基因工程复习培训课件
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专题1基因工程-专题复习课件
为——ACTAG和GATC——。少数限制酶却可识别不止一种 碱ers） 有些来源不同的限制 酶却识别和切割相同的序列，这类限制酶称为同 裂酶。同裂酶产生同样切割，形成同样的末端， 酶切后所得到的DNA片段经连接后所形成重组序列， 仍可能被原来的限制酶所切割。同裂酶之间的性 质有所不同（如对离子强度、反应温度以及对甲 基化碱基的敏感性等方面可能有所差别）。
正确的是 A．染色体和质粒的化学本质都是DNA
( C)
B．染色体和质粒都只存在于原核细胞中
C．染色体和质粒都与生物的遗传有关
D．染色体和质粒都可作为基因工程的常用载体
解析：染色体由DNA和蛋白质构成；原核 生物没有染色体；质粒可以做为基因工程的
载体，而染色体不行。
9、限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特 定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI， HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特 定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端 可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？
黏性末端
G
A ATTC
CT TAA
G
黏性末端
什么叫平末端？
生物A基因片段
生物B基因片段
……GAATTC…… ……GAATTC…………GAATTC…… ……CTTAAG…… ……CTTAAG…………CTTAAG……
同一种 EcoRⅠ 酶切
……G AATTC…… ……G AATT…C………G AATTC… ……CTTAA G…… ……CTTAA …G………CTTAA G…
④注意与细胞膜上载体的区别，两者的化学本质和作用都不 相同。
⑤质粒能自我复制，既可在自身细胞、受体细胞内，也可在 体外。
正确的是 A．染色体和质粒的化学本质都是DNA
( C)
B．染色体和质粒都只存在于原核细胞中
C．染色体和质粒都与生物的遗传有关
D．染色体和质粒都可作为基因工程的常用载体
解析：染色体由DNA和蛋白质构成；原核 生物没有染色体；质粒可以做为基因工程的
载体，而染色体不行。
9、限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特 定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI， HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特 定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端 可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？
黏性末端
G
A ATTC
CT TAA
G
黏性末端
什么叫平末端？
生物A基因片段
生物B基因片段
……GAATTC…… ……GAATTC…………GAATTC…… ……CTTAAG…… ……CTTAAG…………CTTAAG……
同一种 EcoRⅠ 酶切
……G AATTC…… ……G AATT…C………G AATTC… ……CTTAA G…… ……CTTAA …G………CTTAA G…
④注意与细胞膜上载体的区别，两者的化学本质和作用都不 相同。
⑤质粒能自我复制，既可在自身细胞、受体细胞内，也可在 体外。
【公开课课件】选修3专题一 基因工程复习课(50张PPT)
一般目的基因应插在
启_动__子__与__终__止__子__之__间__
终止子
一个完整的重组质粒
复制原点
（2016国卷III节选）
(2)若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含
有目的基因的重组子，如图(c)所示。这三种重组子中，不能在 宿主细胞中表达目的基因产物的有______甲__、__丙_________， 不能表达的原因是__目__的__基__因__没__有_插__入__在__启__动__子__与__终__止__子__之__间_
二、 基因工程的操作 3、表达载体的构建（核心）
载体（质粒）
含目的基因的DNA
重组质粒
（1）为两者得到相同的末端，则应__用__同__种__限__制__酶_________ （2）为避免两者反向连接，则应_用__相__同__两__种__限__制__酶________
二、 基因工程的操作 4、将目的基因导入受体细胞 （关键看受体细胞的类型）
思考：标记基因的作用？？（筛选） 鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细 胞筛选出来。（并不是用来检测目的基因的表达）
