一种快速提取盐桦叶片总RNA的方法建立
一种通用植物总RNA提取法[发明专利]
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专利名称：一种通用植物总RNA提取法
专利类型：发明专利
发明人：苏晓华,王大海,张冰玉,黄秦军,张香华申请号：CN201210103814.9
申请日：20120411
公开号：CN102628039A
公开日：
20120808
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种通用的植物总RNA提取的方法。
RNA样品中不含有破坏RNA和抑制逆转录和PCR反应的因子。
该方法广泛的适用于各类植物总RNA的提取、纯化及制备之用。
而且可以对不同来源、不同生长期、不同处理、不同组织样本的RNA进行分离、纯化。
尤其是普通方法难以提取的富含多糖、多酚的植物的总RNA的理想提取方法。
申请人：中国林业科学研究院林业研究所,苏晓华,王大海,张冰玉,黄秦军,张香华
地址：100091 北京市海淀区青龙桥东小府1号院
国籍：CN
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一种快速高质量植物总RNA提取方法介绍
一种快速高质量植物总RNA提取方法介绍
刘文宝
【期刊名称】《山东蔬菜》
【年(卷),期】2007(000)002
【摘要】植物总RNA的提取方法很多，但是多数步骤烦琐，耗时较长，而且最后RNA的提取质量不高。
采用Trizol法虽然所提RNA的质量较高，但是价格昂贵。
本实验室在长期实践中摸索出一套快速高质量的植物总RNA的提取方法，现介绍如下：
【总页数】1页(P48)
【作者】刘文宝
【作者单位】山东省农业科学院科技开发总公司,济南,250100
【正文语种】中文
【中图分类】S6
【相关文献】
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植物总rna提取试剂
植物总rna提取试剂植物总RNA提取试剂是一种用于从植物组织中提取总RNA的试剂盒。
总RNA是植物细胞中的一个重要组成部分，可以用于基因表达研究、转录组学和其他分子生物学研究。
本文将介绍植物总RNA提取试剂的原理、操作流程、优缺点以及注意事项。
一、植物总RNA提取试剂的原理植物总RNA提取试剂通过破碎细胞壁和细胞膜，溶解蛋白质，并在碱性条件下使DNA和RNA不同程度地溶解从而实现总RNA的提取。
它通常包括下述主要步骤：1.细胞破碎：将植物样品研磨或经过冻融循环处理，释放细胞。
2.蛋白质沉淀：添加试剂进行蛋白质沉淀，将细胞残渣上清液中的蛋白质沉淀下来。
3. RNA沉淀：通过加入酒精等试剂使RNA从上清液中沉淀下来。
4.清洗：用特定的试剂将沉淀洗涤，去除污染物。
5.溶解：加入溶剂溶解沉淀，得到纯度较高的总RNA。
二、植物总RNA提取试剂的操作流程1.准备样品：收集新鲜的植物组织，将其迅速冷冻在液氮中，然后使用试剂研磨或液氮研磨法将其破碎。
2.加入试剂：向研磨好的样品中加入试剂，根据试剂盒的要求进行操作。
3.离心：离心样品，以将细胞碎片和蛋白质沉淀分离。
4.沉淀RNA：将上清液转移至新的离心管中，加入酒精等试剂，使RNA沉淀下来。
5.清洗：用特定的试剂洗涤RNA沉淀，去除杂质。
6.溶解：使用特定的溶剂将RNA沉淀溶解，使其完全溶解。
7.检测：采用比色法、荧光法或电泳等方法对提取得到的RNA进行定量和质量检测。
三、植物总RNA提取试剂的优缺点1.优点：-操作简单，不需要复杂的仪器和设备。
-高效提取总RNA，得到纯度较高的RNA。
-可以快速提取大量的样品。
-可以适用于多个植物种类和组织类型。
2.缺点：-可能存在某些试剂无法完全溶解质体等问题。
-部分试剂存在对环境的污染隐患。
四、植物总RNA提取试剂的注意事项1.使用新鲜的植物组织进行提取，以确保RNA的质量和完整性。
2.严格按照试剂盒的说明进行操作，不要改变试剂的使用顺序或添加量。
介绍一种简单高效的植物总RNA提取方法
