人肝癌多药耐药细胞系HepG2_ADM和其亲本细胞系HepG2蛋白质双向电泳图谱的差异分析
基因编辑肝癌细胞系HepG2—药物研究、肝毒性和癌症研究神器
基因编辑肝癌细胞系HepG2—药物研究、肝毒性和癌症研究神器基因编辑肝癌细胞系HepG2——药物研究、肝毒性和癌症研究神器肝脏作为人体五脏之一，与机体正常的代谢、解毒、凝血等过程息息相关，并且参与机体免疫，是维持机体生命不可缺少的重要器官。
在进行肝脏疾病的研究中，合适的细胞模型是重要的工具之一，但由于常规肝细胞获取困难、培养难度高、培养成本高昂，在一定程度上制约了肝脏疾病研究的发展。
因此，在肝脏研究中选择培养简单、遗传背景稳定的肝细胞系则成为了一种替代选择，其中HepG2是最为常用肝癌细胞系之一。
HepG2细胞系的应用HepG2由knowles等建系于1979年，是一种肝母细胞瘤，来源于一名15岁的高加索白人男性肝癌标本。
HepG2细胞呈上皮样形态，典型染色体数目为55个。
肝炎病毒研究：HepG2不含hepatitis B virus (HBV)和hepatitis C virus (HCV)，因此HepG2是常用的研究HBV和HCV细胞系模型。
体外HCC模型：HepG2是一种来源于肝细胞癌（HCC）患者肝组织的细胞系，是常见的体外HCC模型。
HepG2中p53抑癌基因无突变，因此可用于研究p53与肝细胞癌（HCC）的密切关系，以及HCC的发病、诊治、预防。
药物研究：肝脏是人体内药物代谢的最主要器官,也是重要的解毒器官。
HepG2细胞系无论在形态上还是功能上都更接近于人的肝组织，该细胞系常用于药物代谢和肝毒性研究。
肝细胞系与CRISPR/Cas9技术相结合，助力研究肝炎、遗传病、癌症等医学难题利用CRISPR/Cas9构建基因敲除HepG2的HBV感染细胞模型细胞，为彻底治愈乙肝提供新思路乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）是一种DNA病毒，在细胞外的HBV基因组DNA是一种松弛环状的双链DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子，当病毒感染细胞，HBV基因组进入到宿主细胞核后，rcDNA会在转化成共价闭合环状DNA（covalently closed circularDNA，cccDNA），并且可以稳定存在。
《2024年热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》范文
《热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》篇一一、引言近年来，癌症已成为全球公认的健康问题。
随着医学技术的发展，越来越多的治疗手段如手术、放疗、化疗及新型生物疗法被广泛运用在临床治疗中。
然而，对肝癌的治疗仍面临诸多挑战。
热疗作为一种非侵入性的治疗方法，在肿瘤治疗中显示出其独特的优势。
本研究以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验探讨热疗对Hep-G2细胞凋亡的影响，以期为肝癌的临床治疗提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料本实验采用人肝癌细胞株Hep-G2，由某生物科技有限公司提供。
实验中使用的热疗设备、培养基、血清及其他试剂均为市售合格产品。
2. 方法（1）细胞培养：将Hep-G2细胞置于含有适当培养基的细胞培养瓶中，于恒温培养箱中培养。
（2）热疗处理：将细胞分为对照组和实验组，实验组进行不同温度和时间梯度的热疗处理。
（3）细胞凋亡检测：采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。
（4）数据分析：实验数据采用SPSS软件进行统计分析。
三、实验结果1. 细胞生长情况经过热疗处理的Hep-G2细胞，其生长速度明显减缓，与对照组相比，细胞增殖受到抑制。
2. 细胞凋亡情况流式细胞术检测结果显示，热疗处理后，Hep-G2细胞的凋亡率明显增加。
随着热疗温度和时间梯度的增加，细胞凋亡率呈现上升趋势。
实验组与对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 数据分析通过SPSS软件对实验数据进行统计分析，结果显示热疗处理对Hep-G2细胞的凋亡具有显著影响，不同温度和时间梯度下的凋亡率差异显著。
四、讨论本研究结果表明，热疗对Hep-G2细胞的生长具有抑制作用，同时能够显著诱导细胞凋亡。
这可能与热疗过程中产生的热应力有关，导致细胞内蛋白质变性、DNA损伤等，从而触发细胞的凋亡机制。
此外，不同温度和时间梯度下的热疗效果存在差异，提示我们在临床治疗中需根据患者的具体情况制定个性化的治疗方案。
HepG2人肝癌细胞是什么？
HepG2人肝癌细胞是什么？
HepG2细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。
该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。
目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。
HepG2细胞系基因组和表观基因组相关文献的结果统计显示，HepG2肝癌细胞系的基因组序列创造出更高的基因组特征。
充分整合了包括CN、SNPs、SNV等在内的HepG2细胞系的全基因组特征和基因序列，为其他类似细胞系的全基因组鉴定奠定了基础。
朱利安娜等人发现β-肌酸对人白细胞的杀伤作用比人肝癌细胞更为明显。
单萜类化合物的肝毒性高于HepG2/C3A细胞，优于白细胞。
体内研究表明β-肌力相关的致癌和致畸效应需要进一步的实验证实,Arunraj等人发现，复合纳米凝胶对HepG2细胞系具有细胞毒性，Dox几丁质PLA CNG系统可能是一种有前途的肝癌抗癌药物传递系统。
人肝癌细胞株HepG2在肝脏生理研究中得到了广泛应用，但肝特异性药物代谢酶和转录因子的表达水平较低。
格尔德霉素体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖并促进凋亡
格尔德霉素体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖并促进凋亡刘明强;庄少鹉;刘丽莎【摘要】Objective To investigate the effects of geldanamycin on the proliferation and apoptosis in hu-man hepatoma cell lines HepG2. Methods HepG2 cells were incubated with different concentrations of gel-danamycin for 24 to 72 hours. Cell proliferation was determined by MTT assay. Cell apoptosis was detected by flow cytometry using annexin V and propidium iodide. Results Geldanamycin significantly inhibited the prolifera-tion of HepG2 cells at a dose-dependent manner. When compared to the control,the cell proliferation was inhibit-ed by20.36%,29.45% and 42.52%,respectively after 48h incubation at the concentration of 0.2,0.4 and 0.8μmol/L of geldanamycin,however,the apoptosis of HepG2 cells was increased by 4.82%,24.47% and53.64%(P<0.05). Conclusions Geldanamycin inhibits proliferation and induces apoptosis in HepG2 cells,suggesting a therapeutic effect of geldanamycin in hepatoma treatment.% 目的研究格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。
肝癌细胞株HepG2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立
１ ４ 样 品制 备 ．
收集 １ ０ ×１ 的细胞 ， Ｐ Ｓ洗 细胞 ３次 ， 入 用 Ｂ 加 裂解液 （ ． １０×１’ 细胞 加入 ４ ８ ０个 ９ 裂 解缓 冲 液 ，
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医 药 卫 生
