HBsAg基本操作规程

离石区人民医院检验科作业指导书
主题内容
HBsAg标准操作规程
文件编号：my-sop-O01
版本：B/1
生效日期：2011-10-01
页码：第1页，共2页HBsAg标准操作规程
1.目的规定HBsAg酶联免疫吸附试验的程序和相应的操作
2.范围适用于HBsAg检测
3.责任实验室操作人员严格按要求执行
4.方法原理
4.1方法：双抗体夹心法
4.2原理：采用单克隆抗-HBS包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBS-HRP，当标本中存在HBSAg，该HBSAg与包被抗-HBS结合并与抗-HBS-HRP 结合形成抗-HBS- HBSAg-抗-HBS-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。

5．标本
5.1种类：新抽取的血清、血浆；
5.2保存：标本应无微生物，在2-8℃可保存一周，新鲜标本可长期保存在-20℃（或以下），但避免反复冻融。

6.仪器与试剂
6.1仪器：洗板机 RT-3100 型酶标仪 DNM-9600型
6.2试剂: 北京万泰生物药业股份有限公司无需预处理，置于2-8℃中避光保存，有效期一年；
6.2.1包被反应条；酶结合物；HBSAg阳性对照；HBSAg阴性对照；
6.2.2浓缩洗涤液（用前以蒸馏水作20倍稀释）；
6.2.3底物缓冲液；底物液；
6.2.4终止液；封口胶纸；
6.2.5样本稀释液。

7.检测程序：
检测步骤：冷藏中取出试剂，室温平衡30分钟, 设阴性对照3孔，阳性对照2孔，加样本稀释液，加待测标本,37℃水浴60min,加酶结合物，37℃水浴30min，洗板5次，加显色剂、加终止液，用酶标仪测各孔OD值
结果有效性：阴性对照OD值应小于等于0.1，阳性对照OD值应大于等于0.8，否则应重新实验。

结果判读：CO=2.1×N（N为阴性对照平均OD值，阴性对照平均OD值小于0.05时，应按0.05计算）
标本OD值≥CO为阳性,标本OD值﹤CO为阴性;
或S/CO≥1为阳性；S/CO﹤1为阴性。

阳性、阴性对照不符合本次试验要求的要重新做。

8.质量控制
8.1每次实验必须做外部质控,绘制Levey-Jenning’s质控图，将质控值填入
质控图；
8.2根据质控值的位移,趋势等情况及时纠正实验偏差.
8.3如质控值S/CO<1为失控，应立即查找原因，重做实验。

8.4如质控值超出±2S,本次实验重做。

8.5质控血清有明确的标记,保存在-20℃以下，分装量够一周使用。

8.6所有仪器设备定期检查校正，并有记录。

8.7所有仪器如有维修必须有维修记录。

9.注意事项
9.1溶血、黄疸、乳糜血标本需重新采集；
9.2冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡30min后方可使用
9.3使用前试剂应摇匀，并移去1～2滴后垂直滴加
9.4不同批号不可混用；
9.5待检标本不可用NaN3防腐；如需稀释标本，请用小牛血清稀释
9.6结果判断须在反应终止后10min内完成；
9.7封片不能重复使用；
9.8本试剂盒应视为有传染性的物质，请按传染病实验室检查规程处理。

10.性能指标
10.1精密度<15%
10.2灵敏度与特异性符合国家标准。

编写人审核人批准人批准日期
雒晓燕柳泽萍闫凤娥2011-10-31。