介绍一种简单高效的植物总RNA提取方法赵双宜,吴耀荣,夏光敏(山东大学生命科学学院,济南250100)摘 要:在液氮中研磨小麦幼叶和不同发育时期的种子,经含0.1%SDS和0.1%十二烷基肌氨酸钠(LDS)的尿素缓冲液裂解后,醋酸钠和氯仿沉淀变性蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经2.5mol/L LiCl沉淀总RNA,洗涤后就可得到高质量的总RNA,其OD260/OD280为2.05～2.10,28S和18S RNA带清晰,叶片总RNA还可得到23S和16S RNA带,产率可达5mg RNA/10g材料。
当使用含1%SDS和1%LDS的尿素缓冲液裂解材料时,则可用于DNA 的分离提取,其分子大小可达50～100kb以上。
关键词:植物RNA分离提取;尿素;氯化锂中图分类号:R522 文献标识码:A 文章编号:0253-9772(2002)03-0337-02Introduction of a Simple and E ffective Methodfor Plant Totle RNA IsolationZHAO Shuang2yi,WU Yao2rong,XIA Guang2min(School of L if e Sciences,S handong U niversity,Ji nan250100,Chi na)Abstract:Wheat leaf and seeds at different development stages had been squashed in liquid nitrogen,then lysised by urea buffer which contains0.1%SDS and0.1%LDS,denaturedprotein had been removed by NaAc and chloroform precipita2 tion,total RNA was further purified by LiCl.The RNA we obtained had shar p bands of28S and18S after agarose gel elec2 trophoresis,23S and16S RNA bands can als o be seen clearl y in leaf RNA extract,the value of OD260/OD280of RNA was2105～2110.5mg RNA can been is olated from10g leaf of wheat.This method can als o been used in high molecular weight DNA is ola2 tion but the concentration of SDS and LDS must be increased to1%.K ey w ords:plant RNA isolation;urea;LiCl 在对植物材料的mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)、Northern印迹、3′-RACE和5′-RACE,特别是高质量cD2 NA文库的构建需要从不同发育阶段的组织中提取高质量的RNA,而未降解的总RNA的提取是其首要的条件[1],虽然现在可以利用异硫氰酸胍、盐酸胍和商品化的试剂盒分离植物总RNA,但异硫氰酸胍和试剂盒价格昂贵,且操作稍有不慎,所分离的RNA就可能发生降解,造成28S和18S带模糊和扩散,难以满足实验的要求。
提取rna实验步骤
提取rna实验步骤嘿，咱今儿个就来聊聊提取 RNA 的那些事儿！这可真是个精细活儿呢！你得先准备好各种家伙什儿，离心管啦、移液枪啦，就像战士上战场得有称手的兵器一样。
然后呢，把你要研究的样本弄到手，这就好比是找到战斗的目标。
接下来，开始破碎细胞。
你就想象成是给细胞来个“大拆迁”，把它们的外壳啥的都给弄破，让里面的 RNA 能跑出来。
这一步可得小心点儿，别太粗暴了，不然 RNA 也会被你不小心弄伤的哟！然后，加入各种试剂，就像是给 RNA 搭个小窝，让它们能舒舒服服地待着。
这里面的门道可多啦，每种试剂都有它的作用，就像不同的调料能做出不同味道的菜一样。
再之后就是离心啦！这就像是把好的和坏的分离开来，让 RNA 能聚集到一块儿。
离心的时候那机器嗡嗡响，就好像在说：“嘿，我在努力工作呢！”经过一番折腾，你就能看到那一点点珍贵的 RNA 沉淀啦！这就像是在一堆沙子里找到了金子，那叫一个高兴啊！提取 RNA 可不比做饭简单多少啊，每一步都得仔仔细细的，稍有差错可能就前功尽弃啦！你想想，要是好不容易做到最后发现 RNA 没了，那得多郁闷呀！所以呀，做这个实验的时候得打起十二分的精神。