肝癌 细 胞株 ＨｅＧ ｐ ２的 Ｇ １期细 胞 蛋 白质 组 双 向 电泳 图谱 的建 立
白瑞霞 王文礼 李丽梅 刘 婷 叶 纪诚
（ 内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室 ， 呼和浩特 ０ ０ ５ １０９）
Ｇ ｅｈｃｒ ｉ．ｃｅｃｓ 图 像 扫 描 分 析 一ｒ — Ｅ Ｈ ａｈａｅ ＢｏＳｉ ｅ； ｎ Ｐｏ ｘ ｐｅｓＤ蛋 白凝胶成 像 系统 购 自 Ｐｒｉ ｌ ｒ 司 ； ｒｓ２ ｅｋｎＥｍｅ 公
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《2024年热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》范文
《热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》篇一一、引言随着现代医学的快速发展，癌症的治疗手段日趋多样化，其中热疗作为一种非侵入性的治疗方法，已经得到了广泛的应用和深入研究。
热疗通过对肿瘤细胞进行选择性热处理，从而引发细胞凋亡或坏死，以达到治疗肿瘤的目的。
本文以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验研究热疗对其细胞凋亡的影响，以期为临床治疗提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料人肝癌细胞株Hep-G2细胞、热疗设备、细胞培养基、MTT 试剂、流式细胞仪等。
2. 方法（1）细胞培养：将Hep-G2细胞在适宜的培养条件下进行培养，并观察其生长情况。
（2）热疗处理：将Hep-G2细胞分为对照组和实验组，实验组进行不同温度和时间的热疗处理。
（3）细胞凋亡检测：采用MTT法检测细胞活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
（4）数据统计与分析：对实验数据进行统计分析，比较各组细胞凋亡率的差异。
三、实验结果1. 细胞活性检测结果通过MTT法检测细胞活性，结果显示，随着热疗温度和时间的增加，Hep-G2细胞的活性逐渐降低。
实验组细胞的活性明显低于对照组，表明热疗对Hep-G2细胞的生长具有抑制作用。
2. 细胞凋亡检测结果流式细胞仪检测结果显示，热疗处理后，Hep-G2细胞的凋亡率明显增加。
随着热疗温度和时间的增加，细胞凋亡率呈上升趋势。
实验组细胞的凋亡率显著高于对照组，表明热疗能够诱导Hep-G2细胞发生凋亡。
四、讨论本实验以人肝癌细胞株Hep-G2为研究对象，通过实验研究热疗对其细胞凋亡的影响。
实验结果显示，热疗能够抑制Hep-G2细胞的生长，并诱导其发生凋亡。
这可能与热疗对细胞内相关基因和蛋白的影响有关，从而引发细胞的凋亡机制。
此外，热疗的温度和时间对细胞凋亡的影响也具有重要作用。
适当的热疗温度和时间能够最大限度地发挥热疗的效果，提高肿瘤治疗的疗效。
然而，本实验仍存在一定局限性。
首先，实验仅在体外环境下进行，未能充分考虑体内环境的复杂性。
《2024年热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》范文
《热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》篇一一、引言肝癌作为全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，其治疗一直是医学研究的重点。
近年来，热疗作为一种新兴的治疗手段，在肝癌治疗中逐渐展现出其独特的优势。
然而，热疗对肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的具体作用机制尚不明确。
因此，本文通过实验研究，探讨了热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的影响及其作用机制。
二、材料与方法1. 材料（1）细胞株：人肝癌细胞株Hep-G2。
（2）实验仪器：CO2培养箱、倒置显微镜、流式细胞仪等。
（3）实验试剂：胰蛋白酶、DMEM培养基、胎牛血清、热疗设备等。
2. 方法（1）细胞培养：将Hep-G2细胞置于CO2培养箱中，使用DMEM培养基和胎牛血清进行培养。
（2）热疗处理：使用热疗设备对Hep-G2细胞进行不同温度和时间的治疗。
（3）细胞凋亡检测：采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
（4）数据分析：使用统计学软件对实验数据进行处理和分析。
三、实验结果1. 热疗对Hep-G2细胞生长的影响实验结果显示，随着热疗温度的升高和时间的延长，Hep-G2细胞的生长受到抑制，且呈现剂量依赖性。
当热疗温度达到一定阈值时，Hep-G2细胞的生长明显受到抑制，甚至出现细胞死亡。
2. 热疗对Hep-G2细胞凋亡的影响流式细胞仪检测结果显示，热疗能够诱导Hep-G2细胞发生凋亡。
随着热疗温度的升高和时间的延长，Hep-G2细胞的凋亡率逐渐升高。
在最佳热疗条件下，Hep-G2细胞的凋亡率达到最大值。
3. 热疗诱导Hep-G2细胞凋亡的机制通过进一步的研究，我们发现热疗能够通过多种途径诱导Hep-G2细胞凋亡。
其中，热疗能够激活Caspase家族相关蛋白的表达，促进线粒体膜电位的降低和线粒体中凋亡相关蛋白的释放，从而诱导细胞凋亡。
此外，热疗还能够影响肿瘤细胞的DNA损伤修复能力，促进肿瘤细胞的死亡。
四、讨论本研究通过实验研究，探讨了热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的影响及其作用机制。
《2024年热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》范文
《热疗对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的实验研究》篇一摘要本研究采用热疗技术对人肝癌细胞株Hep-G2进行实验处理，观察其对Hep-G2细胞凋亡的影响。
通过不同温度的热疗处理，探讨了热疗诱导细胞凋亡的机制，并分析其可能的治疗潜力。
研究结果表明，适宜温度的热疗可诱导Hep-G2细胞凋亡，对肝癌治疗提供新的可能性。
一、引言肝癌是全球范围内高发、致死率极高的恶性肿瘤之一。
近年来，尽管在肝癌治疗方面取得了显著的进展，但治疗效果仍需进一步提高。
热疗作为一种新兴的肿瘤治疗方法，具有非侵入性、无毒性等特点，对多种肿瘤具有显著的治疗效果。
因此，本研究采用热疗技术对人肝癌细胞株Hep-G2进行实验处理，以探讨其对细胞凋亡的影响及潜在的治疗价值。
二、材料与方法1. 材料：人肝癌细胞株Hep-G2、不同温度的热疗设备、细胞培养基、凋亡检测试剂等。
2. 方法：（1）将Hep-G2细胞进行不同温度的热疗处理，如42℃、43℃、44℃；（2）使用显微镜观察细胞的形态变化；（3）利用流式细胞术检测细胞的凋亡率；（4）利用免疫印迹技术分析热疗处理后相关凋亡蛋白的表达变化；（5）分析热疗对Hep-G2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。
三、实验结果1. 形态学观察：随着热疗温度的升高，Hep-G2细胞的形态逐渐发生改变，表现为细胞体积缩小、核固缩等典型的细胞凋亡特征。
2. 细胞凋亡率：随着热疗温度的增加，Hep-G2细胞的凋亡率逐渐升高。
在44℃处理下，细胞的凋亡率达到最高。
3. 凋亡蛋白表达：热疗处理后，Hep-G2细胞中与凋亡相关的蛋白表达水平发生显著变化，如Bax和Caspase-3的表达水平明显上升。
4. 对细胞增殖、迁移及侵袭的影响：热疗可抑制Hep-G2细胞的增殖和侵袭能力，但对迁移的影响较小。
四、讨论本实验结果显示，热疗对Hep-G2细胞具有显著的凋亡诱导作用。
适宜的温度能够引起细胞的形态变化，促进细胞凋亡，同时伴随着相关凋亡蛋白的表达变化。
纳米金逆转人肝癌耐药细胞 HepG2／ADM耐药性的实验研究