图中的质粒应用 Bcl I /HinDIII 酶 切割。 获得重组质粒导入细胞后，在筛选 培养基中应添加___四__环__素_____
启动子
目的基因
表达载体
标记基因
方法
a.植物细胞： 农杆菌转化法 、基因枪法、
_花__粉__管__通__道__法__
b.动物细胞： 显微注射
技术（常用受精卵）
c.微生物：___C_a_+_转__化__法_______
二 基因工程的操作
4、目的基因的检查与鉴定
a.利用 DNA分子杂交 技术检测__目__的__基__因__是__否__导__入___
基因工程一轮复习课件
基因工程一轮复习 优秀课件
目录
• 基因工程概述 • 基因工程的基本技术 • 基因工程实验操作流程 • 基因工程伦理与法规 • 基因工程前沿进展与展望 • 复习题与思考题
01
基因工程概述
基因工程的定义
01
基因工程是指通过人工操作，将 外源基因导入到受体细胞中，实 现基因重组和表达的技术。
02
基因工程的核心技术包括基因克 隆、载体构建、基因表达和基因 编辑等。
基因编辑技术包括ZFNs、TALENs和 CRISPR-Cas9等手段，具有高效、精 准和安全等优点。
03
基因工程实验操作流 程
实验准备
实验材料
准备所需的实验材料，如DNA 片段、载体、酶等。
实验设备
检查所需的实验设备，如PCR 仪、电泳仪、离心机等，确保 其正常运行。
实验试剂
配制所需的实验试剂，如缓冲 液、洗涤液等，并确保其质量 和浓度符合要求。
基因工程的发展历程
1970年代
基因工程的萌芽阶段， 科学家开始探索基因重
组技术。
1980年代
基因工程的初步发展阶 段，实现了外源基因在
大肠杆菌中的表达。
1990年代
基因工程的快速发展阶 段，实现了哺乳动物细 胞和植物细胞的基因转
移和表达。
21世纪
基因工程的广泛应用阶 段，涉及医药、农业、
工业和环保等领域。
实验设计
根据实验目的和要求，设计合 理的实验方案和操作步骤。
基因克隆实验
基因片段的获取
通过PCR、酶切等方法获取目的基因片段。
克隆筛选
通过菌落PCR、酶切等方法筛选阳性克隆。
载体构建
将目的基因片段连接到载体上，形成重组 DNA分子。
目录
• 基因工程概述 • 基因工程的基本技术 • 基因工程实验操作流程 • 基因工程伦理与法规 • 基因工程前沿进展与展望 • 复习题与思考题
01
基因工程概述
基因工程的定义
01
基因工程是指通过人工操作，将 外源基因导入到受体细胞中，实 现基因重组和表达的技术。
02
基因工程的核心技术包括基因克 隆、载体构建、基因表达和基因 编辑等。
基因编辑技术包括ZFNs、TALENs和 CRISPR-Cas9等手段，具有高效、精 准和安全等优点。
03
基因工程实验操作流 程
实验准备
实验材料
准备所需的实验材料，如DNA 片段、载体、酶等。
实验设备
检查所需的实验设备，如PCR 仪、电泳仪、离心机等，确保 其正常运行。
实验试剂
配制所需的实验试剂，如缓冲 液、洗涤液等，并确保其质量 和浓度符合要求。
基因工程的发展历程
1970年代
基因工程的萌芽阶段， 科学家开始探索基因重
组技术。
1980年代
基因工程的初步发展阶 段，实现了外源基因在
大肠杆菌中的表达。
1990年代
基因工程的快速发展阶 段，实现了哺乳动物细 胞和植物细胞的基因转
移和表达。
21世纪
基因工程的广泛应用阶 段，涉及医药、农业、
工业和环保等领域。
实验设计
根据实验目的和要求，设计合 理的实验方案和操作步骤。
基因克隆实验
基因片段的获取
通过PCR、酶切等方法获取目的基因片段。
克隆筛选
通过菌落PCR、酶切等方法筛选阳性克隆。
载体构建
将目的基因片段连接到载体上，形成重组 DNA分子。
基因工程复习详细版.ppt
.精品课件.
3
基因工程
——依据预先设计的蓝图，用人工方法将某种生物（供体）的 基因，接合到另一种生物（受体）的基因组DNA中并使其表达， 使后者获得新的遗传性状，产生出人类所需要的产物(产物通常 是蛋白质)，或创造出新的生物类型的现代生物技术。 核心技术为DNA重组技术。
研究水平：分子水平 实质（可遗传变异类型）：基因重组
某 限 制 酶 的 质粒 识 别 序 列 为
AATT
限制酶
碱基互 补配对
同种限制酶
目的基因
DNA连接酶
重组质粒
质粒自身环化
.精品课件.
16
试一试
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别位点，Apr表示抗青
霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。
3550bp
Tcr
Apr
Tcr
Apr
850bp
段长度为___4__7_5__0___对碱基。
.精品课件.
18
限制酶——怎样选择使用
①使目的基因与质粒形成相同的粘性末端，便于二者重组。尽 量避免目的基因、质粒的自身环化；
BamHⅠ
BamHⅠ
目的基因
质粒
HindⅢ
HindⅢ
.精品课件.