这实验就像是一场冒险，你得小心翼翼地前进，遇到问题就得想办法解决。
就好像你在森林里迷路了，得靠着自己的智慧和勇气找到出路。
而且，这可不是一次就能成功的事儿，有时候得反复尝试好多次呢！咱再说说这 RNA 啊，它可重要啦！它就像是生命的密码，藏着好多好多的秘密。
通过提取它，我们就能解开这些秘密，了解生命的奥秘。
这多神奇呀！总之呢，提取 RNA 实验是个既有趣又有挑战性的事儿。
它需要你的耐心和细心，也需要你对科学的热爱和执着。
如果你能做好这个实验，那你可就是个小科学家啦！加油吧，朋友们，去探索 RNA 的奇妙世界吧！。
一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法
一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法柴娟;冯仁军;史后蕊;任梦云;王静毅;张银东【摘要】在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA).结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA.该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2014(035)001【总页数】6页(P104-109)【关键词】香蕉叶片;总核酸;总RNA;总DNA;快速提取【作者】柴娟;冯仁军;史后蕊;任梦云;王静毅;张银东【作者单位】海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101;海南大学农学院,海南海口 570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南海口571101;农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101【正文语种】中文【中图分类】S668.1doi10.3969/j.issn.1000-2561.2014.01.017从植物组织中提取RNA和DNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。
植物总RNA提取步骤
植物总RNA提取步骤1.实验前准备：-准备适当的植物材料，如叶片、茎等。
- 准备含有RNA酶抑制剂（RNase inhibitor）的提取缓冲液。
-将所有实验用具消毒。
-预先将磨杯、琼脂糖凝胶和RNA电泳仪等设备进行灭菌处理。
2.材料粉碎：-将植物组织用液氮快速冷冻并粉碎。
-将粉碎好的材料转移到预先冷却的磨杯中。
3.细胞破碎：-加入足量的提取缓冲液。
-使用磨杵快速研磨，以破碎细胞壁。
4.除去DNA和蛋白质：-将细胞破碎液转移到离心管中。
-加入等体积与细胞破碎液的冷背离心缓冲液。
-室温下离心10分钟，以去除碎屑和细胞核。
5.总RNA沉淀：-将上清液转移到新的离心管中。
-加入等体积的1:1异丙醇：丙酮的混合液，并轻轻颠倒混匀。
-室温下沉淀10分钟，使RNA沉淀到底部。
-以1万×g离心10分钟，以沉淀RNA。
6.RNA洗涤：-弃上清液，加入70%的乙醇进行洗涤。
-轻轻颠倒离心管，使沉淀的RNA与乙醇充分接触。
-以1万×g离心5分钟，将洗脱的RNA沉淀到底部。
-弃乙醇，将离心管倒置在纸巾上，使其自然风干。
7.RNA溶解：-加入适量的DEPC水（二甲基亚砜）或没食子酸钠进行RNA的溶解。
-使用微量离心把沉淀的RNA溶解均匀。
8.RNA质量检测：-使用紫外光谱仪检测RNA的浓度和纯度。
-使用琼脂糖凝胶电泳检查RNA的完整性。
总结起来，植物总RNA提取的步骤包括材料粉碎、细胞破碎、除去DNA和蛋白质、总RNA沉淀、RNA洗涤、RNA溶解和RNA质量检测。
这些步骤需要仔细操作，以保证提取到高质量的总RNA样品。
提取到的总RNA 可用于后续的RT-PCR、实时荧光定量PCR、Northern blot等分子生物学实验。
一种植物总RNA的快速提取方法