纳米金逆转人肝癌耐药细胞 HepG2／ADM耐药性的实验研究邵明涛;潘运龙;覃莉;巫青;丁晖;赵晓旭【摘要】AIM:To investigate whether gold nanoparticles (GNPs) reverses adriamycin (ADM), resistance of human hepatocellular carcinoma drug-resistant cell line HepG2/ADM and to explore the potential mechanism.METH-ODS:The sensitivities of HepG2 cells and HepG2/ADM cells to ADM were tested by MTT assay before and after GNPs pretreatment.The apoptotic rate was examined by flow cytometry.The concentration of ADM in HepG2/ADM or HepG2 cells was determined by ultraviolet-visible spectrophotometer .The content of glutathione ( GSH ) in HepG2/ADM or HepG2 cells by DTNB method.RESULTS:The half maximal inhibitory concentrations ( IC50 ) of ADM for HepG2/ADM cells were(29.46 ±1.73) mg/L and (15.18 ±0.85) mg/L be fore and after GNPs pretreatment,respectively.The IC50 of ADM for HepG2 cells was (9.16±2.03) mg/L before pretreatment.The apoptotic rate in GNPs+ADM group was higher than that in ADM group ( P<0.05 ) .The concentration of ADM in HepG2/ADM group was lower than that in HepG2 group (P<0.01).After GNPs pretreatment, the concentration of ADM in HepG2/ADM cells was higher than that before pretreatment.The content of GSH in HepG2/ADM group was higher than that in HepG2 group (P<0.01).After GNPs pretreatment, the content of GSH in the HepG2/ADM cells was lower than that before pretreatment.CONCLUSION:Gold nanoparticles can reverseADM resistance of human hepatocellular carcinoma drug-resistant cell line HepG2/ADM, <br> reduce the content of GSH and increase the concentration of ADM in HepG2/ADM cells.%目的：探讨纳米金（gold nanoparticles，GNPs）对人肝癌阿霉素（adriamycin，ADM）耐药细胞株HepG2／ADM的阿霉素耐药性的逆转作用及其可能机制。
肝癌细胞HepG2中增强子的识别及生物信息学分析
肝癌细胞HepG2中增强子的识别及生物信息学分析丁若凡;李宇鹏;张一鸣;朱小冬;胡海碧;刘文荣;李玲;郭志云【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2017(28)4【摘要】目的:整合增强子特征识别肝癌细胞HepG2增强子,并对其保守性、GC 含量、转录因子调控、靶基因功能等进行分析,以期解析肝癌细胞增强子参与的调控网络.方法:通过整合H3K27ac、H3K4me1和H3K4me3组蛋白修饰及DNase Ⅰ高敏位点的Chip-seq数据预测HepG2中的增强子,计算每个增强子的平均PhastCons分数和GC含量,评估整体增强子的保守性与GC含量,整合ENCODE 转录因子结合位点数据寻找转录因子-增强子调控,使用GREAT和DAVID分别对增强子和增强子的靶基因进行GO与KEGG通路功能富集分析.结果:共识别2254个肝细胞癌增强子,1432个增强子靶基因,135个转录因子的9983个增强子结合位点;比较随机位点靶基因,发现增强子显著正调控靶基因的表达;保守性与GC含量分析表明增强子具有显著高的保守性与GC含量,并存在C-T/C-T/C-T-G模式的motif;增强子功能分析显示增强子显著富集于蛋白结合、酶结合、转录因子结合、RNA聚合酶Ⅱ结合等已知增强子功能,增强子GO与KEGG通路功能富集分析表明增强子靶基因显著参与细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期调控和细胞迁移等肿瘤相关的生物进程与信号通路.结论:识别的肝细胞癌增强子具有显著高的保守性与GC含量,受多种转录因子调控,对其靶基因起正调控作用并且显著富集于肿瘤相关生物学进程与信号通路中.%Objective:To resolve the enhancer regulation network of hepatoma cell,the enhancers were identified by integrating the features of the enhancers in the hepatoma cell HepG2,and GC content,regulation oftranscription factors,identification of target genes and functional enrichment were analyzed.Methods:Enhancers in HepG2 were predicted by integrating Chip-seq data of histone modifications H3K27ac,H3K4me1 and H3K4me3 and of DNase Ⅰ hyper-sensitivity sites.The average PhastCons score and GC content of each enhancer were calculated to assess the conservation and GC content of the overall enhancers.ENCODE transcription factor binding sites data were integrated to search for transcription factor-enhancer regulation.The enrichment analysis of GO and KEGG pathway was performed by using GREAT and DAVID on enhancers and the target genes of enhancers respectively.Results:A total of 2254 enhancers in HepG2 were predicted,and 1432 target genes of enhancers,135 transcription factors and 9983 transcription factor binding sites of enhancers were obtained.The enhancers in HepG2 significantly promoted the expression of target genes by comparing with random regions.The analysis of conservation and GC content showed that the enhancers were significantly conserved and had a remarkably high GC content,and the motif of enhancer was C-T/C-T/C-T-G.The analysis of the function enrichment of GO and KEGG pathway of enhancers showed that the target genes of enhancers were involved in cell proliferation,cell apoptosis,regulation of cell cycle and cell migration and other tumor related biological processes and signaling pathways.Conclusion:Enhancers in HepG2 were significantly conserved and had a remarkable high GC content enrichment,and they were regulated by a variety of transcription factors and played a positive role in regulation on their target genes,andwere significantly enriched in tumor-related biological processes and signaling pathways.