19
限制酶——怎样选择使用
①使目的基因与质粒形成相同的粘性末端，便于二者 重组。尽量避免目的基因、质粒的自身环化。 用形成不同粘性末端的两种限制酶分别切割质粒、分 离目的基因，便于二者定向连接。 ②不能破坏目的基因和质粒中的所有标记基因。 ③便于筛选含目的基因的受体细胞。
能生长
不能生长 21
试一试
酶Ⅰ、酶Ⅱ、酶Ⅲ、酶Ⅳ4种限制性核酸内切酶切割的
碱 基 序 列 和 酶 切 位 点 分 别 为 C ↓ CGG 、 G ↓ GATCC 、
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8.Ti质粒上可转移的DNA称为________。
9.启动子上有___________酶的结合位点。
抗虫转基因植物 抗病转基因植物 抗逆转基因植物 改良植物品质
转基因植物
提高动物生长速度
改善畜产品质量 生产药物
转基因动物
做器官移植供体
基因工程药物
基因治疗
概念 原理 应用
操作程 序
蛋白质工 程
应用
基因工 程
特别注意
1.在获取目的基因和切割载体时通常用同种 限制酶,以获得相同的黏性末端.但如果两种 不同限制酶切割后形成相同的黏性末端时, 在DNA连接酶的作用下目的基因和载体也 可以连接起来。
2.为了防止目的基因自身连接或载体自身的 连接,可用不同的限制酶分别处理目的基因 和载体。
DNA连接酶
• 作用部位：磷酸二酯键（切哪缝哪） E.coliDNA连接酶只能连粘性末端 T4 DNA连接酶既能连黏性末端也能连平末端 比较： 限制酶 ECOR1切出的是黏性末端 Sma1切出的是平末端
使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入 。 (4)如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成 功，可以采用________________________方法。
• 2.如图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪 的培育过程示意图,据图回答问题
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中作为_______ 基因.
动植物病毒
名称 DNA 连接酶
限制酶 DNA 聚合酶 RNA聚合酶
解旋酶
作用
连接两个DNA片段，是通过磷酸 二酯键连接双链DNA的缺口
参与的生理过程
基因工程
识别某种特定的脱氧核苷酸序 列，并在特定的切点切割
在脱氧核苷酸链上添加单个脱 氧核苷酸
基因工程 DNA复制、PCR技术
在核糖核苷酸链上添加 单个核糖核苷酸
• (1)基因工程的核心步骤是________(填字母)。此过 程所需的工具酶是___________________。 (2)下
图二是运载体和反转录得到的胰岛素基因的片段， 已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓ GATCC—， 限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓ GATC—。 GeneⅠ和GeneⅡ为质粒上的标记基因，根据图分析 ，应用限制酶________切割质粒，用限制酶 ________切割目的基因。构建的重组质粒中，除含 有外源基因、标记基因外，还必须含有________和 ________。 (3)图一B过程中，常用________处理
《基因工程》复习
考情分析
命题重点：基因工程的工具与操作程序 基因工程的原理和应用
考查频度：高考近几年的高频考点,5年19考 如2016年全国1卷和3卷
考查方向：以最新基因工程成果为载体，通过 与其他工程技术综合考查学生解决实际问题 的能力。培养学科核心素养。
学情分析
• 同学们普遍认为较难掌握
• 1.对基因工程的原理和目的不够清晰 • 2.该记的基础知识记不牢，对基因工程操作
表达载体需由哪几部分组成 • 复制原点（复制起点） • 启动子（启动子和
终止子之间）
• 终止子（终止转录） • 标记基因（鉴别受体细胞 简述目的基因与运
中是否含有目的基因，如抗生素 载体结合的过程
的抗性基因。构建时不 能破坏）
第三步：将目的基因导入受体细胞
(2)过程(3)将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用 最多也最有效的方法是______________ ．
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因 一起构建到载体上,GFP基因可以作为基因表达载体 上的标记基因,其作用 是 ________________________________．
2.外源基因能在受体细胞内表达的原因： 所有生物共用一套遗传密码
复习的主要内容
• 1、基因工程的工具 • 2、基因工程的基本程序 • 3、解题方法
基因操作的工具
基因的剪刀（分子手术刀） ——限制性核酸内切酶（限制酶）
基因的针线（分子缝合针） ——DNA连接酶
基因的运输工具（分子运输车） ——运载体
农杆菌转化法、显微注射法、感受态细胞法 （Ca2+处理）
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译
归纳：
• 核心步骤？ • 需要用到限制酶的步骤？ • 需要用到DNA连接酶的步骤？ • 不涉及碱基互补配对的步骤？
解题思路：
