PCR室标本处置规范简介
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1. 血清/血浆等— -70℃ 2. 用于DNA测定的已纯化核酸样本— 4℃ 3. 用于RNA测定的已纯化核酸样本— -80℃ 4. 用乙醇沉淀的核酸样本— -20℃ 5. GITC处理的RNA标本在室温可保存7天
（五）标本的处理（核酸提取）
抑制物可能来源于： 标本本身（如血红素及其前体或降
解ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物）。 核酸提取过程中残留的有机溶剂
（二）标本的稳定化处理
DNA：不需特殊稳定化处理。 RNA：异硫氰酸胍盐（GITC）可使
DNA酶和RNA酶失活。
（三）标本的运送
可在常温下通过邮寄运送，如用于 DNA扩增检测的EDTA抗凝全血及用于 RNA扩增检测的GITC稳定化处理的标本。
未经稳定化处理，则必须速冻后，放 在干冰中运送。
（四）标本的贮存
PCR室标本处置规范简介
（一）标本的采集
临床标本包括EDTA或枸橼酸钠抗凝全血或骨髓、 血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。
EDTA和枸橼酸盐是首选的抗凝剂。不能使用肝素 抗凝，因肝素是Taq酶的强抑制剂。
玻璃器皿在使用前应高压处理，250°烘烤4小时 以上可使RNA酶永久性失活。
临床用于RNA（如HCV RNA）扩增检测的血标本 应尽快（3小时以内）分离血浆，以避免RNA的降解。
（如酚、氯仿等）。 痰须液化处理。
PCR污染与对策
PCR污染分环境污染与反应液污染二种。 常见PCR污染源有三个：
第一、标本间的交叉污染； 第二、实验室中克隆质粒的污染； 第三、PCR产物的污染（Carryover）。
要防止PCR污染，必须做好以下3个环节的工作：
（一）污染的预防 （二）污染源的追踪 （三）污染源的处理
。
（一）污染的预防
操作PCR时，按照下述规则可有效地预防 PCR的污染。
1、PCR的前处理及后处理要在不同的隔 离工作台上或房间内进行。
2、分装试剂，标记批号
3、改进实验操作： (1) 带一次性手套； (2) 避免反应液的飞溅； (3) 用一次性移液器或吸头，吸头不要暴露于 空气，以免产物气溶胶污染； (4) 操作多份样品时，要先将可混匀的成分 (dNTPs，缓冲液，引物等)一起制备标准 混合液(Master mix)； (5) 制备反应混合液时，最后加入样品DNA， 加入DNA后，在进行下一步操作前要盖紧 反应管。
（五）标本的处理（核酸提取）
抑制物可能来源于： 标本本身（如血红素及其前体或降
解ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物）。 核酸提取过程中残留的有机溶剂
（二）标本的稳定化处理
DNA：不需特殊稳定化处理。 RNA：异硫氰酸胍盐（GITC）可使
DNA酶和RNA酶失活。
（三）标本的运送
可在常温下通过邮寄运送，如用于 DNA扩增检测的EDTA抗凝全血及用于 RNA扩增检测的GITC稳定化处理的标本。
未经稳定化处理，则必须速冻后，放 在干冰中运送。
（四）标本的贮存
PCR室标本处置规范简介
（一）标本的采集
临床标本包括EDTA或枸橼酸钠抗凝全血或骨髓、 血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。
EDTA和枸橼酸盐是首选的抗凝剂。不能使用肝素 抗凝，因肝素是Taq酶的强抑制剂。
玻璃器皿在使用前应高压处理，250°烘烤4小时 以上可使RNA酶永久性失活。
临床用于RNA（如HCV RNA）扩增检测的血标本 应尽快（3小时以内）分离血浆，以避免RNA的降解。
（如酚、氯仿等）。 痰须液化处理。
PCR污染与对策
PCR污染分环境污染与反应液污染二种。 常见PCR污染源有三个：
第一、标本间的交叉污染； 第二、实验室中克隆质粒的污染； 第三、PCR产物的污染（Carryover）。
要防止PCR污染，必须做好以下3个环节的工作：
（一）污染的预防 （二）污染源的追踪 （三）污染源的处理
。
（一）污染的预防
操作PCR时，按照下述规则可有效地预防 PCR的污染。
1、PCR的前处理及后处理要在不同的隔 离工作台上或房间内进行。
2、分装试剂，标记批号
3、改进实验操作： (1) 带一次性手套； (2) 避免反应液的飞溅； (3) 用一次性移液器或吸头，吸头不要暴露于 空气，以免产物气溶胶污染； (4) 操作多份样品时，要先将可混匀的成分 (dNTPs，缓冲液，引物等)一起制备标准 混合液(Master mix)； (5) 制备反应混合液时，最后加入样品DNA， 加入DNA后，在进行下一步操作前要盖紧 反应管。