【总页数】6页(P455-459,523)【作者】丁若凡;李宇鹏;张一鸣;朱小冬;胡海碧;刘文荣;李玲;郭志云【作者单位】西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都610031;成都市第三人民医院病理科,四川成都610031;成都市第三人民医院病理科,四川成都610031【正文语种】中文【中图分类】Q751;Q811.4【相关文献】1.人肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM和其亲本细胞系HepG2蛋白质双向电泳图谱的差异分析 [J], 田浪;张志伟;陈孝平2.树突状细胞-肝癌细胞株HepG2融合细胞来源的exosome抗肝癌效应的实验研究 [J], 张红梅;张利旺;任军;白俊;刘文超3.肝癌中增强子调控miRNA前馈环路的识别与功能分析 [J], 常允建;康冉;薛璇;王韶畅;赵庆文;郭志云4.端粒酶逆转录酶基因hTERT在肝细胞癌中的表达及端粒酶反义基因对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响 [J], 张东;李开宗;窦科峰;宋振顺;赵青川5.miR-1246在肝癌血清中的表达及对肝癌 HepG2细胞生物学功能的影响 [J], 王攀;王毅超;虞丹丹;陈文举;钟倩怡;童彬鑫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肝癌细胞株HepG2蛋白双向电泳条件的优化
南 昌大 学 学 报 （ 医学 版 ）２ ０ １ ３年 第 ５ ３卷 第 ７期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｎａ ｎ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ （ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ）２ ０ １ ３ ， Ｖｏ １ ． ５ ３ Ｎ ｏ ． ７
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miR-34a抑制自噬增加肝癌耐药细胞HepG2ADM化疗敏感性
miR-34a 抑制自噬增加肝癌耐药细胞HepG2/ADM 化疗敏感性陈有科高良辉符誉黄小龙海南医学院第一附属医院肝胆胰外科（海南海口570102）[基金项目]2017年海南省自然科学基金项目(817331)[作者简介]陈有科(1981-11~),男,海南三亚人,主治医师,研究方向:肝胆胰外科。
E-mail:*******************·基础研究·Experimental Research·肝细胞癌是导致男性癌症相关死亡的第二大原因,也是全球第五大常见癌症[1]。
化疗在肝癌的治疗中占有重要的地位,虽然近年来疗效有了显著的改善,但患者的临床预后仍然很差,特别是治疗期间发生的肿瘤多药耐药严重阻碍着化疗药物的疗效[2]。
自噬被认为是一种代谢重编程途径,有研究显示自噬可以调控肿瘤细胞多药耐药的产生[3],微小RNA (microRNA ,miRNA )是一类可以参与肿瘤发生、发展的非编码小片段RNA ,微小RNA-34a (mi ⁃croRNA-34a ,miR-34a )属于miR-34家族成员,在一些肿瘤细胞中表达异常,与患者的预后密切相关[4],并且在肝癌中也发现了miR-34a 表达紊乱[5],本研究以肝细胞癌的多药耐药细胞系HepG2/ADM 为对象,研究miR-34a 对HepG2/ADM 细胞自噬的调控作用,并探讨对其化疗敏感性的影响。
1材料和方法1.1主要试剂与仪器人肝癌HepG2细胞株和HepG2/ADM 细胞株购自中国广州吉赛生物科技有限公司,RPMI 1640培养基、胎牛血清(FBS )购自美国Gibco 公司,多柔比星购于美国Sigma 公司,CCK-8细胞增殖检测试剂盒购自日本Dojindo 公司,miR-34a (正义:5′-TGGGCATCTCTCGCTTCATCTTCCC-3;反义:5′-GTGCTGGGGAGAGGCAGGACAG-3′)和内参U6(正义:5′-TCGCTTCGGCAGCACATAT ⁃ACT-3′;反义:5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′)引物由上海生工科技有限公司设计合成,逆转录试剂盒和荧光定量PCR 试剂盒购自日本TaKaRa公司产品。
《2024年KW-2478对肝癌HepG2细胞的作用研究》范文
《KW-2478对肝癌HepG2细胞的作用研究》篇一一、引言肝癌作为一种严重的恶性肿瘤，在全球范围内威胁着人类的生命健康。
当前，肝癌的治疗仍面临许多挑战。
因此，探索新型的治疗方法和药物成为了研究热点。
KW-2478作为一种新兴的药物分子，在多项研究中展现出潜在的抗肿瘤效果。
本研究旨在探讨KW-2478对肝癌HepG2细胞的作用及其可能的作用机制，以期为肝癌的临床治疗提供新的思路和方法。
二、材料与方法1. 材料（1）细胞系：肝癌HepG2细胞。
（2）药物：KW-2478。
（3）实验仪器与试剂：细胞培养箱、显微镜、酶标仪、细胞计数板等。
2. 方法（1）细胞培养：将HepG2细胞培养于含有适宜培养基的细胞培养瓶中，并置于细胞培养箱中。
（2）药物处理：将KW-2478以不同浓度处理HepG2细胞，观察其生长抑制情况。
（3）实验分组：将细胞分为对照组和实验组，实验组分别加入不同浓度的KW-2478。
（4）指标检测：通过MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡等指标。
三、实验结果1. KW-2478对HepG2细胞的生长抑制作用实验结果显示，不同浓度的KW-2478处理HepG2细胞后，细胞增殖受到明显抑制，且随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。
表明KW-2478对HepG2细胞的生长具有显著的抑制作用。
2. KW-2478诱导HepG2细胞凋亡的作用流式细胞术检测结果显示，KW-2478处理后，HepG2细胞的凋亡率显著增加。
进一步实验证实，KW-2478能够激活Caspase 家族相关基因的表达，促进细胞凋亡。
3. KW-2478对HepG2细胞周期的影响通过流式细胞术检测细胞周期分布，发现KW-2478处理后，HepG2细胞的S期比例增加，G0/G1期比例降低，表明KW-2478可能影响HepG2细胞的周期进程。
四、讨论本研究表明，KW-2478对肝癌HepG2细胞的生长具有显著的抑制作用，并能够诱导细胞凋亡。
艾洛替尼耐药肝癌HepG2细胞系的建立及其耐药机制
艾洛替尼耐药肝癌HepG2细胞系的建立及其耐药机制任志广;赵青;魏寅祥;贾砚寒;李新颖;黎燕;彭晖;马远方【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2012(26)6【摘要】目的体外建立艾洛替尼(erlotinib)耐药的人肝癌细胞系HepG2/erlotinib,鉴定其生物学特性,并对其耐药机制进行初步探讨.方法逐步递增艾洛替尼并最终给予艾洛替尼50μmol·L-1连续冲击HepG2细胞12个月,建立HepG2/erlotinib.磺酰罗丹明B法检测HepG2/erlotinib耐药倍数和耐药谱;测定细胞生长曲线并计算细胞增殖时间;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR和Western 印迹法检测HepG2/erlotinib细胞乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞表面BCRP蛋白表达.结果经过12个月艾洛替尼诱导的HepG2耐药细胞,艾洛替尼的IC50值为(72.3±6.1) μmol·L-1,艾洛替尼对正常HepG2细胞的IC50值为(10.6±0.3) μmol·L-1,耐药倍数为6.8±0.7,表明HepG2/erlotinib 为艾洛替尼耐药细胞系.HepG2/erlotinib对顺铂、多柔比星、米托蒽醌和拓扑替康的IC50均大于正常HepG2细胞的IC50,表明产生交叉耐药性.HepG2细胞和HepG2/erlotinib细胞的群体倍增时间分别为(20.7±3.3)h和(26.7±1.2)h,耐药细胞倍增时间延长.与HepG2细胞相比,HepG2/erlotinib的S期细胞比例明显增高(P＜0.05),G0/G1期细胞比例明显降低(P＜0.01);HepG2/erlotinib细胞中BCRP 基因和BCRP蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论建立的HepG2/erlotinib具有耐药细胞的特征和生物学特性,其耐药机制与BCRP蛋白表达增加有关.