一.明确目的，要获得什么 ？是基因 产品、转基因植物还是转基因动物 ---把握整体方向。
•
严格把控质量关，让生产更加有保障 。2021年2月上 午12时 3分21.2.2400:03Febr uar y 24, 2021
•
重规矩，严要求，少危险。2021年2月 24日星 期三12时3分36秒00:03:3624 February 2021
•
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。上 午12时3分36秒 上午12时3分00:03:3621.2.24
运载体
• 载体的作用 • 将 目的基因 转移到受体细胞中去 • 作为运载体必备的条件
• 1.有一 个至多个酶切位点(供外源基因插入) • 2.在细胞中能稳定保存并自我复制（让目的基因能
一起复制） • 3.具有标记基因(供重组DNA的鉴定和选择) • ---最常用的载体质粒（大肠杆菌Ti质粒含T-DNA） λ噬菌体的衍生物
------转化的过程
目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳 定和表达的过程
将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法、基因枪法，花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞法（ Ca2+处理）
步骤四 目的基因的检测和鉴定
分子 水平
检测对象 目的基因是否导入 染色体DNA上
转录
使碱基间氢键断裂形成单脱氧核
苷酸链 注意：使DNA解成两条长链的方法 除用解旋酶以外，在适当的高温 （如94℃）可使DNA解旋。
DNA复制
逆转录酶
以RNA、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定
(4)在培养重组细胞时,培养到______________阶段 可进行胚胎移植。
(5)以上培育过程中应用到的生物技术 有 _____________________________________ ____________等．
谢谢大家！
•
踏实，奋斗，坚持，专业，努力成就 未来。21.2.2421.2.24Wednes day, February 24, 2021
谢谢大家！
II II
I
基本工 具
来源
限制性核酸内切酶
特点 识别核苷酸序列
结果
DNA连接酶
分类及区别 作用
常用载体：质粒：特点
运载体合成 利用PCR技术扩增
II 基因表达载体的构建目的 组成及作用基因组 cDNA原理 条件 过程
目的基因导入受体细胞
主要：农杆菌转 植物细胞 化法 动物细胞 显微注射技术
__________。
5.标记基因的作用 ______________。
6.作为运载体所必备的条件 _______________________________。
7.PCR技术的原理___________,需要的条件 __________________________________ _____________。
步骤一 获得目的基因
1、人工合成 (基因比较小，序列已知)2、从基因中获取 基因组基因
部分基因－－如：cDNA3、利用PCR技术扩增 (已知一段目的基因核苷酸序列) 原理:DNA分子复制 条件：模板、 引物 热稳定DNA聚合酶 四种脱氧核苷酸 能量
第二步： 基因表达载体的构建
•
每天都是美好的一天，新的一天开启 。21.2.2421.2.2400:0300:03:3600:03:36Feb- 21
•
务实，奋斗，成就，成功。2021年2月 24日星 期三12时3分36秒 Wednesday, February 24, 2021
•
抓住每一次机会不能轻易流失，这样 我们才 能真正 强大。21.2.242021年2月24日 星期三 12时3分36秒21.2.24
微生物细胞 Ca2+处理
目的基因的检测与鉴定
分子水平的检测 个体生物水平的鉴定
基因工程必须掌握的问题
• 一、什么是基因工程？ • 二、基因工程的意义？ • 三、基因工程为什么能进行？ • 四、基因工程的操作工具和具体步
骤又哪些？
什么是基因工程？
• 基因工程，又叫DNA重组技术或基因拼接 技术。通俗的说，就是按照人们的意愿， 把一种生物的某种基因提取出来，加以修 饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 定向地改造生物的遗传特性。
•
弄虚作假要不得，踏实肯干第一名。00:03:3600:03:3600:032/24/2021 12:03:36 AM
•
安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。21.2.2400:03:3600:03Feb-2124- Feb-21
•
重于泰山，轻于鸿毛。00:03:3600:03:3600:03Wednesday, February 24, 2021
---体外进行 ---DNA分子操作水平 联系---其他学过的技术手段
基因工程的意义？
• 目的：通过改造生物的遗 传性状而获得人类所需的 生物新品种或基因产品
基因工程为什么能进行？
• 1.不同生物的基因能拼接的原理： DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸 DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