ｃｅ， ｏ ｎ ｅ ｖ ｓ ｙ ｕ ｇ ｓｅ ，ｍｍａｕ ｅ ｓ ｅ ｓ ｆｏ ｗｈ ａ ｎ ｏ ｒ ｒｍ ｉ ｅ ｅ ｔｐ ａ ｔｇ ｎ ｓｗｅｅ ｅ ｔａ ｔ ｄ ａ ｄ ｌ ｙ ｕ ｇ ｌ ａ ｅ ， ｏ ｎ ｔｍｓ ｉ ｔ ｒ ｅ ｄ ｒ ｍ ｅ ｔａ ｄ ｆ ｗｅ ｓ ｆｏ ｄｆ ｒ ｎ ｌｎ ｅ ｕ ｒ ｘｒ ｃｅ ｎ ｌ ｆ ｃ ｅ ｋ ｄ Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｏ ａ ｈ ｃ ｅ ． ｈ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔｔ ｌＲＮＡ ｂ ａｎ ｄ ｈ ｄ ｇ ｏ ｎ ｅ ｒｔ ｎｄｈｉｈ ｐ ｒｔ ． ｄ ｔ ｘ ｒ ｓｉｎ ｐ ｏｉ ｓｏ ｏ ｔｉ ｅ ａ ｏ ｄ ｉ ｔｇ ｌ ａ ｇ ｕ ｙ Ａｎ ｈｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ｒ ｆｌ ｆ ｙ ｉ ｅ
Ａｂｓｒ ｃ ：ｎ ｏｄ ｒｔ ｈ ｃ ｈ ｕ ｌｔ ｆｔｔｌＲＮＡ ｓ ｌｔ ｄ ｂ Ａｃ ｔａ ｏ ｒ ｃｐ ｔｔｏ ｔ ｔｌＲＮＡ ｏ ａ ｉ ｔ ａ ｔ Ｉ ｒ ｅ ｏ ｃ ｅ ｋ ｔ ｅ ｑ ａｉｙ ｏ ｏａ ｉｏａｅ ｙ Ｎａ ／ｅｈ ｎ ｌｐ ｅ ｉ ｉａｉｎ，ｏａ ｆｒ ｄ －
中图 分 类 号 ：５ ２ １ １ Ｑ ２ ． ３ Ｓ ｌ ．０ ； ５２ ０ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ０— ０ １ ２ １ ） ２— １ ０— ５ １０ ７ ９ （０ ０ ０ ０ ４ ０
Ａ ｏ ｏ ｏ ｏ ｐ ｄ Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｏ ｔ ｌＲＮＡ ｒ ｍ ａ ｔ Ｔｉｓ ｅ Ｐｒ ｔ ｃ ｌｆ ｒ Ｒａ ｉ ｓ ｌ ｔｏ ｆ Ｔｏ ａ ｆ ｏ Ｐｌ ｎ ｓ ｕ ｓ
０ １０ ； ７０ １
３ 河北 省农 作 物 病 虫 害 生 物 防治 工 程 技 术 研 究 中 心 ， 北 保 定 ． 河
一种植物总RNA的快速提取方法
华北农学报・2010,25(2):1402144收稿日期:2009-12-24基金项目:国家自然科学基金(30771391);河北省教育厅课题基金(2009130)作者简介:刘 芬(1981-),女,山东东阿人,硕士,主要从事生物化学与分子生物学研究。
通讯作者:刘大群(1958-),男,河北灵寿人,教授,博士,主要从事植物病害生物防治和分子植物病理学研究。
于秀梅(1976-),女,黑龙江肇源人,讲师,博士,主要从事生物化学与分子生物学研究。
一种植物总RNA 的快速提取方法刘 芬1,于秀梅1,2,刘大群2,3(1.河北农业大学生命科学学院,河北保定 071001;2.河北农业大学植物保护学院,河北保定 071001;3.河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心,河北保定 071001) 摘要:为验证Na Ac /无水乙醇沉淀法提取植物总RNA 的质量,本研究对小麦不同组织及其他不同种属植物花的总RNA 进行提取和检验,结果表明,该方法提取的植物总RNA 完整性好、纯度高。
以Tubulin 为参照对其余4个持家基因G A PDH 、A ctin 、Rubisco 和U biquitin 的表达情况进行分析。
扩增结果表明,选定的各持家基因在叶锈菌侵染不同时间的小麦叶片中的表达量并不一致,且各基因在小麦叶片中的丰度也存在差异。
通过对几种基因的扩增,进一步证实该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物总RNA 提取方法。