%OBJECTIVE To establish a human hepatocellular carcinoma cell line with resistance to erlotinib, and to investigate its possible resistance mechanism. METHODSThe cell line HepG2 was cultured by gradually increasing dose of erlotinib and final dose 50 μmol · L -1 in vitro for 12 months to generate its resistance cell line HepG2/erlotinib. The resistant index of ertotinib was determined by sulforhodamine B ( SRB) ; cell growth curve, doubling time and cell cycle phase distribution were measured; breast cancer resistance protein (BCRP) mRNA and its protein level were examined by RT-PCR, Western blotting and flow cytometry . RESULTS After induced for 12 months, a resistant cell line HepG2/erlotinib was established. The IC50 value of HepG2/erlotinib to erlotinib was (72.3 ±6.1) μmol·L-1 while that of HepG2 to erlotinib was (10.6 ±0.3) μmol·L-1, with the resistant index of 6.84 ±0. 7. The IC50 values of HepG2/erlotinib to cisplatin, doxorubi-cin, mitoxantrone and topotecan were greater than that of HepG2 cells, indicated that it had cross resistance to these drugs. The doubling time of HepG2 and HepG2/erlotinib was (20.7 ±3.3)h and (26.7 ±1.2)h, respectively. In the HepG2/erlotinib resistant cell line, the cell numbers of S phase increased (P < 0. 05 ) while that of G0/G1 phase decreased (P < 0. 01). HepG2/erlotinib cells expressed higher levels of BCRP mRNA and BCRP protein compared with parental cells ( P < 0.05). CONCLUSION An erlotinib-resistant human hepatocellular carcinoma cell line HepG2/ erlotinib is established. It shows a typical resistant phenotype and biological characteristics. The high BCRP expression may contribute to its resistance to erlotinib.【总页数】6页(P823-828)【作者】任志广;赵青;魏寅祥;贾砚寒;李新颖;黎燕;彭晖;马远方【作者单位】河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室,河南开封475004;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;南开大学医学院,天津300071;河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室,河南开封475004;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学研究室,北京100850;河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室,河南开封475004【正文语种】中文【中图分类】R979.1【相关文献】1.肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM的建立及耐药机制研究 [J], 王宁;李玉;刘洁2.人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞PC9/ER的建立及奥曲肽改善耐药机制研究 [J], 江飞龙;韩静;朱海振;陈光朋;孙建国;陈正堂3.人肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM和其亲本细胞系HepG2蛋白质双向电泳图谱的差异分析 [J], 田浪;张志伟;陈孝平4.艾洛替尼耐药的卵巢癌SKOV3细胞系的建立及其耐药特性 [J], 赵青;任志广;贾砚寒;魏寅祥;李新颖;黎燕;李亚里;彭晖5.人肺腺癌细胞HCC4006对厄洛替尼耐药细胞株的建立及其耐药机制鉴定 [J], 梁继珍;李理;易基群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三氧化二砷逆转肝癌细胞株HepG2／ADM多药耐药的作用
三氧化二砷逆转肝癌细胞株HepG2／ADM多药耐药的作用李贺;熊茂明;孟翔凌;耿小平【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2006(14)27【摘要】目的:探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及机制．方法:MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达．结果:As2O3在0．25 mg／L剂量以下时对HepG2和HepG2／ADM耐药细胞株的抑制率均小于15％,半数抑制率(IC50)分别为1．02和1．34 mg／L,无细胞毒剂量0．2 mg/L的As2O3能部分逆转HepG2／ADM细胞对阿霉素、顺铂(CDDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐药性,逆转倍数分别为2．92,3．09,2．13,2．60倍．同时无细胞毒剂量0．2 mg／L的As2O3能使HepG2／ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降．结论:As2O3具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调MDR1表达、增加细胞内药物积累有关．【总页数】4页(P2691-2694)【关键词】肝癌;多药耐药;三氧化二砷【作者】李贺;熊茂明;孟翔凌;耿小平【作者单位】安徽医科大学第一附属医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R915【相关文献】1.丹皮酚对肝癌 HepG2／ADM 细胞株多药耐药性的逆转作用及其机制 [J], 孙爱华;陈劲;关恒明;李平2.三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究 [J], 信卉;丁波3.小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究 [J], 张华耀; 谭浪平; 刘建平; 苏正; 韦金星; 黄延年4.苦参素逆转人肝癌细胞株HepG2/ADM多药耐药的作用 [J], 王炜;黄赞松;周喜汉;覃月秋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丹皮酚对肝癌 HepG2／ADM 细胞株多药耐药性的逆转作用及其机制
丹皮酚对肝癌 HepG2／ADM 细胞株多药耐药性的逆转作用及其机制孙爱华;陈劲;关恒明;李平【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(000)001【摘要】目的：探讨丹皮酚体外给药对肝癌耐药细胞株HepG2／阿霉素（ADM）多药耐药性的逆转作用及其可能分子机制。
方法采用人的肝癌细胞株HepG2，体外ADM浓度递增法诱导建立耐药肝癌细胞HepG2／ADM 耐药模型。
分别用0、5、10、25、50、100μmol／L的丹皮酚培养液培养HepG2／ADM、HepG2细胞48 h，选定25、50μmol／L丹皮酚进行下一步实验。
分别采用ADM（0．01、0．2、0．5、0．75、1．5、3．0μmol／L）和氟尿嘧啶（0、1、2、4、10、20、40μmol／L）单独刺激，及25、50μmol／L丹皮酚联合上述各浓度的氟尿嘧啶及ADM联合刺激2种细胞株。