二.细化过程
1.目的基因是什么基因（具体名称）怎样获 取？需要将它放到哪里去表达？
2. 怎样能让目的基因能成功进入受体细胞并 表达（完成转录翻译）
9.启动子上有___________酶的结合位点。
抗虫转基因植物 抗病转基因植物 抗逆转基因植物 改良植物品质
转基因植物
提高动物生长速度
改善畜产品质量 生产药物
转基因动物
做器官移植供体
基因工程药物
基因治疗
概念 原理 应用
操作程 序
蛋白质工 程
应用
基因工 程
特别注意
1.在获取目的基因和切割载体时通常用同种 限制酶,以获得相同的黏性末端.但如果两种 不同限制酶切割后形成相同的黏性末端时, 在DNA连接酶的作用下目的基因和载体也 可以连接起来。
2.为了防止目的基因自身连接或载体自身的 连接,可用不同的限制酶分别处理目的基因 和载体。
DNA连接酶
• 作用部位：磷酸二酯键（切哪缝哪） E.coliDNA连接酶只能连粘性末端 T4 DNA连接酶既能连黏性末端也能连平末端 比较： 限制酶 ECOR1切出的是黏性末端 Sma1切出的是平末端
使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入 。 (4)如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成 功，可以采用________________________方法。
• 2.如图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪 的培育过程示意图,据图回答问题
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中作为_______ 基因.
动植物病毒
名称 DNA 连接酶
限制酶 DNA 聚合酶 RNA聚合酶
解旋酶
作用
连接两个DNA片段，是通过磷酸 二酯键连接双链DNA的缺口
参与的生理过程
基因工程
识别某种特定的脱氧核苷酸序 列，并在特定的切点切割
在脱氧核苷酸链上添加单个脱 氧核苷酸
基因工程 DNA复制、PCR技术
在核糖核苷酸链上添加 单个核糖核苷酸
• (1)基因工程的核心步骤是________(填字母)。此过 程所需的工具酶是___________________。 (2)下
图二是运载体和反转录得到的胰岛素基因的片段， 已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓ GATCC—， 限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓ GATC—。 GeneⅠ和GeneⅡ为质粒上的标记基因，根据图分析 ，应用限制酶________切割质粒，用限制酶 ________切割目的基因。构建的重组质粒中，除含 有外源基因、标记基因外，还必须含有________和 ________。 (3)图一B过程中，常用________处理
《基因工程》复习
考情分析
命题重点：基因工程的工具与操作程序 基因工程的原理和应用
考查频度：高考近几年的高频考点,5年19考 如2016年全国1卷和3卷
考查方向：以最新基因工程成果为载体，通过 与其他工程技术综合考查学生解决实际问题 的能力。培养学科核心素养。
学情分析
• 同学们普遍认为较难掌握
• 1.对基因工程的原理和目的不够清晰 • 2.该记的基础知识记不牢，对基因工程操作
表达载体需由哪几部分组成 • 复制原点（复制起点） • 启动子（启动子和
终止子之间）
• 终止子（终止转录） • 标记基因（鉴别受体细胞 简述目的基因与运
中是否含有目的基因，如抗生素 载体结合的过程
的抗性基因。构建时不 能破坏）
第三步：将目的基因导入受体细胞
(2)过程(3)将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用 最多也最有效的方法是______________ ．
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因 一起构建到载体上,GFP基因可以作为基因表达载体 上的标记基因,其作用 是 ________________________________．
2.外源基因能在受体细胞内表达的原因： 所有生物共用一套遗传密码
复习的主要内容
• 1、基因工程的工具 • 2、基因工程的基本程序 • 3、解题方法
基因操作的工具
基因的剪刀（分子手术刀） ——限制性核酸内切酶（限制酶）
基因的针线（分子缝合针） ——DNA连接酶
基因的运输工具（分子运输车） ——运载体
农杆菌转化法、显微注射法、感受态细胞法 （Ca2+处理）
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译
归纳：
• 核心步骤？ • 需要用到限制酶的步骤？ • 需要用到DNA连接酶的步骤？ • 不涉及碱基互补配对的步骤？
解题思路：
一.明确目的，要获得什么 ？是基因 产品、转基因植物还是转基因动物 ---把握整体方向。
•
严格把控质量关，让生产更加有保障 。2021年2月上 午12时 3分21.2.2400:03Febr uar y 24, 2021
•
重规矩，严要求，少危险。2021年2月 24日星 期三12时3分36秒00:03:3624 February 2021
•
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。上 午12时3分36秒 上午12时3分00:03:3621.2.24