关键词:植物;总RNA 提取;持家基因;小麦;RT 2PCR中图分类号:S512.101;Q522.03 文献标识码:A 文章编号:1000-7091(2010)02-0140-05A Protocol for Rap i d Isol a ti on of Tot a l RNA fro m Pl an t T issuesL IU Fen 1,Y U Xiu 2mei 1,2,L IU Da 2qun2,3(1.College of L ife Science,Agricultural University of Hebei,Baoding 071001,China;2.College of Plant Pr otecti on,Agricultural University of Hebei,Baoding 071001,China;3.B i ol ogical Contr ol Centre of Plant D iseases and Plant Pests of Hebei Pr ovince,Baoding 071001,China )Abstract:I n order t o check the quality of t otal RNA is olated by Na Ac /ethanol p reci p itati on,t otal RNA of radi 2cle,young leaves,y oung ste m s,i m mature seeds fr om wheat and fl o wers fr o m different p lant genus were extracted and checked .The results showed that t otal RNA obtained had good integrity and high purity .And the ex p ressi on p r ofiles of four frequently used house 2keep ing genes (G A PDH,A ctin,Rubisco,U biqutin )were analyzed by nor malizati on with Tu 2bulin gene .The results of the a mp lificati on sho wed that the transcri p ts of the selected house 2keep ing geneswere differ 2ent at different ti m e points of wheat leaves inoculated by leaf rust pathogens,moreover,the copy nu mbers of each house 2keep ing gene were inconsistent in wheat leaves .PCR a mp lificati on shows that Na Ac /ethanol p reci p itati on can meet with de mands of down strea m ex peri m ent of co mmon molecular bi ol ogy and is an ideal method of p lant t otal RNA extracti on .Key words:Plant;Extracti on of t otal RNA;House 2keep ing genes;W heat;RT 2PCR RNA 的提取技术是分子生物学研究领域的基本操作之一。
一种基于PCR的简易快速提取植物叶片DNA的方法[发明专利]
![一种基于PCR的简易快速提取植物叶片DNA的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f9317acb951ea76e58fafab069dc5022aaea46aa.png)
(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.11.26C N 104164420A(21)申请号 201410374176.3(22)申请日 2014.07.31C12N 15/10(2006.01)(71)申请人山东省农业科学院玉米研究所地址250100 山东省济南市历城区工业北路202号(72)发明人刘强 汪黎明 秦保平 刘铁山董瑞 刘春晓(74)专利代理机构济南诚智商标专利事务所有限公司 37105代理人韩百翠(54)发明名称一种基于PCR 的简易快速提取植物叶片DNA 的方法(57)摘要本发明公开了一种基于PCR 的简易快速提取植物叶片DNA 的方法。
该方法是将采集的新鲜的植物叶片剪碎，置于盛有A 液的离心管中，浸泡提取至少1min 后，加入等体积的B 液，混匀；混匀后的提取液可作为DNA 模板用于PCR 。
