培养基配方及配置

培养基配⽅及配置
培养基配⽅及配置
根据其作⽤不同，培养基分为：
诱导培养基
增殖培养基
⽣根培养基
根据其营养⽔平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。

基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。

完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加⼀些物质，如⽣长调节物质和其他复杂有机物质等。

N6培养基特点：
1974年朱⾄清等为⽔稻等⽲⾕类作物花药培养⽽设计
成分简单
KNO3 和(NH4)2SO4含量⾼
⼴泛应⽤于⼩麦、⽔稻及其它植物的花药培养等
White培养基特点：
1943年由Ｗhite为培养番茄根尖⽽设计的。

1963年⼜作了改良，称作Ｗhite改良培养基。

特点：⽆机盐含量较低
适⽤：⽣根培养。

B5培养基特点：
含较低的铵
双⼦叶植物尤其⽊本植物组培可选择
MS培养基特点：
⽆机盐、离⼦浓度⾼，硝酸盐含量较⾼。

MS培养基是⽬前应⽤最多最普遍的培养基。

⽆机盐的浓度较⾼，能保证组织培⽣长所需的矿物质营养。

并且因为离⼦浓度⾼，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出⼊，也不致影响培养基中的离⼦平衡
培养基配⽅明细表：
培养基成分：
⼀、⽆机盐：
氮枝叶⽣长需要氮素，缺氮⽼叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛。

磷缺磷，植株⽣长缓慢，⽼叶暗紫⾊。

钾促进花卉⽣长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。

缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶⽚呈皱曲状，⽼叶发黄或⽕烧状。

钴缺钴，叶⽚失绿⽽卷曲，整个叶⽚向上弯曲凋枯。

⼆、有机物
碳⽔化合物：选⽤种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等
蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%
⼤⽣产时可⽤⽩糖
糖在培养基的作⽤：
1）为细胞提供合成新物质的碳⾻架
2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量
3）维持渗透压
维⽣素
种类：VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3（烟酸）、Vc（抗坏⾎酸
浓度：0.1－1.0mg/L
作⽤：VB1 促愈伤组织产⽣，提⾼活⼒
VB6 促根⽣长
Vc 防组织褐变
VB3 与植物代谢和胚的发育有关系
氨基酸：⽢氨酸、精氨酸、⾕氨酸、⾕氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。

因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。

肌醇：⼜称环⼰六醇，在糖类的转化中起作⽤
椰乳：促愈伤组织和细胞培养，⽤量10－20%，使⽤注意茎尖⼤⼩
⾹蕉泥：⽤量150－200ml/L ，应⽤在兰花组培
马铃薯汁液：⽤量150－200g/L，使苗壮
⽔解酪蛋⽩：浓度100－200mg/L，应⽤在微茎尖培养
三、激素
⾃然界中，植物激素是植物新陈代谢中产⽣的天然化合物，它能以极微⼩的量影响到植物的细胞分化、⽣长、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰⽼和休眠、萌发等许多⽣理⽣化活动。

在培养基中，其各种成分对培养物影响最⼤的最显著的就是激素。

激素的种类、浓度、以及配⽐都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等。

通常，不同植物，或不同品种，甚⾄同⼀植物的不同位置对激素的要求有很⼤的变化，这主要取决于植物的内源激素⽔平。

组织培养中使⽤的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA）等，有的是合成的，如⼆氯苯氧⼄酸（2，4－D）
（⼀）、激素的种类：
1、⽣长素类：
在⾃然界中，⽣长素影响茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶⽚脱落和⽣根等现象
在组织培养中的主要作⽤是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织）组织培养中常⽤的⽣长素：
1 ⼆氯苯氧⼄酸（2，4－D）
2 萘⼄酸（NAA）
3 吲哚⼄酸（IAA）
4 吲哚－－3－丁酸（IBA）
NAA、IAA、IBA被⼴泛⽤于⽣根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和
⽣长。

IAA容易光解，注意⽤棕⾊试剂瓶保存，保存时间不要太久。

溶解⽅法：1M NaOH或95％酒精，以前者为好保存：配成⼀定浓度后，
冰箱冷藏保存
2、细胞分裂素
⾃然界中，细胞分裂素影响细胞分裂，顶端优势的变化和茎的分化等
组织培养中，细胞分类素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。

