HPLC 法同时测定柴银口服液中5种成分的含量

HPLC 法同时测定柴银口服液中5种成分的含量
朱日然
【摘要】目的：建立高效液相色谱法同时测定柴银口服液中5种成分的含量。

方法用 Zorbaxsb - C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm）分离，乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速为1.0 mL·min -1，检测波长为210 nm。

结果绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷的线性范围分别为0.388～9.70μg（r =0.9999）、0.736～18.40μg（r =0.9998）、0.21～5.25μg（r =0.9998）、0.242～10.6μg（r =0.9999）、0.868～21.7μg（r =0.9999），平均加样回收率分别为96.80％（RSD =0.29％）、103.50％（RSD =1.29％）、103.60％（RSD =1.12％）、102.90％（RSD =0.88％）、100.90％（RSD =0.90％）。

结论该方法简便、准确，重复性好，可用于柴银口服液的质量控制。

%Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of five components in Chaiyin Oral Liquid. Methods Using Zorbax SB - C18 column(4. 6 mm × 250 mm,5 μm),acetonitrile - 0. 1% phosphoric acid solution as mobile phase. The flow rate was 1 mL·min - 1 ,the detection wavelength was at 210 nm. Results The linear ranges of chlorogenic acid,amygdalin,puerarin,baicalinand,phillyrin were 0. 388 ~ 9. 70 μg(r = 0. 999 9),0. 736 ~ 18. 40μg(r = 0. 999 8),0. 21 ~ 5. 25 μg(r = 0. 999 8),0. 242 ~ 10. 6 μg(r = 0. 999 9),0. 868 ~ 21. 7 μg(r = 0. 999 9),respec-tively. The average recoveries( n = 6)were 96. 80%( RSD = 0. 29% ),103. 50%( RSD = 1. 29% ),103. 60%( RSD =1. 12% ),102. 90%(RSD = 0. 88% ),100. 90%(RSD = 0. 90% ),respectively. Conclusion The results indicated that the method was
simple,accurate,highly selective and reproducible,thus it can be used as quality control for Chaiyin Oral Liquid.
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2015(000)009
【总页数】3页(P509-511)
【关键词】柴银口服液;绿原酸;苦杏仁苷;葛根素;黄芩苷;连翘苷
【作者】朱日然
【作者单位】山东中医药大学附属医院，山东济南 250011
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
柴银口服液由北柴胡、金银花、黄芩、葛根、荆芥、青蒿、连翘、桔梗、苦杏仁、薄荷、鱼腥草等11味药组成，具有清热解毒，利咽止咳的功效，主要用于上呼吸道感染外感风热证，是风热感冒常用药品之一。

本文建立了采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定柴银口服液中绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷5种有效成分的含量，控制制剂质量及工艺的稳定性［1～4］。

1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪;Mettler Toledo MS电子天平;Zorbaxsb －C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm);Millipore超纯水仪。

1.2 试药绿原酸(批号:110753－200413)，苦杏仁苷(批号:110820－200403)，葛根素(批号:110752－200511)，黄芩苷 (批号:110715－200514)，连翘苷(批
号:110821－200508)均来源于中国食品药品检定研究院;甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

柴银口服液(市售，批号:00512127、10103011、11063018)。

1.3 溶液的制备
1.3.1 标准溶液的制备分别精密称取绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL 分别含 0.388、0.736、0.210、0.424、0.868mg的混合溶液，作为对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备精密量取样品溶液10mL，置50mL量瓶中，加50%甲
醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

1.3.3 阴性对照溶液的制备分别按处方比例称取金银花、苦杏仁、葛根、黄芩、连翘，按工艺方法制备阴性样品，按“1.3.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2 方法与结果［5～7］
2.1 色谱条件 Zorbaxsb－C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相 A为乙腈，流动相 B为0.1%磷酸溶液，流动相梯度洗脱程序见表1;流速:1mL·min－1;检测波长:210 nm;柱温:35℃;进样量 10μL。