其中A 液为：2g ：NaOH ，0.7448g ：EDTANa2，2.42gTris ，加水定容到1L ，灭菌，备用；B 液为：0.05M 的HCl 溶液。
相比传统技术，本发明需要的叶片少；采用的试剂简单，成本低；同时操作简单，不需要大型仪器，不需要液氮或冰盒保存样品，不需要研磨、抽提、沉淀和溶解；同时提取时间短且不污染环境。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书4页序列表2页 附图2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页序列表2页 附图2页(10)申请公布号CN 104164420 A1.一种基于PCR的简易快速提取植物叶片DNA的方法，其特征是，将采集的新鲜的植物叶片剪碎，直接置于盛有A液的离心管中，浸泡提取至少1min后，加入等体积的B液，混匀；混匀后的提取液作为DNA模板用于PCR；其中A液为：2g NaOH，0.7448g乙二胺四乙酸二钠，2.42g三羟甲基氨基甲烷，加水定容到1L，灭菌，备用；B液为：0.05M的HCl溶液。
提叶片rna的方法(二)
提叶片rna的方法(二)提叶片RNA的方法1. 介绍在研究植物基因表达和功能时，提取叶片组织中的RNA是一个非常重要的步骤。
利用叶片RNA可以进行基因表达分析、转录组测序以及RNA互作等研究。
本文将介绍几种常用的提取叶片RNA的方法。
2. TRIzol法TRIzol法是一种常用的利用酚和酒精提取RNA的方法。
下面是该方法的步骤：1.准备含RNase抑制剂的TRIzol试剂。
2.将叶片样品加入离心管中，加入适量的TRIzol试剂。
3.使用离心机将样品离心，使细胞破碎释放RNA。
4.加入氯仿并离心，将RNA从其他成分中分离。
5.将上清液转移到新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。
6.离心并去除上清液，使用70%乙醇洗涤RNA。
7.最后将RNA溶解在适量的RNase-free水中。
优点：具有较高的RNA纯度和完整性。
缺点：操作时间较长且操作步骤繁琐。
3. CTAB法CTAB法是一种利用阳离子表面活性剂和高盐浓度提取RNA的方法。
下面是该方法的步骤：1.准备含RNase抑制剂的CTAB提取缓冲液。
2.将叶片样品研磨并加入CTAB提取缓冲液。
3.使用离心机将样品离心，将细胞破碎释放RNA。
4.加入氯仿并离心，将RNA从其他成分中分离。
5.将上清液转移到新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。
6.离心并去除上清液，使用70%乙醇洗涤RNA。
7.最后将RNA溶解在适量的RNase-free水中。
优点：适用于含有较多多糖物质的样品。
缺点：操作时间较长且有一定的毒性。
4. 快速法快速法是一种利用商业试剂盒快速提取RNA的方法。
下面是该方法的步骤：1.准备含RNase抑制剂的快速提取缓冲液。
2.将叶片样品加入离心管中，加入适量的快速提取缓冲液。
3.使用离心机将样品离心，使细胞破碎释放RNA。
4.加入商业试剂盒提供的悬浮液，使RNA与载体结合。
5.将上清液转移到新离心管中，加入洗涤缓冲液洗涤RNA。
6.离心并去除上清液，使用去离子水洗涤RNA。
CTAB法提取植物叶片的RNA
CTAB法提取白桦RNA方法实验原理：LiCl最终浓度为2 mol/L 0.8 mol/L直接沉淀大分子RNA（包括rRNA和mRNA）需要注意的是Li离子对反转录酶有抑制作用，而Cl离子能抑制蛋白质合成的起始步骤，所以在mRNA反转录和体外翻译实验前不要使用LiCl沉淀DNA和RNANaAc最终浓度为0.3mol/L（Ph5.0）①所用所有试剂：Tris- CTAB：与RNA结合β-巯基乙醇：防止被氧化Tris饱和酚、氯仿：去蛋白质5L LiCl、无水乙醇、70%乙醇、3 mol/L NaAc：使RNA沉淀1×TAE、 BW：配制凝胶Gol-rad或gold-view和6×loading buffer :前沿指示剂ddH2O②所有材料用具试剂瓶、250烧杯玻璃棒250容量瓶记号笔天平一次性手套钥匙、液氮研钵、冰、线手套、枪、枪头、高压锅、电泳照相系统离心机、混摇机、恒温水浴、电泳仪、电泳槽③实验准备：1、CTAB 