采用MTT法检测HepG2／ADM、HepG2细胞的增殖水平，流式细胞仪检测HepG2／ADM、HepG2细胞内细胞毒药物含量，蛋白免疫印迹法检测肿瘤细胞P-糖蛋白表达水平。
结果 ADM抑制HepG2／ADM、HepG2细胞株的IC50依次为1．48、124．14μmol／L，耐药指数为83．9；丹皮酚（25、50μmol／L）能够明显增强ADM、氟尿嘧啶对HepG2／ADM细胞株的细胞毒作用，并降低IC50值（P均＜0．01），但对HepG2细胞的细胞毒作用无明显影响；丹皮酚（25、50μmol／L）能够明显增加HepG2／ADM细胞株对ADM的摄取能力（P均＜0．01），但对HepG2细胞株无明显影响；丹皮酚能显著降低HepG2／ADM细胞株P-糖蛋白表达水平（P均＜0．01），但对HepG2细胞株P-糖蛋白水平无明显影响。
结论丹皮酚对HepG2／ADM细胞株多药耐药性具有明显的逆转作用，可能与其抑制HepG2／ADM细胞株P-糖蛋白表达、增加细胞毒药物细胞内摄取有关。
肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立
肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立白瑞霞;王文礼;李丽梅;刘婷;叶纪诚【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2008(008)001【摘要】采用双向电泳分离肝癌细胞株 HepG2 的 G1 期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在 pH3-10,13 cm 的 IPG 胶条上,可分离到 227 个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为 84%.建立了 HepG2 的G1 期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.【总页数】3页(P161-163)【作者】白瑞霞;王文礼;李丽梅;刘婷;叶纪诚【作者单位】内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室,呼和浩特,010059;内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室,呼和浩特,010059;内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室,呼和浩特,010059;内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室,呼和浩特,010059;内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室,呼和浩特,010059【正文语种】中文【中图分类】R349.3【相关文献】1.HaCaT细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立 [J], 朱红;周海涛;刘建军;何春涤;陈洪铎2.小细胞肺癌细胞系SBC-5蛋白质组双向凝胶电泳图谱的建立 [J], 冯燕国;张贺龙;冯英明;康艳霞;王宏玫;胡玲;阮禹松3.肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期细胞蛋白质组表达差异的研究 [J], 白瑞霞;王文礼4.人肝癌细胞株QGY-7701蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立 [J], 袁拥华;李伟;杨晓兰;李龙江;汤为学;黄开顺;余瑜5.人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳技术的建立 [J], 袁拥华;杨晓兰;李伟;李龙江;汤为学;余瑜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的Ο-糖链的比较分析
人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的Ο-糖链的比较分析潘丽英;顾笑;王承健;强珊;黄琳娟;张英;王仲孚【期刊名称】《高等学校化学学报》【年(卷),期】2015(000)007【摘要】HepG2 ( a primary hepatocellular carcinoma cell line ) and L02 ( ones derived from normal liver tissue) cells were chosen as model cell lines for research. The O-glycans of the total proteins extracted from HepG2 and L02 cells were released by Carlson reductive β-elimination. The released O-glycans previously purified by Dowex 50 WX8-400 cation exchange resin and C18 cartridges were identified by electrospray ioniza-tion mass spectrometry( ESI-MS) and MS/MS. For comparision studies, β-cyclodextrin was used as the inter-nal standard for relative quantitative analysis of the O-glycans derived from HepG2 and L02 cells by MS. As results, 10 O-glycans were observed in HepG2 cell line and 9 O-glycans were detected in L02 cell line. More-over, 9 O-glycans were observed in both HepG2 and L02 cells, wherears 1 truncated O-glycan assigned asH1A1(NeuAc-GalNAc, sialyl Tn antigen, ubiquitous in cancer cells), was only found in HepG2 cells. t-Test results show that 5 and 2 O-glycans in HepG2 cells have significant differences ( P<0. 01 and P<0. 05 , recpectively) , when compared to those of L02 cells. Our studies show methodological significance in structural investigation of O-glycans expressed in hepatocellular carcinoma and early biomarker discovery inclinical diag-nose.%以培养的原发性肝细胞癌HepG2细胞和正常肝细胞L02为研究对象,用细胞裂解液提取总蛋白,然后采用Carlson还原性β-消除法释放O-糖链,以阳离子交换柱结合C18柱纯化分离O-糖链,用电喷雾电离质谱( ESI-MS)和串联质谱( MS/MS)对O-糖链进行序列鉴定,以β-环糊精为内标对2种细胞系的O-糖链进行定量比较分析.结果表明,在肝癌细胞系HepG2中检测到10种O-糖链,正常细胞系L02中检测到9种O-糖链,其中9种O-糖链是2种细胞系中共有的,但HepG2中存在癌细胞中特有的缩短的O-糖链N1A1( NeuAc-GalNAc, sialyl Tn 抗原). t检验结果表明, HepG2与L02相比,在检测到的10种O-糖链中有5种的含量具有极显著性差异(P<0.01),2种的含量具有显著性差异(P<0.05).【总页数】7页(P1275-1281)【作者】潘丽英;顾笑;王承健;强珊;黄琳娟;张英;王仲孚【作者单位】西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069;西北大学生命科学学院，西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，西安710069【正文语种】中文【中图分类】O657.6;O629.12【相关文献】1.纳米级Fe3O4磁性粒子与人肝癌细胞HepG-2及人正常肝细胞L02作用的生物学行为的实验研究 [J], 王晶;徐玉清;于常华;崔凤2.基于电喷雾电离质谱的人肝癌细胞HepG2与正常肝细胞L02的N-糖链的定性定量比较 [J], 潘丽英;王承健;袁江北;张英;黄琳娟;王仲孚3.岩藻糖在正常人肝细胞、低转移人肝癌细胞和高转移人肝癌细胞表面的含量变化[J], 廖晖;廖彩仙;王宇;龚祖元;胡育海4.人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的差异蛋白质组学研究 [J], 锁爱莉;姚煜;张王刚5.去甲肾上腺素对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响 [J], 施媛萍;罗光华;郑璐;魏江;于洋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HEPG2不同化疗药物刺激下耐药相关蛋白表达变化