运载体
• 载体的作用 • 将 目的基因 转移到受体细胞中去 • 作为运载体必备的条件
• 1.有一 个至多个酶切位点(供外源基因插入) • 2.在细胞中能稳定保存并自我复制（让目的基因能
一起复制） • 3.具有标记基因(供重组DNA的鉴定和选择) • ---最常用的载体质粒（大肠杆菌Ti质粒含T-DNA） λ噬菌体的衍生物
------转化的过程
目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳 定和表达的过程
将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法、基因枪法，花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞法（ Ca2+处理）
步骤四 目的基因的检测和鉴定
分子 水平
检测对象 目的基因是否导入 染色体DNA上
转录
使碱基间氢键断裂形成单脱氧核
苷酸链 注意：使DNA解成两条长链的方法 除用解旋酶以外，在适当的高温 （如94℃）可使DNA解旋。
DNA复制
逆转录酶
以RNA、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定
(4)在培养重组细胞时,培养到______________阶段 可进行胚胎移植。
(5)以上培育过程中应用到的生物技术 有 _____________________________________ ____________等．
谢谢大家！
•
踏实，奋斗，坚持，专业，努力成就 未来。21.2.2421.2.24Wednes day, February 24, 2021
谢谢大家！
II II
I
基本工 具
来源
限制性核酸内切酶
特点 识别核苷酸序列
结果
DNA连接酶
分类及区别 作用
常用载体：质粒：特点
运载体合成 利用PCR技术扩增
II 基因表达载体的构建目的 组成及作用基因组 cDNA原理 条件 过程
目的基因导入受体细胞
主要：农杆菌转 植物细胞 化法 动物细胞 显微注射技术
__________。
5.标记基因的作用 ______________。
6.作为运载体所必备的条件 _______________________________。
7.PCR技术的原理___________,需要的条件 __________________________________ _____________。
步骤一 获得目的基因
1、人工合成 (基因比较小，序列已知)2、从基因中获取 基因组基因
部分基因－－如：cDNA3、利用PCR技术扩增 (已知一段目的基因核苷酸序列) 原理:DNA分子复制 条件：模板、 引物 热稳定DNA聚合酶 四种脱氧核苷酸 能量
第二步： 基因表达载体的构建
•
每天都是美好的一天，新的一天开启 。21.2.2421.2.2400:0300:03:3600:03:36Feb- 21
•
务实，奋斗，成就，成功。2021年2月 24日星 期三12时3分36秒 Wednesday, February 24, 2021
•
抓住每一次机会不能轻易流失，这样 我们才 能真正 强大。21.2.242021年2月24日 星期三 12时3分36秒21.2.24
微生物细胞 Ca2+处理
目的基因的检测与鉴定
分子水平的检测 个体生物水平的鉴定
基因工程必须掌握的问题
• 一、什么是基因工程？ • 二、基因工程的意义？ • 三、基因工程为什么能进行？ • 四、基因工程的操作工具和具体步
骤又哪些？
什么是基因工程？
• 基因工程，又叫DNA重组技术或基因拼接 技术。通俗的说，就是按照人们的意愿， 把一种生物的某种基因提取出来，加以修 饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 定向地改造生物的遗传特性。
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弄虚作假要不得，踏实肯干第一名。00:03:3600:03:3600:032/24/2021 12:03:36 AM
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安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。21.2.2400:03:3600:03Feb-2124- Feb-21
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重于泰山，轻于鸿毛。00:03:3600:03:3600:03Wednesday, February 24, 2021
---体外进行 ---DNA分子操作水平 联系---其他学过的技术手段
基因工程的意义？
• 目的：通过改造生物的遗 传性状而获得人类所需的 生物新品种或基因产品
基因工程为什么能进行？
• 1.不同生物的基因能拼接的原理： DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸 DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
二.细化过程
1.目的基因是什么基因（具体名称）怎样获 取？需要将它放到哪里去表达？
2. 怎样能让目的基因能成功进入受体细胞并 表达（完成转录翻译）