5g 直接加入试剂瓶（防止起泡）2、NaCl 20.44g + 0.5M EDTA 12.5ml 用ddH2O 定容至225ml3、空瓶贴标签加适量（100或50ml）的ddH2O LiCl NaAc 70%乙醇氯仿ddH2O4、6个瓶+ 0.1%DEPC 在通风橱里戴双层手套，充分摇匀，气泡不很快消失5、37度保温过夜注意事项：1、试剂瓶用洗洁精水浸泡一个小时，然后清水冲到不起泡，壁上不挂水珠，再用ddH2O冲两次，量筒等量器清洗后都用ddH2O冲洗两次2、Tris 不可用0.1%DEPC处理，等其他组分处理完再加到CTAB中3、所有瓶子用0.1%DEPC处理，除了β-巯基乙醇，Tris饱和酚（购买时小瓶装，直接用即可）所有水溶试剂用ddH2O配置4、加样器100-1000规格的，小于100则不准确④灭菌1、将25ml Tris-HCl加入CTAB中，2、瓶留一个缝，灭菌锅的桶中加适量水3、枪头一层袋，离心管两层袋4、共八个瓶5、时间大概为一个半到两个小时⑤实验前准备小研钵，杵，小钥匙中倒适量酒精，点燃，自灭后凉透（大概得30min）。
一种适用于盐生植物的RNA提取方法
一种适用于盐生植物的RNA提取方法
方孝东;吴多桂
【期刊名称】《海南大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1998(016)004
【摘要】介绍了一种红树ＲＮＡ提取方法，此法无需特殊试剂和贵重仪器设备，可有效地排除红树细胞中大量存在的胶质和多糖类物质的干扰，所得ＲＮＡ样品经紫外分光光度计检测和１％琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性，可满足多数分子生物学实验的需要，尤其适用于提取多糖含量较高的植物细胞的ＲＮＡ。
【总页数】3页(P311-313)
【作者】方孝东;吴多桂
【作者单位】海南大学生物科学技术研究所;海南大学生物科学技术研究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.2
【相关文献】
1.一种适用于RT-PCR的微藻总RNA提取方法 [J], 杨婧;牛艳;张可炜;孔健
2.一种适用于RT-PCR的石榴籽粒总RNA提取方法 [J], 黄有凯;曹丹琴;彭媛媛;龚凌燕;张水明
3.一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法 [J], 阮孟斌;李文彬;于晓玲;彭明
4.一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法 [J], 孙
海波;王智慧;刘学群;黄军艳;董彩华;刘胜毅
5.一种适用于RT-PCR的拮抗酵母菌总RNA提取方法 [J], 宋海超;史学群
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取更显得 困难 。盐桦 叶片富含多糖 、 多酚类 物质 ， 用 Ｔｉ ｌ 剂 不 能获 得 任 何 Ｒ Ａ， ｒｏ试 ｚ Ｎ 而用 Ｃ ｎｅ Ｐ ｎ ｏｃｒ。 ｌ ｔ ｔ ａ Ｍ
Ｒ ＡＲ ａｅｔ Ｎ ｅｇｎ 提取 效果好 ， 但价格非 常昂贵。本研究 采用 Ｃ Ａ —ｉ１ ， Ｔ ＢＬＣ 法 摸索出了一种适宜于盐桦叶 片总 Ｒ Ａ的提取方 法 ， Ｎ 提取 的总 Ｒ Ａ完整性好 、 Ｎ 纯度高 ， 完全可满足 Ｒ —Ｃ ＴＰ Ｒ等后续的分子生物学实验要求 ，
维普资讯
第２卷 ５
・
第 １期子
（ｅｄ Ｓｅ ）
Ｖ０． ５ Ｎ ． ｌ Ｎｏ ． ２ ｏ １２ ｏ １ ｖ ０６
资源研 究 ・
一
种快速提取盐桦 叶片总 Ｒ Ａ的方法 建立 Ｎ
曾幼玲 邓爱华 曹 文尧 张富春
多 ， 于植 物细胞 总 Ｒ Ａ 的提取 主要 有 苯 酚 法 Ｊ异 用 Ｎ 、
（） １ 取新鲜组培 的盐桦植株 叶片 ０ １ 置 于预冷 ．ｇ
硫氰酸胍法＿ 、 ６ 氯化锂沉淀法＿ 、Ｄ ／ Ｊ ５ Ｓ Ｓ 酚抽提法 ， Ｊ Ｊ或
的研钵中加液氮充分研磨 ， 直至叶片成 白色粉末状 ， 将 其移入一离心管中；
关键词 盐桦 叶片 总 Ｒ Ａ 提取 Ｎ Ｒ ．Ｃ ＴＰ Ｒ
盐桦 （ ｅ ｌ ｈ ｌ ｈｌ 取 自实 验 室盐 桦 组 培 Ｂ ｔ ａ ａｏ ｉ ｕ ｐ ａ）