HEPG2不同化疗药物刺激下耐药相关蛋白表达变化周思朗;李鹏;迟志宏;张积仁【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2006(27)2【摘要】目的探讨常用化疗药物连续刺激对肝癌细胞株耐药相关蛋白的影响.方法肝癌HEPG2细胞株经阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)联合化疗刺激.应用流式细胞术分别检测MDR1,MRP及LRP的阳性细胞数及平均荧光强度,以此推算出不同药物连续作用细胞株后以上各耐药蛋白表达的总表达量.结果各化疗药物组以及联合化疗药物组连续刺激细胞株6个周期,表达的MDR1,MRP及LRP 抗体总量变化无明显规律.将各组不同周期表达的抗体总量进行相关性分析,未发现组间相关有统计学意义(P＞0.05).结论不同药物,甚至同样药物在不同时间的诱导HEPG2细胞株耐药完全不同,提示临床进行个体化精确化疗是必要的.【总页数】2页(P186-187)【作者】周思朗;李鹏;迟志宏;张积仁【作者单位】南方医科大学珠江医院肿瘤中心,广州,510282;南方医科大学珠江医院肿瘤中心,广州,510282;南方医科大学珠江医院肿瘤中心,广州,510282;南方医科大学珠江医院肿瘤中心,广州,510282【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.杏仁核点燃大鼠癫痫模型中P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白1的动态表达变化 [J], 李巷;聂荔;张玲玲;康慧聪2.多药耐药相关蛋白在肝癌耐药细胞系HepG2/Oxal中的作用机制研究 [J], 滕凤猛;吴穷;陈昌杰;杨清玲;王惠3.同化疗药物刺激对HEPG2增殖蛋白表达的影响 [J], 周思朗;李鹏;迟志宏;张积仁4.骨肉瘤患者在不同新辅助化疗方案实施前后多药耐药相关蛋白在mRNA及蛋白水平中的表达变化 [J], 李战鹏5.不同浓度常用化疗药物连续刺激对人肺腺癌细胞株增殖耐药产生的影响 [J], 迟志宏;李鹏;刘端祺;张积仁;时冉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HepG2人肝癌细胞株细胞亚群克隆异质性与肝癌干细胞的实验研究的开题报告
HepG2人肝癌细胞株细胞亚群克隆异质性与肝癌干细胞的实验研究的开题报告
1. 研究背景
人肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率不断增加。
尽管已经有许多研究对肝癌的发病机制和治疗方法进行了深入的探究，但是仍然有许多问题需要进一步探讨。
其中，HepG2人肝癌细胞株是广泛应用于肝癌研究的模型细胞株之一，但是其实验研究的异质性问题尚未得到完全解决。
同时，肝癌干细胞被认为是肝癌发生、转移和复发的关键因素，对肝癌干细胞的研究也是热点。
2. 研究目的
本研究的目的是探究HepG2人肝癌细胞株的亚群克隆异质性特征，并对其干细胞特性进行分析。
通过对HepG2人肝癌细胞株的亚群克隆进行鉴定和干细胞特性的分析，可以增加对HepG2人肝癌细胞株的认识，为心脏疾病的早期预防和诊断治疗提供有益的基础研究数据。
3. 研究内容和方法
（1）HepG2人肝癌细胞株的亚群克隆鉴定：利用单细胞克隆技术对HepG2人肝癌细胞株进行亚群克隆鉴定，通过cDNA测序和生物信息学分析，对亚群克隆的特征进行研究。
（2）HepG2人肝癌细胞株的干细胞特性分析：通过流式细胞术和免疫荧光染色技术，对HepG2人肝癌细胞株的CD133、CD44和CD90等干细胞标记物进行检测，并进行相关统计学分析。
4. 研究意义
本研究将填补HepG2人肝癌细胞株亚群克隆和干细胞特性研究方面的空白，有助于深入探究 HepG2人肝癌细胞株细胞的种群异质性和肝癌干细胞的特性，为肝癌研究提供重要的理论依据和实验数据。
同时，通
过揭示肝癌干细胞的特性，有助于提高肝癌治疗的效果，并且可以为肝癌患者提供更好的治疗选择。
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癌细胞对化疗药物产生了多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ），即对一种药物耐药的癌细胞同时 对另一些与之化学结构、作用机制完全不同的药物 产生交叉耐药［１］。因此，ＭＤＲ是当前肿瘤化疗治 疗中亟待解决的问题。本研究使用蛋白质组学中的 双向电泳技术对人肝癌多药耐药细胞系ＨｅｐＧ２／ ＡＤＭ和其亲本细胞系ＨｅｐＧ２的差异表达蛋白进 行了初步分析。
以手术为主的个体化综合治疗已成为目前肝癌 治疗的规范化治疗方案，化疗是目前治疗肝癌的主 要辅助手段之一。尽管新的抗癌药物及化疗方案不
断推出，但治疗效果仍无显著提高。其主要原因是
作者单位：４３０（）３０武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医 院肝脏外科中心 通讯作者：张志伟
堕璺处叠！坐堡生筮２１鲞筮ｉ塑里！坠婴委基！！』坚垒；塑！！ｙ吐２１ １№：兰
Ｂｉｏｓｃｉ—
ＳＤ孓ＰＡＧＥ。电泳时间为１６
６．银染：按蛋白质银染试剂盒操作手册进行。 ７．图像扫描和分析：染色后的凝胶经Ｉｍａｇｅ Ｓｃａｎｎｅｒ扫描仪进行扫描后获得蛋白质点图谱，所 得图谱用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ
２Ｄ
１．细胞株的复苏培养：复苏成功后。将ＨｅｐＧ２ 细胞放入含１０％新生牛血清的ＤＭＥＭ培养液中培 养，ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细胞在含１００ ｔｔｇ／Ｌ阿霉素和 １０％新生牛血清的ＤＭＥＭ培养液中维持培养。培 养条件为３７℃，５％ＣＱ，饱和湿度。 ２．Ｍ１ｖｒ法测定ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和ＨｅｐＧ２细胞 对不同化疗药物的敏感性：将ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和 ＨｅｐＧ２细胞数调至８×１０４个／ｍｌ，取９６孔板，每孔 加入２００“ｌ细胞悬液，放入培养箱培养２４ ｈ后，弃 上清，分别加人含不同药物浓度的ＤＭＥＭ培养液 （含１０％新生牛血清），细胞培养箱内放置４８ ｈ。每 孔加入浓度５ ｍｇ／ｍｌ的ＭＴＴ溶液２０ ｔＡ，３７＂Ｃ放置
Ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａＩ ＧｅＩ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｂｏｒｅｓｉｓ Ｐｒｏｎｌｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ Ｒｅｓｔｓｔａｎｔ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＣｅｌＩ Ｌｉｎｅ ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ ＨｅｐＧ２ ＴｊＡＮ Ｌａｎｇ．
ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ－ｚｏｅｉ，ＣＨＥＮ Ｘｉａｏ－－ｐｉｎｇ．Ｈｅｐａｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｃｅｎｔｅｒ，ＴｏｎｔｇＪｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎ由ｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｋ妇行４３００３０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧ ｚｈｉ—ｍｅｉ
・１７８・
堕壑丛叠垫塑堡蔓２１鲞筮！塑坠坠旦查鉴！！』坠堡；垡塑！ｙ！！：！！！型垒！
・实验研究・ 人肝癌多药耐药细胞系Ｈ ｅｐＧ２／ＡＤＭ和其亲本细 胞系Ｈ ｅｐＧ２蛋白质双向电泳图谱的差异分析
田浪张志伟 陈孝平
