HPLC法测定地肤子中芦丁和槲皮素的含量

HPLC法测定地肤子中芦丁和槲皮素的含量
肖作奇;文晓柯;欧阳波;黄懿;田霞;潘涛
【摘要】目的建立测定地肤子药材中芦丁和槲皮素含量的方法.方法采用高效液
相色谱法结合二极管阵列检测器,选用Agilent TC-C18色谱柱,流动相为乙腈-0.2％磷酸(梯度洗脱),检测地肤子中芦丁和槲皮素的含量.结果芦丁和槲皮素的线性范围
分别为0.0017～0.0532 mg/mL和0.0011 ～0.0340 mg/mL,平均加样回收率分
别为98.5％、97.88％(RSD=1.57％、1.87％).芦丁和槲皮素的平均含量分别为
0.0592、0.0215mg/g.结论该方法简单易行,稳定性和重复性好,可用于地肤子中
芦丁和槲皮素的含量测定.
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2016(013)021
【总页数】4页(P146-148,152)
【关键词】地肤子;高效液相色谱;含量测定;芦丁;槲皮素
【作者】肖作奇;文晓柯;欧阳波;黄懿;田霞;潘涛
【作者单位】湖南省妇幼保健院药学部,湖南长沙410008;湖南省妇幼保健院药学部,湖南长沙410008;湖南省妇幼保健院药学部,湖南长沙410008;湖南省妇幼保健
院药学部,湖南长沙410008;湖南省妇幼保健院药学部,湖南长沙410008;湖南省妇
幼保健院药学部,湖南长沙410008
【正文语种】中文
【中图分类】R914.1
地肤子具有清热利湿、祛风止痒等功效，用于小便涩痛、皮肤瘙痒等症［1］，还具有抗炎、抗病原微生物、抗虫等作用［2-7］，多用于湿疹等皮肤病的治疗。

化学成分研究结果表明，其主要有效成分为皂苷和黄酮［8-11］。

现阶段，对地肤子的质量控制主要是地肤子皂苷Ⅰc的含量测定［1］，但对黄酮含量的测定方法无报道。

本研究采用HPLC对不同产地的地肤子中的芦丁和槲皮素的含量进行测定，为进一步控制地肤子质量提供参考。

1.1 仪器
电子分析天平（Mett1er To1edo，d=0.01 mg），超声清洗器（上海科导），高效液相色谱仪（岛津，LC-20A型），色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，Agi1ent TC-C18）。

1.2 药品和试剂
水（娃哈哈纯净水），乙腈、甲醇（Tedia，色谱纯），其他试剂均为分析纯。

对照品购自上海诗丹德生物技术有限公司（芦丁，批号：3920，纯度99.3%；槲皮素，批号：3467，纯度98.6%）。

2.1 色谱条件
Agi1ent TC-C18色谱柱，流动相A为乙腈，B为0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱程序见表1，DAD检测波长200～400 nm，总流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温25℃。

2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液制备取地肤子过40目筛粉末2.0 g，称定，置于100 mL具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇20 mL，密封，称重，浸泡30 min，超声处理30 min，取出后放至室温后再次称定重量，加80%乙醇补足损失重量，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液制备精密称取芦丁和槲皮素对照品各适量，分别置于25 mL容量
瓶中，加色谱甲醇溶解并定容，摇匀，即得芦丁和槲皮素对照品贮备溶液。

同法配制混合对照品溶液，使每毫升溶液中含芦丁0.0133 mg、槲皮素0.0085 mg。

2.3 系统适用性试验
取“2.2”项下溶液，按照“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析。

结果见图1。

芦丁和槲皮素理论塔板数均大于5000、分离度大于1.5、拖尾因子在0.95～1.05之间，符合含量测定要求。

2.4 线性关系考察
配制系列浓度的对照品溶液进行HPLC测定，进样量10 μL，得到芦丁和槲皮素的线性方程回归方程分别为：Y=2.256×107X-1108，r2=0.9999，线性范围为
0.0017～0.0532 mg/mL；Y=6.783×106X-808.2，r2=0.9996，线性范围为
0.0011～0.0340 mg/mL。

2.5 精密度试验
取“2.2.2”项下所制备的对照品溶液，适当稀释，按“2.1”项下条件分别重复进样6次，进样量10 μL，测得芦丁峰面积RSD=0.6%，槲皮素峰面积RSD= 0.7%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验
取同一批次地肤子粉末，按“2.2.1”项下方法平行制备，分别按“2.1”项下条件进行HPLC分析，进样量10 μL，结果测得芦丁峰面积RSD=1.9%，槲皮素峰面
积RSD=1.5%，表明方法重复性良好。

2.7稳定性试验
取地肤子粉末，按“2.2.1”项下方法平行制备，按“2.1”项下条件分别于0、2、4、8、12、24 h进行HPLC分析，进样量10 μL，结果测得芦丁峰面积
RSD=1.8%，槲皮素峰面积RSD=1.6%，表明供试品在24 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验
按表2取样，进样量10 μL，记录峰面积，计算芦丁和槲皮素的加样回收率，结果见表2，结果符合含量测定要求。

2.9 样品含量测定
精密称取不同产地和批号的地肤子样品粉末各2.0 g，进行HPLC分析，进样量10 μL，记录峰面积，计算芦丁和槲皮素含量。

见表3。

本研究考察了不同提取溶剂对地肤子中芦丁和槲皮素提取的影响，发现80%乙醇溶液具有最高的提取率。

同时，优化了超声提取时间，发现30 min能将芦丁和槲皮素提取完全。

200～300 nm之间色谱图中其他组分对芦丁和槲皮素的测定干扰严重；300～400 nm之间，370 nm的HPLC图谱无干扰，所以选择370 nm为检测波长。

中药及其复方制剂由于其作用机制复杂、有效成分不明确，常常对其一种化学成分进行检测难以有效控制其质量［12-14］。

现代研究表明黄酮为中药中主要有效成分，黄酮类成分也是地肤子中的潜在主要药效成分［15-20］，对其中主要黄酮成分进行含量测定具有重要意义，本研究为地肤子质量标准深化提供科学依据。

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