苗， 最初来 自 新疆阿勒泰地 区盐碱地。ｐ Ｄ １－ Ｍ ８Ｔ测序
盐桦 （ ｅ ｌ ｈ ｌ ｈ ａ） 桦 木 科 桦 木 属 植 Ｂｔ ａ ａ ｐ ｉ 是 ｕ ｏ ｌ 物¨ ， 是原生地 已濒危灭绝的小乔木树种 ， 仅存 在于 新疆阿勒泰地区， 是一种抗盐能力非 常强 的盐生荒漠 植物 ， 被列 为国家 Ⅱ级重点保护野 生植 物＿３ ２］ ｌ。盐桦 载体购 自Ｔ ｋｒ公司 ； ａａ ａ 大肠杆菌 Ｄ ５ 菌株为本实验 Ｈ 室保藏菌种； Ｃ Ｐ Ｒ产 物 回收试 剂盒、 ａ Ｈ 和 Ｈｎ Ｉ Ｂｍ Ｉ ｉ Ｉ ｄＩ 限制性 内切酶 、 ｘａ 酶 以及 Ｒ —Ｃ ＥＴ ｑ ＴＰ Ｒ和 Ｐ Ｒ引物均 Ｃ 购 自Ｔｋｒ 公 司； ａａ ａ 其它试剂均为分析纯 。
１ ２ 方 法 ． １ ２ １ 盐桦 叶 片总 Ｒ Ａ的提 取 方 法 ． ． Ｎ Ｃ Ａ —ｉ １ Ｔ Ｂ ＬＣ 法
作为新疆特有的濒危种 ， 已很难见 到＿ ， 现 ４ 因此 对其 Ｊ
进行种质资源和基因资源 的保护和研究是当务之 急。
核糖核酸（ Ｎ 是对盐桦进行 分子生物学研究 的重 Ｒ Ａ） 要材料之一 。目前较为成熟的分离 Ｒ Ａ的方法有许 Ｎ
质量 的基 因 组 Ｄ Ａ 和 总 Ｒ Ａ， 对 合 理 的 开 发 和 利 Ｎ Ｎ 这
学研 究的必要 前提 和 关键。 盐桦 细胞 中存在 大量 的胶 质 和 多
糖类物 质 ， Ｔｉ ｌ试 剂 根 本 不 能 获 得 Ｒ Ａ。本 研 究 采 用 用 ｒｏ ｚ Ｎ Ｃ Ａ —ｉ１ 提 出了一种适合盐桦叶 片总 Ｒ Ａ的 简单 快速提 Ｔ Ｂ ＬＣ 法， Ｎ 取 方法。消除 了蛋 白质、 Ｎ 多糖 、 Ｄ Ａ、 多酚等污 染。该方 法提 取
用盐桦资源具有重要的意义。
的盐桦 叶片总 Ｒ Ａ， Ｎ 完整性好 、 纯度 高 ， 可用 于 Ｒ ．Ｃ ＴＰ Ｒ等 实验
操作 ， 此法无 需特 殊 试 剂和 贵 重仪 器 ， 实验 结果稳 定 ， 重复 性
１ 材 料 与 方 法
１ １ 实验 材料 ．
好， 适合 富含 多糖和脂 质的植物组织 总 Ｒ Ａ的提取 。 Ｎ
具有坚硬的细胞壁 ， 内含较多的多糖 、 脂质 、 多酚等次 生代谢物 ， Ｊ同种植物 的不同组织和不 同植物的同种 组织材料 ， Ｒ Ａ的提取方法也会有很大差异 。适 其 Ｎ ］
宜 的 Ｒ Ａ提取 方法 也不 尽相 同。 因此 植 物 Ｒ Ａ 的提 Ｎ Ｎ
１４ ｏ ＬＮ Ｃ ；％Ｂ巯基 乙 醇） 盖 紧管盖 ， ． ｍ ｌ ａ １２ 一 ／ ， 剧烈摇 匀， ６ 在 ５℃水浴中温育 ３ ｉ； ０ ｎ ａ ｒ （） ３ 加入 等体积 的氯仿 ， 摇匀 ， ４℃，２ ０ ｒｎ １ ０ｒａ ， ０ ／ｉ 离 心 １ ｉ； ０ｒ ｎ ａ （） ４ 将上层 水相转 移至另一 离心 管 中， 加入 １３ ／ 体积 ８ ｏ ＬＬＣ， ｌ ｉ１ ｍ ／ 混匀 ， ２ 一 Ｏ℃沉淀过夜 ； （） ５ ４℃，２ ０ ｒ ｎ １ ０ｒａ 离心 １ 弃上清 ， ０ ／ｉ ｈ， 沉淀用 ３ ｌ Ｅ溶解 ， １３ ｍＴ 加 ／ 体积 ８ ｏ ＬＬ １ 一 Ｏ℃放置 ２ ｌ ｉ ， ５ ｍ ／ Ｃ
（ ） 入 １ ｌ５℃ 预热 的 Ｃ Ａ ２加 Ｏｍ ６ Ｔ Ｂ抽 提液 （ ％ 的 ２
Ｃ ＡＢ； ０ Ｔ １ ０ｍＭ ｒ — １ ｐ ０； ０ ｒ Ｍ Ｄ Ａ Ｈ ． Ｔ ｉ ＨＣ ， Ｈ ８． ２ ｓ ｎ Ｅ Ｔ ｐ ８ ０；
应用商品化的 Ｔｉ ｌ ｒｏ 试剂进行提取 。但 由于植物细胞 ｚ
（ 新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室／
新疆生物资源基因工程重点实验室
摘要 ： 从植 物 组织 中提取 高质 量的 Ｒ Ａ是进行 植 物分子 生物 Ｎ
乌鲁木齐
８０４ ） ３０６
而且实验成本低 、 简单快速 。本研究 立足通过分子生 物学方面的研究揭示盐桦耐盐 的分子机理 ， 而制备高
收 稿 日期 ： ０ ６０ －５ ２ ０ － ２ ７
（ ） ， ０ｒｒｎ离 心 １ ｒｎ 弃 上清 ， ６ ４℃ １ ０ ａ ２０ ／ ｉ ５ａ ， ｉ 沉淀
基金项目： 国家 自然科 学基 金项 目（ ０ ６０ ５ 、 ３４ ０ １ ） 教育部 春 晖计划 项 目 （ ０４２６ ０ ６ 和 新 疆 自治 区 重 点 实 验 室 开 放 课 题 Ｚ２０ －－５ ３ ）