细胞分裂素常常与⽣长素相互配合，⽤以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。

常⽤的细胞分裂素有：
6－苄氨基嘌呤（6－BA）
激动素（6-糠氨基嘌呤、KT）
⽟⽶素（ZT）
噻⼆唑苯基脲（thidiazuron、TDZ ）
溶解⽅法：1MHCL
保存：配成⼀定浓度后，冰箱冷藏保存
3、⾚霉素
由⽇本⼈⿊泽1926年发现。

⾃然界中，⾚霉素能够打破休眠、促进果实成长等效果。

虽然已经⽤于顶端分⽣组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作⽤往往是负⾯的。

虽然也有⾚霉素能刺激不定胚发育成正常⼩植株的报道，但在使⽤中仍需慎重，不可轻易添加。

⾚霉素有20多种，其中在组织培养中最常⽤的是GA3。

在组织培养中与⽣长素和细胞分裂素相⽐，⾚霉素不太常⽤，据报道⾚霉素能刺激不定胚正常发育成⼩植株溶解⽅法：95％酒精
保存：配成⼀定浓度后，冰箱冷藏保存
⾚霉素易溶于⽔，但溶于⽔后不稳定，容易分解
灭菌：⾼温易分解，要过滤灭菌
4、脱落酸
在⾃然界中，脱落酸能阻碍发育、促进⽼化、形成休眠芽等作⽤。

经试验表明，脱落酸有利于胚性愈伤组织形成正常不定芽。

材料的试管保存，加上脱落酸能抑制⽣长，使继代培养时间延长。

溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。

保存：具有热稳定性，但容易发⽣光解。

配成⼀定浓度后，冰箱冷藏保存
四、培养体⽀持材料
1.琼脂
⽤量7－10g/L（0.7%-1%）
注意：1 若浓度过⾼，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中。

2 当进⾏营养需要研究时，应注意不要使⽤琼脂，因为市场供应所有琼
脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg和微量元素。

3.其它
卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等
五、辅助性物质
1）.抗⽣素：1.常⽤种类：青霉素链霉素庆⼤霉素等
2.⽤量：5%－20%
3.作⽤：防⽌由外植体内⽣菌造成的污染。

4 过滤灭菌
2.）抗氧化物：常⽤抗氧化剂及使⽤：
半胱氨酸VC（50－200mg/L液洗涤外植体伤⼝表⾯）。

3）活性炭：
1.作⽤：具吸附作⽤；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度
0.1 －0.2%）；促进⽣根；防⽌组培苗玻璃化（浓度0.3%）。

利于胚胎培养。

2.常⽤浓度：0.5－10g/L
3.活性炭的作⽤
①对⽣长的抑制：其吸附了植物激素
②对⽣长的刺激：其吸附了有抑制作⽤的物质
培养基配制
(⼆)母液配制要求：
1.母液浓缩倍数：10-100 ，⼤量元素10；微量元素、铁盐100；有机物50；
2.选⽤蒸馏⽔、重蒸馏⽔、分析纯或化学纯试剂
3.防⽌沉淀
4.激素母液浓度：1mg/ml,1次配成50或100 ml
5.激素溶解：IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；
NAA先溶于热⽔或95%酒精再加⽔；
2，4-D先溶于1M NaOH再加⽔；
KT、BA先溶于1M HCl再加⽔。

MS培养基母液的配制
培养基熬制：
1.将定容好的培养液取1/3倒⼊铝锅中，同时加⼊称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防⽌糊底。

2.⽤旺⽕煮开，再⽤⽂⽕加热，直⾄琼脂全部融化。

3.将容量瓶中剩余的液体⼀并倒⼊铝锅中，摇晃使均匀。

调PH 值：
⽤0.1MNaOH 或HCl 调PH 值为6.0。

分装：
趁热分装，100ml 的三⾓瓶约装⼊30－40ml 。

扎⼝与灭菌:
要求封⼝松紧适宜，系活扣，便于接种操作。

培养基应及时灭菌，防⽌变质。

灭菌后，应尽快地转移培养瓶使其冷却，⼀般应将灭菌后的培养基储藏于30℃以下的室内名，最好储藏在4－10℃的条件下。

应当注意的是，某些⽣长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维⽣素是不稳定的，不能和其他的培养基⼀起⾼压灭菌，⽽要进⾏过滤灭菌。