程动力学研究廖丹葵;黄伟;蒋海萍;孙建华;赵钟兴;童张法【期刊名称】《高校化学工程学报》【年(卷),期】2013(000)005【摘要】In order to find out the process condition for preparing the bioactive peptides obtained from Decapterus maruadsi protein, the dynamic model for the Decapterus maruadsi enzymatic system was studied. Alkaline protease was used to hydrolyze Decapterus maruadsi protein which forms complicated active peptides consequently. The dynamic model for enzymolysis of Decapterus maruadsi protein alkaline protease system was obtained via the pH-stat method. The molecular weight distribution of the polypeptide fragments under the different degrees of hydrolysis (DH) in the hydrolysate of Decapterus maruadsi protein was analyzed by high performance size exclusion chromatography (HPSEC). In terms of chromatograms obtained at different DH values, a 3-D continuous surface and corresponding contour were plotted to characterize the relation of DH -polypeptide fragment molecular weight - mass percent in the enzymatic process. Mass percentages of polypeptide fragments at the different molecular weights and DH values were established with Matlab simulation. Results show that the 3-D dynamic model is basically consistent with the real hydrolysis. This model has revealed the composition variation with polypeptide molecular weights inthe enzymolysis and may be used to conduct the real-time quantitative analysis and the dynamic attribute of the enzymolysis system. It is also beneficial to the directional and quantitative preparation of target active peptides.%为了探索定向制备蓝圆鲹蛋白活性多肽的工艺条件，进行了酶解体系的动力学研究。

复合蛋白酶水解蓝圆鲹工艺条件的优化

复合蛋白酶水解蓝圆鲹工艺条件的优化
胡阳;倪辉;杨远帆;陈申如;蔡慧农
【期刊名称】《泉州师范学院学报》
【年(卷),期】2009(27)6
【摘要】以水解度为优化指标,利用单因素试验考察酶解温度、pH值、时间等因素对鱼蛋白水解的影响,利用中心组合试验方法优化酶的添加量和蛋白质浓度.结果表明,复合蛋白酶水解蓝圆鲹的最佳工艺条件为:加酶量2 700 U·g-1蛋白、蛋白质浓度1.56%、水解温度60℃、反应体系pH 7.5、反应时间8 h.在此条件下,水解体系的氨基酸态氮含量达1.27 mg·mL-1,水解度为50.98%,挥发性盐基氮含量为0.032 mg·mL-1.
【总页数】5页(P98-102)
【作者】胡阳;倪辉;杨远帆;陈申如;蔡慧农
【作者单位】集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021;集美大学,生物工程学院,福建,厦门,361021
【正文语种】中文
【中图分类】TS254
【相关文献】
1.碱性蛋白酶水解蓝圆鲹条件的优化 [J], 陈申如;倪辉;杨远帆;田标
2.响应面法优化酶促水解蓝圆鲹蛋白制备抗凝血肽的研究 [J], 周浩纯;顾晗可;单丹
婷;宋璐瑶;俞舜杰;黄光荣
3.中性蛋白酶水解蓝圆鲹条件的优化 [J], 肖安风;倪辉;杨远帆;陈申如;蔡慧农
4.中性蛋白酶催化水解蓝圆鲹提取粗鱼油的工艺条件优化 [J], 黄茂坤;汪泳
5.风味蛋白酶与中性蛋白酶混合水解蓝圆鲹条件优化 [J], 黄茂坤;林志杰
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