表1 梯度洗脱条件T(min) 乙腈(%) 0.1%磷酸溶液(%)089210 8 9220 20 8025
40 6030 80 2035 8 9240 8 92
2.2 专属性考察在“2.1”项下色谱条件，取对照品、样品及阴性样品适量进行检测，样品与对照品色谱图相同保留时间处有色谱峰，而阴性样品无相应峰，说明阴性无干扰，结果见图1。

图1 HPLC色谱图A.混合对照品;B.供试品1.绿原酸;2.苦杏仁苷;3.葛根素;4.黄芩苷;5.连翘苷
2.3 线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液 1、5、10、15、20、25μL，注
入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以各对照品进样量(μg)为
X轴，峰面积值为Y轴计算回归方程、相关系数和线性范围，结果见表2。

表2 线性范围及相关系数组分线性范围(μg) 线性方程r绿原酸 0.388 ～9.70
Y=24.58X －3.595 0.9999苦杏仁苷 0.736 ～18.40 Y=8.937X －3.492 0.9998
葛根素 0.210 ～5.25 Y=42.14X －0.246 0.9998黄芩苷 0.424 ～10.60
Y=27.53X+8.790 0.9999连翘苷 0.868 ～21.7 Y=5.758X +0.115 0.9999
2.4 精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件连续进样6次，记录各色谱图的峰面积，结果绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷峰面积RSD(n=6)分别为 1.31%、1.51%、1.73%、0.72%、1.16%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、4、8、12、16、24 h 按“2.1”
项下色谱条件进行测定，以峰面积计算绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷RSD(n=6)分别为0.46%、0.51%、1.17%、0.41%、1.61%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.6 重复性试验取批号为10103011的样品，按“1.
3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定，进行6次平行试验，结果绿原酸、苦杏仁苷、葛
根素、黄芩苷、连翘苷的平均含量分别为0.150、0.233、0.2532、1.858、
0.0772mg·mL－1，RSD(n=6)分别为1.72%、0.89%、0.83%、1.34%、1.22%，表明该方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验取已测定的样品 (批号:10103011)6份，每份2.5mL，分别置50mL容量瓶中，每份精密加入混合对照品溶液1mL，按“1.
3.2”项下方法制备
供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率分别为
绿原酸96.80%(RSD=0.29%)、苦杏仁苷103.50%(RSD=1.29%)、葛根素
103.60%(RSD=1.12%)、黄芩苷 102.90%(RSD=0.88%)、连翘苷
100.90%(RSD=0.90%)，表明该方法加样回收率良好。

2.8 样品测定取3批样品，每批2份，按“1.
3.2”项下的方法制备供试品溶液，
按“2.1”项下色谱条件进行测定，结果见表3。

3 讨论
3.1 流动相的选择分别对乙腈－水、乙腈－0.5%冰醋酸溶液、乙腈－0.1%磷酸溶液进行考察，发现乙腈－0.1%磷酸溶液的洗脱体系能够对5种有效成分呈现出良
好的分离度，在测定波长处无干扰［8～11］。

表3 样品测定结果成分含量11063018(mg·mL－1)10103011(mg·mL－
1)00512127(mg·mL－1)绿原酸0.15 0.11 0.13苦杏仁苷 0.23 0.23 0.22葛根素0.27 0.25 0.24黄芩苷 2.10 1.86 2.00连翘苷0.083 0.077 0.082
3.2 波长选择取上述5种对照品溶液，在200～400 nm范围内进行扫描，结果绿原酸在218 nm波长处有最大吸收，苦杏仁苷在207 nm波长处有最大吸收，葛
根素在250 nm波长处有最大吸收，黄芩苷在214 nm波长处有最大吸收，连翘
苷在229 nm波长处有最大吸收，结果显示绿原酸、苦杏仁苷、葛根素、黄芩苷、连翘苷等5个成分在210 nm波长处均有较好的紫外吸收，故本试验选择此波长
进行测定。

3.3 对柴银口服液的质量考察，一般均为单味药材质量考察，本研究建立的HPLC 方法同时测定金银花、苦杏仁、葛根、黄芩、连翘等5味药材的有效成分，样品
处理简单，方法准确、可行，能有效对该制剂质量进行控制［12～15］。

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