【摘要】目的建立人肝癌多药耐药细胞系ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和其亲本细胞系ＨｅｐＧ２蛋白质双向 电泳图谱，分析两者间蛋白质表达的差异和特点。方法采用ＭＴＴ法检测ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和ＨｅｐＧ２ 细胞对不同化疗药物的敏感性，利用双向电泳技术分离ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和ＨｅｐＧ２细胞的总蛋白质，凝 胶银染后，用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ
２Ｄ
Ｐｌａｔｉｎｕｍ软件分析两者之间的差异蛋白。结果
相对于正常ＨｅｐＧ２
细胞，ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细胞表现出明显的多药耐药；ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和ＨｅｐＧ２细胞的蛋白质点在双向电 泳图谱上的分布模式基本一致；识别了４５个在两株细胞之间差异表达的蛋白质点，ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细 胞有２５个蛋白点表达上调，９个蛋白点表达下调，７个蛋白点在ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细胞特异表达，４个蛋
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ｕｓｅｄ
ｄｒｕｇｓ．Ｔｈｅ
ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｔｈａｎ ＨｅｐＧ２．Ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｆａｍｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔＯｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔＷＯ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ．Ｆｏｒｔｙ－ｆｉｖｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｔＷｏ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｉ－
白点在ＨｅｐＧ２细胞特异表达。结论本研究初步建立了分辨率较高、重复性较好的ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ
和ＨｅｐＧ２细胞总蛋白质双向电泳图谱，两者之间存在一些差异表达蛋白，为进一步使用蛋白质组学 方法研究肝癌多药耐药奠定了良好基础。 【关键词】癌，肝细胞；蛋白质组；电泳，凝胶，双向
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｈｅｐａｔｏｃｅｉｌｕｌａｒ
Ｖ，１ Ｖ，１ຫໍສະໝຸດ ｈ；５００ｈ；１ ５００ Ｖ，０．５ ｈ；８ ０００ Ｖ，１
ｈ；８ ０００ Ｖ，
４８ ０００ Ｖｈ。
５．ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）：将 等电聚焦后的ＩＰＧ胶条放入１０ ｍＩ平衡液１（５０ ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｔｒｉｓ－Ｂａｓｅ，６
ｍｏｌ／Ｌ Ｕｒｅａ，３０ ０Ａ甘油，２％ ｏＡ甘
ｈａｎ Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司。四氮唑化物（ＭＴＴ）、二甲基
４．等电聚焦（ＩＥＦ）电泳：取０．３ ｍｇ总蛋白质与 水化液（８ ｍｏｌ／Ｌ Ｕｒｅａ，２％ＣＨＡＰＳ，０．００２％溴酚 兰和０．５％ＩＰＧ Ｂｕｆｆｅｒ）混合至３５０ ｐＬ，将其加入 ＩＰＧ胶条中，胶面向下放人槽中，矿物油覆盖胶条后 按如下条件等电聚焦：３０ Ｖ，１２ ｈ；２００
［Ａｂｓｔｒａｃｔｌ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇｅｌ ｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ ＨｅｐＧ２． ａｎｄ ｔＯ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｅｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＭＴＴ ａｓ—
。１７９。
材料和方法 一、材料： １．细胞：人肝癌细胞ＨｅｐＧ２由本实验室冻存， 人肝癌多药耐药细胞系ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ由本实验室 使用阿霉素诱导成功后冻存［２］。 ２．试剂仪器：ＤＭＥＭ（高糖）和新生牛血清为 Ｇｉｂｃｏ公司产品，阿霉素由意大利法玛西亚公司生 产。尿素、硫脲、ＣＨＡＰＳ、Ｔｒｉｓ、ＤＴＴ、Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ、 甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）、 ＩＰＧ缓冲液、１８ｃｍ ｐＨ３～１０ ＩＰＧ胶条购自Ａｍｅｒｓ—
３．细胞收集和细胞总蛋白质的提取：分别取处 于对数生长期的两种细胞，胰酶消化后离心收集。 用冷ＰＢＳ液洗涤３次，山梨醇洗涤４次后加入裂解 液（７ ｍｏｌ／Ｌ Ｕｒｅａ，２ ｍｏｌ／Ｌ硫脲，４％ＣＨＡＰＳ，４０ ｍｒｎｏｌ／Ｌ
Ｔｒｉｓ－Ｂａｓｅ，４０ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＤＴＴ和２％Ｐｈａｒｍ－
ｓ，４＂Ｃ，
ａｌｙｔｅ），置于冰浴中超声裂解６次，每次２～３
ｈ，弃上清，加入ＤＭＳＯ
１５０ ｔＡ。３０
ｍｉｎ后在酶标
仪上测定４９０ ｎｍ波长处每孔的吸收度，计算不同 药物对两种细胞的半数抑制浓度（ＩＣ５０）和耐药指数
（ＲＩ）。
１．ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和ＨｅｐＧ２细胞对不同化疗药 物的敏感性：相对于ＨｅｐＧ２细胞，ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细 胞对多种不同的化疗药物显示出明显的耐药性，尤 其是对阿霉素。统计分析表明，ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和 ＨｅｐＧ２细胞对阿霉素（ＡＤＭ）、长春新碱（ＶＣＲ）、丝 裂霉素（ＭＭＣ）和５一氟尿嘧啶（５一ＦＵ）的耐受性具有 显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），而对甲氨蝶呤（ＭＴＸ）的耐 受性没有显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。 ２．ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ和ＨｅｐＧ２细胞总蛋白双向电 泳图谱的建立：建立了分辨率较高、重复性较好的
４
Ｐｌａｔｉｎｕｍ软件进行分
析。图像分析过程包括蛋白质点的检测、获取蛋白 质斑点位置坐标、背景消减、量的标准化、等电点和 分子量的校正。在每种细胞的蛋白质电泳图谱中选 择蛋白质点清晰、背景好的图像作为参照胶，与组内 其它两次实验的图像进行匹配。然后分别将同种细 胞３次电泳所得的蛋白质点图谱在软件中创建平均 胶，以Ｈ印Ｇ２的平均胶为参照胶与ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ 的平均胶进行匹配，寻找两种细胞间差异表达的蛋 白质点。 ８．统计学分析：计量资料采用ｔ检验，以Ｐ＜ ０．０５表示有显著性差异。 结 果
２Ｄ
本研究使用蛋白质组学中的双向凝胶电泳技术 对我们实验室建立的肝癌多药耐药细胞系ＨｅｐＧ２／ ＡＤＭ和其亲本细胞系ＨｅｐＧ２的总蛋白进行了双 向电泳，并使用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ
油，２％ＳＤＳ，０．００２％溴酚兰和３％碘乙酰胺）中各平 ｒａｉｎ。再将平衡后的ＩＰＧ胶条放入 ＳＩＸ垂直电泳槽中行
ｈ。
ＳＤ孓ＰＡＧＥ胶上，用含有痕量溴酚兰的０．５％琼脂糖 凝胶封口后在Ｅｔｔａｎ
ＤＡＬＴ
剂盒２Ｄ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ为Ａｍｅｒｓｈａｎ ｅｎｃｅｓ公司产品。 二、方法
ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ：２５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｐｏｔｓ ｗｅｒｅ